【CN109821071A】一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶及其制备方法【专利】
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910134184.3
(22)申请日 2019.02.22
(71)申请人 上海仁康科技有限公司
地址 201900 上海市宝山区真陈路1000号1
幢6楼K座211室
(72)发明人 董亚兵 朱宁文 朱迎春
(74)专利代理机构 北京慕达星云知识产权代理
事务所(特殊普通合伙)
11465
代理人 李冉
(51)Int.Cl.
A61L 27/36(2006.01)
A61L 27/50(2006.01)
A61L 27/52(2006.01)
A61L 27/56(2006.01)
A61L 27/60(2006.01)
(54)发明名称一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶及其制备方法，水凝胶以脱细胞真皮基质为原材料，利用Ca 2+和EDC/NHS进行交联。本发明制备的水凝胶为多孔结构，孔隙之间相互连通，具有与人体皮肤组织相似的三维结构，能使机体组织细胞迅速生长；本发明的水凝胶含有丰富的生长因子，具有良好的生物相容性，更有利于支持细胞的生长；且其具有良好的可塑形性，可根据需要制备成不同规格满足需要；本发明的水凝胶，不仅能够用于创面修复，也是优良的组织工程皮肤支架材料，可用于皮肤缺损的修复及制备
组织工程皮肤。权利要求书2页 说明书5页 附图4页CN 109821071 A 2019.05.31
C N 109821071
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109821071 A
1.一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶，其特征在于，所述水凝胶以脱细胞真皮基质为原材料，利用Ca2+和EDC/NHS进行交联。
2.一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)制备脱细胞真皮基质：
①取储存的人源皮肤，清除皮下附带脂肪成分；
②步骤①清除皮下附带脂肪成分的皮肤用碘伏及酒精清洗消毒，后用低渗溶液反复浸泡清洗皮肤；
③将步骤②清洗后的皮肤用2.5mg/ml Dispase II溶液处理过夜；弃去Dispase II溶液，去除表皮，后用生理盐水清洗，获得真皮；
④将步骤③获得的真皮用含有Ca2+的高渗盐溶液处理12-24h；弃去高渗盐溶液后，用生理盐水清洗；
⑤将步骤④清洗后的真皮置于配制好的“脱细胞液”中，在“透析装置”中处理2h-6h，获得脱细胞真皮基质；
⑥用生理盐水清洗3次，每次15min，得到人源的脱细胞真皮基质；
(2)胃蛋白酶酶解：向步骤(1)获得的脱细胞真皮基质中加入1％-5％的胃蛋白酶溶液，室温下搅拌酶解12-15h；
(3)清洗：将步骤(2)酶解后的脱细胞真皮基质过滤取沉淀，将沉淀用生理盐水清洗；
(4)冻干：将步骤(3)清洗后的脱细胞真皮基质沉淀在冻干机中冻干12-15h；
(5)粉碎：将步骤(4)冻干后的脱细胞真皮基质沉淀用超微粉碎机粉碎3-5min，获得脱细胞真皮基质粉末；
(6)交联：
在步骤(5)获得的脱细胞真皮基质粉末中加入蒸馏水，使其形成浓度为0.01g/ml-0.5g/ml的溶液，随后加入交联液，充分混合；将混合后的溶液在-80℃条件下冷冻6h，冻干即获得水凝胶。
3.根据权利要求2所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)制备脱细胞真皮基质：②步骤①清除皮下附带脂肪成分的皮肤，用2％碘伏清洗消毒，用75％酒精脱碘，再用无菌蒸馏水反复浸泡清洗皮肤。
4.根据权利要求4所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)制备脱细胞真皮基质：④将步骤③获得的真皮用0.5-3mol/L含有Ca2+的高渗盐溶液处理12-24h，Ca2+的终浓度为1-10mM/L。
5.根据权利要求2所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)制备脱细胞真皮基质：步骤④所述高渗盐溶液为0.5-3mol/L含有Ca2+的氯化钠溶液，Ca2+的终浓度为1-10mM/L。
6.根据权利要求2所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)制备脱细胞真皮基质：步骤⑤所述的“脱细胞液”包含以下组分：0.1％-0.5wt％胰酶，0.5-5mM EDTA，0.1％-0.5wt％TritonX-100，Na+ 0.1-0.5mol/L，Cl- 0.1-0.5mol/L，Ca2 + 1-10mmol/L；Ca2+来自Ca(NO3)2，NO3- 2-20mmol/L。
7.根据权利要求2所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)制备脱细胞真皮基质：步骤⑤所述的“脱细胞液”包含以下组分：0.1％-0.5wt％胰
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