农药残留检测技术

NY/T 761-2008前处理步骤
称量
样品称量时应注意有代表性，尽量使用 较大的称量勺，减少样品间的差异。
称量时样品应注意不要过度解冻。 样品称量时应充分搅匀。 称量时应尽量使用开口比较大的容器，
如烧杯，避免样品粘到容器壁上。
提取
根据分析的对象来说，一般有水样、气样、土壤、作 物等之分，它们的提取也不完全相同。提取方法主要 有匀浆提取法、振荡提取法、超声提取法等等。
氮吹时，氮吹管不能离液面太近，更换样品后一定要 对针头进行清洗，防止污染。
浓缩注意事项
浓缩过程是样品比较容易损失的环节，因而为了考察样品的浓缩 过程，也可以单独进行标准农药的浓缩回收率试验，一般应在90 ％以上为宜。
对于要浓缩净化后的溶液必须更加警惕，因为提取物中油脂等杂 质已经很少，必要时可以加入几微升不干扰分析的抑蒸剂 （keeper），如乙二醇、硬酯酸等，以保证农药在蒸干时避免遭 到损失。（例如甲拌磷如果吹的太干，其回收率就会偏低，一定 要氮吹近干，或加入几微升不干扰分析的抑蒸剂，而一般用旋转 蒸发仪进行浓缩就不会出现这个问题。）
固相萃取四个步骤
3、淋洗
分析物得到保留后，通常需要淋洗固定相以洗掉不需要的样品组 分，淋洗溶剂的洗脱强度是略强于或等于上样溶剂。淋洗溶剂必 须尽量地弱以洗调尽量多的干扰组分，但不能强到可以洗脱任何 一个分析物的程度。
注意：淋洗时不宜使用太强溶剂，否则会将强保留杂质洗下来。 使用太弱溶剂，会使淋洗体积加大。可改为强、弱溶剂混用；但 混用或前后使用的溶剂必须互溶。
气流吹蒸浓缩装置
利用空气或氮气流吹带出溶剂的浓缩方法，适用于体积小、 易挥发的提取液，但对于蒸汽压较高的农药就比较容易损失。
浓缩注意事项
使用旋转蒸发器时，应注意水浴温度不宜过高，一般 不超过40℃，待浓缩的溶剂多数情况是二氯甲烷。有 时也用丙酮或甲醇，但水浴温度要适当提高。在浓缩 过程中，要注意不能蒸干。
水／蔬菜水果／ 谷物／动物组织 ／生物样品 蔬菜水果／豆类 ／动物组织
动物组织／生物 样品
蔬菜水果
所有 所有
有电荷转移 除平面性分子以 外
固相萃取柱净化应用
一般菜样：如白菜、甘蓝、黄瓜、萝卜等，可根据需 要选用 C18柱、 Florisil柱、NH2柱等净化。
深色样品：如菠菜、菜心、青椒和胡萝卜，含色素多， 可用石墨碳黑柱去除色素。
农残分析中常用的净化方法有：液-液分配法、柱层析法、固相萃 取法、吹扫蒸馏法、磺化法、凝结剂沉淀法和薄层色谱法等。
GPC 样品净化系统
从样品中除去 大分子物质
提高分析结果 的精确度
延长进样口和分 析柱的使用寿命
固相萃取四个步骤
1、柱子预处理（固定相活化） 活化的目的是创造一个与样品溶剂相容的环境
并去除柱内所有杂质。通常需要两种溶剂来完 成上述任务，第一个溶剂（初溶剂）用于净化 固定相，另一个溶剂（终溶剂）用于建立一个 合适的固定相环境使样品分析物得到适当的保 留。
固相萃取四个步骤
注意：终溶剂不应强于样品溶剂，若使用太强 的溶剂，将降低回收率。另外，在活化的过程 中和结束时，固定相都不能抽干，因为这将导 致填料床出现裂缝，从而得到低的回收率和重 现性，样品也没得到应有的净化。如果在活化 步骤中出现干裂，所有活化步骤都得重复。
提取剂
乙腈：4L乙腈中加入1mL磷酸、30g五氧化二 磷，进行蒸馏，收集81℃ ～82℃馏分。
乙酸乙酯：1L乙酸乙酯，加入100mL乙酸酐 和10滴硫酸，加热回流4h。蒸出后，再用碳 酸钾干燥，过滤，再蒸馏，收集77℃馏分。
提取剂
经过以上处理的溶剂，有时还不符合要求，再 可以用高活性的中性氧化铝柱层析进行提纯。
含水少的干样：如稻米、大豆、花生、茶叶等，可在 均质前先加超纯水湿润膨胀样品，然后提取。
提取剂
1．惰性 所选用的溶剂不能与待测物有化学反应。同时也不能对测定时采
用的仪器有影响。如采用电子捕获检测器进行测定时，其前处理 包括提取、净化等环节尽量避免使用含氯试剂。 2．溶剂的纯度 农药残留分析中所使用的溶剂是有特殊要求的，一般纯度达到在 气相色谱的电子捕获检测器上不含有杂峰（杂质一般在10－9克以 下）。
固相萃取四个步骤
2、上样 上样步骤指样品加入到固相萃取柱并迫使样品溶剂通
过固定相的过程，这时分析物和一批样品干扰物保留 在固定相上。 为了保留分析物，溶解样品的溶剂必须较弱。如果溶 剂太强，分析物将不被保留，结果回收率将会很低， 这一现象叫穿漏。尽可能使用最弱的样品溶剂，可以 使溶质得到最强的保留或者说最窄的谱带。
C2-C18
除脂肪，甾体化合物，挥发油， 油脂
硅胶 Florisil
NH2/PSA 聚酰胺／氧化铝 阳：胺类／嘧啶 类
阴：磺酸／羧酸 活性碳，石墨碳 黑
除碳水化合物、甘油三酸酯、自 由脂肪酸、生物碱、黄酮、氨基 酸、强性甙、醌类、甾体化合物
无电荷转移
极性基团多、芳香基团多和分子 量大的一些色素类、胡罗卜素、 固醇
提取过程中注意事项
残留分析试样中农药含量甚微，提取效率的高低直接 影响结果的准确性。选择合适的固液比直接影响提取 效率。由于多残留检测方法考虑的是多组分的同时提 取，所规定的固液比对某种组分就不一定合适，如果 只检测某些组分，应通过试验确定合适的固液比。
提取过程中，应对农药检测相关的化学性质（挥发性、 极性、PKa）加以关注。
使用旋转蒸发器时，应尽量选择冷却循环系统，冷却 温度控制在5 ℃以下，以保证回收率。
浓缩注意事项
使用氮吹浓缩时，加热温度不宜过高，一般控制在80 ℃以下。氮气流量不能过大，不能将样品吹干，在近 干状态下取离水浴锅，自然晾干，若一定要干涸时， 则操作必须细心，可以用橡皮球慢慢吹入干燥空气。
若易氧化的样品，还必须使用氮气，否则会导致某些 农药回收率偏低。
残留分析试样中农药含量甚微，提取效率的高低直接 影响结果的准确性。故应根据试样类型、农药种类、 试样中脂肪、水分含量和最终测定方法等来选择提取 方法和提取溶剂，以便尽可能完全地提取出试样中所 含的农药，而尽量少地提取出干扰物质。
提取
我们对同一样品同时采用匀浆、振荡和超声方法三种不 同提取方法进行了添加回收试验，结果表明不同的提取 方法回收率结果没有显著差异。提取完成后要注意对匀 浆机的清洗顺序（先丙酮后再用水）。
标准溶液的配制
标准溶液的管理要做到规范和可追溯。要建立标准物 质登记台账和标准物质配置和领用台账，每个进样标 样都应当可以追溯到所购买标准样品的标准证书。
标准溶液在配置时应逐级稀释，减少反复解冻，避免 农药降解对检测工作造成影响。
标样配制后应放入棕色贮液液的配制
我们目前主要针对的是蔬菜和水果， NY/T 761-2008采 用的是组织捣碎法：又称匀浆提取法，优点是简便、快 速、效果好。
提取
深绿色样品：如菠菜、菜心、青花菜和青椒等，可在 均质前加石墨化炭黑先除去大部分色素，再提取。
汁液样品：如橙汁、桃汁、菠菜汁等，这类样品含水 多、显酸性，在称样后要先调节酸度至近中性，再提 取。
农药残留检测技术
山东省农药检定所 农业部农药质量监督检验测试中心（济南）
农药残留检测技术
NY/T 761-2008及质量控制 仪器维护
气相色谱维护 液相色谱维护
NY/T 761-2008方法的特点
优点：与GB 5009.20和德国S19方法相比，该方法明显简 便，步骤少，操作简单，显著缩短了前处理的时间，明 显提高农药残留检测效率。
农药名称 样品本底(µv•sec) 0.1回收峰面积(µv•sec) 0.1标全峰面积(µv•sec) 0.2外标峰面积(µv•sec) 0.2基质配标峰面积 (µv•sec) 回收 %（用0.1标全算） 回收 %（用0.2外标算） 回收 %（0.2基质配标算）
甲胺磷 ---
670189 496047 1583154
缺点：“双刃剑” 其优点也正体现了不足之处，由于前处 理过程简单，样品没有经过充分的净化，尤其是有机磷 检测,分取吹干后直接定容上机检测,容易污染衬管，给仪 器维护提出了更高的要求。
样品前处理
农药残留检测中样品前处理技术是检测过程中 耗时最长,最容易出现误差的步骤，对细节要求 很高。注重对样品前处理技术的研究能提高农 药残留检测的效率和准确率。
贮液瓶标签填写要规范，应包含农药名称、浓度、溶 剂名称、配置人、配置时间、有效期等信息。
由于不同样品存在一定的基质增强效应，因此用试剂 配制标准溶液测定样品往往会造成检测结果偏高的现 象，采用样品空白提取液配制标准溶液，可以有效弥 补基质增强效应带来的定量偏差。
标准溶液的配制
辣椒（添加浓度为0.1mg/L）回收率
净化
净化的要求与方法在很大程度上取决于农药和样本的性质、最终 检测方法、对分析时间和对分析结果准确度的要求。
如采用专一性强的火焰光度检测器测定有机磷或有机硫农药时， 不需复杂的净化步骤。
使用抗干扰能力差的电子捕获检测器测定有机氯或菊酯类农药和 使用氮磷检测器时，对净化要求必须严格，否则杂质会影响测定 结果，还可能污染检测器。
固相萃取四个步骤
4、洗脱 淋洗过后，将分析物从固定相上洗脱。溶剂必
须进行认真选择，溶剂太强，一些更强保留的 不必要组分将被洗出来；溶剂太弱就需要更多 的洗脱液来洗出分析物，这样固相萃取柱的浓 缩功效就会削弱。
不同的填料的固相萃取柱
分类
代表
除杂类型
基质类型
农药类型
非极 性
极性
离子 交换 性 吸附 性
最后用气相色谱仪的电子捕获检测器对溶剂作 一次检验。取溶剂300mL～500mL，浓缩到 3mL～5mL，取2L微升进入色谱柱，以不出 现杂峰为合格。
提取过程中注意事项
样本在提取过程中，应保证样品提取时间、 提取过程与质控样品尽量相同，使质控更清 楚的反映前处理操作的准确性。