安捷伦液相色谱柱键合相说明

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安捷伦1260高效液相操作规程

安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。

如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。

流动相选择注意事项：①避免使用高粘度的溶剂作为流动相；②所选用的流动相一定要与样品相溶；③各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

b.反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.准备工作①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。

注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。

安捷伦高效液相色谱仪操作规程

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）翻开计算机，登陆windows操作系统。

（2）翻开主机各模块电源〔从上至下〕，待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机〞图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制〞画面。

（3）进展仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-。

把各流动相放入相应的溶剂瓶中。

（4）编辑方法。

方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项〔四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认〕，完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。

（5）排气。

旋开排气阀〔逆时针〕，右单击“四元泵〞图标出现快捷键，点击“方法〞设置泵流速，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。

一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。

关泵，关闭排气阀〔顺时针〕。

〔注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀〕。

（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。

将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。

（7）换流动相，待柱前压力根本稳定后，翻开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。

二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品〞小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。

（2）编辑好样品信息前方可进样。

三、数据处理（1）翻开桌面“仪器1脱机〞，单击“数据分析〞进入数据分析画面。

（2）从“文件〞菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。

（3）谱图优化。

从“图形〞菜单中选择“信号选项〞从范围中选择“自动量程〞及适宜的显示时间，或选择“自定义量程〞调整，反复进展，直到图比例适宜为止。

（4）积分。

从“积分〞中选择“自动积分〞，假设积分结果不理想，从菜单中选“积分事件〞，更改数据为适宜的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高〞，从“积分〞中选择积分选项，那么数据被积分，如积分结果不理想那么修改相应的积分参数直到满意为止。

安捷伦高效液相操作方法

安捷伦高效液相操作方法
安捷伦高效液相操作方法（Agilent High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种用于分离、定量和分析化合物的常见技术。

下面是一般的HPLC操作方法：
1. 样品准备：将待测试的样品准备成溶液状。

可以用溶剂、酸或碱来溶解固体样品，并用适当的容器过滤以去除杂质。

2. 选择合适的柱：根据待测样品的性质和分离要求选择合适的色谱柱。

常见的柱包括反相柱、阳离子交换柱、阴离子交换柱等。

3. 设置流动相：准备好适合待测试样品的流动相。

流动相一般由溶剂和缓冲液组成，根据需要可以调整溶剂比例和缓冲液pH值。

4. 建立方法：设置进样样品量、流速、柱温等参数。

根据待测样品的特性，选择合适的检测波长进行检测。

5. 运行实验：将样品注入进样器，并设置流动相的流速。

开始运行实验，记录数据。

6. 数据分析：根据实验结果进行数据分析和解释。

可以通过峰高、峰面积、保留时间等指标对样品进行定量分析。

7. 清洗和维护：在实验结束后，定期清洗HPLC系统的各个部件，以保持仪器的良好运行状态。

可以用纯水、有机溶剂等进行清洗。

以上是一般的HPLC操作方法，具体的操作步骤和条件可能因不同的仪器和样品而有所不同。

在进行HPLC实验时，应根据实际情况进行调整和优化，确保准确的分离和分析结果。

安捷伦高效液相色谱法

(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前高效液相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。
3．流动相
在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越显著越好。根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。如果采用流动相的极性小于固定相的极性，称为正相分配色谱，它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。如果采用流动相的极性大于固定相的极性，称为反相分配色谱。它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。
（l）紫外检测器（2）荧光检测器 (3) 示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同的折射率，因此差示折光检测器是一种通用型检测器。灵敏度可达10-7g· -3。主 cm 要缺点是对温度变化敏感，并且不能用于梯度淋洗。
（4）电导检测器 (5) 附属系统
它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集以及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱仪中尤为重要的附属装置 .
柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。
4．检测系统
在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。现将常用的检测器介绍如下:

色谱柱填料键合-概述说明以及解释

色谱柱填料键合-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容应该简要介绍色谱柱填料键合这个主题，为读者提供一个整体背景，并引起读者的兴趣。

以下是可能的概述内容：概述：在现代色谱分析中，色谱柱是至关重要的工具之一。

而色谱柱的填料则是决定其分离性能和分析效果的关键因素之一。

填料的键合技术是对填料表面进行高效化学处理的过程，旨在提高填料的稳定性、选择性和分析能力。

正因为填料的键合技术对色谱柱具有如此重要的影响，研究人员们不断探索着新的填料键合方法和应用领域。

本文将深入探讨色谱柱填料键合的相关内容。

首先，我们将介绍色谱柱填料的概念、作用和重要性。

其次，我们将对目前常用的填料分类和特点进行详细讨论。

在结论部分，我们将重点探讨填料键合对色谱柱性能的影响以及填料键合技术的发展和应用前景。

通过本篇长文的阅读，读者将对色谱柱填料键合有更深入的了解，并能够认识到其在色谱分析中的重要性和潜在应用价值。

文章结构部分的内容如下所示：1.2 文章结构本文共分为引言、正文和结论三个部分。

下面将对各个部分的内容进行简要介绍。

引言部分主要概述了本篇文章的研究背景和意义。

首先介绍了色谱柱填料键合的重要性和应用领域，以引起读者的兴趣和注意。

然后对文章的整体结构和主要内容进行了概述，包括正文部分将详细介绍色谱柱填料的概念、分类和特点，以及填料键合对色谱柱性能的影响。

最后提出文章的目的，即通过深入研究填料键合技术的发展和应用前景，为相关领域的研究和应用提供参考。

正文部分将详细介绍色谱柱填料的概念和作用，包括填料的定义、功能和基本原理等。

然后对色谱柱填料的分类进行了详细介绍，包括常见的包括液相色谱柱、气相色谱柱和固相色谱柱等。

针对不同类型的色谱柱填料，对其特点和应用进行了分析和总结，为读者提供了详细的了解和参考。

结论部分主要总结了填料键合对色谱柱性能的影响。

首先对填料键合技术的原理和方法进行了概述，然后分析了填料键合对色谱柱分离效率、分辨率和稳定性等性能的影响。

安捷伦高效液相色谱知识收藏

Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。

2、打开 1100 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。

4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

5、把流动相放入溶剂瓶中。

6、打开Purge阀。

7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。

8 、设Flow：5ml/min，单击OK。

9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。

10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge valve。

11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump 编辑画面，设Flow：1.0ml/min。

12、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。

也可输入停泵的体积。

单击Ok。

（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：●从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。

2、方法信息：●在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。

安捷伦液相色谱柱选择指南

安捷伦液相色谱柱选择指南000什么是色谱柱1.简介英文名chromatographiccolumn装填有固定相用以分离混合组分的柱管。

多为金属或玻璃制作。

有直管形、盘管形、U形管等形状。

色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。

液相色谱通常均采用填充柱。

色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。

色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。

对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。

市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。

对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。

即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。

这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。

在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

2.色谱柱的构造色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。

柱管多用不锈钢制成，压力不高于70kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。

为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。

也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。

还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。

色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20µm(5~10µm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。

安捷伦液相色谱柱键合相说明Word版

1.8, 3.5, 5, 7
80
L1
Agilent TC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
130
L1
Agilent TC-C18 (2)
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
170
L1
Agilent HC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
300
L1
Zorbax Sil
球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L3
Zorbax Rx-Sil
球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5
80
L3
Lichrosorb Sil
球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L3
Zorbax EclipsePlus-C8
双封端的辛烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.
L1
Agilent HC-C18 (2)
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
170
L1
LiChrosphere RP-C18
十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L1
LiChrosphere RP-C18 封端
封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L1
苯基键合且封端的球形全多孔硅胶颗粒
5
70
L11
SampliQ Si-SAX (固相萃取)
季胺盐键合的阴离子交换硅胶填料，30~50 um粒径
/
/
L12
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)

安捷伦1100液相色谱仪的使用说明书

进样体积５ｕｌ柱温箱：３０ＥＸ＝２４６ｎｍ，ＥＭ＝３１７ｎｍ，ＰＭＴ＝１０响应时间＝４ｓ．停止时间出峰完毕ＥｘｃｉｔａｔｉｏｎＡ：激发波长：２００－７００ｎｍ，步长为１ｎｍ，或ＺｅｒｏＯｒｄｅｒＥｍｉｓｓｉｏｎ：发射波长：２８０－９００ｎｍ，步长为１ｎｍ，或ＺｅｒｏＯｒｄｅｒＰＭＴ：大多数应用适当的设定值为１０，若高浓度样品峰被切平头，则减少ＰＭＴ值Ｐｅａｋｗｉｄｔｈ大多数应用设为４ｓ只有快速分析采用小的设定值ＭｕｌｔｉＥｘ多波长及光谱激发ＭｕｌｔｉＥｍ多波长及光谱发射同时可以输入范围Ｒａｎｇｅ步长ｓｔｅｐ采集光谱
（３）单击Ｏｋ．（４）从Ｒｅｐｏｒｔ菜单中选择Ｐｒｉｎｔ
ｒｅｐｏｒｔ则报告结果将打印到屏幕上如想输出到打印机上则单击Ｒｅｐｏｒｔ底部的Ｐｒｉｎｔ钮
（四）关机：
关机前用１００％的水冲洗系统２０分钟然后用有机溶剂冲洗系统１０分钟如ＡＣＮ然后关泵适于反相色谱柱［正相色谱柱用适当的溶剂冲洗］
色谱柱：ＺｏｒｂａｘｅｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ８，１５０ｍｍ４．６ｍｍｉ．ｄ２溶剂准备色谱级纯或优级纯乙腈ＡＣＮ或甲醇二次蒸馏水
基本操作步骤：（一）开机１打开计算机，进入ＷｉｎｄｏｗｓＮＴ或Ｗｉｎｄｏｗｓ２０００画面，并运行ＢｏｏｔｐＳｅｒｖｅｒ程序
样品波长－－一般选择最大吸收处的波长样品带宽ＢＷ —
一般选择最大吸收值一半处的整个宽度ＢＷＮｏｉｓｅ
参比波长—
一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域
参比带宽ＢＷ —
至少要与样品信号的带宽相等许多情况下用１００ｎｍ作为缺省值Ｐｅａｋ

安捷伦液相最高柱温

安捷伦液相最高柱温摘要：1.引言2.安捷伦液相色谱柱温的概述3.影响安捷伦液相最高柱温的因素4.安捷伦液相色谱柱温的优化策略5.总结正文：安捷伦液相色谱是一种广泛应用于生物制药、食品安全和环境监测等领域的分析技术。

在液相色谱过程中，柱温的控制对于保证分析结果的准确性和重复性至关重要。

本文将详细介绍安捷伦液相最高柱温的相关知识，包括影响因素和优化策略。

安捷伦液相色谱柱温的概述：安捷伦液相色谱柱温是指在液相色谱过程中，色谱柱内部的温度。

柱温对样品的分离效果和峰形有着重要影响。

适当的柱温可以提高色谱柱的分离效果，缩短分析时间，同时还可以降低流动相的挥发性，提高检测器的灵敏度。

影响安捷伦液相最高柱温的因素：1.色谱柱的材质：不同材质的色谱柱对柱温的耐受程度不同。

例如，硅胶键合相色谱柱通常在40℃以下的柱温下使用，而金属氧化物键合相色谱柱则可以在更高的柱温下使用。

2.流动相的性质：流动相的极性、粘度和挥发性等因素会影响柱温的选择。

极性较强的流动相通常需要较高的柱温以获得较好的分离效果。

3.样品性质：样品的极性、溶解度和热稳定性等因素会影响柱温的选择。

对于热稳定性较差的样品，需要选择较低的柱温以避免样品分解。

安捷伦液相色谱柱温的优化策略：1.根据色谱柱的材质和流动相的性质选择合适的柱温。

一般来说，柱温的选择应在色谱柱耐受范围内，并充分考虑流动相的极性、粘度和挥发性等因素。

2.通过实验优化柱温。

在保证样品不发生分解的前提下，适当提高柱温可以缩短分析时间。

需要注意的是，柱温的提高应控制在色谱柱的耐受范围内，避免柱温过高导致柱效降低。

3.使用柱温控制装置。

安捷伦液相色谱仪通常配备有柱温控制装置，可以通过精确控制柱温来优化色谱分析效果。

总结：安捷伦液相最高柱温的选择需要综合考虑色谱柱材质、流动相性质和样品性质等因素。

通过优化柱温，可以提高色谱柱的分离效果和分析效率。

安捷伦的色谱柱的介绍及选择

8
Agilent LC colmns
4
Zorbax主要的键合相
Zorbax硅胶颗粒
StableBond
二异丙基二异丁基键合
Rx-C18/Sil
二甲基十八烷基硅烷
EclipsePlus/XDB
二甲基键合双封端
Bonus-RP
酰胺嵌入三封端
Extend-C18
双齿键合双封端
SB-C18 二异丁基-C18
行业领先的峰形更好的专利技术处理硅胶基质改进的双封端技术：改进的键合试剂及键合过程
更加严格的质控标准，批与批之间更加好的重现性
不同粒径 – 1.8, 3.5, 5um
最高的分离效率 C18，C8，PAH, 苯基-己基
•致密键合 •双封端 •超纯坚固的ZORBAX硅胶 •宽的 pH使用范围2-9
ZORBAX Rx-Sil (1987) 由于金属含量低, 硅羟基pKa高, 碱性化合物不发生拖尾
二氧化硅 Zorbax Rx-SIL Zorbax SIL Nucleosil Hypersil nd = 未检出
金属浓度（ppm) Na K Mg Al Ca Ti Fe Zr Cu Cr Zn 10 < 3 4 1.5 2 nd 3 nd nd nd 1 17 nd nd 57 9 32 21 88 < 1 nd 88 56 N/A N/A nd 130 57 76 nd N/A N/A nd 2900 N/A 40 300 38 65 230 N/A N/A N/A N/A
Agilent 液相色谱柱
高通量和LC/MS柱
Zorbax 高通量柱，LC/MS 色谱柱 Zorbax 快速分离柱 Zorbax 快速分离高通量柱 Zorbax 溶剂节省色谱柱 Zorbax 微径色谱柱 Zorbax 毛细管柱和纳流柱

安捷伦LC1260液相色谱操作规程及使用注意事项

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程㈠开机1．把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。

2．打开计算机，打开主机各模块电源（从上至下），再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。

3．旋开排气阀（逆时针），右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。

将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。

4．依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。

㈡数据采集1. 编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。

2. 编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。

在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。

3. 四元泵参数设定：在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。

4. TCC（柱箱）参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。

5. VWD检测器参数设定：在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。

6. 仪器曲线设置：默认即可。

7. 关闭排气阀（顺时针），冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。

8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时（定量环体积为20uL），用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。

安捷伦液相色谱柱键合相说明

LiChrosorb RP-C18
键合十八烷基硅烷化学键的不规则多孔硅胶颗粒
5,10
100
L1
色谱柱名称
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
Eclipse AAA
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
3.5, 5
80
L1
Zorbax ODS
十八烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5,7
L7
Zorbax Eclipse XDB-C8
双封端的辛烷基硅烷
L7
Agilent HC-C8
双封端的辛烷基硅烷键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
130
L7
LiChrosphere RP-C8
辛烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
60
L7
色谱柱名称
1.8, 3.5, 5, 7
80
L1
Agilent TC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
130
L1
Agilent TC-C18 (2)
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
5
170
L1
Agilent HC-C18
双封端的十八烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
填料描述
粒径 (μm)
孔径(Å)
USP
键合相
LiChrosorb RP-C8
键合辛烷基硅烷的不规则多孔硅胶颗粒
5,10
100
L7
Zorbax SB-C8
侧基有立体保护基团的辛烷基硅烷化学键合相的球形全多孔硅胶颗粒
1.8, 3.5, 5, 7

c8安捷伦色谱柱老化方法

C8安捷伦色谱柱的老化方法如下：1. 硅胶基质键合相：将色谱柱连接到液相色谱系统上，使用0.1%甲酸水溶液（或其他pH值为2-3的缓冲溶液）以0.5-1.0 mL/min的流速冲洗色谱柱20倍柱体积。

然后使用甲醇冲洗色谱柱20倍柱体积。

老化温度为40-60℃，保持1-2小时。

2. 环氧基质键合相：将色谱柱连接到液相色谱系统上，使用0.1%甲酸水溶液（或其他pH值为2-3的缓冲溶液）以0.5-1.0 mL/min的流速冲洗色谱柱20倍柱体积。

然后使用甲醇冲洗色谱柱20倍柱体积。

老化温度为40-60℃，保持1-2小时。

3. 磺酸基质键合相：将色谱柱连接到液相色谱系统上，使用0.1%甲酸水溶液（或其他pH值为2-3的缓冲溶液）以0.5-1.0 mL/min的流速冲洗色谱柱20倍柱体积。

然后使用甲醇冲洗色谱柱20倍柱体积。

老化温度为40-60℃，保持1-2小时。

4. 聚合物基质键合相：将色谱柱连接到液相色谱系统上，使用0.1%甲酸水溶液（或其他pH值为2-3的缓冲溶液）以0.5-1.0 mL/min的流速冲洗色谱柱20倍柱体积。

然后使用甲醇冲洗色谱柱20倍柱体积。

老化温度为40-60℃，保持1-2小时。

5. 硅胶基质反相相：将色谱柱连接到液相色谱系统上，使用0.1%甲酸水溶液（或其他pH值为2-3的缓冲溶液）以0.5-1.0 mL/min的流速冲洗色谱柱20倍柱体积。

然后使用甲醇冲洗色谱柱20倍柱体积。

老化温度为40-60℃，保持1-2小时。

6. 环氧基质反相相：将色谱柱连接到液相色谱系统上，使用0.1%甲酸水溶液（或其他pH值为2-3的缓冲溶液）以0.5-1.0 mL/min的流速冲洗色谱柱20倍柱体积。

然后使用甲醇冲洗色谱柱20倍柱体积。

老化温度为40-60℃，保持1-2小时。

7. 磺酸基质反相相：将色谱柱连接到液相色谱系统上，使用0.1%甲酸水溶液（或其他pH值为2-3的缓冲溶液）以0.5-1.0 mL/min的流速冲洗色谱柱20倍柱体积。

液相色谱柱维护与使用指南

液相色谱柱维护与使用指南色谱柱是整个液相分离系统的核心，而色谱柱的安装，活化/平衡，使用，维护/清洗以及保存是发挥色谱柱性能的重要过程。

笔者收集了Waters,Phenomenex,纳谱分析（国产）以及安捷伦的液相色谱柱使用指南。

笔者综合几家的使用指南，总结如下：1 .安装现代色谱柱上一般都会标明流向，我们应该按照流向进行正确安装,后期也许可以进行反冲,但前期还是尽量不要反冲。

当安装新色谱柱时，必须确保连接管路与新色谱柱匹配。

如果色谱柱末端与系统接头匹配不佳，新色谱柱的性能会受到不良影响（诸如：柱效下降、峰形拖尾等）或者发生渗漏。

同时色谱柱的接头应照最大压力进行选择，如下图为安捷伦推荐的接头。

最大系统压力推荐的接头部件号最高400barInfmity1abQuickTurn 接头（手紧式）接头：5067-5966最高800barInfmity1abQuickTurn 接头（带有安装工具）接头：5067-5966安装工具：5043-0915 最高1300barInfinity1abQuickConnect 快速连接接头接头：5067-5965如需了解更多信息和部件号，请参见《Agi1entInfinity1ab 接头产品样本》（5991-5164CHCN ）。

2 .活化/平衡通常，色谱柱出厂时保存于100%乙精中。

将色谱柱更换至其它流动相体系之前，务必要确保流动相的兼容性。

为避免流动相缓冲液在色谱柱或色谱系统中析出，使用五倍柱体积的水/有机溶剂混合溶液冲洗色谱柱，其中有机溶剂含量与所需缓冲盐流动相的有机溶剂含量相同或更低（例如，使用60%的甲醇水溶液冲洗色谱柱和系统，然后再更换为60%甲醇/40%缓冲液的流动相）。

对于反相分离来说，完成平衡至少用10倍柱体积的流动相（参见下表中的色谱柱体积）。

当反压达到恒定且色谱柱基线稳定时，可认为该柱达到完全平衡。

对于具有较短的化学链（例如C8、苯基、CN ）固定相的色谱柱，应小心确保在使用色谱柱之前对其进行了彻底的平衡。

安捷伦高效液相色谱仪操作说明

资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载安捷伦高效液相色谱仪操作说明地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容安捷伦高效液相色谱仪操作说明一、校枪及样品处理1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步骤：打开分析天平预热，一只烧杯放到称量盘上调零，一只装入纯水。

将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL，分别吸取纯水称质量，如偏大或偏小，调节移液枪直至准确到0.001g。

（如枪使用过久或气密性不好，可以准备一个小烧杯装入纯水，每次先轻轻沾湿枪口，甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水，再插上枪头使用。

）注意慢吸慢放，不要挂珠。

2. 样品处理：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液，取出样品后，首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）。

然后将样品稀释20倍，取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。

混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）。

准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管），取200μL待测液盖紧盖子。

按顺序放到自动进样盘中。

二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关打开。

打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序，打开色谱仪各组件电源，待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。

化学工作站自动与1200LC通讯。

流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中，打开冲洗阀，设流速为2ml/min，单击确定，再依次单击泵→控制，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均无气泡。

安捷伦1260液相操作规程

安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项一开机1)打开主机各模块电源(从下至上),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站,2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。

3)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。

将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min,排出管路中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头),关闭排气阀。

4)重复上述步骤,依此切换到B、C、D溶剂分别排气。

5)将泵的流量设到实验用流速,按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱20—30分钟。

6)点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。

7)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,进入平衡系统。

二数据采集方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。

若无,需按下面步骤建立:(1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;(2)出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;(3)泵参数设定:在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。

在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。

点击“确定”进入下一参数设定。

(4)柱温箱参数设定:手动输入规定的温度即可。

(5)紫外检测器(VWD)参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。

在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。