植物检验检疫技术

第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 5、分离培养检验
主要适用于潜伏于种子、苗木、繁殖材料及 植物产品内的病原菌
分离真菌一般用PDA培养基，分离培养细菌用 牛肉汁培养基，对于特殊要求的菌类可以 用选择性培养基
Байду номын сангаас
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 5、分离培养检验
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 2、染色检验法
对植物病原细菌检验可以用革兰氏染色法和 鞭毛染色法，对于植物病原线虫则用透明 染色法
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 3、直接镜检
第五章 植物检验检疫技术
加入定量蒸馏水或其它洗涤液，振荡5一lOmin， 使孢子脱离种子，转移到洗涤液中。 (2)离心富集：将孢子洗涤液移人离心管，低速离心 (2500—3000r／min)10—15min，使孢子沉集在离 心管底部。
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 4、洗涤检验法
取10g稻种，脱下谷壳剪碎或磨碎，放入已灭 菌处理的烧杯中，加灭菌水20ml浸泡30min， 过滤后分别吸取滤液1.5、1.0和0.5ml，置 于三个灭菌的培养皿内
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法
各加lml新培养的白叶枯细菌指示菌液(浓度 为9X108／ml以上)混匀后加入10ml融化的肉 汁胨琼脂培养基，摇匀凝成平板后，放在 25—28℃温箱中，培养10—12h
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 4、洗涤检验法
用于检测种子表面附着的真菌孢子，包括黑 粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、锈菌 的夏孢子以及多种半知菌的分生孢子等。
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 4、洗涤检验法
洗涤检验的操作程序如下： (1)洗脱孢子：将一定数量的种子样品放人容器内并
洗涤检验的操作程序如下： (3)镜检计数：弃去离心管内的上清液，加入一定量
蒸馏水或其它浮载液，重新悬浮沉集在离心管底 部孢子，取悬浮液，滴加在血球计数板上，用高 倍显微镜检查孢子种类并计数，据此可计算出种 子的带菌量。 (4)孢子生活力测定：用常规孢子萌发测定法、分离 培养法或红四氯唑(TTC)染色法判定孢子死活。
检验，按粮谷、油料、豆类颗粒形状 和大小，选用不同孔径的规格筛
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 2、过筛检验：将需用的筛层，按筛孔大小顺序
套好(小筛孔放在下面)，将样品放人上层选筛内 (不宜过多，约达筛层高度的2／3)，套上筛盖， 电动或手动回旋转动一定时间后，按筛层将筛上 物和筛下物分别倒入白瓷盘中，用扩大镜或解剖 镜检查，检出昆虫和螨类，同时还可检出虫粒、 病粒、杂草籽和其它夹杂物。若检查时室温低于 10℃，最下层筛出物须在20—30℃下处理15— 20min，促使害虫活动，再行检查。
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 3、软X光透视检测 • 4、检疫犬检查
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 1、相对密度检验 • 一定浓度的食盐水或其它溶液
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 2、染色检验法
检查粮粒中的谷象、米象等可将样品放在铁丝网中，在30℃ 的水中浸lmin，再移入1％高锰酸钾溶液中lmin，然后用 清水冲洗或用过氧化氢硫酸液洗涤20—30s，用扩大镜检 查，挑出有直径约0．5mm黑斑点的籽粒，再行剖检。
豆类可用1％碘化钾或2％碘酒染色1—1．5min，再移入0．5 ％氢氧化钠或氢氧化钾液中20—30s，取出用水冲洗30s， 如粒面有1—2mm直径的黑圆点，则内部可能隐藏豆象。
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 1、直接检查：利用肉眼或放大镜 • 注意有无害虫的排泄物、脱皮壳、卵、
幼虫、蛹、茧和成虫诸虫态以及食痕 和危害状等。
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 2、过筛检验：取样携回室内进行过筛
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 9、保湿萌芽检验
保湿培养检验 吸水纸检验法
通常用底部铺有三层吸水纸的塑料培养皿或其它适 用容器作培养床。先用蒸馏水湿润吸水纸，将种 子按适当距离排列在吸水纸上，再在一定条件下 培养，对多数病原真菌，适宜的培养温度为20— 25℃，每天用近紫外光(NUV)灯或日光灯照明12h。
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法
• 噬菌体是感染细菌的病毒，能在活细菌细 胞中寄生繁殖，破坏和裂解寄主细胞，在 液体培养时，使混浊的细菌悬浮液变得澄 清，在固体平板上培养时，则出现许多边 缘整齐，透明光亮的圆形无菌空斑，称为 “噬菌斑”，肉眼即可分辩。
方法有：组织分离法 稀释分离法 划线分离法
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 6、血清学检验
方法有：免疫电镜技术 酶联免疫吸附技术 斑点免疫法 免疫荧光抗体法
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 7、生理生化测定
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法
国内已采用噬菌体法检查水稻稻种是否带有 白叶枯病菌。病田稻种的稻壳中通常都带 有专化性的噬菌体或存活细菌，可据以确 定稻种确系带菌。
第五章 植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法