_实验室常用血液抗凝剂的特点及应用

实验室常用血液抗凝剂的特点及应用
在实验室检验中，有许多检测项目的血液标本是需要抗凝才可以检测的。

而抗凝剂种类较多，实际应用中要根据不同的需要进行选择，才能获得理想的效果。

实验室中常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四乙酸盐（EDTA盐）、枸橼酸盐、草酸盐等4种，现将它们的特点及应用分别叙述如下：
一、肝素
抗凝是用于血液化学成分检测的首选抗凝剂。

肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖，是分散相物质平均分子质量为15000。

其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶Ⅲ结合引起抗凝血酶Ⅲ构型发生变化，加速凝血酶-凝血酶复合体形成而产生抗凝作用。

此外，肝素还能借助血浆辅助因子（肝素辅助因子Ⅱ）来抑制凝血酶。

常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵，钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量，铵盐会增加尿素氮的含量。

通常用肝素抗凝的剂量为10.0～12.5 IU/ml血液。

肝素对血液成分干扰较少，不影响红细胞体积，不引起溶血，适用于做红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及普通生化测定。

但肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。

另外，肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。

此外，肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为Wright染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。

肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。

二、乙二胺四乙酸盐(EDTA盐)
EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物，凝血过程被阻断，血液不能发生凝固。

EDTA盐有钾、钠、锂盐，国际血液学标准化委员会推荐使用的是EDTA-K2，其溶解度最高，抗凝速度最快。

EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液，每ml 血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。

EDTA盐可在100℃下干燥，抗凝作用不变。

此抗凝剂不影响白细胞计数及大小，对红细胞形态影响最小，并且可以抑制血小板的聚集，适用于一般血液学检测。

但如果抗凝剂浓度过高，渗透压上升，会造成细胞皱缩。

EDTA溶液pH与盐类关系较大，低pH可使细胞膨胀。

EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀，采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。

EDTA-K2使Ca2+、Mg2+下降，同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低，EDTA-K2的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。

EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。

此外，EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。

三、枸橼酸盐
枸橼酸盐主要是枸橼酸钠，其抗凝原理是能与血液中的Ca2+结合形成螯合物，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断，从而阻止血液凝固。

枸橼酸钠有Na3C6H5O7·2H2O和2Na3C6H5O7·11H2O两种晶体，通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液，与血液按照1:9体积混合。

大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝，它有助于Ⅴ因子和Ⅷ因子的稳定，并且对平均血小板体积及其他凝血因子影响较小，可用于血小板功能分析。

枸橼酸钠细胞毒性较小，也是输血中血液保养液的成分之一。

但是，枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液，碱性强，不适用于血液化验和生化测验。

四、草酸盐
草酸盐也是常用的抗凝剂，优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断。

常用
的草酸盐抗凝剂种类有草酸钠、草酸钾和草酸铵，草酸钠的常用浓度为O.1 mol/L，与血液按1:9比例使用。

但是，高浓度k+或Na+易使血细胞脱水皱缩，而草酸铵则
可使血细胞膨胀，故测定血细胞比容时用草酸铵与草酸钾或草酸钠两者适当比例混
合的抗凝剂，恰好不影响红细胞的形态和体积。

常用于血液生化测定，但不适用于
K+、Ca 2+的测定。

由于生成草酸钙沉淀，红细胞会出现锯齿状，白细胞出现空泡，淋巴细胞及单核细胞会变形，不宜做血片检查。

草酸盐可使血小板聚集，并影响白
细胞形态，不能用于白细胞和血小板分类计数。

主要参考文献：
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附录四常用抗凝剂的配制及用法
2009-06-02 17:32
附录四常用抗凝剂的配制及用法
在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。

对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。

一、肝素
（1）肝素抗凝作用原理
肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。

（2）配制和用量
纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml 血液计)。

但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。

一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。

也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。

在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg
体质量。

肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。

市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于10 0mg。

二、草酸盐合剂
（1）原理
草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。

此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。

（2）配制方法及用量
草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。

根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。

如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。

（3）注意事项
草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。

用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。

不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。

三、枸櫞酸钠
常配成3～5%水溶液。

也可直接加粉剂，每毫升血加3～5mg，即可达到抗凝目的。

枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。

但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。

仅可用于红细胞沉降速度测定。

急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为5～6％溶液。

四、草酸钾
（一）原理和注意事项
草酸钾为最常用的抗凝剂。

其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。

常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。

草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。

（二）配制及使用方法
取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。

配制成10％水溶液，如每管加0.1ml则可使5~10ml血不凝。

一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2％溶液，如每管加0．1ml可使1~2ml血液不凝。

五、乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA）
EDTA对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。

每0. 8mg可抗凝1ml血液。

除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。