运动人体科学基础实验.

5 实验参考ຫໍສະໝຸດ Baidu案
⑪ 实验对象：实验对象为运动人体科学专业学生 10 名， 采用功率自行车进行大强度运动训练建立运动实验模型： 采用半自动生化分析仪检测血液标本。 ⑫ 运动训练方案：运动模型的建模，采用功率自行车进 行有氧运动训练（运动方案可自行设计）。持续运动 5 分钟，运动强度由心率控制，为实验对象最大心率达 85-95％。 ⑬ 实验方法与步骤： ① 包被抗原：用包被液将抗原做适当稀释，一般为 1-10 μ g/孔，每孔加200 μ l，37 ℃温育1 h，或4℃冰箱放 置16-18 h。
实验十三
血乳酸的测定与应用
1 实验目的
⑪通过实验使学生掌握体内血乳酸的测定方法及该指标在运 动实践中的应用和意义，为体育教学和运动训练提供指导。 ⑫进一步巩固离心机、可调微量移液器、振荡器等仪器的基 本操作。掌握实验对象取材、标本处理的方法与半自动生 化分析仪的操作方法。 ⑬通过综合设计型实验的实验设计与研究过程，提高学生的 学习兴趣，培养学生查阅文献资料、独立思考、创新思维、 动手操作、分析问题和解决问题的能力，使学生基本掌握 从事一般科学研究的方法。
2 实验原理

乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有氧代谢系统的 重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生成，然后 透过细胞膜进入血液，并随血液循环到达身体的其他组 织被代谢消除。可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖， 在供能体系中占有重要地位。与此同时，乳酸过多对酸 碱平衡的影响又成为负面效应，导致疲劳发生。 因此，运动时乳酸的生成、运动后乳酸的消除，以及运 动训练和体育锻炼中血乳酸指标的应用成为运动生物化 学研究的重要内容之一。 安 静 时 ， 人 体 静 脉 血 里 的 乳 酸 物 质 的 量 浓 度 为 0.451.3mmol/L。剧烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强，

3 实验器材与试剂
⑪实验仪器 采血针、吸血管、移液管、聚苯乙烯微量 细胞培养板、酶联免疫检测仪
⑫ 试剂 ①辣根过氧化物酶羊抗兔IgG； ② 包 被 液 ： 0.05 mol/L 碳 酸 缓 冲 液 （ pH 值 为 9.63 ） ： Na2CO30.15g，NaHCO20.293g，蒸馏水稀释至100ml； ③稀释液（ PBS-Tween ）： NaCl8g ， KCl0.2g ， KH2PO4 0.2g ， Na2HPO4·12H2O 2.9g ， Tween-20 ， 0.5ml ， 蒸 馏 水 加 至 1000ml； ④洗涤液：同稀释液； ⑤封闭液：0.5%（质量分数）BSA（用PBS配制）； ⑥邻苯二胺溶液（底物）： 配制：0.1 mol/L柠檬酸（2.1g/100 ml ），取 6.1 ml ； 0.2 mol/L Na2HPO4·12H2O （ 7.163 g/100 ml ），邓邻苯二胺 8 mg（溶解）；临用前加30%（体积分数）H2O240 μ l； ⑦ 终止液：2mol/L H2SO4。
6 注意事项
⑪ 设计运动方案时，应注意检索文献资料，注意运动 时间与强度的关系，注意研究对象的物种差异。 ⑫ 严格按照实验方法与步骤进行操作。 ⑬ 做好实验数据的统计分析。
⑭ 若对实验动物进行运动训练时，要注意观察和判断 运动的情况与疲劳的程度：动物停止跑动时应设法驱 赶动物。 ⑮ 做好实验数据的统计分析
4 实验方法与步骤
4-5人一组，自由组合编组，选定一人担任小组长。 查找国内外近十年有关运动训练中血乳酸变化的 文献资料并总结，以小组为单位进行讨论，拟定 实验的内容与指标。 根据拟定的实验内容与指标，讨论拟定运动实验 对象的训练方案：运动方式、运动强度与时间等 （包括学会训练实验动物）。 详细制定实验步骤与方法，严格按照实验步骤与 要求进行实验。
表3-17 全血乳酸检测试剂盒的操作 蒸馏水（ml） 3mmol/L标准液（ml）
空白管 0.02
标准管
0.02
测定管
上清液（ml） 0.02 酶工作液（ml） 1 1 1 显色剂（ml） 0.2 0.2 0.2 混匀，37℃水浴准确反应10分钟 终止液（ml） 2 2 2 混匀，530nm，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度 标准浓度为3mmol/L，稀释倍数为7倍



血乳酸浓度显著升高，而且在某些项目中两者的相关系 数很大，其增长情况与运动强度、氧债、训练程度等因 素密切相关，因而可直接用运动后血乳酸的浓度来评定 无氧代谢的能力，如400m跑后，血乳酸低于10 mmol/L表 明无氧代谢能力差；达到 14-15 mmol/L 表明无氧酵解能 力强。 当今血乳酸不仅用来评定速度耐力水平，还用来评定有 氧代谢能力，控制运动强度，预测成绩等等。

⑪设计本次实验方案 ①实验对象的选择（不同项目运动员）运动训练方式、强度、 持续时间及取样时间的选择。 ②血乳酸的实验测定方法选择 可采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA），或放射免疫法（Radioimmuniassay,RLA） 测定。 ③确定实验数据的统计学处理方法。 ⑫全血乳酸检测试剂盒法 ① 原理：以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸， 使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物， 呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。 ② 材料与试剂：采血针、吸血管、离心管、台式离心机、 超声清洗机、试管架、移液枪、TP头、水浴箱、可见光分 光光度计、比色杯。
⑭ 实验报告（实验结果与分析）内容 ① 实验结果：实验结果为实验对象运动后，血乳酸含量显著 升高，运动前血乳酸浓度为 0.45-1.3 mmol/L ，运动后即刻 为10-15 mmol/L，两者差异具有统计学意义（P<0.05）。 ② 实验结果分析：乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有 氧代谢系统的重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生 成，可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖，在供能体系中占 有重要地位，可直接用运动后血乳酸的浓度来评定无氧代谢 的能力。如400 m跑后，血乳酸低于10 mmol/L表明无氧代谢 能力差；达到14-15 mmol/L表明无氧酵解能力强。
②洗涤：倒尽板孔中液体，加 200μ l 洗涤液，反复 3 次，最后 将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。 ③加封闭液200μ l，37℃温育1h。 ④洗涤同②。 ⑤采集受试者运动前与运动后血液制成血清 ⑥加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200μ l。 同时作稀释液对照。37℃温育12h，或室温放置2 h。 ⑦洗涤同②。 ⑧加辣根过氧化物酶羊抗兔 IgG ，每孔 200μ l ， 37℃温育 1h ， 或室温放置2h。 ⑨洗涤同②。 ⑩加底物：邻苯二胺溶液加200μ l，室温暗处5min。观察结果： 用酶联免疫检测仪记录A190 nm读数。