【检验医学】丙氨酸氨基转移酶活性测定
实验六-血清丙氨酸氨基转移酶的活力测定
（2）样品测定
取2支试管，标记，按下表依次加入试剂。
管号 血清/mL 基质液/mL
2，4-二硝基苯肼/mL
基质液/mL NaOH溶液/mL
对照管 0.10 ——
混匀，37℃水浴30min 0.50
混匀，37℃水浴20min 0.50 5.00
混匀，室温放置10min
测定管 0.10 0.50
0.50
—— 5.00
在505nm波长下用对照管调零，读取测定管的吸光度值， 对照标准曲线求得ALT相应的酶活力单位。
【临床意义】
肝细胞中ALT含量最丰富，，当肝脏疾病导致肝细胞损伤后， ALT即大量释放进入血液中，导致血清中ALT活性明显增高。 故测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。 ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死； 中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞； 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、
实验六
【实验目的】
掌握赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的原理及操作； 熟悉ALT标准曲线的绘制； 熟悉酶活力概念； 了解赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的评价
【实验原理】
赖氏法：
在37℃、pH7.4的条件下，以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，ALT 催化生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性 的大小；
试管和试管架
【实验方法】
（1试剂。
管号
空白管
1
2
3
4
5
丙酮酸标准液/mL
0
0.05 0.10
0.15
0.20
0.25
基质液/mL
0.50
0.45 0.40
0.35
0.30
丙氨酸氨基转移酶检测方法
丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。
检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。
下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。
一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。
具体步骤如下：1.患者空腹4～8小时。
2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。
3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。
4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。
二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确的测试结果。
具体步骤如下：1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。
2.采集患者的静脉血标本。
3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。
4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。
三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。
具体步骤如下：1.准备特定的抗ALT抗体试剂。
2.采集患者的静脉血标本。
3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。
4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。
5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。
综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。
针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。
总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。
您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。
临床检测--谷丙转氨酶活性的测定
如何测定酶的活性? 活性单位定义中必须规定哪些条件?
卡门氏单位的定义为：
在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为 3ml)在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在 25℃，1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸氢酶催化下， 使NADH+H+变成NAD+，使光密度下降0.001为1个 转氨酶活性单位。 丙氨酸 + α-酮戊二酸 GPT 谷氨酸 + 丙酮酸
相当于GPT活性(卡门氏单位) 0.00 28 57 97 150 200
37℃水浴预温5分钟，各管加2,4-二硝基苯肼0.5ml混匀， 再在37℃水浴中放置20分钟后，各管加0.4mol/L NaOH溶 液5ml，混匀放置10分钟后，以蒸馏水调零点，用520nm波 长比色，读取各管光密。.
各管的读数均减去对照管(O管)的光密度，然后以光密度值 为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准 曲线。
实验操作
1. 标准曲线的制作:
0
1
2
3
4
5
丙酮酸标准液(ml)
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
ALT底物试剂(ml)
0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25
0.1M磷酸盐缓冲液pH7.4(ml) 0.10 0.10 0.10 0.10 0.氨酶的测定有何临床意义？
2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要 避免溶血？
5.0
混匀，在室温中放置10分钟，以蒸馏水调零点，用 520nm波长比色，读取光密度。用T-C管的光密度查标准曲 线，即得到待测血清中所含ALT的酶活性。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页一、实验目的1. 掌握测定血清ALT活力的方法和原理。
2. 熟悉ALT在肝脏功能监测中的重要性。
二、实验原理ALT是一种酶，分布在人体的细胞内，主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织中。
正常情况下，ALT主要在肝脏中发挥作用。
当肝脏受到损伤时，ALT会释放到血液中，导致血液中ALT活力的升高。
因此，测定血清ALT活力是一种常用的肝功能检测方法。
本实验使用比色法测定血清ALT活力。
利用谷草-丙氨酸转移酶测定(AST)所产生的谷草酸，和血清ALT催化产生的丙酮酸反应，生成2,4-二硝基苯胺，其吸光度与丙酮酸的浓度成正比。
由此计算出血清ALT活力。
三、实验步骤1. 将标准品和待测血清样品准备好，室温恢复至20-25°C。
2. 取比色管，在无菌条件下加入以下试剂：2.5ml缓冲液pH7.5、0.25ml 10mmol/L 肌酸盐缓冲液、0.2ml5.5mmol/LNADH、0.2ml2mol/L丙酮酸、0.1ml3%的PEG，混匀。
3. 加入待测血清样品1ml，立即混匀。
4. 马上读测吸光度(Zero)。
5. 在37℃恒温箱中孵育10分钟。
6. 然后再读一次吸光度。
7. 加入ALT试剂，混匀，孵育60秒钟。
8. 反应结束后7分钟内，读取吸光度值，记录。
9. 将标准品同样操作，测定吸光度，计算样品中ALT活力的单位(L_0.9)四、实验注意事项1. 实验中的所有仪器、试剂、杯器等都要事先清洗干净，确保无污染。
2. 实验操作应在干燥、无尘、无异味的净化房间内进行。
3. 操作过程中要注意保持常温。
4. 实验中的吸光度必须在规定时间内完成测定，避免影响结果。
5. 测定前，必须保证血清样品无血浆外渗。
6. 测定期间谨慎操作，防止试剂泼溅，注意安全。
五、实验结果分析ALT活性测定值与肝损伤的程度有一定的相关性。
当ALT活性超过健康人参考范围时，说明肝脏功能出现异常，可能出现肝炎、脂肪肝等肝病状况。
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程.检验原理：（酶偶联速率法）L-丙氨酸和α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶的作用下生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）作用下生成L-乳酸，同时还原型辅酶I（NADH）被氧化为氧化型辅酶I（NAD、在340nm处测得吸光度呈下降趋势与ALT活性成正比。
根据NADH吸光度下降程度计算丙氨酸氨基转移酶的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
1.-丙氨酸+Q-酮戊二酸一生→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H，侬->L一乳酸+MUT3.2225828°C48-20°C保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6 .检验结果的解释：6.1 样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W∕V）的氯化钠溶液稀释样本。
6 .2.单位换算：ukat∕L=U∕L×16.67×10^37 .检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7. 2若试剂浑浊，或以水空白在34Onnl处吸光度小于LOOO时不能使用。
8.试剂性能指标8.1 试剂外观：无色或淡黄色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8. 2装量：不低于标识值。
8. 3试剂空白吸光度：在34Onnl处，光径ICnI时，空白吸光度A21.0008 .4试剂空白吸光度变化率：在34Onm处，光径ICm时，Z∖A∕minW0.0049 .5线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U∕L,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；(50-500)U/L 区间内,线性相对偏差不超过±10%。
8. 6准确度：相对偏差应不大于±15机8. 7分析灵敏度：在34Onrn处，光径ICnl时，测量已知浓度的样品后换算成W/L的丙氨酸氨基转移酶时，吸光度变化AAU∕L∕min22XIO-48. 8批内精密度：CV≤5%8. 9批间精密度:R≤10%8. 10稳定性：(2-8)C下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足1-8的要求。
血清丙氨酸氨基转移酶活力的测定
主讲人：杨宇光 主讲人： 小组成员： 小组成员：刘婷婷 刘杰 陈琪 杨宇光
实验目的
• 了解血清丙氨酸氨基转移酶活力单位的定 义 • 掌握血清丙氨酸氨基转移酶活力单位的测 定方法和临床意义
实验原理
ALT 丙酮酸 + α - 酮戊二酸 ← → 谷氨酸 + 丙酮酸
丙酮酸 + 2,4 - 二硝基苯胫 → 丙酮酸 - 2,4 - 二硝基苯腙 + H 2 O
OH —
• 丙酮酸-2,4-二硝基苯腙在碱性环境中呈现红棕色， 颜色的深浅与丙酮酸含量成正比，与标准丙酮酸的显 色进行比较，即可测定丙酮酸的含量。 • α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯腙结合成相应的苯 腙，在碱性条件下显色。两种苯腙的吸收光谱有差异， 在520nm比色时，丙酮酸-2,4-二硝基苯腙的吸光度值 远较α-酮戊二酸苯腙高。反应30min后，α-酮戊二 酸量减少而丙酮酸量增高，在一定范围内，520nm处 吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二 酸的物质的量之比呈线性关系。
• 混匀，室温放置10min后，以蒸馏水调零， 在520nm波长处比色，读取吸光度，用T管 得吸光度减去C的吸光度，查标准曲线，即得 到待测血清中所含ALT的酶活力。
临床意义
• ALT广泛存在于机体的各种组织中，但肝细 胞中含量最多，当肝脏有病变特别是急性 肝炎或肝细胞坏死时，血清中ALT的活力显 著升高
盐缓冲液ph74ml编号01234000005010015020alt底物试剂ml05004504003503001moll磷酸01001001001001024二硝基苯肼液ml050050050050050混匀置37水中水浴20min04mollnaohml5050505050相当于alt活力卡门氏单位0285797150实验操作?将上述各管混匀室温放置10min后以蒸馏水调零用520nm波长比色读取各管吸光度然后以各管吸光度减去0号管的吸光度之差anao为纵坐标各管相应的转氨酶活力单位为横坐标绘制标准曲线?取试管2只标明测定管和对照管将测定前将底物液在37水浴中预温5min再按下表操作血清丙氨酸氨基转移酶活力的测定项目测定管对照管血清l10alt底物液ml05005005005005005024二硝基苯肼液ml混匀置于37水浴保温20min血清l1004mollnaohml500500?混匀室温放置10min后以蒸馏水调零在520nm波长处比色读取吸光度用t管得吸光度减去c的吸光度查标准曲线即得到待测血清中所含alt的酶活力
丙氨酸氨基转移酶的测定
丙氨酸氨基转移酶的测定
丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定主要通过肝功能检查进行，其参考值范围为0~40U/L。
在测定前，患者需要空腹12小时，不过不同年龄及人群参考范围没有明显差异。
当丙氨酸氨基转移酶数值偏高时，通常提示肝脏受到损害。
这可能是由多种原因导致的，如不良饮食习惯、过度劳累、药物因素等。
如果同时伴随肝区不适、全身乏力、食欲下降等情况，可能存在病毒性肝炎、脂肪肝、肝硬化等疾病。
丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定原理是催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。
具体来说，ALT催化丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸上，生成丙酮酸和NADH，然后NADH在LDH的催化下生成NAD+。
在上述偶联反应中，NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比，因此可以通过检测NADPH的氧化速率来确定ALT的活性。
总的来说，丙氨酸氨基转移酶的测定对于评估肝脏功能具有重要意义。
如果检测到肝脏功能受损，建议前往医院就诊，由专业医生进行评估和治疗。
丙氨酸氨基转移酶ALT活性测定
2013/12/1
酶的活力单位(U)及比活力
1．酶的活力单位(U): 1个酶活力单位，是指在 特定条件下，1分钟内能将1微摩尔(μmol)底物转 化为产物所需的酶量。
2．酶的比活力 比活力的大小，就是酶含量的大小, 以U/mg
盐析法 聚乙二醇沉淀法
等电点沉淀法 有机溶剂沉淀法 热变性沉淀法
2013/12/1
酶的分析
酶的活力测定 酶促反应动力学
2013/12/1
酶的活力测定
1．酶活力(Enzyme Activity) 是指酶催化化学反应的能力，也
即酶催化某一化学反应的反应速度。 2．酶反应速度
酶活力测定常采用测反应初速度 的方法。底物浓度的变化在起始浓度 的5％以内的速度为初速度。
ALT活性测定的方法
Karman分光光度法
2013/12/1
比色测定法
ALT
丙氨酸 ＋ α-酮戊二酸
丙酮酸 ＋ 谷氨酸
红棕色 苯腙硝醌化合物
2,4-二硝 基苯肼
OH丙酮酸二硝基苯腙
2013/12/12013源自12/1比色测定法金氏法(King法)
60 min
每100ml血清 在37℃条件下 与底物作用 60min，生成1 微克分子丙酮 酸为1单位
酶学分析
2013/12/1
Contents 1 酶的分离和纯化 2 酶的活力测定 3 酶促反应动力学 4 酶法分析 5 同工酶 6 酶在医学上的应用
2013/12/1
酶的分离和纯化
2013/12/1
酶的分离纯化技术路线
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)
什么是改良赖氏法？
卡门法
赖氏法
丙酮酸+α-酮戊二酸 谷氨酸+丙氨酸 丙酮酸→NAD++乳酸 在紫外分光光度法中，NADH在 340nm波长处的吸光度降低值与ALT 活性成正比。 卡门氏酶单位：1ml血清（反应溶液 总量为3ml）在340nm波长下，用内 径喂1.0cm的比色皿，在25摄氏度， 1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸脱氢 酶催化下，使NADH+H+变成NAD+， 光密度下降0.001为一个转氨酶活性 单位。
临床意种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项
1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
2.酶活性的测定：取试管2支，注明测定管及对照管，
丙氨酸氨基转移酶测定方法
丙氨酸氨基转移酶测定方法1. 简介嘿，朋友们！今天我们来聊聊一个很重要但又有点复杂的东西——丙氨酸氨基转移酶，简称ALT。
听起来很高大上对吧？其实它就是我们身体里的一个小助手，帮忙处理氨基酸和能量。
它主要在肝脏里工作，所以如果它的水平不正常，可能就意味着我们的肝脏在“发脾气”。
你知道的，肝脏可是个“好汉”，平时默默无闻，但一出问题可就不得了了！那我们到底要怎么测定ALT呢？别急，接下来我就来为大家一一解答。
2. 测定方法概述2.1 准备工作首先，进行ALT测定之前，我们得准备好一切工具。
你可别小看这点，仪器、试剂都得准备齐全。
一般来说，你需要一个生化分析仪、血清样本、以及一些化学试剂。
这些东西可不便宜，所以我们得好好珍惜它们，别搞得一团糟哦！然后，还要记得提前告知病人一些注意事项，比如要空腹来抽血，毕竟谁也不想一边吃着早饭，一边来检测身体状况吧？2.2 样本采集说到采集样本，这可是一门艺术！我们通常从病人的手臂静脉抽取血液，像是在给他们献上“能量”似的。
抽血的时候，护士小姐姐要是笑容满面，病人肯定会感觉轻松不少。
样本采集完毕后，要及时放入试管，别让它在外面“冻”着，毕竟，ALT可不喜欢低温。
接下来，就可以送去实验室啦！3. 测定过程3.1 反应原理在实验室里，我们要用到一种化学反应来测定ALT。
这种反应可谓是“连环反应”，ALT会把氨基酸和草酰乙酸结合起来，生成丙酮酸和谷氨酸。
听起来是不是有点复杂？其实就像做菜一样，把不同的材料混合，最后得到美味的成果。
这个反应的速度，直接和ALT的浓度成正比，简单说就是——ALT越多，反应越快，结果就越明显。
3.2 数据分析反应结束后，生化分析仪会自动读取结果，别小看这个过程，可是“高科技”的体现呢！结果会以单位每升（U/L）来表示，数值越高，表示肝脏的“工作压力”越大。
这时候，医生就会根据这些数据，给出专业的建议。
比如，如果ALT高得离谱，可能就要查查肝脏有没有“生病”。
ALT活性的测定
【参考值】：0～40U/L
ALT是丙氨酸氨基转移酶，也叫谷丙转氨 酶的缩写符号。正常情况下，该酶主要存在 于肝细胞内，只要极少量被释放入血浆中。 当组织发生病变时，细胞内ALT被大量释放 入血，引起ALT活性增高。
是诊断肝功能的主要指标之一。
ALT升高常见于：
1. 急性肝炎和中毒肝细胞坏死时显著增高。
实验器材
（1）试管
1支
（2）水浴箱
1台
（3）试管架
1个
（4）洗耳球
1个
（5）微量移液器
1支
（6）刻度吸量管（5ml） 1支
（7）半自动生化分析仪 1台
实验试剂
（1）血清 （2）试剂
五、实验内容和操作过程
1、加样： 取1支干净试管，加1mL试剂,10mL血清，混合均匀。
2、测定： 在URIT-800半自动生化分析仪上（波长340nm）
2. 慢性肝炎、肝硬化及心肌梗死时中度增高。
3.阻塞性黄疸和胆道炎症时轻度增高。外科手术，早期 妊娠时也有升高。
4. 生理性的升高如：过度劳累，剧烈运动、睡眠不好 油炸食品等。
5、血清谷丙转氨酶活性测定是目前临床上诊断肝脏
疾病的一种重要方法，但不具有特异性。
二、实验目的
1．掌握测定ALT活性的原理、方法和临床意义。 2．掌握URIT-800半自动生化分析仪的使用。
三、实验原理
1. L-丙氨酸 + a-酮戊二酸 ALT 丙酮酸 + L-谷氨酸 2. 丙酮酸 + NADH + H+ LDH L-乳酸 + NAD+ 3. NADH的氧化速率与血清中ALT的活性成正比，
通过测定340nm处NADH的下降速率， 即可计算出ALT的活性(单位：U/L)。
临床生化检验：丙氨酸氨基转移酶测定 (速率法 )
操作步骤
取3支试管做好标记，按下表操作：
加入物
B
S
U
蒸馏水 标准液 血清 试剂R1
240μl
反应式
试剂与器材
R1试剂： Tris缓冲液 100mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L 乳酸脱氢酶(LDH) ≥ 2000U/L NADH
R2试剂： α-酮戊二酸 15mmol/L 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH) 0.18mmol/L
标准液：79U／L 病人血清 紫外分光光度计
样品要求
3．正常新生儿ALT水平比成年人约高2倍，出生后约3 个月降至成人水平。
思考题
ALT连续监测法测定存在哪些副反应？双试剂法 是如何把它消除的？
丙酮酸 NADH H LDH L 乳酸 NAD
上述偶联反应中， NADH被氧化为NAD+ ， NADH 的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长处， NADH呈现特征性吸收峰，而NAD则没有。因此，可在 340nm处连续监测到NADH的消耗量（即吸光度的下降 速率-△A/min ），从而计算出ALT活性浓度。
-
-
240μl
-
3ml
3ml
混匀，25℃室温放置5分钟
240μl 3ml
试剂R2
750μl 750μl 750μl
混匀，室温25℃放置1分钟后，在波长340nm处，以B管调零， 并计此时为0点或起点，测定初始吸光度值，等待，再测定1分钟后、 2分钟后、3分钟后的吸光度值，然后准确测定平均每分钟吸光度变 化值△A/min。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定
器材：分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样
器、移液管等。
待测标本：血清
2020/3/23
8
标准曲线的绘制（改良赖氏法）
❖ 取干净试管5支标明管号，按下表所示操作。
加入物（ml）
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液
基质缓冲液 2,4二硝基苯肼溶液
0.4mol/L NaOH溶液
二硝基苯肼溶液，氢氧化钠溶液（0.4mol/ L），丙酮酸标准液
（2.0mmol/L ）
连续监测法用试剂盒。
试剂1：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，NADH（0.2mmol/L）， LDH （＞1350U/L）；
试剂2：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，α-酮戊二酸 （50mmol/L），L-丙氨酸（400mmol/L）。
完全。加入NaOH溶液的方法和速度要一致，不同的
方法及速度也会导致吸光度读数的差异。
5、底物中的α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼均为呈色物
质，称量必须很准确，每批试剂的空白管吸光度上下
波动不应超过0.015，如超出次范围，应检查试剂及
仪器等方面的问题。
6、当血清标本酶活力超过150卡门氏单连续监测法）
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+NADH
ALT 丙酮酸+L-谷氨酸
LD L-乳酸+NAD+
在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活力。
2020/3/23
7
主要试剂、材料与仪器
改良赖氏法试剂：0.1mol/ L磷酸盐缓冲液、基质缓冲液、2,4-
血清丙氨酸氨基转移酶活力的测定PPT课件
【试剂】
5．1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液 称取2，4-二硝基苯 肼（AR）19.8mg，溶于1.0mol/L盐酸100ml，置棕色玻 璃瓶中，室温中保存，若冰箱保存可稳定2个月。若有结 晶析出，应重新配制。 6．0.4mol/L NaOH溶液 称取NaOH 1.6g溶解于蒸馏水中， 并加蒸馏水至100ml，置具塞塑料试剂瓶内，室温中可长 期稳定。 7．2.0mmol/L丙酮酸标准液 准确称取丙酮酸钠（AR） 22.0mg，置于100ml容量瓶中，加0.05mol/L硫酸至刻度。 此液不稳定，应临用前配制。丙酮酸不稳定，开封后易变 质（聚合），相互聚合为多聚丙酮酸，需干燥后使用。 8．待测标本 病人血清或质控血清。
（以蒸馏水代替血清，其它和对照管同样操作）。所以， 成批标本测定时，一般不需要每份标本都作自身血清对照 管，以试剂空白管代替即可，但对超过正常值的血清标本 应进行复查。严重脂血、黄疸及溶血血清可引起测定的吸 光度增高；糖尿病酮症酸中毒病人血中因含有大量酮体， 能和2，4-二硝基苯肼作用呈色，也会引起测定管吸光度 增加。因此，检测此类标本时，应作血清标本对照管。
【计算】
• 测定管吸光度减去样本对照管吸光度的 差值为标本的吸光度。该值在校正曲线上查 得ALT的卡门氏单位
【参考范围】
•
血清ALT：5～25卡门氏单位
临床意义
ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细 胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入 血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常作 为判断肝脏受损指标。
【操作步骤】
1 . 标准曲线的绘制：取试管5支，按表操作。
编号
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷
0.10
丙氨酸氨基转移酶检测原理
丙氨酸氨基转移酶检测原理
丙氨酸氨基转移酶（AST）是一种参与氨基酸代谢的酶，主要存在于肝脏、心肌、肌肉和肾脏等组织中。
检测AST活性在临床上有重要意义，可用于诊断肝病、心肌梗死等疾病，以下是AST检测的原理。
AST检测通常采用血清测定方法。
检测过程中，将患者的静脉血样本
放置于离心管中，使用离心机进行离心分离，分离出清晰的血清液。
然后将血清液样本与特定的底物反应，该底物为天然丙酮酸盐，当AST存在时，则可加速底物反应，导致丙酮酸的分解产生谷氨酸和草
酰乙酸，同时放出一定量的NADH。
在此阶段，AST活性的测定需要NADH检测，以便测量它的光学密度。
使用分光光度计测量NADH在340nm的吸收值，该值可以反映出AST的活性水平。
AST的测定结果用单位每升（U/L）来表示，其活
性值与样本血浆中AST的浓度成正比。
AST检测的正常值通常为10-40U/L，超出该范围可能表明肝细胞损伤、心肌损伤或肌肉疾病等其他健康问题。
然而，仅凭单一的AST值很难
作出诊断，因为许多其他因素也可以影响AST的水平，如摄入药物或
饮酒等。
综上所述，AST检测的原理是通过测量血清中AST的活性水平来诊断临床问题。
虽然AST值不一定反映单一的疾病，但它仍然是评估肝肾和心脏等健康状况的常用指标之一。
丙氨酸氨基转移酶测定的操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定的操作规程1、用途：测定人血清中丙氨酸氨基转移酶的活性。
2、原理：丙氨酸氨基转移酶催化L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷丙酸。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸还原的同时，将NADH氧化成NAD+。
在340nm处测定NADH吸光度的下降速率，即可计算出ALT的活力。
3、适用仪器：奥林巴斯AU480型全自动生化分析仪.4、样本要求：4.1、样本种类：新鲜无溶血血清。
4.2、样本采集：常规静脉采血约2ml，不抗凝。
置普通管中，或采用含有分离胶的真空采血管。
4.3、样本干扰：对反映吸光度有干扰的样本，包括溶血和浑浊的样本都可能影响检测结果遇上述情况建议重新采集标本。
4.4、样本保存：血清样本2℃—8℃可稳定3天，-20℃可保存1个月，忌反复冻融。
5、检测方法：5.1、试剂的准备：试剂开瓶即可使用。
5.2、检测步骤：1cm）载→测定→结果审核→报告。
5.3、校准：用K因素进行试剂空白校准，也可使用Roche公司校准品进行校准操作，当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须重新校准。
5.4、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果。
6、参考范围：(医院应根据本地区实际情况建立自己的参考范围。
）7、注意事项：7.1、试剂具有一定的酸碱性，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
7.2、使用后的器具应按照规定处理，扔入指定的垃圾箱内，不可随处乱扔，防止环境污染和二次使用。
7.3、由于运输过程产生渗液或漏夜的产品，或在运输贮存中没有按照说明书要求进行维护的试剂，不可使用。
7.4、试剂只用于体外诊断。
8、参考文献：王惠萱、李雪梅、王冈，临床检验操作手册，云南科技出版社，2008.中华人民共和国卫生部医政司，全国临床检验操作规程（第三版），东南大学出版社，2006。
陆永绥、李清华、张伟民主编，临床检验自动化仪器分析标准操作规程，浙江大学出版社，2006.。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定
2014级12班1组201450557 陆丽霞血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定实验原理：以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，在血清丙氨酸氨基转移酶的作用下，生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性的大小,丙氨酸能与2，4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸二硝基苯腙。
丙酮酸二硝基苯腙在碱性溶液中呈现棕色，可用比色测定。
实验步骤：1.标准曲线绘制：⑴取6支试管并编号，按表4-16操作；表4-16 标准曲线的绘制试剂对照 1 2 3 4 52mmol/L丙酮酸标准液0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25底物溶液0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 PBS缓冲液0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37摄氏度水浴5分钟，然后各管加入2,4—二硝基苯肼2,4——二硝基苯肼0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0相当于ALT活力单位0 28 57 97 150 200A5200 0.059 0.107 0.167 0.208 0.249⑵将所得6支试管混匀，10min后以对照组调零，用520nm波长比色并读取吸光度；⑶以吸光度为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标，绘制标准曲线2．酶活性测定：⑴取2支试管，编号，按表4-17操作：表2 ALT活力测定试剂对照测定血清——0.1PBS缓冲液0.1 ——底物溶液0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴30分钟，然后各管加入2,4——二硝基苯肼2,4—二硝基苯肼0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH 5.0 5.0A5200 0.122⑵用520nm波长比色，以对照管调零，读取测定管吸光度；实验结果:由标准曲线方程y=0.0014x，当A520=0.122，即y=0.122，故x=87那么测得ALT酶活力单位为87讨论：1．查资料得参考正常值为40单位以下，实验测得ALT酶活力单位为87，机体可能发生了肝病变。
丙氨酸氨基转移酶标准
丙氨酸氨基转移酶标准丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，简称ALT）是一种存在于肝脏、肾脏和心脏等组织中的酶类蛋白，其在氨基酸代谢过程中发挥着重要作用。
丙氨酸氨基转移酶标准是临床检验中常用的一项指标，用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
本文将详细介绍丙氨酸氨基转移酶标准的相关知识，以帮助读者更好地理解和应用这一指标。
丙氨酸氨基转移酶标准的测定方法主要包括酶测定法和免疫学测定法两种。
酶测定法是通过测定血清中ALT的活性来评估肝脏损伤程度，常用的试剂盒包括动态酶动力学法和直接测定法。
免疫学测定法则是通过测定血清中ALT的含量来进行评估，常用的试剂盒包括酶联免疫吸附法和化学发光法。
这两种方法各有优缺点，临床上可根据具体情况选择合适的方法进行检测。
在临床实践中，丙氨酸氨基转移酶标准的正常参考范围是性别和年龄相关的。
一般来说，成年男性的正常参考范围为10-40 U/L，成年女性的正常参考范围为7-35 U/L。
对于儿童和青少年，其正常参考范围则会有所不同。
需要特别注意的是，不同实验室所用的测定方法和试剂盒可能会导致参考范围略有差异，因此在临床应用中应当结合具体情况进行判断。
丙氨酸氨基转移酶标准的升高往往与肝脏疾病相关。
肝细胞损伤会导致ALT释放入血液中，因此血清ALT活性或含量的升高往往提示肝脏损伤。
常见的引起ALT升高的疾病包括肝炎、脂肪肝、肝硬化等。
此外，一些药物、酒精、肌肉损伤等因素也可能导致ALT 升高。
因此，在临床实践中，当发现患者ALT升高时，需要结合临床症状、其他肝功能指标以及影像学检查等综合分析，以明确病因并制定相应的治疗方案。
总之，丙氨酸氨基转移酶标准是评估肝脏功能和诊断肝脏疾病的重要指标之一。
通过本文的介绍，相信读者对丙氨酸氨基转移酶标准有了更深入的了解。
在临床实践中，我们需要结合具体情况，合理选择测定方法，正确解读检测结果，并且在临床诊疗中全面考虑患者的病情，以期达到更好的诊断和治疗效果。
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临床意义
▪ 胆道疾病：胆囊炎、胆道结石、胆管炎、癌性肝外胆道 梗阻等，ALT轻度或中度增高。
▪ 心血管疾病：急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭合并肝 淤血，ALT轻度或中度增高。
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临床意义
▪ 生物参考区间: 男5～40U/L 女5～35U/L
▪ 轻度增高（50-100U/L）轻微肝损伤指征。见于各 种类型的轻型肝炎、肝脏轻度物理损伤或化学中毒、 脂肪肝、肝硬化、慢性迁延性肝炎。
▪ 中度增高（100-500U/L）病因与ALT明显增高基 本相同，但病情较轻，还可见于慢性活动性肝炎、 严重胆道梗阻伴肝细胞损伤、原发性肝癌、肝脓肿、 肝硬化活动期多。
毒性、中毒性、肝休克等。酒精性肝中毒应低 于此值。 ALT降低：磷酸吡多醛缺乏症
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注意事项
▪ 血清中含有酮酸能消耗NADH，使结果偏高；血清 中谷氨酸脱氢酶增高时，在有氨的条件下，亦消耗 NADH，使结果偏高。
▪ 血清不宜反复冷冻保存，以免影响酶的活性。 ▪ 标本应避免溶血，红细胞内的ALT的含量高于血清
▪ 试剂主要成分：
▪ R1： Tris 缓冲液（PH=7.5）100mmol/L
L-丙氨酸
500mmol/L
LDH
>1200U/L
▪ R2： α-酮戊二酸
15mmol/L
NADH
0.18mmol/L
▪ 2.试剂的储藏和稳定性：试剂在2-8℃避光保存，可稳 定至有效期；启用后在2-8℃稳定4周；若试剂混浊或 以水为空白在340nm处吸光度值小于1.0时，则不能使 用。
▪ 药物影响：氯丙秦、异烟肼、乙醇等药物引起ALT增高 ▪ 其它：如低血糖、低胆固醇及前白蛋白降低是肝功能严
重损害的指标。
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临床意义
▪ 医学决定水平： ＜20U/L可排除许多与ALT升高的有关疾病。 ＞60U/L的时候可考虑引起ALT增高的各种疾病。 ＞300U/L通常与急性肝细胞损伤有关，包括病
▪ 谷丙转氨酶催化丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。 ▪ 丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和
NAD+ 。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧 化的速率与血清中的ALT活性成正比，在340nm处测 定NADH下降速率，即可测出ALT活性。
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试剂与仪器
▪ 1.试剂：液体双试剂，可直接使用。
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临床意义
▪ 明显增高（大于500U/L）急性弥漫性肝损伤、严 重中毒性肝损伤，最高可达5000U/L。
▪ 急性病毒性肝炎，黄疸出现后，ALT迅速上升，其 活性的高低与病情基本一致。
▪ 重症肝炎症状恶化同时伴有黄疸加重而ALT下降， 呈现胆红素与ALT分离，表示肝细胞大量坏死，肝 功能衰竭。
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计算
ALT（U/L）= △A/min × ──T─V×─10─00── SV×（ε1－ε2）×P
= △A/min×3376 式中： TV = 总反应体积（µl）
SV = 样品体积（µl） ε1 = NADH在340nm处的毫摩尔消光系数6.22 ε2 = NADH在405nm处的毫摩尔消光系数 P = 比色杯光径（0.5cm）
▪ 测定读点：21-26
样品量：6.0μl
▪ R1试剂量：120μl ▪ R2试剂量：30μl ▪ 定标方式：LINEAR
R1位置：A03 R2位置：A04
定标液数值=98U/L
▪ ALT（U/L）=（△A样品吸光度/△A标准液吸光度） ×标准液浓度
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操作步骤
▪ 实验参数(单试剂) R1:R2=4:1 ▪ 反应方式：RATE DOWN ▪ 波长：340nm ▪ 样品量：25μl ▪ 试剂量：500μl ▪ 定标方式：FACTOR ▪ 酶测定因数：-3376 ▪ 单位：U/L
▪ 1998年IFCC批准37℃条件下的酶活性测定 的推荐方法，是目前公认的国际参考方法， 同时推荐应用酶校准品校准各实验室酶活性 测定结果，提高了实验室间测定结果的可比 43;α-酮戊二酸 ALT 丙酮酸 + L-谷氨酸
▪ 丙酮酸 + NADH + H+ LDH L-乳酸 + NAD+ + H2O
▪ 转氨酶广泛存在于肝脏、心肌、骨骼肌、肾、 脑、胰、脾、肺、白细胞和红细胞中。这些 组织损伤或坏死时，酶从这些组织细胞中释 出，致使血清中ALT或AST活性升高。
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简述
▪ 各种肝炎急性期，许多药物引起的肝脏及各 种肝细胞坏死均可见ALT显著增高，因而， ALT检测是肝细胞损伤的灵敏指标。
（浆）3-5倍，有溶血标本会造成结果增高。 ▪ 宜用血清标本测定。草酸盐、枸橼酸盐抗凝剂虽不
抑制酶活性，但可引起血浆轻度浑浊，不宜使用。
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方法学评价
▪ 本实验线性：10～1000U/L。 ▪ 批内精密度小于5% 、批间精密度小
于6.67% ▪ 准确性偏差不超过±10%
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标本采集与要求
▪ 标本采集：血清或血浆标本 ▪ 标本处理：采血后应尽快送检，送检后血
标本应尽快分离血清。标本在2-8ºC可保 存7天。
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操作步骤
▪ 全（半）自动分析法：速率法
▪ 实验参数(双试剂)
▪ 反应方式：RATE DOWN 主/副波长： 340nm/404nm
安全性预警措施
▪ 应按《实验室安全管理》程序执行。在进行 操作前，首先应采取必要的保护性措施如穿 戴保护性外套、手套等。
▪ 如血液标本采用开盖程序测试，开盖时应防 止气雾胶污染环境。
▪ 所有检查过的血液标本及有关的废弃物，都 会带来潜在的危险或生物污染。
丙氨酸氨基转移酶 活性测定
实验目的与要求
▪ 利用半自动生化分析仪进行ALT项目的检测 ▪ 掌握连续监测法测定ALT的基本原理及操作 ▪ 熟悉ALT检测结果的临床意义 ▪ 了解连续监测法测定ALT的特点和注意事项
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简述
▪ 转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基移 换反应的一组。丙氨酸氨基转移酶（ALT） 和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）最具有临 床意义。