人端粒酶(TE)说明书含量48
端粒酶活性TRAP实时定量检测试剂盒产品说明书
号达到阈值所需的循环数为 Ct 值（参考图像如下）：其中 6 号为阴性对照
14. Ct 值作为端粒酶活性的计量单位 15. 用户可以使用 293 细胞（10，100，和 1000 细胞数）作为阳性对照，以此建立标准曲线：横座标（X
用于荧光定量pcr反应实验提示样品制备1细胞样品制备准备1个细胞培养6孔板的单孔细胞直至生长至80铺满率1用细胞刮脱棒刮落细胞转移到15毫升离心管放进微型台式离心机离心5分钟速度为3000g或6000rpm例如eppendorf5415小心加入xx微升预冷的裂解液reagenta混匀细胞颗粒群放进冰槽里孵育30分钟选择步骤放进4微型台式离心机离心5分钟速度为16000g或13000rpm例如eppendorf5415选择步骤小心移取上清液到新的15毫升离心管10
技术背景
端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白酶（ribonuleoprotein），与人体细胞永生化（immortalization）和转 化（transformation）有关。端粒重复序列扩增方法（telomeric repeat amplification protocol；TRAP）是基于 多聚酶联扩增的敏感高效的体外端粒酶活性的检测技术。首先，非端粒单核苷酸引物作为端粒酶的底物而 持续延长产生六碱基差异的片段；然后，延长所获得的产物在非端粒单核苷酸引物和逆向引物的参与下进 行特异性扩增。SYBR 绿色荧光染料，作为 DNA 结合染料，可以和扩增子（amplican）上双链 DNA 的任 一小沟（minor groove）结合，而发出荧光信号。根据每一循环的荧光强度来确定扩增产物的产量，并用循 环阈值（threshold cycle；Ct）表示。TRAP 实时定量 PCR 技术十倍敏感于常用 TRAP 电泳技术，同时避免 二聚体产生的假阳性干扰。
人端粒酶逆转录酶--肿瘤免疫治疗新靶点
人端粒酶逆转录酶--肿瘤免疫治疗新靶点
庞建新
【期刊名称】《癌症（英文版）》
【年(卷),期】2003(022)008
【摘要】以人端粒酶逆转录酶(hTERT)这一新的肿瘤相关抗原为基础的肿瘤免疫研究正在兴起.来源于hTERT的抗原肽与MHC-I分子结合后递呈在多种肿瘤细胞膜表面,在正常人或肿瘤患者体内外激发细胞毒性T细胞(CTL)反应.体内外实验表明,CTL能识别hTERT抗原肽并以MHC限制性方式特异性杀伤TERT阳性的多种肿瘤细胞,而对体内极少数TERT阳性的正常细胞如造血干细胞或激活的T淋巴细胞没有影响.在活动性肿瘤病人体内进行的Ⅰ期临床试验结果进一步证实引起自身免疫反应的可能性极小.这些结果表明,以hTERT这一新的肿瘤抗原为靶点的肿瘤免疫学治疗及预防具有广阔的应用前景.
【总页数】3页(P893-895)
【作者】庞建新
【作者单位】第一军医大学药理教研室,广东,广州,510515
【正文语种】中文
【中图分类】R345;R730.5
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6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
大鼠端粒酶(TE)酶联免疫分析试剂盒 说明书
大鼠端粒酶（TE）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定大鼠组织匀浆或其它相关生物液体中端粒酶（TE）含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗TE抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗大鼠TE抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的TE呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50ng/ml，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别稀释成50ng/ml，25ng/ml，12.5ng/ml，6.25ng/ml，3.12ng/ml，1.56ng/ml，0.78ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制25ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）50ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml。
4.检测稀释液A：1×10ml。
5.检测稀释液B：1×10ml。
6.检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
稀释方法同检测溶液A。
8.底物溶液：1×10ml/瓶。
端粒酶
端粒酶科技名词定义中文名称：端粒酶英文名称：telomerase定义1：一种反转录酶，由蛋白质和RNA两部分组成核糖蛋白复合体，其中RNA是一段模板序列，指导合成端粒DNA的重复序列片段。
所属学科：免疫学（一级学科）；概论（二级学科）；免疫学相关名词（三级学科）定义2：一种自身携带模板的逆转录酶，由RNA和蛋白质组成，RNA组分中含有一段短的模板序列与端粒DNA的重复序列互补，而其蛋白质组分具有逆转录酶活性，以RNA为模板催化端粒DNA的合成，将其加到端粒的3′端，以维持端粒长度及功能。
所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）定义3：催化端粒中重复单元合成的一种核糖核蛋白酶。
所属学科：遗传学（一级学科）；分子遗传学（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布百科名片端粒酶-简介细胞中有种酵素负责端粒的延长，其名为端粒酶。
端粒酶的存在，算是把 DNA 克隆机制的缺陷填补起来，藉由把端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂克隆的次数增加。
端粒酶让人类看到长生不老的曙光。
目录开发应用的艰辛历程最新研究端粒酶与结直肠肿瘤的关系定义应用国内相关研究端粒DNA功能和端粒酶功能及生物特性端粒酶-端粒学假说及研究开发应用的艰辛历程最新研究端粒酶与结直肠肿瘤的关系展开编辑本段定义端粒酶（Telomerase），是基本的核蛋白逆转录酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端。
端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用，端粒酶能延长缩短的端粒（缩端粒酶短的端粒其细胞复制能力受限），从而增强体外细胞的增殖能力。
端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，在肿瘤中被重新激活，端粒酶可能参与恶性转化。
端粒酶在保持端粒稳定、基因组完整、细胞长期的活性和潜在的继续增殖能力等方面有重要作用。
细胞中有种酶负责端粒的延长，其名为端粒酶。
端粒酶的存在，算是把 DNA 克隆机制的缺陷填补起来，藉由把端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂克隆的次数增加。
端粒酶
端粒酶抑制剂用于肿瘤治疗的研究新进展近年来，肿瘤细胞永生化的“端粒—端粒酶学说”已为越来越多的研究结果所证实。
端粒酶是唯一的一种以自身RNA序列为模板将端粒重复序列复制添加到染色体3′末端的核蛋白酶。
许多研究结果表明：人类85%～90%的肿瘤细胞的端粒酶活性呈阳性，端粒酶的激活及端粒长度的稳定与肿瘤、衰老的发生和发展有密切关系，针对端粒酶基因的调控可以通过抑制端粒酶的活性来抑制肿瘤的生长并促进其凋亡，具有对肿瘤细胞特异性的作用，是肿瘤靶向治疗的一个新的研究方向。
本文中对端粒、端粒酶的结构和功能，端粒酶活性的调控，端粒酶与肿瘤和衰老的关系，端粒酶抑制剂的最新研究进展以及在肿瘤等疾病治疗中的应用前景进行综述和分析，为进一步开发天然来源的端粒酶抑制剂、研发肿瘤靶向治疗新药提供参考。
1.端粒与端粒酶1.1端粒端粒（T elomers）为真核细胞染色体末端的一种特殊结构，由端粒DNA和端粒蛋白质组成，其DNA 含有大量的TTAGGG n串联重复结构，其功能是完成染色体末端的复制，防止染色体融合、重组和降解，起着保护染色体末段的作用。
端粒是线性DNA，它的末端会随周期性的复制而逐渐缩短。
Muller1于1938年首次发现这一结构并将其命名为端粒（T elomers）。
由于末端复制问题，细胞每分裂1次，端粒就缩短50～100，当端粒缩短到临界长度时，细胞就会出现衰老以致死亡，因此在正常真核细胞中，端粒可被看成是“生命的时钟”或“有丝分裂的计数器”2。
1.2端粒酶端粒酶(T elomerase) 是一种由RNA和蛋白质组成的特异核糖核酸蛋白复合体，具有逆转录的酶活性，能以自身的RNA为模板5’-CUAACCCUAAC-3’通过逆转录合成端粒重复序列并连接到染色体末端以补偿细胞分裂时端粒的缩短，使细胞获得无限增殖能力3。
端粒酶的主要功能是：①通过自身的RNA 模板、催化亚单位和辅助蛋白将端粒DNA 添加到染色体的末端；②维持和平衡端粒序列长度；③修复断裂的染色体末端4。
医学知识之端粒酶
端粒酶
端粒酶介绍：
端粒酶是一种由RNA和蛋白质组成的特殊反转录酶，与真核生物细胞DNA末端的端粒(一段特定的核苷酸序列及结构)的合成有关。
正常体细胞的端粒长度是随着细胞的分裂逐渐缩短的，端粒酶活性增强，可维持端粒的长度不缩短，使细胞永久增殖而癌变。
故端粒酶检测及其抑制剂可用于肿瘤诊断和治疗。
端粒酶正常值：
阴性。
端粒酶临床意义：
适应于各类肿瘤性疾病的诊断和鉴别诊断。
升高：肝癌(93.88OD/30μg蛋白质)、癌周围组织(24.09OD/30μg 蛋白质)。
小细胞肺癌早期即有端粒酶活性升高，非小细胞肺癌多于中晚期出现活性改变。
端粒酶注意事项：
1.注意防止实验室污染而出现假阳性或假阴性。
2.注意去除组织标本中含有的多聚酶抑制剂，减少假阴性。
3.闪烁分析技术、ELISA法、原位杂交法较TRAP法检测结果更可靠。
端粒酶检查过程：
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【注意事项】
大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：
1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药
以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，
应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可
以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物
的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。
本文到此结束，谢谢大家!。
瑞粒酶总述
瑞粒酶端粒(telomere) 和端粒酶(telom erase) 是近年来生命科学研究的热点之一，正常细胞在分裂过程中，因其染色体末端(端粒)DNA 不能完全复制而缩短，细胞经多次分裂后，端粒缩短达到危机点(crisis)，促发某一信号，使细胞逐渐失去增殖能力而衰老死亡。
端粒酶可延长染色体末端DNA，端粒酶的活化使细胞获得无限增殖能力。
基于此，有少数细胞(如永生细胞系) 及绝大多数恶性肿瘤细胞(85%) 可逃逸这一危机点。
因为在这些细胞中含有活化的端粒酶系统，从而使细胞获得无限增殖能力，使之永生化和恶变，因此，对端粒和端粒酶系统的研究，有助于阐明细胞衰老和恶变机制，对肿瘤的诊断、治疗以及抗衰老都具有重要的理论和实际意义。
一般认为，癌症是由多种突变的积累，破坏了细胞正常的生长调控而引起的，除了一些明确的病因外，有许多实验结果支持这样一种假说，即端粒酶的激活对许多恶性肿瘤细胞的形成是必需的，且肿瘤细胞与端粒酶活动增加之间存在相互激发的关系［1］。
这种显著的相关性提示: 在肿瘤细胞恶性状态的进展和维持中，端粒酶可能起到关键性的作用。
本文就端粒与端粒酶研究的最新进展作一综述，具体讨论了端粒的结构与功能，端粒酶在端粒合成与稳定中的作用，介绍了端粒酶活性的测定方法，细胞永生与端粒酶激活的关系，提出了通过抑制端粒酶活性来治疗癌症的可能性。
1 端粒(telomere)1.1 端粒(telomere) 的概念端粒是指真核细胞线性染色体末端的蛋白质-DNA特殊结构，即染色体末端DNA 序列的多个重复，其作用是保护和稳定染色体的末端，它由2～20kb 串联的短片段重复序列(TTAGGG) n 及一些结合蛋白组成。
四膜虫(单细胞生物) 端粒的结构是6 个核苷酸5′- TTGGGG - 3′序列的多次重复。
人类为5′-TTAGGG- 3′序列的多次重复。
随着细胞不断分裂，染色体复制次数增加，端粒DNA 序列进行性缩短。
端粒酶基本原理及技术方法
端粒酶基本原理及技术方法摘要：近几年研究表明端粒酶与肿瘤的发生发展密切相关，推测可能是一个广泛的肿瘤标志物。
本文就端粒酶活性检测的原理，端粒酶的提取方法，TRAP扩增技术，四种结果分析方法（同位素法、染色法、荧光法和ELISA法）以及如何进行质量控制与半定量测定进行综述。
端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。
人端粒酶RNA组分（hTR）于1995年被克隆，其中含有端粒重复序列的模板（5′-CUAACCCUAAC-3′）；蛋白质组分具有RNA依赖的DNA多聚酶活性，结构尚不清楚。
端粒酶能以自身RNA的模板区为模板复制合成端粒序列。
在胚性细胞等增殖活跃的细胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟体细胞中端粒酶失活，同时还发现绝大多数肿瘤细胞都呈端粒酶阳性，而在癌旁组织和正常组织阳性率很低，推测端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标志物1。
因此近几年端粒酶在各种肿瘤中的研究日益深入，同时促进了检测方法的改进与完善。
本文对其检测方法综述如下。
1基本原理端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺（PAGE）凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。
1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法（telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP）。
TRAP反应原理见下图。
首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成agggttag，然后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入一个24nt的CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。
2基本技术方法2.1标本来源手术摘除组织，针吸活检组织，胸水，腹水，膀胱或胰管冲洗液，棉拭子所取分泌物和尿液（尚有争议）等。
2.2端粒酶的提取方法早期采用超声等物理破碎的方法在不同细胞中的提取效率差异较大，此后采用去污剂（如CHAPS）裂解的方法在少量细胞获取了较稳定的端粒酶提取液。
人精浆中端粒酶活性测定及其临床意义
人精浆中端粒酶活性测定及其临床意义高菊兴;张纪云【期刊名称】《山东医学高等专科学校学报》【年(卷),期】2011(33)1【摘要】目的观察精浆端粒酶活性(TA)在不同类型男性不育症患者中的变化,以及与精浆睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)浓度之间及精液中精子数量和质量之间的相互关系.方法随机选取110例男性不育症患者与30例生育者,应用酶联免疫吸附(ELISA)方法,对其精浆TA进行检测;应用放射免疫分析(RIA)方法对其精浆T、FSH、LH浓度进行检测;按WHO规定的方法,定量分析精液中的精子密度、精子活率、a+b级精子活力百分率、精液中白细胞数量.结果不育症组精浆TA和T浓度均明显低于生育组(P均<0.01);不育症组精浆FSH和LH浓度均明显高于生育组(P均<0.05).在不育症组中,随着精液中精子数量的递减,TA水平亦呈现逐渐下降趋势;精浆中TA与T浓度之间存在明显的相关性(r＝0.236,P<0.01),与FSH和LH浓度之间无相关性(P>0.05);精子活力、活率正常组精浆TA均高于不良组(P<0.01);WBC精液组精浆TA高于非WBC精液组(P<0.05).结论精浆TA水平与精子数量和质量存在一定的相关性,同时与精子发育密切相关的睾酮浓度有协同促进作用,端粒酶在人类生殖发育中发挥着重要作用.检测精浆TA水平对于进一步了解、预防和治疗某些病理状态下所致的生殖能力低下有重要意义.【总页数】5页(P4-8)【作者】高菊兴;张纪云【作者单位】临沂市人民医院临床检验中心,山东临沂,276003;山东医学高等专科学校【正文语种】中文【中图分类】Q55【相关文献】1.微量分光光度法测定人精浆中柠檬酸含量 [J], 张廷超;杨惠2.人精浆中端粒酶活性测定及其临床意义 [J], 高菊兴;张纪云3.人精浆中EGF与NPY测定的临床价值初探 [J], 张纪云;宁勇4.人精浆中铁蛋白与β_2-微球蛋白测定及临床意义 [J], 张纪云;高菊兴5.男性不育病人精浆血管紧张素Ⅱ测定及临床意义 [J], 郑松;李铮;王益鑫;向祖琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
端粒酶课件
对长期成活的组织和长期进行有丝分裂的细胞是必需的。
细胞的死亡过程分为两个阶段, 即第一致
死期M1（mortality stage1, M1）和第二致死期M2
（mortality stage2, M2）。
当端粒缩短至一关键性长度2kb-4kb 时,染 色体的稳定性就会遭到破坏,细胞开始衰老进 入M1期。
第一节 端粒与端粒酶
一、端粒的结构与功能 端粒研究的模式生物：四膜虫
四膜虫有两个细胞核。小核很稳定，含5对染色体， 用于生殖传代。而大核在接合细胞的发育过程中， 染色体断裂成200-300个小染色体，DNA从染色体上 断裂后通过复制更是形成高达～10000个小染色。
四膜虫： 端粒DNA是由简单重复序列组成的一段核酸。
端粒以GT富集的形式延伸在CA富集链上。G 尾部由于CA富集链的有限降解而产生。
研究发现，端粒DNA序列既有高度的保守性， 如原生动物、真菌、高等植物及高等动物中期 序列都很相似，又具有种属特异性，如四膜虫 重复序列为GGGGTT,草履虫为TTGGGG,人类 和哺乳动物为TTAGGG.
几乎所有生物的端粒 重复序列可以写成： Gn(Ａ/Ｔ)m的形式。
端粒的结构和功能
通过原位 杂交技术, 清晰可见 位于染色 体末端的 端粒结构
端粒的功能
1 端粒DNA与结构蛋白形成的复合物如同染色体的 一顶“帽子”，它既可保护染色体不被降解，又避 免了端粒对端融合（end-end fusion）以及染色体 的丧失。 2端粒DNA复制的特点是在每次DNA 复制中，每条 染色体的3`端均有一段DNA(一段端粒）无法得到 复制，随着细胞每次分裂，染色体3`末端将持续丧 失50-200bp的DNA，当端粒缩短到一定程度，细 胞停止分裂，进入静止状态，故有人称端粒为正常 细胞的分裂时钟（mistosis clock)。
端粒与端粒酶 ppt课件
乳腺癌细胞系（四种） T4白血病细胞
出现生长抑制和端粒酶活性的抑制，但 不同细胞系所需剂量不同
抑制端粒酶活性
——细胞分化诱导剂
分化不良的恶性肿瘤细胞端粒酶活性一般很高，但 终末分化的正常人体细胞却无端粒酶活性表达，这 提示：细胞分化与端粒酶活性之间存在某种关系
端粒酶呈阳性
提示：端粒酶活性的变化与细胞恶化有关
端粒酶活性升高 可能引起癌症
对癌细胞的研究发现：
永生化是癌细胞所具有的显著行为 端粒酶被激活的细胞也具有永生化行为 癌细胞具有端粒酶被激活的细胞所具备的
特性 抑制端粒酶活性，使永生化细胞转变为正
常细胞
癌细胞通过分泌大量端粒酶来防止染色 体端粒缩短，以便不断分裂繁殖
目前结论：
细胞内端粒酶活性的缺失，导致：端粒缩短 端粒一旦缩短到短于某个 “关键长度” ，就
很有可能导致：染色体双链断裂，并激活细 胞自身的检验系统，使细胞进入M1期死亡状 态 随着端粒的进一步丢失，发生染色体重排， 导致：无着丝粒染色体和非整倍体染色体的 形成等，使细胞进入M2期死亡状态
目前结论（续）：
科学家们考虑：可能存在着一种不同于DNA 聚合酶 的酶来完成单链间隙的复制
示 意 图
端粒酶的发现
1984，CW.Greider和EH.Blackburn发现： 将一段单链的末端寡聚核苷酸加至四膜虫的提 取物中后，端粒的长度延长了，这就说明了切 实有这样的一种酶存在
将它命名为：“端粒酶”（telomerase） 进一步的研究揭示了端粒与端粒酶在细胞的生
长及肿瘤发生中有非常重要的意义，现正成为 一个研究的热点
卵母细胞培养液标准
卵母细胞培养液标准
卵母细胞培养液是一种重要的细胞培养液，主要用于卵母细胞的培养。
卵母细胞是雌性哺乳动物生殖系统中的重要细胞之一，对于维持雌性生殖系统的正常功能和繁殖具有至关重要的作用。
卵母细胞的质量和数量对于高质量的生殖和繁殖起到重要的作用。
本文将介绍卵母细胞培养液的标准。
一、培养液基础成分
1. DMEM/F12 (1:1)：基础培养液的成分之一，含有多种必需和非必需氨基酸，也含有多种维生素和矿物质。
2. 胎牛血清（FBS）：基础培养液的成分之一，含有多种生长因子和营养物质。
3. 阿拉伯糊精：可用作代替FBS的成分，对于卵母细胞的培养效果具有一定的促进作用。
4. 丝氨酸和胆碱：卵母细胞必需的两种营养物质。
1. 人类绒毛膜促性腺激素（hCG）：可用于促进卵母细胞的成熟和释放。
2. 黄体酮：可用于促进卵母细胞的成熟和释放，并提高其受精率。
3. 抗菌素和抗真菌素：用于防止污染。
三、培养液指标
1. pH 值：7.2-7.4
2. 清洁度：无菌
3. 透明度：清澈透明
4. 离子强度：280-320mOsm
5. 端粒酶（TE）活力：≥10^6 U/L
6. 葡萄糖浓度：5mM
7. 非必需氨基酸浓度：0.1-0.4mM
8. 乳酸浓度：2-4mM
9. 特别要求：不能存在免疫原性成分，不能影响卵母细胞的生长和发育。
以上就是卵母细胞培养液的标准，这些指标旨在确保卵母细胞的初代培养液的制备和在体外的养护环境，在生理水平上，达到了在捐助女性体内的相近环境中所维持的生理状态，从而保证了生命科学研究的进展和最终的临床治疗效果。
人端粒酶反转录酶基因电转染优化培养大鼠前软骨干细胞
人端粒酶反转录酶基因电转染优化培养大鼠前软骨干细胞彭义;曲家富;曹立海;赵国志;杜晓健【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2016(020)014【摘要】背景：将人端粒酶反转录酶转染至目的细胞中,可以提高其端粒酶活性,保持端粒的长度,在调控增殖和分化方面有重要作用。
目的：探讨人端粒酶反转录酶基因转染对体外培养大鼠前软骨干细胞端粒酶活性及生物学特性的影响。
方法：体外培养Wistar大鼠前软骨干细胞,以反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染,同时设置对照组、阴性对照序列组、转染组。
用TRAP-ELISA法检测前软骨干细胞端粒酶活性,RT-PCR、Western blot检测前软骨干细胞人端粒酶反转录酶基因和蛋白的表达,CCK-8法、细胞生长曲线检测细胞生长增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。
结果与结论：（1）人端粒酶反转录酶基因转染前软骨干细胞48 h,端粒酶活性明显升高;（2）与对照组、阴性对照序列组相比,转染组人端粒酶反转录酶基因和蛋白水平表达明显,细胞的生长速度明显增快,G0/G1期细胞数减少,S期细胞数增多,差异有显著性意义（P〈0.05）;（3）结果表明,以反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染使前软骨干细胞端粒酶活性明显升高,能够促进大鼠前软骨干细胞增殖。
【总页数】7页(P2110-2116)【作者】彭义;曲家富;曹立海;赵国志;杜晓健【作者单位】唐山市第二医院足踝外科,河北省唐山市063000【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.TGF-β_3诱导大鼠前软骨干细胞向软骨细胞特性方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养 [J], 孙凯;游洪波;陈安民;郭风劲;祁军;徐志刚;丁然2.人端粒酶反转录酶基因电转染优化培养大鼠前软骨干细胞 [J], 彭义;曲家富;曹立海;赵国志;杜晓健3.端粒酶反转录酶基因电转染人羊膜间充质干细胞移植治疗糖尿病 [J], 付建茹;4.端粒酶反转录酶基因电转染人羊膜间充质干细胞移植治疗糖尿病 [J], 付建茹5.人转化生长因子β3基因转染KLD-12自组装纳米肽纤维支架三维培养前软骨干细胞 [J], 丁然;张勇;游洪波;李锋;孙凯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
端粒酶的结构和功能
端粒和端粒酶研究及应用黄品清10102106摘要：端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构 ,由端粒DNA和端粒相关蛋白组成 ,它能维持染色体的结构稳定和功能 ,保护其免受核酸酶降解 ,防止其末端融合或重排等。
当端粒长度因细胞复制而缩短到极限时，细胞就会走向衰老甚至死亡，而端粒酶的存在能补充已缩短的端粒从而延长细胞寿命甚至使其得到永生。
端粒(telomere)是染色体末端的特殊结构，它的存在及其特殊构象的维持，是保护线性染色体末端、顺利完成DNA末端复制所必需的。
端粒具有稳定染色体末端、解决末端复制不完整等多重功能。
端粒酶(telomerase)是对抗正常复制过程中端粒的缩短、维持真核生物染色体长度的关键酶，在肿瘤细胞中表达尤为强烈。
自“端粒缩短是触发细胞衰老的分子钟”的假说提出后，科学家们已通过实验提供了大量证据来证明该假说，随着对端粒和端粒酶的结构和功能研究的深入，它们成为国内外研究的热点之一。
一、端粒的结构和功能端粒(telomere)是保护真核细胞染色体末端并维持其完整的特殊的DNA／蛋白质复合物，它像“帽子”一样扣在染色体的两端，从而维护染色体的完整性和稳定性，防止染色体被降解、融合和重组，便分裂后得到的子代细胞能准确的获得完整的遗传信息．1、端粒DNA的结构端粒DNA由两条长短不同的DNA链构成，一条富含G，另一条富含C。
富含G的那条链5’一3’指向染色体末端，此链比富含Cc的链在其3’末端尾处可多出12～16个核苷酸的长度，即3’悬挂链(3’overhangstrand)，一定条件下能形成一个大的具有规律性很高的鸟嘌呤四联体结构，此结构是通过单链之间或单链内对应的G残基之间形成Hoogsteen碱基配对，从而使4段富含G的链旋聚成一段的四链体DNA。
也有人认为，端粒G链序列可以形成稳定的发卡结构，它和四联体结构都被认为与端粒DNA的保护功能有关。
不同物种端粒的重复序列和长度是不一样的，人类的端粒DNA由[5’一TTAGGG一3’]反复串联而成，不具有编码任何蛋白质功能，进化上高度保守，总长度约5一15kb，随着每次细胞分裂的进行，染色体末端丢失50一200bp。
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人端粒酶(TE)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T
38ng/L -1200 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中端粒酶(TE)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人端粒酶(TE)水平。
用纯化的人端粒酶(TE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入端粒酶(TE)，再与HRP标记的端粒酶(TE)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的端粒酶(TE)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人端粒酶(TE)浓度。
试剂盒组成
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。