考染方法一种

推荐郭尧君老师使用一种考染的方法

⑴ 电泳后的凝胶立即浸泡在固定液（500 ml 乙醇，100 ml 冰醋酸，400 ml 蒸馏水）中至少30 min，如有必要可在固定液中浸泡过夜；

⑵ 将固定后的凝胶在热的染色液（0.29 g 考马斯亮蓝溶解在250 ml 脱色液中，在使用前边搅拌边加热至60℃）中浸泡10min，然后用蒸馏水将凝胶淋洗一次；

⑶ 多次变换脱色液（250 ml 乙醇，80 ml冰醋酸，加蒸馏水至1 L），直至凝胶背景脱净为止，为加快脱色，可略加温度；以上各步最好用振荡器（摇床）震荡染色皿。

⑷ 为了防止凝胶干燥后的龟裂，脱去背景色的凝胶在保存液（25 ml 87% 甘油加225 ml 脱色液）中浸泡30min。然后将凝胶放在玻璃板上，再用保存液浸湿

玻璃纸包住凝胶在室温下晾干。

R250属于慢染，脱色脱的完全，G250属于快染，脱色脱的不彻底。

R250(Coomassie brilliant blue R250).C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=5 60―590nm.染色灵敏度比氨基黑高5倍.尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色.但蛋白质浓度超出一定范围时,对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析时要注意这点.

G250, 又名Xylene brilliant cyaninG.比考马斯亮蓝R250多二个甲基.M W=854;λmax=590―610nm.染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍.优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色.所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析.

G250中的G就是Green，偏绿，R250中的R代表Red，偏红，在进行小分子量蛋白的Tricine电泳是常用G250染色，至于加热，染和脱色都可以加热，但都是在急需知道结果的情况下采用，加热后染的背景色很重脱色时间就长而且很难将背景色脱干净，脱色液经常加热会导致固定剂的会发，很快脱色剂就没用了，脱色效果很差，而且加热挥发出来的甲醛对呼吸道有刺激作用因此尽量不要加热！

Neuhoff等介绍了一种高灵敏度的染色方法（30 ng/带），无背景色，但需要过夜。

染色液：在980 ml 2%磷酸中加100 g过硫酸铵，直到完全溶解。再加1 g考马斯亮蓝G-250（溶在20 ml水中），不需要过滤，使用前振摇。

固定：将凝胶放在12%三氯醋酸中固定1小时。

染色：取160 ml上述染色液，在染色时加40 ml甲醇。凝胶染色放置过夜。染色后用0.1 M Tris-磷酸缓冲液（pH6.5）漂洗1至3分钟。再用25%乙醇淋洗不超过1 min。然后再10%醋酸在室温脱色2小时即可。