附子中新乌头碱的含量测定(一)
附子高压蒸制生物碱含量测定
附子高压蒸制生物碱含量测定［摘要］本文在中药炮制理论指导下，以生附子、常压蒸附子炮制品为对照，以三种乌头生物碱及炮制品的外观评分为指标，比较高压蒸制工艺。
结果:附子高压蒸制效果最佳，附子经润湿法处理后，使用立式压力蒸汽灭菌器（LS-50LJ）蒸制 150 min时，与各炮制品综合评分比较相近，从各方面考察分析:外形美观符合药典规定，双酯型生物碱含量急剧下降低至0.04mg/g。
达到2015版药典对炮制附子的要求。
结论:该工艺简便、可控、易行，可作为替代传统炮制工艺的新方法。
经高压蒸制法处理后其双酯型生物碱大大降低，单酯型生物碱明显增加，总生物碱含量变化不大，说明该工艺稳定可行，适合工业化生产。
［关键词］附子；高压蒸制；生物碱；总生物碱；一、概述附子为毛茛科草本植物乌头子根的加工品，始载于《神农本草经》，味辛、甘，性大热；具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功效［1］。
其生品所含的乌头碱等酯型生物碱毒性较大，但它既是有效成分，又是毒性成分，临床使用的安全范围较小，通过合理的加工可使生物碱由双酯型水解为单酯型，从而达到降毒存效的目的。
但实际操作时往往出现炮制不及，毒性太大，炮制太过，药效不存的现象。
目前能同时控制附子毒性和保证疗效的工艺尚不规范，同时对其安全性和有效性的科学、量化的质量标准不明确，造成各地附子炮制品的质量相差很大［2］。
历版《中国药典》制法耗时耗能，依赖经验，可控性较低，炮制过程中化学成分较难控制。
传统炮制工艺是在产地进行洗净、泡胆巴、煮、剥皮、切片、漂片等加工处理，在此过程中，生物碱损失约81.3% ，其中泡胆巴损失31.6% ，漂片 33.6% ，蒸片16.1% ［3］。
本文提出的高压蒸制法，操作简单、可控、省时，去毒效果好，是目前炮制研究的热点。
二、实验部分2.1仪器与试药2.1.1实验试药表2.1实验试药试药批号厂家附子采自陕南上海源叶生物料技有限公司乌头碱对照品P23S7F21639上海源叶生物料技有限公司次乌头碱对照品M12A7S19326上海源叶生物料技有限公司新乌头碱对照品Y12A7H19379乙睛、四氢呋喃、用醇、乙醇、乙酸铵、冰乙酸、异丙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、氨水，其中乙睛和四氢呋喃为色谱纯，其余为分析纯，水为纯化水。
高效液相色谱法测定附子中次乌头碱的含量
高效液相色谱法测定附子中次乌头碱的含量【关键词】高效液相色谱摘要：目的成立附子中次乌头碱的含量测定方式。
方式色谱柱为Hypersil ODS2，5 μm，4.6 mm×250 mm；流动相为0.2%冰醋酸(用三乙胺调pH 6.25)乙腈(63∶37)；流速：1.0 ml/min。
结果次乌头碱在0.151～1.208 μg范围内线性关系良好，r=0.999 8，加样回收率为98.13%，RSD为1.14%。
结论该法可作附子的质量操纵指标之一。
关键词：附子；次乌头碱；高效液相色谱法附子为毛莨科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.子根的加工品，依炮制方式不同有盐附片、黑顺片、白附片等饮片规格。
《中国药典》2000版Ⅰ部附子项下未收载含量测定方式。
附子中含双酯型生物碱，要紧有乌头碱、次乌头碱和新乌头碱等。
文献报导酯型生物碱含量测定有酸性染料比色法［1～2］、高效液相色谱法(HPLC)［3～5］和薄层扫描法［6］。
本文采纳HPLC对附子中酯型生物碱进行分析，经预实验附子中乌头碱的含量极低或未能检出，新乌头碱的含量也很低，，次乌头碱的量最大，而且次乌头碱是酯型生物碱毒性显著降低的水解产物，故以次乌头碱的含量作为定量指标，作为附子质量操纵指标之一。
1 仪器与材料1.1 仪器高效液相色谱仪(HP1050)；色谱柱：Hypersil ODS2，5 μm,4.6 mm×250 mm。
1.2 材料附子(购自广东省药材公司中药饮片厂、广州市药材公司经营)，次乌头碱(购自中国药品生物制品检定所)，乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
2 方式与结果2.1 色谱条件确信2.1.1 检测波长的选择次乌头碱的甲醇溶液别离进行紫外扫描，结果均在235 nm处有最大吸收，与文献报导［3］的测定波长一致，故采纳235 mm作为检测波长。
2.1.2 流动相的选择文献［4～5］报导的流动相碱性过强或加入氯仿。
RP-HPLC同时测定附子地上部分中新乌头碱和次乌头碱的含量
Ｋｅ ｒ ｓ ｅ ａ ａ ｔ ｆＲａ ｉ ｏ ｉ ａ ｅ ａｉ Ｐ ａ ｐ ｒ ｔ ； ｓ ｃ ｎｔ ｅ ｈ ｐ ｃ ｎｔ ｅ； — Ｌ ｙ ｗｏ ｄ ：ａ ｒ ｌ ｒ ｏ ｄｘ Ａｃ ｎ ｔ Ｌ ｔ ｒｌ ｒ ｅ ａ ａａ ｍｅ ａ ｏ ｉ ｎ ； ｙ ａ ｏ ｉ ｎ ＲＰ ＨＰ Ｃ ｉ ｐ ｉ ｓ ｉ ｉ
头碱 、 次乌头碱均得到较好分离 ， 分别在 １ ． ０ ｇ・ ～、１４ ２ ５～１ ０ｍ Ｌ １． ６～１１０ ｍ Ｌ 呈 良好 的线性关 系 ； ２ ０ ｇ・ 加样 回收率 分别为 该方法简便 、 灵敏 、 准确 ， 可用于附子中双酯型生物碱 的定量 分析 。
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｆ ｍ ｅ ａ ｏ ｉｉ ｅ ａ ｙ ｃ ｎ ｔｎ ｎ ｔ ｅ ａ ｒ ａ ａ ｔ ｏ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｏ ｓ ｃ ｎ ｔｎ ｎｄ ｈ ｐａ ｏ ｉ ｅ ｉ ｈ ｅ ｉ ｌｐ ｒ ｆ ｉ Ｒａ ｉ ｏ ｉｉＬａ ｅ ａ ｉ ａ ｐ ｒ ｔ ｙ ＲＰ． ｄ ｘ Ａｃ ｎ ｔ ｔ ｒ ｌ Ｐｒ ｅ ａ ａ ａ ｂ ｓ ＨＰＬＣ
ｍ ５Ｉ ； ｍ， ， 流动相为 乙腈－． ％ 乙二胺水 溶液 ， ｚ ｍ） ０１ 梯度 洗脱 ： ０
～
１３ 药材 ．
附子地上部分采 自汉 中洋 县 ， 由西安 医学 院中药
１ ｉ，６ 乙腈 ；７ 叭 ～ ３ ｉ ，２ 乙腈 ； ７ｍｎ ５ ％ １． ０ｍ ｎ ９ ％ 检测 波长 ：
２ ０ｎ 柱 温 ：０ｏ 流 速 ：． ・ ｉ ～； 样 量 ：０ Ｉ。 色 ３ ｍ； ３ Ｃ； １０ｍｌ ｍ ｎ 进 １ ｌ ｘ
ｏ Ｒ ｄ ｃｎｔ Ｌ ｔ ａｉ Ｐａ ｐ ｒｔ．Ｍ ｅ ｏ ｓ Ｔ ｏ ｃｎ ｔｕ ｎ ｅｅａ ａ ｚ ｄ ｓ ｌ ｎ ｏ ｓ ｉ ｅ ｕ ｉ Ａ Ｓ Ｃ８ ｏｕ ｎ （ ５ ｆ ａ ｉ Ａ ｏ ｉ ａ ｒｌ ｒｅ ａａ ｘ ｉ ｅ ｓ ａ ｔ ｄ ｗ ｏ ｓ ｔｅ ｔ ｗ ｒ ｎ ｌ ｅ ｉ ｔ ｅ ｕｌ ｗ ｔ ａＶ ｎ ｓ Ｂ ｃ ｌｍ ２ ０ ｈ ｉ ｓ ｙ ｍｕ ａ ｙ ｈ ｌ ｌ
附子理中丸中乌头碱的限量检查
附子理中丸中乌头碱的限量检查
忻丁烯;邓群;吴安明;王胜利;程紫骅
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】1983(0)2
【摘要】附子理中丸由制附子、党参、炒白术、干姜、甘草五味中药组成,为常用中成药。
生附子含乌头碱,成人口服0.2毫克乌头碱即能引起中毒。
为防止由于炮制不当而引起中毒事故,我们研究了附子理中丸中乌头碱的限量检查法。
1.样品来源附子理中丸,江西国药厂产品,批号810226,每丸9克。
2.乌头碱标准品 E.Merck,用无水乙醇溶解,配成1毫升相当于1毫克乌头碱。
【总页数】1页(P17-17)
【关键词】限量检查;中乌头碱;附子理中丸
【作者】忻丁烯;邓群;吴安明;王胜利;程紫骅
【作者单位】江西国药厂;江西中医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R286.0
【相关文献】
1.构建限量检查医院制剂姜红活血止痛酊中乌头碱的薄层色谱法研究 [J], 彭波;刘春龙
2.骨痹止痛液中乌头碱的限量检查 [J], 李喜香;李兴勇;王雪梅;包强
3.流感丸中乌头碱的限量检查及HPLC含量测定方法的建立 [J], 刘高宏;魏立莉;
4.流感丸中乌头碱的限量检查及HPLC含量测定方法的建立 [J], 刘高宏;魏立莉
5.流感丸棒嘎药材中乌头碱限量检查方法学研究 [J], 仇朝红;马元龙
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附子中3种双酯型生物碱含量测定方法建立
附⼦中3种双酯型⽣物碱含量测定⽅法建⽴2 附⼦研究概况附⼦为亚门⽑茛科(Ranunculaceae)植物乌头(AconitumcarmichaeliDebx．)侧根(⼦根)的加⼯品，其性⼤热、⾟、⽢，归⼼、肾，⽣品极毒。
中医认为附⼦具有回阳救逆、补⽕助阳、散寒⽌痛、逐风通痹、温阳⾏⽔等功效。
附⼦始载于《神农本草经》，主风寒咳逆邪⽓，温中，⾦疮，破症坚积聚，⾎瘕，寒湿，拘挛膝痛，不能⾏步[1]。
2.1 附⼦化学成分研究国内外学者对附⼦化学成分的研究表明，附⼦的化学成分分为⽣物碱类物质、脂类物质和多糖类物质三⼤类。
其中⽣物碱类物质为其主要成分，包括脂溶性⽣物碱：乌头碱（aconitine），中乌头碱（新乌头碱mesaconitine），次乌头碱（下乌头碱、海帕乌头碱hypaconitine），塔拉乌头胺（talatisamine），和乌胺（higeramine）棍掌碱氯化物（coryneine chloride）[2]，异飞燕草碱（isodelphinine），苯甲酰中乌头碱（benzoyl mesaconitine），新乌宁碱（neoline），北乌头碱（beiwutine），多根乌头碱（karakoline），去氧乌头碱（deoxyaconitine），准葛尔乌头碱（songorine）；⽔溶性⽣物碱：江油乌头碱（jiangyouaconitine），新江油乌头碱（neojiangyouaconitine）、尿嘧啶(Uracil)[3]、附⼦亭碱（fuzitine）、消旋去甲基衡州乌药碱（demethylcoclaurine）[4]、、附⼦宁碱（fuziline）、去甲猪⽑菜碱（salsolinol）[5]等。
其中双酯型⽣物碱乌头碱（aconitine），中乌头碱（mesaconitine），次乌头碱（hypaconitine）为其主要成分，约占0.4%-0.8%，易溶于氯仿、苯、⽆⽔⼄醇和⼄醚，难溶于⽔，微溶于⽯油醚，既是附⼦的药效成分，⼜是毒性成分。
HPLC法测定附子及其样品中6种乌头类生物碱的含量
HPLC法测定附子及其样品中6种乌头类生物碱的含量栾永福;孙蓉【期刊名称】《中国药物警戒》【年(卷),期】2014(000)005【摘要】目的：建立同时测定附子药材及其样品中6种乌头类生物碱含量的高效液相色谱分析方法。
方法C18柱，乙腈-四氢呋喃（25：15）为流动相A，以0.1mol·L-1醋酸铵溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0mL·min-1，检测波长235nm。
结果6种乌头类生物碱均达到了较好的分离，分别在一定范围内呈良好的线形关系。
结论该方法简便、快速、灵敏，可有效地用于附子的鉴别和内在质量控制。
%Objective To establish a HPLC method for the determination of six kinds of Aconitum alkaloids in Aconitum carmichaeli and its samples. Methods A C18 column was used, and acetonitrile-tetrahydrofuran(25:15) as the mobile phase A, 0.1mol·L-1 NH4AC solution as the mobile phase B, gradient elute with a flow rate of 1.0mL·min-1 and a detection wavelength of 235nm. Results The six kinds of Aconitum alkaloids were separated, and the calibra tion curves of them were in good linearity over the certain range respectively. Conclusion This method is simple and accurate. It can be used in the identification and quality control of A. carmichaeli.【总页数】5页(P271-274,280)【作者】栾永福;孙蓉【作者单位】天津中医药大学，天津300073;山东省中医药研究院，山东济南250014【正文语种】中文【中图分类】R917;R282【相关文献】1.HPLC测定乌头汤提取物中3种乌头类生物碱的含量 [J], 张晓芬;王彬辉;章文红;王石健;王金明;杨赛成2.HPLC-Q-TOF-MS法测定不同厂家小金丸中9种乌头类生物碱的含量 [J], 黄阳;曹益鸣;张小龙;卜红闽3.HPLC法测定生附子及其炮制品中乌头碱及次乌头碱的含量 [J], 崔敏;杨武德4.RP-HPLC法测定蒙药那如-3丸中乌头类生物碱含量 [J], 陶淑娟;邵太丽;毕开顺5.HPLC法测定附子配伍前后乌头类生物碱含量 [J], 张丽;李锦;王玉明;刘昆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
附子不同组织中生物碱含量的测定
Vol. 24 No. 1 M ar. 2009
附子不同组织中生物碱含量的测定
侯大斌 赵祥升 王 惠 许 源
(西南科技大学生命科学与工程学院 四川绵阳 621010)
摘要 :对附子不同组织中乌头总碱和 3种双酯型生物碱 —新乌头碱 、乌头碱和次乌头碱的含量进行了测定 。用酸性 染料比色法测定乌头类总生物碱的含量 ;反相高效液相色谱法测定新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱的含量 ,色谱柱为 : Zorbax extend - C18 (150 mm ×4. 6 mm , 5. 0μm ) ,流动相为乙腈 —0. 1%乙二胺 ,梯度洗脱 ,流速为 l mL /m in,检测波 长为 240 nm ,柱温 30 ℃。结果表明 :附子不同组织中生物碱的含量呈现明显的差异性 。子根 、茎秆 、叶 、须根和母 根中乌头类总生物碱含量分别为 : 5. 53, 3. 81, 14. 77, 8. 87和 4. 58 mg/ g; 3种双酯型生物碱含量在不同组织中的含 量顺序为 :须根 >子根 >母根 >叶片 >茎秆 。该研究可为附子资源的综合利用提供科学依据 。 关键词 :附子 新乌头碱 次乌头碱 乌头碱 高效液相色谱法 中图分类号 : R282; S567 文献标识码 : A 文章编号 : 1671 - 8755 (2009) 01 - 0098 - 04
高效液相色谱法测定附子中3组分的含量
中国药房 ２ ０ ０ ６年第 １ 卷第 １ ７ ６期
Ｃｈｉ ａ Ｐｈ ｒ ａ ｙ ０ ６ Ｖｏ ． ７ ｎ ａ ｍ ｃ ２ ０ １ １ Ｎｏ． ６ １
。１ ５５。２
维普资讯
５ ， ｍｌ 振荡使之溶解 ， ． ０ ４ ｍ微孔滤膜过滤 ， 取续滤液 １／ ， ０ ｌ供 １ 高效液相色谱法分析 。 ２ ５ 线 性关 系考 察 ．
Ｓｉ ｕ ｔ ｎｅ ｕ ｎｔ ｎｔ Ｄ ｅ ｅ ｍ ｉ ｍ ｌａ ｏ ｓ Ｃｏ ｅ ｔ ｒ ｎａｔｏ ｏ ｔｎｅ， ｉ ｎ ｏｆ Ａｃ ｎｉｉ Ｈｙｐａ ｏ ｔｎｅ ａ ｄ Ｍ ｅ ａ ｏｎｉｉ ｎ Ｆｕｚ ｙ Ｈ ＰＬＣ ｃ ｎｉｉ ｎ ｓｃ ｔｎｅ ｉ ｉｂ
ＡＢＳ ＴＲＡＣ Ｔ ＯＢＩ ＥＣＴｌ ＶＥ：Ｔｏｅ ｔ ｂｉｈ ａ Ｐ ｅｈ ｄｆｒｓｍｕｔ ｎ ｏ ｓｃ ｎ ｅ ｔｄ ｔｒ ｎ ｔｏ ｆａ ｏ ｉｉ ｅ ｍ ｅａ ｏ ｉｉｅ， ｓａ ｌ ｎＨ ＬＣ ｍ ｔ ｏ ｏ ｉ ｌ ｅ ｕ ｏ ｔｎ ｅｅ ｍｉ ａｉ ｎｏ ｃ ｎ ｔｎ ， ｓ ｃ ｎ ｔ ｓ ａ ｎ
２ ３ 内标 溶 液 的 制 备 ． 准确称取阿普唑仑 １ ．ｍｇ 置于 ５ ｍｌ ０２ ， ０ 容量瓶 中， 加水溶
仑 对照品均 由中国药 品生物制 品检定所提供 ；甲醇为色谱纯 ， 水 为超纯水 ， 三乙胺 、 磷酸等试剂均为分析纯。
附子中新乌头碱的含量测定
２ １ 色谱条 件 色谱 柱 ： ｌ ｒｍ～ｃ ５ ｆ ，． Ｈ ５ ． Ｗｅ ｈｏ ｅ １（ ｍ ４ ６ ｌｎｘ２ ０ ｓ ｘ Ｉ ａ ｒ ； 动相 为 甲醇 一水 一三 乙 胺 （ ５ ２ ：０ ０３ ； 速 ：． ｍ） 流 ７ ： ５ ．３ ） 流 １０ 图 ２ 新 乌 头 碱 对照 品 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ图 ｍ ・ ｉ 。； 测 波 长 ：３ ｍ； 温 ：Ｏ 。进 样 量 ： ｆ。 在该 色 Ｊ ｒ ｎ 。检 ａ ２３ｎ 柱 ３℃ ５ｘ ｌ 谱条件下 ， 新乌头碱与杂峰分离 良好。结果见 图 １ 。 ～２ ２ ５ 稳定性实验 精密 吸取放置 ０ ２ ４， ， ． ， ， ６ ８ｈ的样 品溶液 ５ １ ２ ２ 溶液 的配 制 ． 分别注入高效液相 色谱 仪 ， 测得 相 应 的峰 面 积 ，Ｓ Ｒ Ｄ＝２ １％。 ．９ ２ ２ １ 对照品溶液 的制备 精密称取新乌头碱对照品适 量 ， ．． 配制 结 果 表 明 ， 试 品溶 液 在 ８ 供 ｈ内稳定 性 良好 。 成 ０ １６ ｇ・ｍ 的 对 照 品 溶 液 ， 精 密 吸 取 此 对 照 品 溶 液 ， ２ ６ 重复性实验 精密称取同一药材 ６份按 “ ．． ” ． １ｒ ａ ｌ 再 ． ２２ ２ 项下供试 品 ０４ ０ ８ １２ １６ ２０ ２ ４ ２８ｍ 分别定容于 ５ｍ 容量瓶 中。 ． ，． ，． ，． ，． ，． ，． １ ｌ 的制备方法制备 ， 分别吸取 上述样 品溶液 ５ 注入 高效液相色 ２ ２ ２ 样 品溶液 的制各 精密称取生 附子粉末 （０目） １４ｇ 谱 仪， ．． ４ 约 ． ， 测其峰 面积并计算含量 ， Ｓ ２ ０ ％ 。 Ｒ Ｄ＝ ．６ 置 于 具塞 三 角 锥 形 瓶 中 ， 入 浓 氨水 ２ｍ ， 润 ０ ５ｈ再 加 ７ １ ２ ７ 加样 回收率实验 精密称取 已知含量样 品（ ０ ７ ） 加 ｌ浸 ． ， ５ｍ ． 约 ．ｇ ９份 ， 分 乙醚摇 匀， 放置 过夜 ， 超声 （ 功率 ５ ０ ｗ， ０ 工作频 率 ４ Ｈ ） ０ｋ ｚ 提取 别精密加入新乌头碱对照品溶液适 量使其 中新乌 头碱 含量为样 １ ｉ， ５ｒ ｎ过滤 ， 以 ２ ｌ ａ 再 ５ｍ 乙醚分次洗涤药渣 ， 过滤 ， 合并滤液和洗 品中新乌头碱含 量 的 ８ ％ （ ０ ３份 ） １０ （ 、０ ％ ３份） １０ （ 、２ ％ ３份 ） 。 液 ， ￣水 浴 挥 干 ，．３ ％盐 酸 甲醇 溶 液 溶 解 残 渣 ， 定 容 至 ２ 按“ ．． ” ４ Ｃ ５ ００７ 并 ５ ２２ ２ 项制 备， 按上述 色谱条 件测 定 ， 计算新乌 头碱 含量 并
附子理中口服液中乌头类生物碱的含量测定
・科研交流・附子理中口服液中乌头类生物碱的含量测定杨 云 (河南中医学院 郑州450003) 附子理中口服液是由中国药典1990年版收载的附子理中丸通过剂型改革研制的新药。
由附子、白术、党参、干姜、甘草五味药组成,具有温中健脾的功效,对脾胃虚寒、脘腹冷痛、呕吐泄泻、手足不温有显著的疗效。
附子为方中主药,其有效成分为乌头类生物碱。
为提高产品质量,保证临床用药安全有效,我们对附子理中口服液中乌头类生物碱的含量测定方法进行了探讨,现将结果报道如下。
1 实验方法及结果111 仪器、药品与试剂 日本岛津UV -240分光光度计;上海第二分析仪器厂721型分光光度计;附子理中口服液(河南宛西制药厂);附子、党参、白术、干姜、甘草等药材购自河南中医学院校医院;乌头碱对照品由中国药品生物制品鉴定所提供,德国产;所用试剂均为分析纯。
112 供试液的制备11211 对照品溶液的配制 精密称取乌头碱对照品约6m g ,置100m l 量瓶中,加2m l 0105m o l L 硫酸溶液,使溶解,并加水稀释至刻度,摇匀,即得。
11212 供试品溶液的制备 精密量取本品10m l 置分液漏斗中,加水8m l 稀释,再加氢氧化钠试液调节pH 值至11,用氯仿提取5次(20、15、10、10、10m l ),合并氯仿液;分出乳化层,加无水硫酸钠适量,搅拌,脱水,分出氯仿液;无水硫酸钠用氯仿洗涤2次,每次5m l ,合并以上3种氯仿溶液,蒸干,残渣加硫酸液(0105m o l L )012m l 搅拌,溶解,加少量蒸馏水稀释,移入5m l 量瓶中,用水分次洗涤容器,洗液并入量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
11213 空白对照液的制备 按处方量称取除附子之外的各味药材,制备成缺附子口服液,精密吸取此口服液10m l ,按“供试品溶液的制备”项下规定的方法制备空白对照液。
113 测定波长选择 精密吸取对照品溶液、空白对照液以及供试品溶液各210m l ,分别加水110m l ,按样品测定项下规定的方法操作,于365～500nm 波长间测定吸收光谱,结果见图1。
附子总生物碱提取物中3个双酯型和3个单酯型乌头碱成分的含量测定
附子总生物碱提取物中3个双酯型和3个单酯型乌头碱成分的含量测定刘敏;张海;蔡亚梅;陈啸飞;朱臻宇;柴逸峰【摘要】目的提取附子总生物碱,采用高效液相色谱法同时测定附子总生物碱提取物中苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰乌头次碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱6个成分的含量.方法采用85％的乙醇回流提取附子药材,经大孔吸附树脂柱分离后,制得附子总生物碱提取物,采用Waters Terra C18色谱柱(3.0mm×100mm,3.5μm)；流动相为A:乙腈,B:水(5 mM醋酸铵),梯度洗脱,A相随时间的变化:15％～26％ (0～ 10 min),26％～30％(10 ～ 20min),30％ (20 ～25 min)；流速0.5 ml/min；检测波长235 nm;柱温25℃；进样量5μl.结果 6个生物碱成分苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱在20 min内实现完全分离,在11.40～114.0、10.22 ～ 102.2、10.36 ～ 103.6、6.250 ～62.50、13.50 ～135.0、15.12～151.2 μg/ml的线性范围内,线性关系良好(r ＞0.999).方法学考察结果表明,日内日间精密度,最低检测限和定量限的范围均符合含量测定的要求,加样回收率(n=6)分别为104.52％(RSD=2.0％)、103.43％(RSD=1.6％)、101.92％ (RSD =2.3％)、99.45％ (RSD =2.7％)、97.67％(RSD=1.9％)、101.15％(RSD=3.4％).结论该方法简便、准确、可靠,可用于附子提取物中6个乌头碱成分的含量测定.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2013(031)003【总页数】4页(P181-184)【关键词】附子总生物碱;高效液相色谱法;含量测定【作者】刘敏;张海;蔡亚梅;陈啸飞;朱臻宇;柴逸峰【作者单位】南京军区联勤部药品仪器检验所,江苏南京210002;第二军医大学东方肝胆外科医院药材科,上海200438;第二军医大学药学院,上海200433;第二军医大学药学院,上海200433;第二军医大学药学院,上海200433;第二军医大学药学院,上海200433【正文语种】中文【中图分类】R282.710.3附子(Aconiti Lateralis Radix Preparata)为毛莨科(Ranunculaceae)乌头属(Aconitum)植物乌头(Aconiturmn carmichaelii Debx.)子根的加工品，其味辛、甘、性热、有毒，入心、脾，肾经，具有回阳救逆、温补肾阳和祛寒止痛等功效[1]。
反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量（精）
反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量（精）反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量作者：邓雅琼，刘荣华，邵峰，卢锋【摘要】目的测定附子中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。
方法采用反相高效液相色谱（PR-HPLC）法，使用UltimateTM XB-C18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm)；流动相为乙腈-0.2%冰醋酸（浓氨水调节pH值为7.29）；检测波长：230 nm；流速1.作者：邓雅琼，刘荣华，邵峰，卢锋【摘要】目的测定附子中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。
方法采用反相高效液相色谱（PR-HPLC）法，使用UltimateTM XB-C18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm)；流动相为乙腈-0.2%冰醋酸（浓氨水调节pH值为7.29）；检测波长：230 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温为35℃。
结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的回归方程分别为：Y=31.258X+5.794，r=0.999 9；Y=17.418X+5.236 9，r=0.999 8；Y=18.989X+6.186 6，r=0.999 7。
三者的线性范围分别为：3.3125～106μg/ml；0.735 7～23.541 9μg/ml；1.966 1～62.916 4μg/ml。
结论该方法简便、准确、分离效果好、灵敏度高,可用于附子的质量控制。
【关键词】附子反相高效液相色谱乌头碱新乌头碱次乌头碱Abstract：ObjectiveTo develop a high performance liquid chromatography (HPLC) method for the determination of three principal alkaloids in aconite root. Methods（4.6mm×250mm, 5μm）column by isocratic elution using Acetonitrile -0.2%Glacial acetic acid （adjusted to pH 7.29 with concentrated ammonia）.ResultsThe average recovery of the three alkaloids were analyzed simultaneously with UltimateTM XB-C18 ratesobtained were in the range of 98.93-100.5%for RSD below 2.0%.The linear ranges of aconitine; hypaconitine; mesaconitine were respectively 3.312 5～106 μg/ml, 0.7357～23.5419 μg/ml,1.9661～62.9164μg/ml (r=0.999 9, r=0.999 8, r=0.9997).ConclusionThe contents of alkaloids in aconite root varied significantly from species; hence quality control of aconite root is very necessary.Key words：Aconite root; RP-HPLC; Aconitine; Hypaconitine; Mesaconitine附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根加工品［1］。
参附注射液中3种痕量成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的测定
参附注射液中3种痕量成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的测定该文建立了参附注射液中3种痕量附子指标成分的含量测定方法，为评价君药附子的药效学作用提供了依据。
样品经中空纤维液相微萃取（HF，LPME）进行纯化富集，采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），流动相乙腈，10 mmol·L-1碳酸氢铵溶液（pH 10），流速0.45 mL·min-1，梯度洗脱。
电喷雾电离（ESI）、多反应监测（MRM）方式进行含量测定。
结果表明，乌头碱、次乌头碱、新乌头碱在0.1～100 ng·L-1线性关系良好，r>0.999，检测限分别为0.03，0.03，0.02 ng·L-1，平均加样回收率分别为100.1%，97.4%，97.5%，RSD分别为1.2%，1.1%，1.5%。
该方法保证了参附注射液的用药安全，为正确评价附子的君药药效学作用提供了科学依据，为含有附子的中药制剂的质量控制提供了可靠方便而实用的检测手段。
标签：乌头碱；次乌头碱；新乌头碱；参附注射液；中空纤维液相微萃取；超高效液相色谱质谱参附注射液源于古方“参附汤”，是以红参、附子为主要成分的中药注射液，具有回阳救逆、益气固脱的作用。
临床上主要用于治疗心源性休克和心力衰竭。
处方中，附子作为君药，其主要活性成分为乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等双酯型生物碱，现代药理学研究证实，这类生物碱具有抗炎、免疫抑制、麻醉止痛、抗肿瘤等作用[1，2]，对心血管系统具有强心、降血压、扩血管等作用[3]。
但同时这类生物碱的毒性较强，主要损害循环系统及中枢神经系统，引起机体多脏器功能的损害[4]。
参附注射液在生产过程中，除对附子药材的炮制处理有严格的要求外，还需通过特有的水解转化等工艺降低其毒性[5]，保证用药安全。
所以，制剂质量标准及研究文献中研究人员都试图对附子中双酯型生物碱含量进行严格的控制[6，7]。
附子理中丸中乌头碱的检查
实训十九 附子理中丸中乌头碱的检查一、实训目的1.掌握中药制剂中乌头碱限量检查的一般操作步骤和技能。
2.理解乌头碱限量检查的原理。
二、检验依据附子理中丸药品标准 [《中国药典》2005年版（一部）正文部分484页] 【处方】附子（制） 100g 党参 200g 白术（炒） 150g 干姜 100g 甘草 100g【检查】乌头碱限量 取本品水蜜丸适量，研碎，取25g ，或取大蜜丸适量，剪碎，取36g ，加氨试液4ml ，拌匀，放置2小时，加乙醚60ml ，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇溶解使成1ml ，作为供试品溶液。
取乌头碱对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液12ul 、对照品溶液5ul ，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以苯-乙酸乙酯-二乙胺（14:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点。
三、检验原理本品处方五味药中有附子，附子中含有多种生物碱，其中乌头碱型生物碱中C 14、C 8的羟基分别与乙酸、苯甲酸成双酯型（乌头碱型）生物碱存在，如乌头碱、美沙乌头碱等。
这种双酯型生物碱亲酯性强，毒性大，因此附子需要经过炮制加工降低其毒性。
为保证用药安全，《中国药典》采用薄层色谱法对乌头碱进行限量检查。
四、仪器与试剂硅胶G 薄层板、展开槽、微升毛细管或微量注射器、分析天平、水浴锅、震荡器、量瓶等。
乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所）、附子理中丸、乙醚、无水乙醇、苯、乙酸乙酯、二乙胺、氨试液、稀碘化铋钾试液等。
五、实验步骤和内容1.供试品溶液制备 取水蜜丸适量，研碎，取25g ，加氨试液4ml ，拌匀，放置2小时，加乙醚60ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇溶解使成1ml，作为供试品溶液。
川乌、草乌、附子及其复方制剂中乌头类生物碱的含量测定研究概况
川乌、草乌、附子及其复方制剂中乌头类生物碱的含量测定研究概况提要综述了近年来国内外川乌、草乌、附子及其复方制剂中乌头类生物碱含量测定研究概况。
川乌、草乌、附子及其炮制品均为中国药典1995年版一部收载的常用中药。
中医认为这些药具有祛风除湿、温经止痛的作用。
现代药理研究证明，乌头类中药具有镇静、镇痛、强心、抗炎、抗肿瘤等作用。
由于其主要有效成分为剧毒的双酯型生物碱，而且治疗量与中毒量接近。
为确保临床用药安全有效，国内外学者在乌头类生物碱的含量测定方面做了大量工作。
1 分光光度法1.1酸性染料比色法赵玉梅等［1］选择溴麝香草酚蓝作为酸性染料，比色法测定骨痹痛散中乌头总生物碱含量，以乌头碱(12.06mg/50ml，0.05mol/L H2SO4)作对照，提取液于波长412nm处测定吸光度并计算出乌头总碱含量。
平均回收率为97.54%。
乌兰娜日等［2］选择溴甲酚绿为酸性染料，以乌头碱(10mg/100ml，氯仿)作对照，于波长(415±1)nm处测定附子理中丸中乌头总碱含量。
平均回收率为99.5%，RSD为1.43%。
王海孙等［3］选择文献［2］的条件测定风湿骨痛酒中乌头总生物碱含量，平均回收率为98.58%，RSD为1.83%，因处方中有麻黄，所以提取液在水浴上挥去溶剂后应在105℃烘1h以使麻黄碱挥发，排除干扰。
陶建生等［4］选择溴甲酚绿为酸性染料，以乌头碱做对照于波长416nm，处测定止痛酊中乌头总碱含量。
平均回收率为96.9%，RSD为3.0%。
杨云［5］以溴麝香草酚蓝为酸性染料，波长408nm处测定附子理中口服液中乌头总生物碱含量，平均回收率96.79%。
1.2 一阶导数分光光度法龙沛霞等［6］采用一阶导数光谱法测定制川乌、制草乌及附子中乌头生物碱含量。
测得结果与中国药典(1995年版)方法的测定结果比较无显著差异，而该方法操作起来更简便。
1.3 二阶导数分光光度法徐思文［7］采用二阶导数光谱法测定三七伤药片中总生物碱含量，样品和标准品溶液在波长(238±2)nm和(246±2)nm处有相应的吸收谷和吸收峰，而阴性对照光谱呈近平行线，不干扰样品中乌头总生物碱的定量分析。
不同产地附子含量测定
1.测定条件的选择
1.1对照品溶液的制备
精密称取经105℃干燥至恒重的乌头碱对照品2.96 mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含乌头碱0.1184 mg）。
1.2最大吸收峰的确定
用下述条件对供试品液及对照品液与溴甲酚绿形成的离子对的氯仿溶液，在紫外分光光度计上从340-520 nm的范围内扫描，其最大吸收峰位在415 nm，与文献报道[1-2]相同。
仪器校正用的标准缓冲液的配制：
磷酸盐标准缓冲液：精密称取在115℃±5℃干燥2~3小时的无水磷酸氢二钠3.55 g与磷酸二氢钾3.40 g，加水使溶解并稀释至1000 ml。
硼砂标准缓冲液：精密称取硼砂3.81 g（注意避免风化），加水使溶解并稀释至1000 ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空气中二氧化碳进入。
0.365
2.3重复性实验
称取同一批号的药材粉末(附子1号)1 g，精密称定，按供试品溶液制备项下操作制备供试品，测定吸光度，平行制备6份。结果见表4。
表4重复性实验结果(n=6)
Table.4 Experiment results of repeatability (n=6)
样品号
取样量/g
吸光度
硫酸（广州化学试剂厂，批号：20070712-1）
乙醚（天津市百世化工有限公司，批号：20091101）
醋酸钠（天津市百世化工有限公司，批号：20100503）
冰醋酸（天津市百世化工有限公司，批号：20090320）
硼砂（天津市北联精细化学品开发有限公司，批号：20090828）
磷酸氢二钠（天津市百世化工有限公司，批号：20090620）
含量/%
1
有毒中药现代药理研究之附子
附子[基原]本品为毛其科乌头屑植物乌头Af。
nj6Mmf“rMifAd?jj Debn的子根加工品。
[化学成分]含多种生物碱，总含量为o．32％，主要为海帕乌头碱(次乌头碱，hypa凹n心ne，C：：H d sol。
N)约0．048％、乌头碱(aconNne，CM HM0ll N)0．01％、新乌头碱(meeacont —tine，CMHM01，H)0．006％，其次有塔拉地萨敏(tal饥t2amine，C：d H：，OsN)、川乌头碱甲(chuanwu base，C2：HMO。
N)、J1[乌头碱乙(chuanwu b69e B．CMHM0‘N)、尼奥灵(neo —1ine)、宋果灵(son80rine)、附子灵(fuz山ne)、北乌碱(beiw山tne)、单乙酰塔拉胺(mono—acctytalatisamtne)、乌头生布碱A、B(senbusine A，B)、去甲猪毛菜碱(sals01inot)、棍掌碱(cogyneine)、借碱(18narine)、禾布碱(hokbusiMe)A，D、杰沙乌头碱(jesaconitiRe)、苯甲酰乌头原碱(ben加1aconine)、苯甲酰乌头原碱(benz。
ylme：acon5ne)、苯甲酰下乌头碱(ben301hypaconine)[1d。
从日本产附于中分离出消旋去甲乌药碱(d1—demethylcoclaMrtne，N8enamine)和棍*碱(c。
rynetne)，前者为水涪性强心有效成分，后者早期呈明显升压作用。
所含去甲猪毛菜碱也为水镕性强心成分。
四川江油一带产附子生物碱含量一船在I．1％一1．3％，而自四川江彰移栽于南京的附子中含总生物碱约o．77％，主要为新乌头碱(mesaconitine)约o．4％，另有海帕乌头碱，微量的川乌头碱甲及乌头碱，从附子中还分离到4种鸟头聚糖A、B、C、D(acon地n A，B，CPD)．水涪性成分尿喀咬，以及消旋去甲乌药碱(ht6enamLne)。
附子新型炮制品中乌头类生物碱测定及其强心作用研究
•药学评价•附子新型炮制品中乌头类生物碱测定及其强心作用研究贾雪岩1，林华2*，沈玉巧2，邓广海21. 广州中医药大学，广东广州 5104052. 广东省中医院药学部，广东广州 510120摘 要：目的比较附子新型炮制品与传统炮制品中乌头碱类水平及强心作用，为附子炮制工艺改进提供药理学依据。
方法采用高效液相（HPLC）色谱法测定生附子及黑顺片、高温片、高压片、微波片4种附子炮制品及其煎煮液中6种乌头类生物碱水平；应用Langendorff大鼠离体心脏灌流法，测定附子4种炮制品对心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、舒张末压（LVEDP）、左心室内压变化速率（±d p/d t max）的影响，分析其强心作用。
结果与生附子比较，附子经炮制后，毒性成分双酯型生物碱减低，单酯型生物碱逐渐增加；与黑顺片比较，高压片中生物碱得到最大限度保留，单酯型生物碱水平高于黑顺片，双酯型生物碱水平较低，说明附子高压炮制是一种“低毒高效”的工艺；而高温片和微波片中单、双酯型生物碱水平均有所降低，其成分有一定的流失；4种炮制品煎煮液中6种生物碱溶出率与炮制品中生物碱水平呈正相关。
与对照组比较，4种炮制品均能够显著升高离体大鼠心脏的HR、LVSP、±d p/d t max，降低LVEDP，且呈一定剂量相关性；与黑顺片组比较，3种新型炮制品HR、LVSP、LVEDP、±d p/d t max均差异不显著；在相同剂量下，高压片中HR、LVSP、±d p/d t max值最高，LVEDP值较低。
结论附子高压炮制工艺是一种“高效低毒”炮制工艺，且强心作用效果较好。
关键词：附子；炮制；乌头类生物碱；高效液相；强心作用中图分类号：R965 文献标志码：A 文章编号：1674 - 6376(2016)02 - 0224 - 06DOI: 10.7501/j.issn.1674-6376.2016.02.014Determination of content of novel aconite processed productsand their cardiotonic effectJIA Xue-yan1, LIN Hua2, SHEN Yu-qiao1, DENG Guang-hai11. Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangdong Guangzhou 510405, China2. Dept. of Pharmacy, Guangdong Province TCM Hospital, Guangdong Guangzhou 510120, ChinaAbstract: Objective To compare aconite content and cardiac effects of model processed products and traditional processed products, and to improve the processing technology of aconite. Methods Using HPLC to determine four kinds of aconite processed products (black smooth sheets, high temperature sheets, high pressure sheets, and microwaving sheets) and contents of six kinds of alkaloids in its decoction. With isolated heart perfusion with Langendorff method, HR, LVSP, LVEDP and ±d p/d t max and other content indicators were determined, and the cardiotonic effects of different aconite processed products were analyzed. Results The alkaloid content in high pressure Aconiti Lateralis Preparata slice (Fu Pian) had maximum retention, mono-ester type high alkaloid content, and diester decreased significantly, high temperature, microwaving, and black smooth single and double ester alkaloid contents were low, and the component loss was obvious. Four kinds of processed products of decoction of six kinds of alkaloids dissolution rate and processed products of alkaloid content showed a positive correlation, compared with the control group: Four kinds of processed products could improve significantly higher in isolated rat hearts of HR, LVSP, and ±d p/d t max values, decreased LVEDP values, and the pharmacodynamic effect and dose size showed a certain correlation; compared with the black smooth sheets, three model processed products in HR, LVSP, LVEDP, and ±d p/d t max and other indicators had no significant difference. In the same dose, high pressure Fu Pian in HR, LVSP, and ±d p/d t max values were the highest, and LVEDP value was lower. Conclusion Fuzi high pressure processing收稿日期：2015-07-12基金项目：广东省自然科学基金资助项目（S2013010014082）*通信作者 林华，女，主任中药师，硕士生导师，研究方向为中药质量鉴定和品质评价。
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附子中新乌头碱的含量测定(一)
作者：贾金艳，彭小冰，沈洲卿，杨卫平
【摘要】目的建立以高效液相色谱法测定附子中新乌头碱含量的方法。
方法采用Welchrom-C18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)，以甲醇－水－三乙胺（75∶25∶0.033）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长为233nm，柱温为30℃。
结果新乌头碱在0.0464～0.3248μg 范围内呈良好线性关系，r=0.9999；平均回收率为100.7%，RSD=2.19%。
结论该方法操作简便、准确、重复性好，可用于附子中新乌头碱的含量测定。
【关键词】附子；新乌头碱；高效液相色谱法
附子为毛茛科植物乌头AconitumcarmichaeliDebx.子根的加工品，具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪的功效〔1〕。
附子的主要成分是乌头类生物碱，可分为单酯类、双酯类和胺基醇类生物碱。
其中以双酯型类生物碱如乌头碱、次乌头碱、新乌头碱成分毒性较大，但又同时是附子的药性成分。
历代医家都非常重视附子的毒性及其用量〔2〕。
为保证用药的安全性，本文在参考有关文献的基础上〔3，4〕，对附子生品中的新乌头碱进行含量测定，希望能够为其在质量控制方面提供一定的依据。
1仪器与试药
1.1仪器岛津LC-20A高效液相色谱仪,HS10260D超声洗洁器，XS205电子天平（十万分之一），JT1003电子天平（千分之一）。
1.2试药新乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110799－200404）；甲醇为色谱纯；三乙胺、乙醚为分析纯；盐酸；氨水；纯净水。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：Welchrom-C18(5μm，4.6mm×250mm)；流动相为甲醇-水-三乙胺（75∶25∶0.033）；流速：1.0ml·min-1；检测波长：233nm；柱温：30℃。
进样量：5μl。
在该色谱条件下，新乌头碱与杂峰分离良好。
结果见图1～2。
2.2溶液的配制
2.2.1对照品溶液的制备精密称取新乌头碱对照品适量，配制成0.116mg·ml-1的对照品溶液，再精密吸取此对照品溶液，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0，2.4，2.8ml分别定容于5ml容量瓶中。