男性不育实验诊断检测项目基本内容及意义

男性不育实验诊断检测项目基本内容及意义

暨南大学医学院附属深圳市人民医院（518020，深圳）刘瑜何林

随着基础研究的深入，与男性不育相关实验检测项目愈来愈多，内容涉及形态学、免疫学、生物化学及分子生物学等多学科领域。在这些繁冗的检测项目中究竟哪些最具诊断价值以及如何正确运用这些检测项目来进行不育症的病因学诊断，是长期困扰男性不育实验诊断临床应用的技术难题。现将当今较为成熟、有良好应用价值并获得国际专家学者广泛认可的实验检测指标介绍如下：

一、静止性生殖道感染检测指标

精液中的泌尿生殖道上皮细胞、前列腺细胞、生精细胞和白细胞形态在湿片状态下是无法区分开的，它们统称为圆细胞（Round cells）。只有通过特殊检查才能将白细胞与其他类型圆细胞区别开，从而达到判断感染是否存在的目的。

精液白细胞过氧化物酶(Leukocyte Peroxidase)染色、精液白细胞群(Leukocyte subpopulations)定量和精浆弹性蛋白酶(Elastase)定量是目前用于精液感染性检测的常用指标。其中前二者是WHO推荐指标，后者是近几年被国内外学者广泛研究认可的检测指标。

精液白细胞过氧化物酶染色、精液白细胞群定量主要用于判断白细胞精子症，精液白细胞数大于1×106/ml即可确诊。但二者在诊断准确性上是有差别的。过氧化物酶染色只能检测到精液中分泌过氧化物酶的中性粒细胞，不能检出精液中所有白细胞，故假阴性率高。而白细胞群定量是迄今为止最准确可靠的白细胞精子症检测方法，可检测出精液中所有类型白细胞。

精浆弹性蛋白酶定量检测的是白细胞抗炎效应复合物。精液中弹性蛋白酶浓度与白细胞量不一定总是成正比。有研究表明，精液弹性蛋白酶浓度与精液中白细胞（过氧化物酶法检测）呈良好相关性。精液白细胞浓度>1×106/ml时，精浆弹性蛋白酶浓度均>1000ng/ml。但当精液白细胞浓度<1×106/ml时，亦有一些标本精浆弹性蛋白酶浓度>1000ng/ml[1]。最新研究表明，通过ROC(receiver operating characteristic)曲线分析，精浆弹性蛋白酶判定感染的临界值定为290ng/ml，其灵敏度为79.5%，特异性达74.4%[2]。

二、免疫性不育检测指标

目前血清抗精子抗体检测已在临床广泛开展。对于男性不育患者而言，以血清抗精子抗体作为免疫性不育辅助诊断指标并无多大临床意义，原因如下：（1）由于男性血-睾屏障的存在，血清内精子抗体的存在无法真实反映当前生殖道内精子是否存在抗体；（2）血清抗精子抗体诊断试剂盒特异性较差。目前国内外所用血清抗精子抗体诊断抗原多直接从精子内获得，它同时包含精子膜抗原和大量精子膜内抗原物质。迄今为止已发现的人类精子特有抗原物质多达几十种（但尚不清楚引发免疫性不育最具特异性的抗原成份），这些提取抗原可与正常人血清存在明显的交叉反应。尽管在制作工艺上可使试剂盒最大限度地减少这种假阳性结果，但其特异性仍存在较大疑问；（3）该项目试剂盒检测方法多采用ELISA间接法，易造成假阳性。

精子膜表面抗体(Spermatozoan surface antibody)（亦称精子包被抗体, Antibody-coating of spermatozoa）是WHO推荐的用于免疫性不育的诊断指标。其优点在于：（1）检测标本为活力精子，更有临床意义；（2）可以对精子表面抗体产生部位进行定位；（3）检测过程中能保持被检测精子膜的完整性，膜内抗原不对外释放，检测更具特异性；（4）操作简单快捷。

临床上许多血清抗精子抗体检测结果呈阳性的男性，其精子包被抗体检测却并无异常。

三、前列腺分泌功能检测指标

1．精浆锌(Zinc)

WHO推荐指标。锌直接参与精子生成、成熟、激活和获能；能延缓精子膜的脂质氧化，维持胞膜结构的完整性和稳定性，从而使精子保持良好的活动力；锌是前列腺功能指标之一，与抗细菌感染有关。病原微生物感染对前列腺分泌功能有影响，可使精浆锌降低。

2．精浆柠檬酸(Citric acid)

WHO推荐指标。精浆柠檬酸来自前列腺，其作用是通过与钙离子结合，影响射精后精液液化过程。前列腺炎可导致精浆柠檬酸降低。

3．精浆酸性磷酸酶(Acid phosphatase)

WHO推荐指标。前列腺炎可引起精浆酸性磷酸酶降低，前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤者其含量增高。

四、精囊分泌功能检测指标

精浆果糖(Fructose)是WHO推荐的精囊分泌功能评价指标。精囊分泌的果糖是精子能量的主要来源。精囊炎时其含量降低；不完全射精或射精过频，果糖含量亦降低；精囊缺如果糖测定为阴性。常用于梗阻性无精症患者梗阻发生部位的定位诊断。

五、附囊分泌功能检测指标

精浆中性α-葡糖苷酶(Neutral alpha-glucosidase )是WHO推荐的附囊分泌功能评价指标。中性α-葡糖苷酶较左旋肉毒碱和甘油磷酸胆碱对附睾更特异更灵敏。结合激素和睾丸其他指标，对远端输精管阻塞有较好的诊断价值。

六、精子功能评价指标

1．去透明带仓鼠卵母细胞试验(Zone-free hamster oocyte test)

WHO推荐检测指标。用于精子-卵母细胞融合能力的体外评价。其不足之处在于：（1）该方法不如生理过程有效，而且可能涉及不同机制，常出现假阴性结果（病人的精子在仓鼠卵母细胞试验中失败，但在体内或体外可使人的卵母细胞受精）；（2）试验操作复杂，可变因素较多；（3）试验中难以实施有效的质量控制，试验误差较大，且仓鼠卵母细胞来源困难，普通实验室难以开展临床检测工作。

2．诱发顶体反应（Induced acrosome reaction, IAR）

WHO推荐研究指标。通过对引发顶体反应后的顶体状态进行评价，达到鉴定顶体反应障碍的目的。去透明带仓鼠卵母细胞试验中也包含有诱发顶体反应的过程，IAR作为一个独立的检测项目，主要用于男性不育病因分析及辅助生殖技术（ART）助孕方式的选择[3]。3．精子顶体酶(acrosin)

顶体酶是受精过程中重要的蛋白水解酶，当精子头部进入卵透明带时，顶体酶原被活化为顶体酶水解卵透明带，使精子穿过卵透明带最终与卵子融合。

精子顶体酶是目前被国内外学者广泛研究和认可的评价指标。虽然顶体酶的作用机制现在尚未完全明了且存在一定争议，精子顶体酶活性检测也暂未列入《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》，但其在辅助生殖中的意义已得到多数学者的承认，将其作为ART助孕方式选择的评价指标之一已获得良好的应用效果[3]。

4．人透明带结合试验（Human zona pellucida binding test）

WHO推荐研究指标。精子与透明带结合的过程启动顶体反应，释放可溶性顶体内容物，