化妆品微生物五项检测

增
菌 18~24h 培 36±1℃ 养
分 离 18~24h 纯 36±1℃ 化
无菌落或无特征菌落
灰白色、扁 平、周围有 水溶性蓝绿 色素
特征菌落
镜检
书写检验 记录单
最终结 果判断
化★妆品微铜生物绿五项检假测 单胞菌检查流程图
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验
生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验
黄绿色 菌膜
灰白色 湿润
十六烷三甲基溴化铵平板
粉红/ 紫红色
SCDLP培养基
氧化酶试验
化妆品微生物五项检测
盐酸层呈粉紫色 氯仿层呈蓝绿色
绿脓菌素试验
明胶液化 试验
化妆品微生物五项检测
N2
硝酸盐还原产气试验 明胶液化 明胶培养基（高层）
结果报告
被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆 菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被 检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而 液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为 阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。
征 菌
落 靛基质
液面玫瑰红色
紫黑色
结果报告
根据发酵乳糖产酸产气，平 板上有典型菌落，并经证实 为革兰氏阴性短杆菌，靛基 质试验阳性，则可报告被检 样品中检出耐热大肠菌群。
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铜绿假单胞菌 检验操作流程
未检出2天，检出4天
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假
甘露醇发酵试验
金黄色葡萄球菌检查流程图
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灰/黑色
Baird Parker’s平板
血浆凝固酶试验
化妆品微生物五项检测
血浆凝块
甘露醇高盐琼脂
液态血浆
结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检， 证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸， 血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色 葡萄球菌。
化妆品微生物五项检测
人员操作方面： 无菌操作，避免污染； 一定专业技术或工作经验（招聘与外部审核时） 相互协作； 测试结果的证明。
化妆品微生物五项检测
化妆品微生物五项检测
革兰氏染色操作流程
化妆品微生物五项检测
保证检验结果正确
设备： 恒温培养设备 高压灭菌器（验证） 超净工作台（生物安全柜） 均质器(旋涡混合器) 天平（0.1g） 显微镜（可要可不要无硬性要求）
化妆品微生物五项检测
常规洁净工作台设置
化妆品微生物五项检测
目前大部分微生物实验室布局
菌落总数的测定便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品 进行卫生学总评价的综合依据。
化妆品微生物五项检测
测试流程
48小时出结果（30-300）：
供试液 的制备
混合平板 的制备
细菌的培 养
书写检验 记录单
化妆品微生物五项检测
数据 处理
检查结果、 观察与计数
TTC亦不可多加会抑制菌落生长
为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂 吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有细菌 存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
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SCDLP培养基或 7.5%NaCl肉汤
配培 养基 和稀 释液
供试 品的 处理
耐盐分
Baird Parker’s 或血琼脂
增 菌 24±2h 培 36±1℃ 养
来自百度文库
分
离 24~48h 纯 36±1℃ 化
镜检
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
耐热大肠菌群 Thermotolerant coliform bacteria系
一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在 44.5℃培养24h—48h能发酵乳糖产酸并产气。 该菌主要来自人和温血动物粪便，可作为粪便污染指标 来评价化妆品的卫生质量, 推断化妆品中有否污染肠道 致病菌的可能。
化妆品微生物五项检测
化妆品微生物五项检测
霉菌和酵母菌 检验操作流程
霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）化妆品检样在一定条件下培养后，1g或 1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，以判 明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。
本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎 红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌 和酵母菌数。（5-50）
化妆品微生物五项检测
接种阳性菌计算回收率
推荐了解： 人员培训能力掌握的检验重要指标。 有条件可做视具体样品测试结果。 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状
的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方 法的有效性。
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耐热大肠菌群 检验操作流程
未检出2天，检出3-4天
化妆品微生物五项检验
化妆品微生物五项检测
菌落总数检验
菌落总数（Aerobic bacterial count）：化妆品检样经过处理，
在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、 pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所 得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性 和兼性厌氧菌落总数。
双倍胆盐乳糖
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
镜检
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
增
菌 44.5±0.5℃ 检查
培 养
24-48h
结果 判断
不产酸不产气
书写检验 记录单
最终结 果判断
★粪大肠菌群检查流程图
化妆品微生物五项检测
分离培养
产酸产气
36±1 ℃
18~24h
蛋白胨水
培养
特
44.5±0.5℃ 24±2h
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金黄色葡萄球菌 检验操作流程
未检出2天，检出3天
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳
性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露 醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种， 能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致 败血症。
单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿 脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐， 在 42℃±1℃条件下能生长。
该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血 症等。在自然界中分布甚广，空气、水、土壤
化妆品微生物五项检测
SCDLP培养基
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
十六烷三甲基 溴化铵琼脂