2020年牛肉膏蛋白胨培养基配方(课件)
牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌
方月琴
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一、复习 二、实验：配培养基与灭菌 三、斜面的划线培养 四、倒平板的操作 五、平板划线培养
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一、复习
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《微生物培养与检验》主要课程内容
1.微生物营养需求 2.微生物形态 3.微生物纯化、分离
4.微生物培养、筛选与保存
5.微生物检验
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课程内容
1 2 微生物吃什么？ 微生物长的什么样？
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安全操作与标准操作
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微生物吃什么？
（一）微生物培养基的制备 （二）微生物的消毒灭菌 （三）认识微生物培养所需的仪器设备
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（一）微生物培养基的制备
培养基：是人工配制的、适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养物质。 满足微生物生长发育的水分、C，N，生长因子，
P，S，Na，Ca等
适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的氧化还 原电位，合适的渗透压
用新洁尔灭棉球擦拭工作台和手；
将酒精灯瓶外擦干净，转移入工作台； 将已融化的培养基瓶身擦干净，转移入工作台； 待培养基冷却至50°C左右（不烫手为原则，但 是不可冷却过度），倒平板。
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平板要求：平板平整，无凸起；平板无“挂 壁”；培养基布满整个平皿 倒平板操作视频
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平板倒制结束，静置，待凝固使用
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3
如何得到微生物？
如何保存微生物？
4 5
我很爱吃熟食（猪头肉），但是听 说熟食微生物超标，这是怎么检测 的？
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规则：
1.上课不迟到：第1、5节课，提 前10min到教室 2.下课前，自己的实验物品归类，
该清洗的清洗，该收拾的收拾
3.值日生负责擦黑板、扫地、擦 桌；为大家做好服务工作 4.上课时间请不要玩手机
牛肉膏琼脂培养基
号后，放在火上加热。
待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。
等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌：1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15~30分钟。
牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g氯化钠 0.5g琼脂 2g蒸馏水 100mLpH 7.0～7.2灭菌 1.05kg/cm2，22min配制具体步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
3．调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。
反之，则用1mol/L HCl进行调节。
注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
4．过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。
一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。
5．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
分装装置见图Ⅴ-1。
牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌 ppt课件
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斜面培养基接种法
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请大家划线接种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，置于培养箱16~18h后 取出置于4℃冰箱保存
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平板要求：平板平整，无凸起；平板无“挂 壁”；培养基布满整个平皿 倒平板操作视频
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平板倒制结束，静置，待凝固使用
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4.学习斜面培养基制作
取无菌试管，倒入1/3高度的培养基，塞上盖子，斜靠，使得斜面长度 3~4cm，待凝固后使用
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请大家先制备 4 个试管的斜面培养基，然后将剩余培养基用于制备平 板
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（四）紫外线杀菌
240~280nm波段紫外线杀菌力较强
多以253.7nm作为紫外线杀菌波长 特点：穿透力弱 超净工作台：
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（五）药物杀菌
1.酒精
2.新洁尔灭
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（三）认识微生物培养所需的仪器设备
1.培养平板
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2.试管与棉塞
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3.接种环，涂布棒
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4.高温高压蒸汽灭菌锅
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7.微量移液器的使用
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今天的工作：
1.固体物品的灭菌
2.配制培养基并进行灭菌
3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种
7.灭菌效果检查
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开始实验
1.固体物品：
1）平皿（6只/组）
2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头
6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开盖 。注意防止烫伤 27
牛肉膏蛋白胨培养基配方
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；掌握划线分离纯化微生物的原理与方法熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCI、琼脂等实验原理：培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等实验内容：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。
（3）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。
加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10% NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2, 因为高压蒸汽灭菌后， pH 常降低。
(5)分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内(附图 1-1)。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的 1/4 左右；固体培养基装试管高度的 1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
牛肉膏蛋白胨培养基 接种等
实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。
（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。
二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。
牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。
三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
(二)其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。
四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后，补足所需水分。
（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。
（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。
（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。
1．液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。
2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。
分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。
3．半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方成分克/升牛肉膏10.0胨5.0酵母粉5.0盐5.0葡萄糖1.0琼脂15.0酚红0.025培养基PH值调整至7.0±0.2，于121℃高压灭菌20分钟即可。
下面解释每个成分的作用和影响：1.牛肉膏：提供氮源、维生素和矿物质，为微生物提供生长所需的营养物质。
3.酵母粉：富含维生素B群和其他营养物质，能够促进微生物的生长。
4.盐：提供微量元素，维持细胞内渗透平衡。
5.葡萄糖：提供微生物的碳源和能量，促进微生物的繁殖。
6.琼脂：用于凝固培养基，使其固化，提供坚固的基质，方便微生物生长。
7.酚红：作为指示剂，用于检测培养基的酸碱度，在碱性条件下呈现红色。
配方中的每个成分都起到了重要的作用，为微生物的生长提供了必要的营养物质。
同时，配方还可以根据需要进行适当的改动和调整，以满足特定微生物的生长需求。
在制备培养基时，需要注意的事项有：1.每个成分的浓度：每个成分的浓度都对微生物的生长产生影响，需要严格按照配方中的比例加入。
2.PH值调整：PH值对微生物的生长也有影响，需要根据具体的需求和微生物的要求进行调整。
3.培养基的制备和高压灭菌：制备培养基时，要注意加热和溶解的过程，确保所有成分充分溶解。
高压灭菌可以杀灭培养基中的细菌和其他微生物，保证培养基的无菌状态。
总结起来，牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的培养基，通过提供丰富的营养物质，可以有效地支持微生物的生长和繁殖。
配方中的每个成分都具有重要的功能和作用，制备时需要注意每个成分的浓度和PH值的调整。
此外，高压灭菌可以保证培养基的无菌状态。
通过合理的制备和使用，牛肉膏蛋白胨培养基可以为微生物学实验和研究提供坚实的基础。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
大肠埃希菌/产气肠杆菌
葡萄糖
CH3COCOOH
伤寒沙门菌
甲酸解氢酶
HCOOH
H2 + CO2
葡萄糖
CH3COCOOH
HCOOH
指示剂：溴麝香草酚蓝pH<6.3(黄)；6.3< pH<7.2(绿)；pH>7.2(蓝)
pH6.3
pH7.2
实验原理 2. 吲哚试验（I）
不同微生物所含酶系统不同，某些细菌含有色氨酸酶， 能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸。
O2
CH3COCHOHCH3 + KOH
CH3COCOCH3
CH3COCOCH3 + 胍基
红色化合物 + H2O
大肠埃希菌
VP试验阴性。
实验原理 5.枸橼酸盐利用试验（C）
肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用 柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。
产气肠杆菌 产气肠杆菌能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长，并 分解柠檬酸盐产生CO2，再生成碳酸盐，使培养基由中性变 为碱性，培养基中的指示剂BTB由绿色变为蓝色。
甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇
指示剂：
甲基红pH<4.5(红)；pH>5.4(橘黄色)。
pH4.5
pH5.4
实验原理 4.VP试验（V）
某些细菌在糖代谢过程中，经糖酵解途径产生丙酮酸。 因不同细菌所含酶不同，进一步对丙酮酸的代谢也不同。
产气肠杆菌
2CH3COCOOH
CH3COCHOHCH3 + 2CO2
静置后观察
③甲基红试验 加入5滴甲基红，振荡，
静置后观察
④伏普试验
加入0.4mL 40%KOH, 开盖振荡，再加入α-6%萘酚
常用25种培养基详细配方
一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl 5g琼脂15—20g水1000mlpH 7．0—7．21．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
二、淀粉琼脂培养基(高氏1号培养基，培养放线菌用)可溶性淀粉20gKNO31gNaCl 0．5gK2HPO40．5gMgSO40．5gFeSO40．01g琼脂20g水1000mlpH 7．2—7．4配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅拌边加水及其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。
1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
三、查氏培养基(培养霉菌用，实验16)NaNO32gK2HPO41gKCl 0．5gMgSO40．5gFeSO40．01g蔗糖30g琼脂15—20g水1000mlpH 自然1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(别离真菌用)葡萄糖10g蛋白胨5gKH2PO41gMgSO4·7H2O 0．5g1/3000孟加拉红(rose bengal，玫瑰红水溶液)100ml琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800ml0．56kg/cm2(8磅/英寸2)，112．6℃灭菌30分钟。
临用前参加0．03%链霉素稀释液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
五、马铃薯培养基(实验16)马铃薯200g蔗糖(或葡萄糖) 20g琼脂15—20g水1000mlpH 自然马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml。
1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
六、麦芽汁琼脂培养基(实验15)1．取大麦或小麦假设干，用水洗净，浸水6—12小时，置15℃阴暗处发芽，上盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停顿发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
2．将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴锅中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
牛肉膏蛋白胨培养基
1、实验原理
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学研究最常用的天然培养基。
在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基。
加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离、培养和测数等。
2、培养基配方
牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g、NaC1 5.0g、琼脂20.0g、自来水1000 mL、pH7.0。
3、操作步骤
⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g，加50 mL自来水，置电炉搅拌加热至牛肉膏、蛋白胨完全溶解。
⑵向小铝锅中加入500 mL自来水，将溶解的牛肉膏、蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次。
加入5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌。
⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL。
⑷用玻棒沾少许液体，用pH试纸测定pH值。
用NaOH或HC1调至pH7.0。
⑸分装漏斗分装于10mm×180mm试管中，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好。
★是否可以搁置几天后进行灭菌？
⑹高压蒸汽灭菌，121℃灭菌30min。
⑺灭菌后摆放斜面。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方
配方：
1.牛肉膏粉：10克
2.蛋白胨：10克
3.氯化钠：5克
4.水：1000毫升
制备过程：
1.将牛肉膏粉、蛋白胨和氯化钠加入烧杯中。
2.加入适量的水，充分搅拌，直到完全溶解。
3.将溶液转移到一个大容量瓶中。
4.加入适量的水，使总体积达到1000毫升。
5.用盖子或气密塞封闭瓶口，避免细菌的污染。
6.将培养基在121摄氏度的高压灭菌器中高压灭菌20分钟。
7.灭菌后，将培养基冷却至室温，并存储在4摄氏度的冰箱中。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含营养物质的培养基，适用于广泛的细菌种类。
牛肉膏提供了蛋白质、胆碱和其他有机物质，支持细菌的生长。
蛋白胨是由动物和植物的蛋白质消化得到的营养物质，富含氨基酸，可提供能量和生长因子。
氯化钠提供细菌所需的离子平衡。
制备好的牛肉膏蛋白胨培养基可用于分离和培养广谱细菌。
在培养细菌时，可以向培养基中添加其他适当的抗生素或指示剂来选择特定的细菌
菌种。
此外，还可以向培养基中添加其他营养物质，如血清、糖类、氨基酸等，以增强培养基的适用性，满足特定细菌的生长需求。
总结：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，它以富含营养的牛肉膏和蛋白胨为基础，提供了细菌所需的能量、氨基酸和生长因子。
配方简单，制备过程相对简单，适用于广泛的细菌菌种的培养。
根据具体的实验需求，可以对配方进行适当的修改和补充，以提高培养基的适用性和选择性。
牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌
目录
• 牛肉膏蛋白胨培养基的简介 • 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 • 牛肉膏蛋白胨培养基的灭菌 • 牛肉膏蛋白胨培养基的应用 • 总结与展望
01
牛肉膏蛋白胨培养基的简介
定义与用途
定义
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用 的基础培养基，以牛肉膏和蛋白 胨为主要成分。
用途
常用于培养细菌，如大肠杆菌、 沙门氏菌等。
组成成分
牛肉膏
提供细菌生长所需的碳源、氮源、维生素和矿物质。
蛋白胨
提供细菌生长所需的氮源和维生素。
氯化钠
维持培养基渗透压，调节细菌生长环境。
琼脂
凝固培养基，形成固体培养基。
培养基的理化性质
pH值
适宜细菌生长的pH值为7.2-7.4。
渗透压
适当的渗透压有利于细菌的生长和繁殖。
营养成分
牛肉膏和蛋白胨提供了丰富的营养成分，满足细 菌生长所需。
加入琼脂粉
将溶解好的琼脂粉加入上 述溶液中，继续加热并搅
拌至完全溶解。
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称量试剂
按照配方比例称取适量的节pH值
使用酸或碱调节培养基的 pH值至7.2-7.4。
灭菌处理
将配制好的培养基分装到 灭菌的培养皿或试管中，
进行高压蒸汽灭菌。
注意事项
避免交叉污染
在配制过程中，要避免培养基与 其他物品接触，以免交叉污染。
储存与使用
配制好的培养基应储存于干燥、 阴凉处，避免阳光直射；在使用 前应检查培养基是否有杂菌污染 。
01
严格控制pH值
pH值对细菌的生长有重要影响 ，应确保培养基的pH值在合适 的范围内。
金黄色葡萄球菌 (牛肉膏蛋白胨培养基)
金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。
本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
2．金黄色葡萄球菌肠毒素检测金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。
3．金黄色葡萄球菌的控制主要包括：1）防止金黄色葡萄球菌污染食品防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。
防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、细菌繁殖。
奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。
对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
2）防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。
牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
产气肠杆菌
2CH3COCOOH
CH3COCHOHCH3 + 2CO2
O2
CH3COCHOHCH3 + KOH
CH3COCOCH3
CH3COCOCH3 + 胍基
红色化合物 + H2O
大肠埃希菌
VP试验阴性。
实验原理 5.枸橼酸盐利用试验（C）
肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用 柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。
实验原理 1.糖发酵试验
不同微生物发酵单糖的能力各异，产生的分解产物也 不同，可以作为细菌分类鉴定的手段。
大肠埃希菌/产气肠杆菌
葡萄糖
CH3COCOOH
伤寒沙门菌
甲酸解氢酶
HCOOH
H2 + CO2
葡萄糖
CH3COCOOH
HCOOH
指示剂：溴麝香草酚蓝pH<6.3(黄)；6.3< pH<7.2(绿)；pH>7.2(蓝)
检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。
大肠埃希菌 葡萄糖 分解
甲酸 乙酸 乳酸 琥珀酸等
产气肠杆菌 葡萄糖 分解
甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇
指示剂：
甲基红pH<4.5(红)；pH>5.4(橘黄色)。
pH4.5
pH5.4
实验原理 4.VP试验（V）
某些细菌在糖代谢过程中，经糖酵解途径产生丙酮酸。 因不同细菌所含酶不同，进一步对丙酮酸的代谢也不同。
α-6%萘酚
实验步骤
1.细菌生理生化反应结果观察：
①单糖发酵试验
直接观察
②吲哚试验
加入5滴柯氏试剂，振荡，
静置后观察
③甲基红试验 加入5滴甲基红，振荡，
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和Na Cl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌（荤食），因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15—20g、水 1000ml、pH 7．4—7．6（7.0—8.0）三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
培养基牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成课件
概念
凡能为微生物提供所需碳 凡能为微生物提供所 微生物生长不可缺少
元素的营养物质
需氮元素的营养物质 的微量有机物
来源
无N有a机机HC碳碳O源源3等：：；糖CO类2、、脂肪酸、无 铵 有 肉盐 膏机 机、 、氮 氮硝 蛋源 源酸 白： ：盐 胨尿N2等 、素、； 氨、氨基牛、
酵母膏、蛋白胨、动 植物组织提取液
选择培养基：加入某种化学物质，从众多微生物 中分离出所需微生物
鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物
几种选择培养基举例： 加入青霉素的培养基： 分离酵母菌、霉菌等真菌 不加氮源的无氮培养基： 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基： 分离自养型微生物 唯一碳源为纤维素的培养基： 分解纤维素的细菌 加入氨苄青霉素的培养基： 分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基嘌呤的培养基： 分离杂交瘤细胞
一、基础知识 （二）无菌技术 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。 思考：获得纯净培养物的关键是什么？ 防止杂菌污染的操作技术叫什么？ 1、获得纯净培养物的关键：防止外来杂菌的入侵 2、无菌技术的概念： 无菌技术泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法技术。 3、无菌技术包括的四个方面： P15 P15旁栏思考： 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微 生物污染外，还有什么目的？ 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
一、基础知识 （一）培养基 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
思考：1、什么叫培养基？ 2、培养基的基本成分有哪些？由什么物质提供？ 3、培养基种类有哪些？
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2020年牛肉膏蛋白胨培养基配
方（课件）
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NａCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaＣｌ提供无机盐.在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。
琼脂在４０℃时凝固,通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌（荤食）,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖.
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：
牛肉膏３g、蛋白胨 10ｇ、NaCl 5ｇ、琼脂１5-
20g、水１0０0ml、pH 7．4—７.6（７。
0—8。
0）
三、器材
牛肉膏,蛋白胨, NaCｌ,琼脂；１mol/L NaＯH, 1moｌ/L HＣl；
试管,三角烧瓶，烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器，扭力天平,牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pＨ试纸( pH 5．５-9。
0),棉花,牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤
１．称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaＣｌ放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯.也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片.蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
......感谢聆听
2。
溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
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3。
调ｐH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始ｐH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入１mol/Ｌ NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值，直至pＨ达7。
6。
反之，则用1mol／L HCl进行调节。
注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
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对于有些要求ｐH值较精确的微生物,其pＨ的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有关说明书）。
4．过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。
一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去(本实验无需过滤）。
5．分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
分装装置见图Ⅴ－1.
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1）液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2）固体分装分装试管,其装量不超过管高的１／5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ—２.分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
（3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6.加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。
7．包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
三角烧瓶加塞
后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
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８．灭菌
将上述培养基以1．05ｋg／ｃｍ２(15磅/英寸2),１２１．3℃，２０分钟高压蒸汽灭菌。
如因特殊情况不能及
时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
9．搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至5０℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
１0。
无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24-４8小时,以检
查灭菌是否彻底.
PＤＡ培养基配方:
特点及用途
PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Ｐｏtａto Deｘtrose Aｇar （Ｍeｄium）,依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文.
一种常用的培养基,宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌(素食)。
酵母菌PH（3.８~6．0)，霉菌（4．0~5．8）等。
按物理性状划分:固体培养基，按培养基成分划分：半合成培养基
配方
马铃薯 2００克葡萄糖 20克琼脂１5~２0克自来水100０毫升自然PＨ
配制步骤
其做法是称取200ｇ马铃薯,洗净去皮切成小块,加水煮烂（煮沸20～3０分钟,能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至１０００毫升,分装试管,加塞、包扎，（１２1℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
......感谢聆听
其他事项
1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
2。
PＤA培养基一般不需要调ｐH。
对于要调节ｐH的培养
基，一般用pＨ试纸测定其pＨ。
如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmｏl／LＨCL溶液进行调节.调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3。
培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养.
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为０.1ｇ／L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性
高氏1号培养及配方：
培养放线菌用 ,改良的高氏
可溶性淀粉2g ,ＫＮO３０。
1g ，K２HＰO4 0．05ｇ，MgSO４•７H2O ０。
０5g ,ＮaCl 0.05g ,FeＳ
O4• 7H2O 0.０01ｇ (母液），琼脂 2g ，自来水 1０
0mL ，pH 7．2～7。
4 ，灭菌 1。
05ｋｇ／cm２,2０mｉn ......感谢聆听
配制时,先用少量冷水，将淀粉调成糊状,倒入少于所需水量的沸水中,在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到100ml,调ｐH，12１℃灭菌20ｍin。
高温灭菌后，倒平皿前加入１0%酚２滴至100ml培养基中混匀，将培养基倒入平皿内约15ml/皿。
高氏１号：
可溶性淀粉（２0g），KNO３(1g），K2ＨＰO4(0。
5ｇ）,MｇＳO４• 7H2O(0.５g），NaCl(0.05ｇ），FeSO4• 7Ｈ2Ｏ(0.0１g），琼脂２0g,pH=7．4-７。
6 和改良的差别就在于有没有FeＳO4• 7H2O 高氏常常配完后变成褐色也是由于Fe2+氧化为Fｅ3+的关系,所以常常有人用螯合的FeSＯ４,防止氧化.
...... 感谢聆听 ......。