2015版药典沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。
2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。
3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。
4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。
5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。
6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。
二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。
将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。
2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。
3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。
确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。
4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。
5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。
三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。
正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。
2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。
3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。
四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。
2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。
3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。
4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。
5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。
沉降菌测试标准操作规程
目的：规范沉降菌测试标准操作规程，确保测试结果的准确性。
适用范围：沉降菌的测试。
责任：沉降菌测试人员执行本规程，检验室主任负责监督检查本规程的正确实施。
程序：1.方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
2. 所用的仪器和设备2.1高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。
2.2恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行定检。
2.3培养皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。
2.4培养基普通肉汤琼脂培养基药典认可的培养基。
其配制方法见附录A（标准的附录）3.测试步骤3.1采样方法将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30分钟，再将培养皿盖盖上后倒置。
3.2培养3.2.1全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
3.2.2在30℃-35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
3.2.3每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
3.3菌落计数3.3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
3.3.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.注意事项4.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性，准确性。
4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。
4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
4.5采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质，破损或污染的应剔除。
5.测试规则5.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。
版药典表面微生物检测操作规程
1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2表面微生物：4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的大小；2.设备、管路等的复杂程度；3.生产活动的重要性；4.易受污染的部位等。
药典沉降菌检测操作规程
程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2测试时间:对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
4.3.3采样点数目及其布置:最少采样点数目:沉降菌的最少采样点数可按表1确定。
在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2表1 最少采样点数目表2 最少培养皿数采样点的布置:除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。
沉降菌操作规程
沉降菌操作规程
《沉降菌操作规程》
一、目的
为了保证实验室中沉降菌的安全操作，防止交叉污染和实验材料受到污染，特制定本规程。
二、适用范围
本规程适用于实验室中进行沉降菌相关实验操作的人员。
三、操作规程
1. 实验室通风通风设备应保持良好，并且实验室中应保持整洁。
2. 操作前应洗手，并穿戴好实验服、手套、口罩和护目镜。
3. 实验材料应在消毒柜中进行高温消毒处理。
4. 操作过程中，严禁食品、饮料进入实验室，严禁吸烟。
5. 实验后，实验台面、仪器设备等应进行彻底清洁消毒。
6. 任何实验室内的废弃物均应按照相关规定进行处理。
7. 操作结束后，要将实验台面、仪器设备等进行彻底清洁消毒。
四、注意事项
1. 在操作实验室中时，严禁搔抓头发、脸部等地方，以免对实验材料造成污染。
2. 如果在操作过程中发生污染，应立即停止操作，通知相关人员进行处理。
3. 如果发生意外或者突发情况，应及时向实验室负责人汇报并进行处理。
通过严格遵守《沉降菌操作规程》，可以确保实验室中的沉降菌实验得以安全进行，保障操作人员的健康安全，有效防止实验材料的污染和交叉感染。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程1. 引言沉降菌是指在液体中沉淀并附着在容器底部的微生物。
在许多行业中，沉降菌的检测是非常重要的，例如制药、食品加工、饮水安全等领域。
本文档旨在介绍沉降菌检测的操作规程，以确保检测结果准确可靠。
2. 检测设备和试剂准备在进行沉降菌检测之前，需要准备以下设备和试剂：•沉降菌检测容器：一般选择具有透明底部和标有刻度的容器，容量不小于100 mL。
•色谱纸：用于制作沉降菌检测培养基。
•高温灭菌器：用于灭菌沉降菌检测容器和试剂。
•干燥烘箱：用于干燥沉降菌检测容器和试剂。
•取样器：用于抽取待检测样品。
•生物安全柜：用于操作中的生物安全。
试剂准备：•培养基：可根据需要选择适当的培养基，例如Luria-Bertani（LB）培养基。
•蒸馏水：用于制备培养基和洗涤操作。
•山梨醇盐溶液：用于沉降菌悬浮液的稀释。
3. 检测操作步骤步骤1：沉降菌检测容器准备1.将需要检测的沉降菌检测容器放入高温灭菌器中，设定适当的温度和时间进行灭菌。
2.灭菌后，将沉降菌检测容器取出，放入干燥烘箱中进行干燥，确保容器完全干燥。
步骤2：制备培养基1.准备适量的色谱纸，切成小块。
2.在高温灭菌器中加热蒸馏水至沸腾，将色谱纸块放入烧杯中，倒入足够的蒸馏水。
3.候色谱纸块充分吸水后，取出备用。
步骤3：取样1.在生物安全柜内，使用取样器抽取待检测样品，确保样品干净无杂质。
2.将样品转移到沉降菌检测容器中，注意不要沾到容器外表面。
步骤4：制备沉降菌悬浮液1.取一定量的山梨醇盐溶液，进行稀释，制备合适的浓度。
2.将制备好的山梨醇盐溶液加入沉降菌检测容器中，使样品充分悬浮。
步骤5：培养和观察1.将沉降菌检测容器放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
2.观察培养后的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
4. 结果记录和分析根据观察到的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
根据结果进行分析和判断，判断样品是否符合标准要求。
5. 安全注意事项•操作过程中要戴好实验手套和口罩，避免直接接触待检测样品。
版药典沉降菌检测操作规程
题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2测试时间:对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
微生物室洁净区沉降菌测定操作规程
微生物室洁净区沉降菌测定操作规程一、目的建立微生物室洁净区沉降菌测试的标准操作规程，为沉降菌测试人员提供正确的标准操作方法。
二、范围适用于本公司微生物室洁净区沉降菌测试的全过程。
三、责任微生物室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。
微生物室检验员：负责对本规程的实施。
四、内容：1.1 测试方法:通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
1.2测试仪器：培养皿、培养基、隔水培养箱、高压蒸汽灭菌器。
1.2.1 培养皿：一般采用90mm×15mm规格的培养皿。
1.2.2 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基。
1.3 测试前的要求：1.3.1 测试状态：1.3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
洁净室（区）的温度和相对湿度应与检验要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。
1.3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。
1.3.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合检验的要求，并在报告中注明测试状态，微生物室洁净区沉降菌测试均在动态下监测。
1.3.1.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
1.3.2 测试人员：1.3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
1.3.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
1.3.3 测试时间：1.3.3.1 对单向流，如A级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
1.3.3.2 对非单向流，如B级、B级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
沉降菌测试方法..[参考内容]
![沉降菌测试方法..[参考内容]](https://img.taocdn.com/s3/m/1bc4e5e4ad51f01dc281f1e5.png)
沉降菌测试方法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=.........21nMnM M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
沉降菌测试方法..
沉降菌测试方法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3平均菌落数=.........21nMn M M ++ n —培养皿总数M 1—1号培养皿菌落数M 2—2号培养皿菌落数M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
沉降菌测试操作规程
1.0 目的通过监测发现问题及时采取措施予以解决，确保环境洁净度符合生产工艺要求。
2.0 适用范围适用于我公司净化车间十万级、万级和局部百级洁净区域。
3.0 职责3.1质量部负责净化车间环境检测。
4.0 工作程序4.1 原理4.1.1参照中华人民共和国国家标准GB/T 16294-2010《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》进行。
本方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物性粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4.2测试状态4.2.1 沉降菌测试前被测试洁净室已经过消毒。
4.2.2 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中（原始记录）中注明测试状态。
4.3 测试人员4.3.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.3.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
4.4 培养基4.4.1 培养基用大豆酪蛋白琼脂培养基或沙氏培养基。
4.4.2 培养皿一般采用Ф90mm×15mm规格的培养皿。
测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.4.3 将培养基按要求配制加热熔化后，分装、灭菌。
冷却至60℃时，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿中。
加盖后在室温放至凝固。
4.4.4 制备好的培养基平皿在 2～8 ℃保存，一般以一周为宜。
4.5 测试时间测试应在净化空调系统正常运行不少于30min以后开始。
4.6 测试点和记录4.6.1 测试点按附录《沉降菌测试点分布图》。
4.6.2 测试点（采样点）的位置离地面 0.8米左右（略高于工作面）。
4.6.3 在测试报告中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。
4.6.4 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
4.6.5不同面积的最少采样点数目见表1表14.6.6最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还应满足最少培养皿数，见表2 表24.6.7采样次数：每个采样点一般采样一次 4.7 平均菌落数的计算：平均菌落数NM M M M n21 ++＝ (1)式中： M 代表平均菌落数 M n 代表n 号培养皿的菌落数 N 代表培养皿总数 4.8 测试步骤4.8.1 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
沉降菌测试标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中沉降菌的测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别的区域内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）的沉降菌的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
2、仪器、设备、培养基2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿2.2培养基：营养琼脂培养基2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、测试条件3.1温度和相对湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应，温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%为宜。
3.2压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间压差应≥10Pa。
4、测试状态：动态测试和静态测试。
静态测试时，室内测试人员不得多于2人；动态测试时，现场人员数按《洁净区人员控制管理制度》中规定执行，记录中注明现场人员数量及测试点位置。
5、测试时间：对单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于10分钟后开始；对非单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于30分钟后开始。
6、采样点数量及布置 6.1最少采样点数目6.2最少培养皿数在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表6.3采样点布置类型abcdef6.4采样点的位置6.4.1一般布置在离地面0.8-1.5m之间或操作平台的高度，除受洁净室（区）的设备限制外，应在整个洁净室（区）均匀布置。
6.4.2每个采样点一般采样一次，也可以多于1次。
6.4.3布置采样点时，应避开回风口，测试人员应在采样口的下风侧。
7、培养基制备7.1依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
7.2在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。
沉降菌测试方法..
沉降菌测试⽅法..沉降菌测试⽅法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养⽫包在报纸⾥，放⼊恒温烤箱中加热⾄180℃后，⼲烤2⼩时。
2、取X克培养基放⼊X克蒸馏⽔，放⼊⾼压消毒锅中加热溶化，冷⾄45℃时，在⽆菌操作要求下将培养基注⼊培养⽫，每⽫约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平⽫倒置于33℃恒温培养箱中培养48⼩时，若培养基平⽫上确⽆菌落⽣长，即可采样⽤。
制备好培养⽫宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，⼀般在100级层流罩中放置3个培养⽫，在100000级，10000级按⾯积⼤⼩⼀般放2个培养⽫。
打开培养⽫盖，使培养基表⾯暴露0.5⼩时，再将培养⽫盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不⼩于48⼩时，采样点位置离地0.8m—1.5m 左右。
5、将培养⽫举起⽤⾁眼直接计数，⽤记号笔点记然后⽤5—10倍放⼤镜检查是否遗漏，若培养⽫上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养⽫边缘⽣长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换⽓次数、空⽓流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合⽣产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试⼈员必须穿戴符合环境洁净度级别⼯作服，静态测试时，室内测试⼈员不得多于2⼈。
测试时间对单向流100级净化房间及层流⼯作台，测试应在净化空调系统正常运⾏不少于10min后开始，对⾮单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运⾏不少于30min 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=.........21nMnM M ++ n —培养⽫总数 M 1—1号培养⽫菌落数 M 2—2号培养⽫菌落数 M n —n 号培养⽫菌落数⽤平均菌落数判断洁净空⽓中微⽣物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
2015版中国药典检验操作规程
2.实验操作
• 2.1准备用具，配制培养基、稀释液、培养箱
• 2.1.1用具：150mL三角烧瓶 试管 1mL移液管 10mL移液管
• 2.1.2培养基：需氧菌菌总数
胰酪大豆胨琼脂培养基、
• 霉菌和酵母菌总数 沙氏葡萄糖琼脂培养基
• 控制菌
胰酪大豆胨液体培养基
•
肠道菌增菌液体培养基
• 麦康凯液体培养基
• (2)立式压力蒸气灭菌器：待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体 物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降 到60℃以下 再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。
（3）物品取出,
• 随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉、包装有明显的水浸者,不可作为无菌物 品使用。培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。 取出的物品掉落在地或误放不洁处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使 用。取出的合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。凡属 合格物品,应标有灭菌日期及有效期限。
• 1.1.4 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的 器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
• 1.1.5 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平 皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
1.1无菌操作要求
• （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察 是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。
• （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于 进行灭菌处理的要求。
沉降菌检测标准操作规程
沉降菌检测标准操作规程1 方法概述：本测试方法采纳沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培育基平皿，经若干时间，在相宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培育皿中的菌落数来判定干净环境内的活微生物数，并以此来评定干净室（区）的干净度。
2所用的仪器和设备2.1 高压消毒锅使用时应严格根据仪器说明书操作。
2.2 恒温培育箱必需定期对培育箱的温度进行校验。
2.3 培育皿一般采纳Ф90mm15mm 的硼硅酸玻璃培育皿。
2.4一般肉汤琼脂培育基的预备及灭菌见附件A3测试步骤3.1采样方法将已制备好的培育皿，按干净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培育皿盖，使培育基面暴露30分钟（静态），再将培育皿盖盖上后倒置。
3.2培育3.2.1 全部采样结束后，将培育皿倒置于恒温培育箱中培育。
3.2.2 在30℃-35℃培育箱中培育，时间不少于48h。
3.2.3 每批培育基应有对比试验，检验培育基本身是否污染。
可每批选定3只培育皿作对比培育。
3.3菌落计数3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，看是否有遗漏。
3.3.2 若培育皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可辨别时仍以2个或2个以上菌落计数。
4留意事项4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的牢靠性，精确性。
4.2 实行一切措施防止人为对样本的污染。
4.3 对培育基、培育条件及其他参数做具体的记录。
4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培育皿背面或正面认真观看，不要漏计培育皿边缘生长的菌落，并须留意细菌菌落与培育基沉淀物的区分，必要时用显微镜鉴别。
4.5 采样前认真检查每个培育皿的质量，如发觉变质，破损或污染的应剔除。
5测试规章5.1 沉降菌检测前，被检测干净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速掌握在规定值内。
5.1.2 沉降菌检测前，被检测干净室（区）已经过消毒。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程
《沉降菌检测操作规程》
一、目的
为了保障食品安全，防止沉降菌污染食品，特制定本操作规程。
二、适用范围
本规程适用于对食品中沉降菌的检测工作。
三、检测仪器和试剂
1. 采用适用于沉降菌检测的培养基和培养皿。
2. 采用适用于沉降菌检测的显微镜和显微镜镜片。
四、检测操作步骤
1. 取一定量的食品样品，按照相应比例加入适量的生理盐水中，并进行均匀搅拌。
2. 取适量预处理后的样品液，分别加入培养基中的培养皿，并进行培养。
3. 观察培养皿，记录沉降菌的形态特征和数量。
4. 如果需要进一步分析，使用显微镜观察沉降菌的细胞形态和结构。
五、结果判定
根据检测结果，判断食品样品是否含有沉降菌，并确定其数量和种类。
六、记录和报告
1. 对检测操作进行详细记录，包括样品处理、培养条件、观察结果等。
2. 根据检测结果，制作检测报告，并按照规定提交相关部门。
七、注意事项
1. 操作人员应按照操作规程进行操作，严格遵守操作规范和安全操作规定。
2. 显微镜等实验仪器要定期检查和维护，以确保检测的准确性和可靠性。
3. 培养基的制备和保存要符合相关要求，避免影响检测结果。
通过严格按照《沉降菌检测操作规程》进行操作，可以保障沉降菌检测的准确性和可靠性，为保障食品安全提供了重要的技术支持。
024 洁净区沉降菌检测标准操作规程
QB 瑞阳制药有限公司企业标准QB/RY.4.02.2061024 ————————————————————————冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测标准操作规程2015-11-23颁发 2015-12-01实施————————————————————————瑞阳制药有限公司粉针事业部综合办公室颁发目录1. 目的 (1)2. 主题内容与适用范围 (1)3. 定义 (1)4. 引用标准 (2)5. 操作规程 (2)6. 重点操作复核制 (14)7. 中间产品质量标准和控制规定 (15)8. 安全防火及劳动保护 (15)9. 异常情况的处理和报告 (15)10. 设备维护及使用 (16)11. 技术经济指标的计算 (16)12. 度量衡的使用与校正 (16)13. 相关记录 (16)14. 附录 (16)1. 目的建立冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测标准操作规程，确保洁净区内沉降菌检测的操作符合质量要求。
2. 主题内容与适用范围本规程规定了冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测的相关目的；相关定义及引用标准；规定了生产操作方法；重点操作复核；质量标准与控制；安全防火与劳动保护；异常情况的处理和报告；设备的维护及使用；技术经济指标的计算；度量衡器的使用与校正；以及相关记录和附录。
本规程适用于冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测的操作。
3. 定义3.1 洁净室（区）：需要对环境中尘埃及微生物污染进行控制的房间（区域），其建筑结构、装备及其使用应当能够减少该区域内污染物的引入、产生和滞留。
3.2 沉降菌：用《医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法》提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
3.3 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集合体，称为菌落，简称CFU。
通常用个数表示。
3.4 动态：指生产设备按预定的工艺模式运行并有规定数量的操作人员在现场操作的状态。
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题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程
编码：颁发部门：质量部
起草：日期：2015年月日修订日期：年月日
审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日
批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版
分发部门：质量部、中心化验室
1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：
4.1基本概念：
4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：
4.3.1使用的仪器设备和培养基:
高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每
皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2测试时间:
对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
4.3.3采样点数目及其布置:
最少采样点数目:沉降菌的最少采样点数可按表1确定。
在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2
表1 最少采样点数目
面积（m2）
洁净度等级
A、B级C级D级
＜10 2-3 2 2 ≥10-＜20 4 2 2
≥20-＜40 8 2 2
≥40-＜100 16 4 2
≥100-＜200 40 10 3
注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。
表2 最少培养皿数
洁净度等级所需φ90mm培养皿数（以沉降4h计）
A 14
B 2
C 2
D 2
采样点的布置:
除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。
在日常监控时，那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气及设备附近应考虑增加取样点和取样次数(与产品非接触区相比，这些区域应视为关键区):人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区，需加强监控。
取样点一股布置在趾离地面0.8-1.0m之间或操作平台的高度。
取样时，取样没备会对气流产生干扰，取样时应避免可能对气流组织的干扰。
尽量避免在回风口附近取样(距离lm以上)，且测试人员应在取样口的下风侧，并尽量少走动。
4.3.4测试步骤：
4.3.4.1采样方法:
用无菌容器(如不锈钢储槽)将预先培养的培养皿(无菌平皿)带至待测区，将培养皿取出，放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5
小时，再将培养皿盖上，盖后倒置。
检测时记下培养皿打开的起始时间和结束时间。
4.3.4.2培养：
全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
32℃培养，时间为72小时。
每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定三个培养皿做对照培养。
4.3.4.3菌落计数:
用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否有遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上计数。
4.3.5注意事项：
测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
采取一切措施防止人为对样本的污染。
对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。
采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
测试状态:
沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。
沉降菌测试前，被测试洁净区己经过消毒。
测试状态有静态和动态两种，在空调系统验流时、长期停产恢复生产前、设施设备大修复产前进行静态测试，在日常监测时进行动态监测。
测试人员:测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。
静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。
结果计算:
用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
平均菌落数的汁算见下式:
计算公式：
ΣMi
M=
n
式中M为平均菌落数（CFU）
Mi表示1，2，3，……n号平皿菌落数；n表示平皿总数。
6．标准：
洁净度级别沉降菌平均菌落数（CFU/皿）以
4h计
A ＜1
B 5
C 50
D 100
7.结果评定:
用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。
若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
8.偏差纠正
一旦发现空气微生物监测结果超标，一般可以采取以下行动进行调查和评估:
回顾最近一次的悬浮粒了数的检测结果;
回顾最近一次的表面微生物的检测结果;
检查人员的更衣程序是否正确;
检查空调系统的运行情况;
检查操作人员的行为的正确性;
必要时空调系统需要重新验证。
采样点布置图：。