《刚地弓形虫简介》PPT课件

因子或介质作为PEF能增加侵入的有效性，而单克隆抗体Tg49既能抑制PEF，
也能识别ROP1，所以认为ROP1就是PEF。
• 3、致密颗粒蛋白
•
是弓形虫分泌排泄抗原的重要组成部分，在
修饰调理弓形虫纳虫泡结构中起重要作用。
• 4、微线体蛋白
•
由弓形虫虫体前端散布在棒状体周围的微线
体分泌的、属于成员众多的家族蛋白质。在弓形虫
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⑵ 动物接种分离法或细胞培养法 将样本接种于小白鼠腹腔内，1周后取腹 腔液镜检。样本也可接种于离体培养的 单层有核细胞。查找滋养体。
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2、免疫学诊断
⑴ 染色试验（DT） ⑵ 间接血凝试验（IHA） ⑶ 间接免疫荧光抗体试验（IFA） ⑷ 酶联免疫吸附试验（ELISA）
粘附、侵袭宿主细胞期间，虫体的滑行移动和侵入
宿主细胞都与信号分子介导的钙依赖激酶等调节、
肌动球蛋白作用微线体蛋白的释放有关。
• 分类：1、具有跨膜性质的微线体蛋白MIC2、6、7等
•
2、不具跨膜特性的可溶性黏附蛋白MIC1、3
、4、5等
五 致 病 (pathogenesis)
1. 致病特点
⑴虫株毒力:强毒株、弱毒株
•
将病原微生物在训育条件下使其产生定向
变异，极大降低致病性，但仍保留一定的毒力、
免疫原性和繁殖能力，可刺激机体产生细胞和体
液免疫应答，但此类疫苗仍具有潜在回复突变而
恢复毒力的危险，故不适于人类。
2 虫体特异组分疫苗
•
是利用虫体排泄和分泌性抗原或速殖子膜抗原特定组分制备的疫
苗，虫体排泄和分泌抗原直接暴露于宿主免疫系统，因而可以激发宿主
产生体液免疫和细胞免疫，而速殖子膜抗原是诱导宿主免疫应答的主要
靶抗原之一。利用弓形虫抗体蛋白与免疫刺激复合物免疫猪，可产生很
高的IgG抗体水平，但抗体水平不足以抵抗大剂量虫体攻击。
3 基因工程疫苗
•
是利用基因工程方法或分
子克隆技术，分离出弓形虫的保
护性抗原基因，通过原核或真核
系统表达出保护性抗原，制成疫
刚地弓形虫
Toxoplasma gondii
张**
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一 概 述 (Instruction)
•
弓形虫(T.gondii)是猫科动物的肠道球虫，1908年由法国学者在北非刚地梳趾
鼠的肝脾单核细胞内发现—命名刚地弓形虫。
•
弓形虫呈世界性分布，人和许多动物都能感染，全世界有25%－50%人受感染，
我国阳性感染率为5%－20%，部分地区高达30%以上。
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专性细胞内寄生
•
弓形虫的整个发育过程经历无性生殖和有性生
殖两个世代的交替。
•
猫科动物为终宿主，有性生殖只限于在猫小肠
上皮细胞内进行。无性生殖阶段可在肠外其它组织、细
胞内进行。
•
哺乳类、鸟类、人等都可作为中间宿主，（除
红细胞外）有核细胞都可寄生，只能无性生殖。
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速殖子电镜
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三 基因组成和核苷酸的合成代谢
• （一）弓形虫的基因组
• 1 染色体DNA
•
除受精的大配子外，弓形虫各期染色
体DNA均为单倍体，约含70Mb，9.6×10-16g。
染色体组DNA中G+C含量约占55%，为没有甲基
化的碱基。
• 2 线粒体DNA
•
为环状双链，长度36kb，有一个10kb的
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机会致病性原虫
•
虫体侵入宿主细胞后，在宿主机体免疫功能正常的情况下，弓形
虫速殖子在细胞内的增殖速度逐渐减慢，最终转化为缓殖子并形成包囊，
宿主通常表现为无明显症状的隐性感染。
•
当宿主免疫功能下降时，缓殖子活化为速殖子，迅速增值并扩散，
破坏宿主细胞，引发脑炎、淋巴结炎等多脏器损伤弓形虫病，严重者可
扇状排列，前端较尖，后端较钝。
4 配子体
•
配子体有雌雄之分：
•
雄配子体呈卵圆形，直径10um，成熟雄配子体内含12-32个雄配子，雄
配子近似新月形，两端尖，长约3um。
•
雌配子体呈圆形，染色后呈深红色，较大的核，位于虫体一侧，雌配
子体发育成熟后，虫体略变大，可达15-20um，称为雌配子。
5 卵囊
•
P22(SAG2)和P43（SAG3）在虫体胞膜位置
上与P30靠近，能协助P30使虫体迅速入侵。用抗
P22单克隆抗体，速殖子与宿主细胞共同卵育，虫
体在宿主细胞外堆积，延缓对宿主细胞的附着。
当抗体压力解除后，堆积的虫体侵入细胞的活动
力增强。
• 3、ROP1
•
ROP1在弓形虫侵入宿主细胞的过程中起到了PEF的作用，当某些蛋白质
质粒DNA整合到机体的遗传系统内会引起细胞癌变；产生
免疫耐受的潜在可能。
• 其他新型疫苗：目前出现了一些新型疫苗：多糖疫苗、化 学合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗等。
七 实验诊断(diagnosis)
1、病原学诊断
⑴ 涂片染色法
取急性期患者的体液、脑脊液、 骨髓、羊水、胸水等离心后，沉淀物 作涂片，姬氏染色镜检查滋养体。
•
为雌雄配子结合后形成的合子发育而成。圆形或橢圆形，大小12um
×10um，有两层光滑透明的囊壁，卵囊随宿主粪便排到体外，在适宜温度、
湿度下迅速发育并孢子化，24h即可发育成熟，成熟时含有2个孢子囊。
滋养体 trophozoite
（又称速殖子） 假包囊
包囊
cyst
含缓殖子
卵囊
oocyst
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⑵宿主免疫状态
免疫力正常——隐性感染（无临床症状） 免疫力低下——致死性弓形虫病
2. 致病机理
急性期— 速殖子增殖作用
慢性期/隐性感染—包囊占位挤压作用
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3.临床表现
⑴ 先天性弓形虫病
母亲孕期感染,50%胎儿先天感染
胎儿先天性畸形 如脑积水、无脑儿、视网膜脉络膜炎、 弱智等或流产、早产、死产等。
•
P30蛋白占速殖子全部蛋白质的5%，是弓形
虫速殖子侵入宿主细胞与细胞受体结合的重要虫
体配体，速殖子与宿主细胞的粘附作用，可以被
抗P30单克隆抗体6A8所抑制，单克隆抗体6A8的
源自文库
Fab片段也能抑制虫体的粘附作用，而且具有计量
依赖性，P30分子构象的变化，能影响虫体对宿主
细胞的粘附作用。
• 2、P22(SAG2)和P43（SAG3）
内含多个重复的终止密码子。
• 3、P30基因（SAG1）
•
单一拷贝，不含内含子，分子量大约为
34700 ，编码蛋白质序列为319氨基酸。
• 4、ROP1基因
•
为2.1kb的单一拷贝ROP1的mRNA全长
2155nt，核苷酸序列86-143之间可能存在一个
内含子。
（二）主要蛋白质功能
• 1、P30（SAG1）
抗原的cDNA或mRNA与特定载体的重组体，作为抗原直接接
种动物和人，核酸进入细胞内，表达编码抗原，激活免疫
系统产生抵抗病原侵入或致病的免疫力。
• 与其他疫苗相比有如下优点：制备方法简单，可大量生产， 保存方法多，便于储存和运输，可诱生体液和细胞免疫，
免疫应答维持时间持久。
• 缺点：将DNA意外导入非靶细胞内，影响细胞正常功能； 刺激被接种机体产生抗DNA抗体，有导致自身免疫的可能；
反向重复序列。编码虫体代谢过程中与呼吸链
相关的物质，还可能编码虫期转化的有关物质。
• 3 质体DNA
•
呈环状，大小为35kb，可能编码DNA依赖的
RNA聚合酶亚单位β和β’及核糖体RNA小亚单位。
• 4 弓形虫RNA
•
主要有3个组分，分别为24S、19S和5S。
（二） 核苷酸合成代谢
• 1 嘌呤核苷酸合成代谢
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（2）后天获得性弓形虫病
免疫力正常——隐性感染 免疫力低下——全身性弓形虫病
引起脑膜脑炎、视网膜脉络膜炎 淋巴结炎、肝炎、心肌炎、肺炎
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六 疫苗
• 1、全虫疫苗
• （1）灭活苗
•
由致死的全虫或全虫裂解物制成。优点：
安全性比较高；缺点：免疫原性低。
• （2）减毒或弱毒苗
3、基因诊断
PCR及DNA探针——灵敏、特异、早期诊断
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八防治
重在预防：
⑴ 加强家畜、家禽的管理 ⑵ 严格肉类及制品的检疫 ⑶ 教育孕妇远离宠物——不养猫，不玩猫 ⑷ 做好产前检查
治疗：磺胺类 乙胺嘧啶＋磺胺嘧啶
孕妇首选 螺旋霉素
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感谢下 载
•
弓形虫不能进行嘌呤核苷酸的从头合成，
需要宿主细胞提供外源性的嘌呤，虫体才能进
行核苷酸的合成。在细胞内寄生的虫体主要依
靠次黄嘌呤补救途径获得嘌呤。这可能是弓形
虫专性细胞内寄生的原因。
• 2 嘧啶核苷酸合成代谢
•
弓形虫能进行嘧啶核苷酸的从头合成，也
能通过嘧啶补救途径从宿主细胞的核苷酸池获
得。
四 主要基因和蛋白质
导致死亡。
二 生活史
脑、心、肝、肺、 肌肉、淋巴结
胎儿
人等中间宿主吞入
经
包囊 假包囊
缓殖子 速殖子
侵入肠壁 假包囊
胎 盘
速殖子
卵囊
猫
子孢子 随血液淋巴侵（有核细胞）
等
入 有核细胞
终 宿 主
免 疫
吞 入
速殖子
缓殖子
小肠上皮细胞裂殖子
进入血流 进入新的组 织细胞内
功 能 正 常
子孢子
雌雄配子体
免疫功能↓
苗。分为重组单价疫苗和复合多
价疫苗。
重组单价疫苗是将弓形虫 的单一保护性抗原基因 通过原核或真核系统表 达纯化后制成疫苗。
复合多价疫苗是将不同抗 原分子设计成联合抗原 或编码不同抗原分子的 功能性表位氨基酸的基 因片段连接起来，通过 原核或真核系统表达出 联合抗原或联合表位肽 段。
4 核酸疫苗
•
包括DNA疫苗和RNA疫苗，是将含有病原生物的某种
• （一）主要基因
• 1、B1 基因
•
是一个前后重复的35个拷贝的基因，据cDNA序列
分析，在456-843bp区域内有一个内含子，此区域有规
范的5’和3’剪切位点序列，被广泛用于弓形虫的检测
研究中。
• 2、P22基因（SAG2）
•
是速殖子基因组中的单一拷贝基因，长度
1404bp，内含597bp开放阅读框，为完整的翻译序列，
缓殖子
包囊
卵囊
合子 雌雄配子
（组织细胞内）
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1 滋养体（速殖子）
•
滋养体为中间宿主有核细胞内分裂繁殖的虫体，又称速殖子。呈香蕉
形或新月形，一端钝圆，一端较尖。一侧较平，另一侧较弯曲。虫体大小约
（4~7）微米×（2~4）微米。几个到十几个速殖子被宿主细胞膜所包绕形成
假包囊。
2 包囊
•
见于宿主组织中，呈圆形或椭圆形，外有一层由虫体分泌的和富有弹
性的紧韧囊壁所包绕，随着囊内虫体缓慢增殖，直径5-100微米不等，内含数
百虫体。在包囊内缓慢增殖或相对静止的阶段称缓殖子。
3 裂殖体
•
裂殖体在终宿主猫科动物的小肠绒毛上皮细胞内发育增殖。虫体为长
椭圆形，细胞质色浅，内含4~40个裂殖子，裂殖子呈新月形，在裂殖体内呈