药物毒理学实验
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（1）小白鼠编号（从1-20号）用两种颜色记 号笔进行标记： 黑色代表个位（蓝色记号笔）； 红色代表十位（红色记号笔）。 （2）小鼠称重并按体重大小依次排序。 ① ④ ② ⑤ ③ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨
2.2 试验设计
组别 1 2 3 4 5
小鼠编号 5 18 20 7 13 6 9 1 19 15 2 12 3 16 17 11 10 8 4 14
死试验。
（2） 致癌实验： 短期致癌实验和长期致癌实验。
（3） 致畸胎试验：于孕鼠或孕兔胚胎的器官形成期给药，观察对子代的影响。
最大耐受剂量(MTD)
指在外来化合物急性毒性实验中,化学物质不引起
受试对象(实验动物)出现死亡的最高剂量,故可缩写为LD0。一般不用最大耐 受剂量来比较两种外来化合物的毒性。 治疗指数 为药物的安全性指标。通常将半数中毒量（TD50）/半数有
一.试验目的 1.眼刺激试验目的； 2.眼刺激试验方法； 3.眼刺激试验结果的评价方法。
二、实验材料
1.动物：家兔；
2.受试物：10%双氧水溶液；
3.剂量：滴入1滴； 4. 方法：滴入一侧眼结膜囊内，另一侧作为空白对照（滴 入等量生理盐水）。给药后使眼睛被动闭合 1min 。记录给 药后5min、10min、15min、20min时眼的局部反应情况（1h、 12h、24h、48h、72h）。
分值计算方法
角膜评分：分值×５
虹膜评分：分值×５
结膜评分：（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）分值×２
总分：３项评分之和。 分值范围（０－５０分）
眼刺激性评价标准
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 刺激程度 积 分 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 无刺激性 ０－ 5 轻度刺激性 ５－１５ 轻度刺至中度刺激性 １５－２０ 中度刺激性 ２０－３０ 中度至重度度刺激性 ３０－４０ 重度刺激性 ４０－５０ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
计算方法1：加权机率单位法(Bliss 法)-软件辅助计算
计算方法2： 2. 改良寇氏法公式计算： LD50=log-1[Xm-i(Σp-0.5)] Xm：为最大剂量组剂量对数值； i：为相邻两组剂量比值的对数（相邻两组对数剂量的差值， log2）； P：为各组动物死亡率（用小数表示，如果死亡率为20%应写成 0.20）；
（二） 刺激性试验
1. 皮肤刺激实验
2. 眼部刺激实验
1.皮肤刺激性实验
一.实验目的
通过比较染毒动物与正常动物皮肤的变化，学
习评价外源性化学物急性皮肤刺激的 基本方法。
二、实验原理
皮肤刺激试验是指皮肤接触药物是否产生可逆性炎性症状的 试验，它又分急性皮肤刺激试验（一次皮肤涂抹实验）和多次皮 肤刺激试验。
三、实验材料
1、动物：成年健康家兔。家兔休重2kg左右，与给受试物24
小时将动物背部脊柱两侧毛脱掉，脱毛面积约为体表面积1０
％（家兔每侧各约50cm2）。 2、受试物：膏剂、液体或粉末。粉末需用适宜赋形剂（如 羊毛脂、凡士林等）混匀，本实验采用10%双氧水溶液。
四、实验方法
1、实验操作：在家兔背部受试物区和对照区（脱毛后），一 次将受试物1ml均匀涂布受试物区，将生理盐水涂布于空白对 照区，再以医用纱布及胶布进行包扎固定，开始计时。在给 药后30分钟取下包扎，用温水洗净皮肤上的残留受试物，观
药物毒理学实验
指导老师： 刘 娟 罗艺晨
• 毒性试验
•
给实验动物进行不同途径、不同期限的染毒、检测各
种毒性终点的实验。其目的是确定无害作用水平、毒性类
型、靶器官、剂量-反应关系，为安全性评价或危险性评 价提供重要的资料。
评价一个药物的毒性试验方法：急性毒性试验、亚慢性毒性试
验、慢性毒性试验、特殊毒性试验（遗传、生殖、致突变等）、其 它毒性试验（刺激性、过敏性、溶血性等）等。 评价一个药物的毒性指标：安全剂量（safety dose）、最小中 毒剂量（minimal toxic dose）、最大耐受剂量（MTD）、半数致死 量（LD50）、治疗指数（TI=LD50/ED50）、安全范围（MS=LD1/ED99或 LD5/ED95）
实验一
急性毒性试验
•
（一） 药物LD50的测定
一、实验目的
（1）理念——是药三分毒;
（2）了解一些常规药物毒理学的试验方法， 及评价指标; （3）掌握药物急性毒性试验的试验设计方 法、LD50的测定及计算方法。
二. 实验原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组方法，
根据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一
构,是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进 入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的染色 单体或染色体的无着丝粒片断或环。最后单独形成 一个或几个规则的次核，存在于细胞质中，由于比 核小得多故称微核。 微核的产生与染色体损伤有关。
所有皮肤刺激试验方法都在Draixe, Waodard和Calvery(1944）
所提方法的基础上发展起来的。目前多选用家兔和豚鼠，对于强 刺激或无刺激作用的药物用家兔检测效果好，但对作用缓和的刺 激药物用豚鼠实验结果较准确。Criffth（1977）发现家兔通常比 豚鼠和人更易敏感，用这两种动物评价人体反应更为合理。
健康成年小白鼠若干只，体重18-22g。
四.实验方法
1. 预实验
各组剂量分别为Dmax、（ Dmax ）r、（ Dmax ）r2、(Dmax)r3……….
2.正式试验
2.1试验步骤 小白鼠禁 食6-10h 60min
随机分成5组
各组按试验设 计方案给药 计算LD50
记录小鼠死亡 只数
得出结论
将小白鼠随机分成5组，每 组4只(随机单位 组设计方法)。
作业
撰写试验报告。
实验二
特殊毒性试验
特殊毒性包括致畸、致癌、致突变作用和生殖毒性。 药物对遗传物质的损伤,被称为“药物的遗传毒性”。若药 物影响生殖细胞使形成的配子(精子和卵)的遗传物质发生突
变,可能致使发育期间的胎儿发生先天性畸形。突变如发生在
体细胞,在个体中可导致肿瘤的形成。药物的致癌性,致畸性, 致突变性都是属于药物特殊毒性的研究范围。三者之间关系 交错癌变与突变,致癌物与致突变物有着密切的关系。
以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、
染色，于显微镜下计数PCE中的微核。如果与对照组比较，处 理组PCE微核率有统计学意义的增加，并有剂量-反应关系， 则可认为该受试物是哺乳动物体细胞的致突变物。
微 核（micronucleus, 简称MCN）
也叫卫星核,是真核类生物细胞中的一种异常结
眼睛部分结构：模式图
眼刺激试验--角膜评分
刺激反应强度
无混浊 极轻微弥漫性混浊，虹膜清晰可见 轻度混浊（虹膜细微结构不清晰） 混浊（虹膜结构不清，瞳孔大小看不到） 极混浊（虹膜完全看不到）
评分
0 1 2 3 4
眼刺激试验—虹膜评分
刺激反应强度 评分
正常
皱褶明显加深，充血，肿胀，角膜周围
0
1
轻度充血，瞳孔对光仍有反应
急性毒性试验
是指一次或24小时内多次染毒的试验，是毒性研究的
第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经 口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度）， 观察急性中毒表现， 亚慢性毒性 是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出
现的中毒效应。所谓较大剂量，是指小于急性LD50的剂量。“多日”的确 切天数，至今尚无完全统一的认识。一般认为在环境毒理学与食品毒理学 中所要求的连续接触为3～6个月，而在工业毒理学中认为1～3月即可。
效量（ED50)或半数致死量（LD50）/半数有效量（ED50）称为治疗指数。
治疗指数大的药物相对治疗指数小的药物安全，但以治疗指数来评价药物的 安全性，并不完全可靠。
安全范围
是指药物的最小有效量与最小中毒量之间的范围，它表示药
物的安全性，一般安全范围越大，用药越安全。药理学用上95%有效剂量 （ED95）到5%中毒剂量（LD5）的距离来表示。
>10000 mg/kg
35 ~ 350克 350 ~ 1050克
>1050克
6. 注意事项
6.1 正确捉拿小白鼠，防止咬伤；
6.2
注意肌肉注射方法，给药剂量力求准确；
6.3 实时注意观察小鼠中毒症状及其发生时间、死亡 时间。
7. 作业
7.1 查阅文献，与国内外相关文献报道结果作比较。
7.2 撰写试验报告
慢性毒性试验
是确定外来化合物的毒性下限，即长期接触该化合物可以引
起机体危害的阈剂量和无作用剂量。一般认为环境毒理学与食品毒理学则要求实
验动物染毒1年以上或2年，而工业毒理学慢性试验动物染毒6个月或更长时间。 特殊毒性试验 包括致畸、致癌、致突变作用以及生殖毒性试验。
（1）致突变实验包括微生物回复突变试验、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 和整体试验（常选用微核试验）。 作用于生殖系统的药物， 需进行动物显性致
次或24h后，观察动物所产生的警醒毒性反应及其严
重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计
算半数致死量（LD50）。据此分析受试动物毒性反应 与剂量的关系，并根据LD50值对药物进行毒性分级。
三.实验材料
（1）器材
（2）药品
1ml注射器、电子天平、记号笔、镊子、剪刀等。
盐酸赛拉嗪注射液。
（3）动物
出血，肉眼可见坏死，对光无反应（或 出现其中一种反应） 2
眼刺激试验—结膜评分ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ａ. 充血（指睑结膜、球结膜部位） 血管正常 血管充血呈鲜红色 血管充血呈深红色，血管不易分辨 弥漫性充血呈紫红色 Ｂ. 水肿 无水肿 轻微水肿（包括瞬膜） 明显水肿，伴有部分眼睑外翻 水肿至眼睑近半闭合 水肿至眼睑超半闭合 Ｃ. 分泌物 无分泌物 少量分泌物 分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 分泌物使整个眼区潮湿或粘着 评分 ０ １ ２ ３ ０ １ ２ ３ ４ ０ １ ２ ３
积分
0 1 2 3
紫红色红斑并有焦痂形成
4
0
水肿形成
无水肿
勉强可见
皮肤隆起轮廓清楚 水肿隆起约1mm 水肿隆起超过1mm，范围扩大 总分
1
2 3 4 8
表2 皮肤刺激强度评价
刺激反应 无刺激 轻度刺激 中度刺激 强刺激 分值 0-0.4 0.5-2.9 3-5.9 6.0-8.0
2. 眼刺激试验
Σp：各组动物死亡率之总和 。
5. 评价指标
急性毒性分级 小鼠一次经口LD50 大致相当于体重 70kg人的致死剂量
极毒
剧毒 高毒
<1 mg/kg
1mg --10 mg/kg 11--100 mg/kg
< 7滴
7滴 ~ 1茶匙 1茶匙 ~ 35克
中等毒 低毒
无毒
101 - -1000 mg/kg 1001--10000 mg/kg
2.3 给药方法：肌肉注射
表1：给药方案 组别 1 2 3 注射浓度（mg/kg） 1000 850 720 注射量
0.005mL/g体重
4 5
660 520
3.试验结果记录
表2：结果记录表
组别 1 2 3 4 5 注射浓度（mg/kg） 动物数 4 4 4 4 4 死亡数 死亡率 备注
1000 850 720 660
1.小鼠骨髓微核试验
2.药物免疫毒性试验（环磷酰胺对小鼠免疫器官重
量的影响）
1. 小鼠骨髓微核试验
一. 试验目的
1 学习小鼠骨髓微核试验原理及目的
2 掌握微核试验的制片方法
3 掌握微核的观察计数
4 掌握微核试验的结果分析评价
二.实验原理
微核试验（MNT）是检测染色体或有丝分裂期损伤的一种
遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而 丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成 为微核。 最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。
察受试区皮肤的变化，有无红斑、水肿等现象。
如为多次给受试物实验则一般每日涂抹一次，连续一周， 其余均与一次给受试物的方法和要求一致。
2、结果判断与评价
每只动物实验结果按表1进行刺激反应评分，
计算出平均分值按表2进行刺激强度评价：
表1 皮肤刺激反应评分
红斑形成
无红斑 勉强可见 明显红斑 中等-严重红斑
520
4. 计算LD50
4.1计算方法：目测机率单位法、加权机率单 位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法。 4.2 Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对 剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和 100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。 4.3 我国卫生部规定，Bliss法是作为新药 LD50测定评定必须采用的方法。
2.2 试验设计
组别 1 2 3 4 5
小鼠编号 5 18 20 7 13 6 9 1 19 15 2 12 3 16 17 11 10 8 4 14
死试验。
（2） 致癌实验： 短期致癌实验和长期致癌实验。
（3） 致畸胎试验：于孕鼠或孕兔胚胎的器官形成期给药，观察对子代的影响。
最大耐受剂量(MTD)
指在外来化合物急性毒性实验中,化学物质不引起
受试对象(实验动物)出现死亡的最高剂量,故可缩写为LD0。一般不用最大耐 受剂量来比较两种外来化合物的毒性。 治疗指数 为药物的安全性指标。通常将半数中毒量（TD50）/半数有
一.试验目的 1.眼刺激试验目的； 2.眼刺激试验方法； 3.眼刺激试验结果的评价方法。
二、实验材料
1.动物：家兔；
2.受试物：10%双氧水溶液；
3.剂量：滴入1滴； 4. 方法：滴入一侧眼结膜囊内，另一侧作为空白对照（滴 入等量生理盐水）。给药后使眼睛被动闭合 1min 。记录给 药后5min、10min、15min、20min时眼的局部反应情况（1h、 12h、24h、48h、72h）。
分值计算方法
角膜评分：分值×５
虹膜评分：分值×５
结膜评分：（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）分值×２
总分：３项评分之和。 分值范围（０－５０分）
眼刺激性评价标准
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 刺激程度 积 分 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 无刺激性 ０－ 5 轻度刺激性 ５－１５ 轻度刺至中度刺激性 １５－２０ 中度刺激性 ２０－３０ 中度至重度度刺激性 ３０－４０ 重度刺激性 ４０－５０ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
计算方法1：加权机率单位法(Bliss 法)-软件辅助计算
计算方法2： 2. 改良寇氏法公式计算： LD50=log-1[Xm-i(Σp-0.5)] Xm：为最大剂量组剂量对数值； i：为相邻两组剂量比值的对数（相邻两组对数剂量的差值， log2）； P：为各组动物死亡率（用小数表示，如果死亡率为20%应写成 0.20）；
（二） 刺激性试验
1. 皮肤刺激实验
2. 眼部刺激实验
1.皮肤刺激性实验
一.实验目的
通过比较染毒动物与正常动物皮肤的变化，学
习评价外源性化学物急性皮肤刺激的 基本方法。
二、实验原理
皮肤刺激试验是指皮肤接触药物是否产生可逆性炎性症状的 试验，它又分急性皮肤刺激试验（一次皮肤涂抹实验）和多次皮 肤刺激试验。
三、实验材料
1、动物：成年健康家兔。家兔休重2kg左右，与给受试物24
小时将动物背部脊柱两侧毛脱掉，脱毛面积约为体表面积1０
％（家兔每侧各约50cm2）。 2、受试物：膏剂、液体或粉末。粉末需用适宜赋形剂（如 羊毛脂、凡士林等）混匀，本实验采用10%双氧水溶液。
四、实验方法
1、实验操作：在家兔背部受试物区和对照区（脱毛后），一 次将受试物1ml均匀涂布受试物区，将生理盐水涂布于空白对 照区，再以医用纱布及胶布进行包扎固定，开始计时。在给 药后30分钟取下包扎，用温水洗净皮肤上的残留受试物，观
药物毒理学实验
指导老师： 刘 娟 罗艺晨
• 毒性试验
•
给实验动物进行不同途径、不同期限的染毒、检测各
种毒性终点的实验。其目的是确定无害作用水平、毒性类
型、靶器官、剂量-反应关系，为安全性评价或危险性评 价提供重要的资料。
评价一个药物的毒性试验方法：急性毒性试验、亚慢性毒性试
验、慢性毒性试验、特殊毒性试验（遗传、生殖、致突变等）、其 它毒性试验（刺激性、过敏性、溶血性等）等。 评价一个药物的毒性指标：安全剂量（safety dose）、最小中 毒剂量（minimal toxic dose）、最大耐受剂量（MTD）、半数致死 量（LD50）、治疗指数（TI=LD50/ED50）、安全范围（MS=LD1/ED99或 LD5/ED95）
实验一
急性毒性试验
•
（一） 药物LD50的测定
一、实验目的
（1）理念——是药三分毒;
（2）了解一些常规药物毒理学的试验方法， 及评价指标; （3）掌握药物急性毒性试验的试验设计方 法、LD50的测定及计算方法。
二. 实验原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组方法，
根据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一
构,是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进 入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的染色 单体或染色体的无着丝粒片断或环。最后单独形成 一个或几个规则的次核，存在于细胞质中，由于比 核小得多故称微核。 微核的产生与染色体损伤有关。
所有皮肤刺激试验方法都在Draixe, Waodard和Calvery(1944）
所提方法的基础上发展起来的。目前多选用家兔和豚鼠，对于强 刺激或无刺激作用的药物用家兔检测效果好，但对作用缓和的刺 激药物用豚鼠实验结果较准确。Criffth（1977）发现家兔通常比 豚鼠和人更易敏感，用这两种动物评价人体反应更为合理。
健康成年小白鼠若干只，体重18-22g。
四.实验方法
1. 预实验
各组剂量分别为Dmax、（ Dmax ）r、（ Dmax ）r2、(Dmax)r3……….
2.正式试验
2.1试验步骤 小白鼠禁 食6-10h 60min
随机分成5组
各组按试验设 计方案给药 计算LD50
记录小鼠死亡 只数
得出结论
将小白鼠随机分成5组，每 组4只(随机单位 组设计方法)。
作业
撰写试验报告。
实验二
特殊毒性试验
特殊毒性包括致畸、致癌、致突变作用和生殖毒性。 药物对遗传物质的损伤,被称为“药物的遗传毒性”。若药 物影响生殖细胞使形成的配子(精子和卵)的遗传物质发生突
变,可能致使发育期间的胎儿发生先天性畸形。突变如发生在
体细胞,在个体中可导致肿瘤的形成。药物的致癌性,致畸性, 致突变性都是属于药物特殊毒性的研究范围。三者之间关系 交错癌变与突变,致癌物与致突变物有着密切的关系。
以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、
染色，于显微镜下计数PCE中的微核。如果与对照组比较，处 理组PCE微核率有统计学意义的增加，并有剂量-反应关系， 则可认为该受试物是哺乳动物体细胞的致突变物。
微 核（micronucleus, 简称MCN）
也叫卫星核,是真核类生物细胞中的一种异常结
眼睛部分结构：模式图
眼刺激试验--角膜评分
刺激反应强度
无混浊 极轻微弥漫性混浊，虹膜清晰可见 轻度混浊（虹膜细微结构不清晰） 混浊（虹膜结构不清，瞳孔大小看不到） 极混浊（虹膜完全看不到）
评分
0 1 2 3 4
眼刺激试验—虹膜评分
刺激反应强度 评分
正常
皱褶明显加深，充血，肿胀，角膜周围
0
1
轻度充血，瞳孔对光仍有反应
急性毒性试验
是指一次或24小时内多次染毒的试验，是毒性研究的
第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经 口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度）， 观察急性中毒表现， 亚慢性毒性 是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出
现的中毒效应。所谓较大剂量，是指小于急性LD50的剂量。“多日”的确 切天数，至今尚无完全统一的认识。一般认为在环境毒理学与食品毒理学 中所要求的连续接触为3～6个月，而在工业毒理学中认为1～3月即可。
效量（ED50)或半数致死量（LD50）/半数有效量（ED50）称为治疗指数。
治疗指数大的药物相对治疗指数小的药物安全，但以治疗指数来评价药物的 安全性，并不完全可靠。
安全范围
是指药物的最小有效量与最小中毒量之间的范围，它表示药
物的安全性，一般安全范围越大，用药越安全。药理学用上95%有效剂量 （ED95）到5%中毒剂量（LD5）的距离来表示。
>10000 mg/kg
35 ~ 350克 350 ~ 1050克
>1050克
6. 注意事项
6.1 正确捉拿小白鼠，防止咬伤；
6.2
注意肌肉注射方法，给药剂量力求准确；
6.3 实时注意观察小鼠中毒症状及其发生时间、死亡 时间。
7. 作业
7.1 查阅文献，与国内外相关文献报道结果作比较。
7.2 撰写试验报告
慢性毒性试验
是确定外来化合物的毒性下限，即长期接触该化合物可以引
起机体危害的阈剂量和无作用剂量。一般认为环境毒理学与食品毒理学则要求实
验动物染毒1年以上或2年，而工业毒理学慢性试验动物染毒6个月或更长时间。 特殊毒性试验 包括致畸、致癌、致突变作用以及生殖毒性试验。
（1）致突变实验包括微生物回复突变试验、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 和整体试验（常选用微核试验）。 作用于生殖系统的药物， 需进行动物显性致
次或24h后，观察动物所产生的警醒毒性反应及其严
重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计
算半数致死量（LD50）。据此分析受试动物毒性反应 与剂量的关系，并根据LD50值对药物进行毒性分级。
三.实验材料
（1）器材
（2）药品
1ml注射器、电子天平、记号笔、镊子、剪刀等。
盐酸赛拉嗪注射液。
（3）动物
出血，肉眼可见坏死，对光无反应（或 出现其中一种反应） 2
眼刺激试验—结膜评分ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ａ. 充血（指睑结膜、球结膜部位） 血管正常 血管充血呈鲜红色 血管充血呈深红色，血管不易分辨 弥漫性充血呈紫红色 Ｂ. 水肿 无水肿 轻微水肿（包括瞬膜） 明显水肿，伴有部分眼睑外翻 水肿至眼睑近半闭合 水肿至眼睑超半闭合 Ｃ. 分泌物 无分泌物 少量分泌物 分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 分泌物使整个眼区潮湿或粘着 评分 ０ １ ２ ３ ０ １ ２ ３ ４ ０ １ ２ ３
积分
0 1 2 3
紫红色红斑并有焦痂形成
4
0
水肿形成
无水肿
勉强可见
皮肤隆起轮廓清楚 水肿隆起约1mm 水肿隆起超过1mm，范围扩大 总分
1
2 3 4 8
表2 皮肤刺激强度评价
刺激反应 无刺激 轻度刺激 中度刺激 强刺激 分值 0-0.4 0.5-2.9 3-5.9 6.0-8.0
2. 眼刺激试验
Σp：各组动物死亡率之总和 。
5. 评价指标
急性毒性分级 小鼠一次经口LD50 大致相当于体重 70kg人的致死剂量
极毒
剧毒 高毒
<1 mg/kg
1mg --10 mg/kg 11--100 mg/kg
< 7滴
7滴 ~ 1茶匙 1茶匙 ~ 35克
中等毒 低毒
无毒
101 - -1000 mg/kg 1001--10000 mg/kg
2.3 给药方法：肌肉注射
表1：给药方案 组别 1 2 3 注射浓度（mg/kg） 1000 850 720 注射量
0.005mL/g体重
4 5
660 520
3.试验结果记录
表2：结果记录表
组别 1 2 3 4 5 注射浓度（mg/kg） 动物数 4 4 4 4 4 死亡数 死亡率 备注
1000 850 720 660
1.小鼠骨髓微核试验
2.药物免疫毒性试验（环磷酰胺对小鼠免疫器官重
量的影响）
1. 小鼠骨髓微核试验
一. 试验目的
1 学习小鼠骨髓微核试验原理及目的
2 掌握微核试验的制片方法
3 掌握微核的观察计数
4 掌握微核试验的结果分析评价
二.实验原理
微核试验（MNT）是检测染色体或有丝分裂期损伤的一种
遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而 丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成 为微核。 最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。
察受试区皮肤的变化，有无红斑、水肿等现象。
如为多次给受试物实验则一般每日涂抹一次，连续一周， 其余均与一次给受试物的方法和要求一致。
2、结果判断与评价
每只动物实验结果按表1进行刺激反应评分，
计算出平均分值按表2进行刺激强度评价：
表1 皮肤刺激反应评分
红斑形成
无红斑 勉强可见 明显红斑 中等-严重红斑
520
4. 计算LD50
4.1计算方法：目测机率单位法、加权机率单 位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法。 4.2 Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对 剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和 100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。 4.3 我国卫生部规定，Bliss法是作为新药 LD50测定评定必须采用的方法。