银染方法总汇及注意事项

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蛋白质染色(银染法)标准操作规程

蛋白质染色（银染法）标准操作规程（编号：041）
1、目的及适用范围
检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质，实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。

2、主要仪器
摇床、避光盒
3、试剂及配制方法
乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛，去离子水
固定液：100mL乙醇（40%乙醇），25mL冰醋酸（10%冰醋酸）加水到250mL；
致敏液：75mL 乙醇（30%乙醇）17g 乙酸钠，28.2g 三水乙酸钠（34g乙酸钠），0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250mL；
银染液：0.625g AgNO3，100 uL37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；
显色液：6.25 g Na2CO3，50 μL 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；
终止液：3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250mL
保存液：1% 冰醋酸
4、操作步骤
4.1固定：50mL固定液中固定30min或者更长时间
4.2致敏：50mL致敏液中致敏30min
4.3水洗：3 x 10min
4.4银染：50mL银染液中染20min （保持避光）
4.5水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)
4.6显色：50mL显色液中显色，时间视显色程度而定
4.7终止：50mL终止液中终止10min
4.8保存：1% 冰醋酸，4 ℃
5、注意事项
88。

鞭毛染色液(银染法)

鞭毛染色液(银染法)简介：细菌鞭毛是细菌的运动器官，幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境，这就是鞭毛运动作用的很好例证。

通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。

Leagene 鞭毛染色液(银染法)采用镀银染色法，该染色法的优点是采用氨银染色液作为核心染料，试剂比较灵敏，操作简单，结果判断更可靠。

组成：自备材料：1、酒精灯2、载玻片3、蒸馏水操作步骤(仅供参考)：1、在洁净无油脂的载玻片上滴加2滴蒸馏水。

2、用接种环挑取无菌蒸馏水，再与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点2次。

3、轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀。

切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落。

4、置室温或恒温箱内干燥固定。

5、临用前取A1、A2等量混合，即为鞣酸染色液。

取刚配制的鞣酸染色液加入干净容器或者试管中，充分混匀，用酒精灯缓慢加热，稍微冷却，立即进行染色步骤。

6、滴加经加热处理的鞣酸染色液于载玻片上染色，蒸馏水缓慢冲洗，甩干。

7、滴加氨银染色液，小火焰加热至冒气泡，蒸馏水缓慢冲洗，自然干燥。

8、镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心。

细菌分布少的地方，鞭毛容易观察。

细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。

编号名称 DM0033 2×100ml Storage 试剂(A): 鞣酸染色液 A1: 鞣酸溶液 50ml RT 避光 A2: 鞣酸稀释液 50ml RT 试剂(B): 氨银染色液 100ml 4℃ 避光使用说明书 1份染色结果：菌体深褐色，鞭毛为褐色。

注意事项：1、玻片应洁净，无油污。

2、染色的菌种应连续传代多次，处于生长活跃期。

3、染色过程应小心操作，防止鞭毛脱落。

4、配制好的鞣酸染色液不宜久置，尽量在10min内使用。

5、氨银染色液不稳定，应严格4℃避光保存，出现严重浑浊时应弃用。

质谱银染的试剂

质谱银染的试剂
质谱银染是一种在质谱分析中用于增强蛋白质或肽段的检测灵敏度的方法。

通常使用的质谱银染试剂是银离子的溶液，它会与蛋白质或肽段中的氨基酸残基反应，形成银颗粒，从而增强质谱信号。

以下是一种常用的质谱银染试剂的制备步骤：
1.制备酸性银溶液：
o将银硝酸（AgNO₃）溶解在蒸馏水中，得到
酸性的银溶液。

2.加入酸：
o向银溶液中加入一些酸，通常是甲酸
（HCOOH）或乙酸（CH₃COOH），以调整溶
液的酸性。

酸性条件有助于促使银离子与蛋
白质发生反应。

3.加入还原剂：
o添加一种还原剂，如脱氢乙酸（HCHO）或亚
硫酸氢钠（NaHSO₃），以还原银离子为银颗
粒。

4.反应蛋白质或肽：
o将待检样品中的蛋白质或肽与银离子反应，
形成银沉淀。

5.洗涤：
o将反应后的样品进行洗涤，去除未反应的试
剂和其他杂质。

6.干燥：
o将样品干燥，以得到质谱银染后的样品。

使用质谱银染的优势在于其增强了质谱信号，使得低丰度的蛋白质或肽段更容易被检测到。

然而，该方法可能对某些质谱仪器的灵敏度产生影响，因此在使用时需要谨慎优化条件。

Gomori银染色法

[试剂配置]
氨性银溶液甲液:硝酸银10.2g，蒸馏水 100ml，乙液：氢氧化钠3.1g，蒸馏水 100ml。取甲液5ml，滴加氨水至溶解清亮为止。再加入5ml乙液，此时该溶液突然变为黑色，在滴加氨水至清亮为止。补加4滴氨水，用蒸馏补足50ml。
染色步骤
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片5um，常规脱蜡至水（2）高锰酸钾氧化液（高锰酸钾0.5g，蒸馏水95ml，在加入5ml 3%硫酸）5min。再用自来水洗1min。（3）2%草酸漂白2min，水洗2min （4）2%硫酸铁氨媒染2min （5）水洗1min，蒸馏水洗2次（6）加入氨性银溶液内1min。（7）蒸馏水洗2次后。用20%甲醛液还愿5min。（8）蒸馏水浸洗2次（9）0.2%氯化金液1min，蒸馏水洗2次（10）用丽春红S苦味酸染色液复染3-5min。（11）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：
网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈黄色。
注意事项：
()
Gomori银染色法
主讲：李磊
姜明星
概述：
网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维，由交错排列的纤维组成，还有大量堆积时则形成致密的网状，固有网状纤维之称。若用银氨液浸染能使纤维变成黑色，固又称为嗜银纤维（argentaffin fibres）
原理：
由于组织蛋白质与银化合物的结合，在经过甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及表面的物质。

DNA的银染

（下列加液量以刚好覆盖凝胶为宜）
电泳完毕后，撬开玻璃板，将粘有凝胶的玻璃板置于塑料盘（不要碰凝胶表面！）
用蒸馏水漂洗两次，并取出玻璃板去水后，用10%乙醇进行凝胶固定 10 min，轻摇去乙醇，水洗、加入1%硝酸，轻摇5min 吸出硝酸，用蒸馏水漂洗2次
加入0.2%硝酸银溶液，轻摇20min 蒸馏水漂洗3次去水后，加入显色液，在非直射光线下观察显色观察区带出现，效果最佳时移除显色液加入3%乙酸，轻摇5min 移除3%的乙酸溶液，10%乙醇洗涤1次观察结果
聚丙烯酰胺凝胶中DNA的银染
原理
在弱酸环境下银离子可以与DNA结合，碱性甲
醛溶液可以将结合的银离子还原成金属银，显影成
DNA非变性PAGE胶试剂及其功能：
10%乙醇 1%硝酸 0.2%硝酸银显色液（3% Na2CO3，1%甲醛，新鲜配制）
3%乙酸

实验操作及注意事项

银染法的名词解释

银染法的名词解释对于普通人来说，银染法可能是一个陌生的名词，但对于纺织品行业的从业者来说，它却是一个非常重要的工艺。

银染法是一种利用化学方法将银离子引入纺织品中，以达到防菌、抗菌、净化空气等功能的一种技术。

下面，我们将深入探讨银染法的详细内容。

一、银染法的原理银染法利用的是银离子的抗菌性能。

事实上，早在古代，人们就发现银具有抗菌的作用。

在现代，科学家们通过研究发现，银离子能够干扰细菌的细胞膜和核酸的复制，从而抑制细菌的生长和繁殖。

为了将银离子引入纺织品中，银染法应运而生。

二、银染法的流程银染法的流程主要包括：纺织品预处理、银染剂的配制、浸染银染剂、干燥和固定银离子等步骤。

首先，在纺织品进行预处理。

预处理主要包括漂白、洗涤、软化、充电等步骤，以去除纺织品表面的杂质，使其更加适合染色。

接着，配制银染剂。

银染剂通常由银盐和染料组成。

不同的银盐可以产生不同的效果，例如硝酸银可以产生较强的抗菌效果，氧化银则可以产生净化空气的效果。

然后，将纺织品浸泡在银染剂中。

这个步骤中，纺织品会吸收银离子，并且银离子会与纺织品的纤维结合，从而实现功能的目的。

完成浸染后，需要将纺织品进行干燥。

干燥的目的是除去多余的水分，使银离子更好地固定在纺织品上。

最后，采用适当的固定剂将银离子固定在纺织品上。

固定剂能够与银离子进行反应，形成稳定的化学结构，从而增加银离子在纺织品上的使用寿命。

三、银染法的应用银染法在现代纺织品行业中应用广泛。

首先是医疗纺织品领域。

由于银离子的抗菌性能，银染法在生产医用口罩、手术衣等产品时被广泛采用，可以有效地阻止细菌的传播，保护医护人员和患者的健康。

另外，银染法也被应用于家纺领域。

银染法可以制作出带有抗菌功能的床上用品，例如枕头套、被套等。

这些产品可以减少细菌的滋生，为家庭提供一个干净、健康的生活环境。

此外，银染法还可以应用于户外装备领域。

例如，登山服、户外鞋等产品采用了银染法，不仅可以抑制细菌的生长，还有效防止异味产生，让户外运动更加舒适。

银染方法

银染方法1.搪瓷盘中倒入2000ml左右70%乙醇，把胶做好标记卸入乙醇中，摇床上固定15min2.回收乙醇(可重复用3-5次)，蒸馏水洗2遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净3.190ml蒸馏水中加入3.6%的NaOH4.2ml、20%AgNO33.6ml、氨水2ml混匀配成染色液。

倒入染色液，染色30min。

4.倒掉染色液，蒸馏水洗3遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净5.200ml蒸馏水中加入1%柠檬酸钠1ml，甲醛100ul混匀配成显色液。

倒入显色液显色至清晰。

6.倒掉显色液，加蒸馏水停显，并洗2-3遍测序板的硅化处理1:每块玻璃板的面都需硅化处理，以防止凝胶与两块玻璃板紧贴并减少电泳完毕后从胶模中取出凝胶时凝胶发生破裂的可能性。

硅化方法为；将拟硅化的玻璃板置于通风橱中，并戴手套操作，在拟硅化板面上加2-3ml 5％二氯二甲基硅烷(二氯二甲基硅烷5％溶于氯仿中)，用纸巾将硅化液涂布均匀，然后用去离子水洗净玻璃板,再用乙醇冲洗后晾干。

如需要从玻璃板上去除原有的硅，可用KOH-甲醇擦拭之。

KOH-甲醇配制为100ml甲醇中加5g片状KOH即可。

测序板的硅化处理2:1.浓度：4%二氯二甲基硅烷2.成分：二氯二甲基硅烷，三氯甲烷4.用途：制备聚丙稀酰胺凝胶时，可用Repel-silane处理小玻板，使凝胶易于剥离。

5.使用方法：测序用玻璃板必须彻底洗净。

先用温水和洗涤剂洗净，用水洗掉洗涤剂,再用去离子水冲洗干净。

最后用乙醇洗板。

1）长玻璃板的处理每次铺胶前均需用亲和硅烷对长玻璃板进行处理。

1、用镜头纸蘸取亲和硅烷溶液少许（1ml左右），涂在长玻璃板上。

要将整块板都涂满、涂匀。

2、4~5分钟后，用95%乙醇洗长玻璃板三次，以去除多余的亲和硅烷。

2）短玻璃板的处理每次铺胶前均需用剥离硅烷对短玻璃板进行硅化处理。

1、处理短玻璃板前先更换手套，以防与亲和硅烷交叉污染。

2、用镜头纸蘸取剥离硅烷溶液适量（1.5ml左右），涂在短玻璃板上。

银染中每步的原理

银染中每步的原理
银染是一种将金属银沉积在物体表面的染色方法，主要用于改变物体的颜色和增加其抗氧化能力。

其原理主要包括以下几个步骤：
1. 表面处理：首先需要对物体表面进行适当的处理，以去除表面的杂质和氧化物，以便银能够更好地沉积在物体表面。

常用的表面处理方法有机械打磨、电化学抛光等。

2. 银溶液制备：制备含有银离子的溶液，通常使用银盐（如硝酸银）和适当的酸性溶液配制而成。

溶液的酸性有助于提供适当的环境，使银离子可以稳定存在，同时可调节酸碱度来控制银沉积的速率和均匀性。

3. 沉积过程：将待染物体放入银溶液中，并加上适当的电压，通过电解作用将银离子还原成金属银，并沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。

电压的选取要根据染色效果和物体材质等因素进行调节。

4. 清洗和后处理：将染色后的物体从银溶液中取出，经过适当的清洗，以去除残留的银离子和其它杂质。

清洗后，还可以进行一些后处理步骤，如漂白、封闭等，以增加染色层的光亮度和耐久性。

总的来说，银染的原理是通过电解作用，将银离子沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。

这一过程的关键是控制电解条件和后处理步骤，以确保银染效果的稳
定和持久。

银染方法总结

银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有100 多种。

大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。

由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D 凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。

这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测！如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究银染操作规程实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。

试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛实验操作程序：固定：30min或者更长时间100ml 乙醇（40% 乙醇）25ml冰醋酸（10% 冰醋酸）加水到250ml致敏：30min75ml 乙醇（30% 乙醇）17g乙酸钠或28.2g三水乙酸钠0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250ml 水洗：3 x 10min银染：20min0.625g AgNO3、100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)显色：视情况而定6.25 g Na2CO3、50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml终止：10min3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250ml保存：1% 冰醋酸，4 ℃注意事项：1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。

2．甲醛在使用前加入。

3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。

4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。

5．银染液和显色液需要预冷。

银染流程及注意事项

银染流程及注意事项
银染流程银染 protocol
注意事项：
在最初甲醇固定时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X 100和两性电解质这些干扰性物质。

蛋白胶固定之前一定要先用水涮干净！
SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。

减少巯基乙醇的用量即可避免。

不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。

因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。

染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择 40 60 rpm.
对于银染条带不理想可尝试优化：
① 反应溶液都平衡到室温，
② 硝酸银和显色液容易失效，可以现配现用
③ PAGE胶固定之前，用水浸洗掉running buffer
④ 检查用水器具是否都去离子彻底（用新鲜配置50%硝酸润洗）。

银染

一、银染前准备1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。

2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。

3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。

4. 跑胶时我采用大梳子，小样本量。

因为银染本身分辨率就很高，样本量太大时杂带太浓。

小梳子的条带比较模糊。

二、银染过程1. 电泳结束后，自来水冲洗玻璃板两面，预冷，剥下凝胶，双蒸水洗涤两次。

2. 浸没于0.1%的AgNO3溶液中，摇床银染10分钟。

注意事项：a. 时间。

银染时间可延迟到15分钟，但是千万不要超过20分钟，否则胶的背景极深，一个字，丑。

b.浓度。

硝酸银溶液浓度不宜超过0.15%，我的经验表明，AgNO3浓度越高，胶越黄越丑。

3. 双蒸水冲洗两次，1min。

注意事项：a. 充分的漂洗可以降低背景色。

因此漂洗时间一定要到1min4. 浸没于1.2% NaOH+ 0.4% 甲醛溶液中显影，看到模糊的条带后立即大量双蒸水冲洗，中止显影。

注意事项：a. 白色器皿，看条带比较方便。

b.出现淡淡条带后立即中止银染。

千万不要等到看到清晰的目标条带时才中止显影，那时已经显影过度，拍片时背景色极深，丑。

c. 采用“低浓度NaOH×长时间显影”的策略。

实验证明浓度较高的NaOH（浓度超过1.5%）很容易显影过度。

因此不采用“高浓度NaOH×短时间显影”的策略。

d.为便于控制显影速度，得到最佳的信噪比，显影液温度不要过高（显影液提前半小时配，NaOH溶解后会释放热量，导致显影液温度过高），以10度左右为宜，温度过高则易显影过度，背景深；温度过低则显影时间延长。

e. 显影后尽早拍片。

胶片会随着时间逐渐变黄，条带越来越浓，最后杂带逐渐显现，因此拍品要趁早。

时间拖得越久，片子越难看。

PAGE银染方法

TA钠盐或者1g甘氨酸加去离子水到终体积250ml。浸泡凝胶10min。 9．保存 1%冰醋酸，4℃。 1．银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.7
5mm）可以提高灵敏度。 2．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。 3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色
由于其成本低，所用试剂安全、快速、灵敏度高而被广泛应用。银染的原理是银离子在碱性pH环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。由于银染的灵敏度很高，可染
出凝胶上低于1ng/蛋白质点，故广泛的用在2D凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。这里介绍的是一种实验室常用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋
．室温操作，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。 14．当蛋白质中含有核酸或金属时，银染则不会奏效。改变固定剂和染色之前对胶进行漂洗可以
改进染色效果。 15．据称戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。在染色效果不佳的情况下可以考虑。 16．银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅
，而背景会加深。 17．不同蛋白质对银染反应不一样，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此不宜用银染测定不同蛋白的比例。
上海坤肯生物化工有限公司主营分子生物学
试剂、免疫试剂、细胞培养基、生化试剂、实验室耗材及仪器。公司以专业的技术支持，和周到快捷的服务，努力成为生物化工领域的领头羊。公司的经营理念：以专业的产品、专业
致在60KDa或67KDa处出现两条水平线。减少巯基乙醇的用量即可避免。。 8．染色、水洗等过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60rpm。没有设备，用
手推轻晃亦可。 9．凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。 10．凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配

银染步骤及注意事项

银染步骤及注意事项银染步骤及注意事项银染色步骤为1次固定10分钟冰醋酸2用双蒸水洗涤凝胶，每次1分钟3染色液1g硝酸银。

5mL37甲醛1L双蒸水现在匹配染色30分钟。

4.快速清洗并清洗凝胶数次。

5开发30克碳酸钠1.5毫升37甲醛200微升10毫克/升硫代硫酸钠显影直到出现清晰的条纹银染色成功的关键因素包括:1 .用超纯水，如纳米纯水或Milli-Q或双蒸水进行银染色的纯化2.使用提供的碳酸钠或ACS试剂级碳酸钠染色后用于水洗的时间长度非常重要。

清洗胶水，然后将其放入通常浸泡在水中的显色溶液中，只需5-10秒钟。

4使用前及时向显色液中加入甲醛和硫代硫酸钠ul/1ml5.使用前及时配制染液银染方法有很多种，目前文献报道有100多种。

然而，确切的染色机理还不是特别清楚。

一般原理是银离子在碱性酸碱度环境下还原成金属银，沉淀在蛋白质表面形成颜色。

银染色广泛用于2D凝胶分析和垂直凝胶，用于极低蛋白质含量的测定，因为它对低于1纳克/蛋白质斑点的染色凝胶具有高灵敏度。

本文介绍了我们实验室成功使用的银染色法，以补充关键操作和要求。

主要用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测，如内源GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究。

银染色程序用于检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。

实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白质带上的硝酸银和银离子还原成金属银，在蛋白质带上沉积银颗粒。

染色程度与蛋白质中某些特殊基团的有关。

不含或很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时会被染色。

银染的详细机制尚不十分清楚。

试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或乙二胺四乙酸。

Na2.2H2O，甲醛实验程序固定30分钟或更长时间100毫升乙醇40毫升乙醇25毫升冰醋酸10毫升冰醋酸加水250毫升敏化30分钟75毫升乙醇30毫升乙醇17克醋酸钠28.2克三水醋酸钠0.5克硫代硫酸钠加水250毫升水洗涤3×10毫升银染料20分钟0.625克硝酸银100微升37甲醛加水至最终体积250毫升使用前用水冲洗2×1min注意掌握时间水冲洗时间长颜色慢点是黄色发展取决于情况o 6.25 g Na2CO3 o 50 ul 37甲醛添加o 水至最终体积2使用前50ml终止10 min o 3.65 g EDTA、na 2.2h2o 或1g甘氨酸o加水至最终体积250ml保存1冰醋酸4℃注意事项1如果固定时间较长，加一步水洗30分钟以避免胶水太脆而破裂。

蛋白质银染原理与方法

原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。

① SDS-PAGE电泳。

注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。

否则难以得到清晰的电泳分辨率。

②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。

加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在固定液中。

③彻底弃去固定液，加入25mlIncubation Solution（保育液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在保育液中。

④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。

⑤准备：取2.5ml 10XSilvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。

⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。

室温振荡保温20min。

⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。

注意观察目的条带。

如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。

显色时间不要过长，否则本底较深。

⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。

⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。

弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。

银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。

今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。

能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪位大侠有经验的希望能点拨一下？hotstoe wrote:1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30秒三次，2.0.1% 硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟（换2次去离子水）4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.不要试图将所有的条带都显出来，要求越高可能导致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色，6.固定3分钟后再用去离子水洗涤2遍（整个试验比较费去离子水）。

我们实验室用的银染方法

我们实验室用的银染方法1.50%甲醇浸泡15分钟(置于摇摆床上,以下省略,本步骤两次,每15分钟更换一次)2.10%甲醇浸泡10分钟3.水漂洗3次,每次数秒4.2μM DTT溶液浸泡20分钟5.0.1%硝酸银溶液浸泡20分钟6.水漂洗3次,每次不超过15秒(每次约150ML)7.显色液漂洗3次,每次不超过15秒(每次约100ML)8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约200ML)9.10G柠檬酸定影显色液:15G无水碳酸钠溶于500ml水,用前加入250μL福尔马林搅拌均匀水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看一般来说，高背景是由于杂质产生的，银染的水质很重要，最好要用去离子水或双蒸水，装胶的器皿也一定要洗得很干净。

固定、银染之后均需充分的漂洗。

其实银染就是银镜反应，可能是你的样品浓度高，所以白了，浓度更高还会变成一条能反光的带。

固定时间不需加长，我有时来不及还减少固定时间，银染关键是器皿和溶液干净，显色前胶一定要漂干净大板本来效果就差点，浓度越大，条带形状越差，这也很正常，银染薄点的胶效果要好些，因为染的是表面的蛋白1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.材料没什么要求，玻璃会更好一点，但不好搞到，我们是见到什么大小合适就用什么。

液体的量一般是胶体积的5倍，比如13×13×0.1cm的胶，用一百ml一定够，80也行。

银染步骤及注意事项

银染步骤是1 固定10冰乙酸min。

2 清洗双蒸水冲洗凝胶次每次1min。

3 染色染色液1g硝酸银.5mL37甲醛1L双蒸水。

现配染色30min。

4 清洗迅速洗凝胶次。

5 显影30g 碳酸钠1.5mL37甲醛200uL 10mg/L硫代硫酸钠。

显影至清晰带纹出现。

成功银染的关键因素包括 1 用超纯水比如NANOpure或Milli-Q纯化或者是双蒸水作银染。

2 用提供的碳酸钠或者ACS试剂级的碳酸钠。

3 在染色后水清洗所用时间的长短很重要用不超过5-10秒的时间清洗胶然后放入显色溶液中一般在水里浸一下就好。

4 甲醛和硫代硫酸钠ul/1ml在使用前及时加入到显色液中。

5 在使用前及时配染色液。

银染的方法种类很多目前有文献报道的就有100 多种。

但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。

大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银沉淀在蛋白质的表面上而显色。

由于银染的灵敏度很高可染出胶上低于1 ng/蛋白质点故广泛的用在2D 凝胶分析上及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。

这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法对关键操作及要求做了补充主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测如内源性GST-Pulldown、Co-IP 等实验中相互作用蛋白的研究银染操作规程实验目的检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。

实验原理在碱性条件下用甲醛将蛋白带上的硝酸银银离子还原成金属银以使银颗粒沉积在蛋白带上。

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。

银染的详细机制还不是非常清楚。

试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛实验操作程序固定30min或者更长时间o 100ml 乙醇40 乙醇o 25ml冰醋酸10 冰醋酸o 加水到250ml 致敏30min o 75ml 乙醇30 乙醇o 17g 乙酸钠28.2g 三水乙酸钠o 0.5g硫代硫酸钠o 加水到终体积250ml 水洗3 x10min 银染20min o 0.625g AgNO3 o 100 ul 37甲醛在使用前加入o 加水到终体积250ml 水洗2 x 1 min 注意把握时间水洗时间长显色速度慢点的颜色偏黄色显色视情况而定o 6.25 g Na2CO3 o 50 ul 37 甲醛在使用前加入o 加水到终体积250ml 终止10min o 3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸o 加水到终体积250ml 保存1 冰醋酸4 ℃注意事项1固定时间较长则加一步水洗30min以免胶太脆而破碎。

蛋白质银染原理与方法

原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～／蛋白条带。

① SDS-PAGE电泳。

注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。

否则难以得到清晰的电泳分辨率。

②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。

加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在固定液中。

③彻底弃去固定液，加入25mlIncubation Solution（保育液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在保育液中。

④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。

⑤准备：取10XSilvering Solution, 加入水，混匀后使用。

⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。

室温振荡保温20min。

⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。

注意观察目的条带。

如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。

显色时间不要过长，否则本底较深。

⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。

⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。

弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。

银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。

今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。

能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪位大侠有经验的希望能点拨一下？hotstoe wrote:1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. % 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30秒三次，硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟（换2次去离子水）4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.不要试图将所有的条带都显出来，要求越高可能导致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色，6.固定3分钟后再用去离子水洗涤2遍（整个试验比较费去离子水）。

银染操作步骤(精)

银染操作步骤1. 固定:电泳结束后,取凝胶放入约 100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

固定 40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。

固定液的配制:依次加入 50ml 乙醇、 10ml 乙酸和 40ml MilliQ级纯水或双蒸水,混匀后即成 100ml 固定液,可大量配制室温存放。

2. 30%乙醇洗涤:弃固定液,加入 100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

30%乙醇的配制:70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇,混匀后即成 100ml 30%乙醇。

3. 水洗涤:(洗 2次弃 30%乙醇,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

4. 增敏:(辅染现配现用弃水,加入 100ml 银染增敏液 (1X,在摇床上室温摇动 2分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

银染增敏液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银染增敏液 (100X,混匀后即为银染增敏液 (1X。

银染增敏液 (1X配制后需在 2小时内使用。

银染增敏液 (100X的配制:即 2.8%硫代硫酸钠溶液,需用黑袋包裹避光保存。

5. 水洗涤 (共 2次 :弃原有溶液,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

弃水,再加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

6. 银染:弃水,加入 100ml 银溶液 (1X,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

银溶液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液 (100X,混匀后即为银溶液 (1X。

银溶液 (1X配制后需在 2小时内使用, 最好是现配现用。

银染步骤及注意事项

银染步骤及注意事项银染色步骤为1次固定10分钟冰醋酸2用双蒸水洗涤凝胶，每次1分钟3染色液1g硝酸银。

5mL37甲醛1L双蒸水现在匹配染色30分钟。

4.快速清洗并清洗凝胶数次。

清洗胶水，然后将其放入通常浸泡在水中的显色溶液中，只需5-10秒钟。

4使用前及时向显色液中加入甲醛和硫代硫酸钠ul/1ml5.使用前及时配制染液银染方法有很多种，目前文献报道有100多种。

然而，确切的染色机理还不是特别清楚。

一般原理是银离子在碱性酸碱度环境下还原成金属银，沉淀在蛋白质表面形成颜色。

银染色广泛用于2D凝胶分析和垂直凝胶，用于极低蛋白质含量的测定，因为它对低于1纳克/蛋白质斑点的染色凝胶具有高灵敏度。

本文介绍了我们实验室成功使用的银染色法，以补充关键操作和要求。

主要用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测，如内源GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究。

银染色程序用于检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。

实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白质带上的硝酸银和银离子还原成金属银，在蛋白质带上沉积银颗粒。

染色程度与蛋白质中某些特殊基团的有关。

不含或很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时会被染色。

银染的详细机制尚不十分清楚。

试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或乙二胺四乙酸。

银染方法总汇及注意事项

ptotocol是这样的，请看哪里不妥：蛋白银染步骤步骤溶液时间固定甲醇100ml冰醋酸25ml加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次敏化甲醇75ml戊二醛（25%w/）1.25ml硫代硫酸钠(5%w/) 10ml醋酸钠（17g）加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml甲醛(37%w/) 0.1ml加双蒸水至250ml 20min冲洗双蒸水2次显色碳酸钠(6.25g)甲醛(37%w/) 0.05ml加双蒸水至250ml2-5min终止EDTA-Na22H2O(3.65g)加双蒸水至250ml 10min冲洗双蒸水3次建议使用silia的方法！！简单，快！本人的银染方法：1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；6. 水洗：同上；7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；8. 水洗：同上；9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。

以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。

谢谢！！！5.2.2.3 银染色1 银染液1（1000ml）：甲醇50％乙酸12％甲醇500ml 冰醋酸120ml2 银染液2（1000ml）：甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%，（含乙酸1－2ml）甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02%无水碳酸钠25g，甲醛1.5ml4 硝酸银（100ml）：20%硝酸银（过滤后待用）染色步骤：1 银染液1 洗2次，每次5分钟2 银染液2 洗1次，每次30分钟3 超纯水洗2次，每次1分钟4 0.5%硝酸银洗30分钟5 超纯水洗5次，每次1分钟（关键步骤，共计5分钟）显色液显色6 看到各条带，则倾去显色液, 1％乙酸中止我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜色。