副流感病毒小鼠动物模型的建立及病理学研究_杜淑娟
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DU Shu_juan1 , CHENG Shu_jun2 , YUAN Mei_feng1
(1.Guangdong Hospital of TCM , GuangZhou 510120, China ; 2.Guangdong Entry_Exit Inspection and Quarantine Technique Center , GuangZhou 510623, China)
【Key words】 Sendia virus;Parainfluenza virus;Model , animal
Ⅰ型和 Ⅲ型副流感病毒是严重危害儿童健康的 主要呼吸道病源体 , 约占儿童病毒感 染的 26 %, 严 重危害儿童健康[ 1] 。中医药在抗呼吸道病毒方面的 作用 , 已成为目前治疗呼吸道病毒感染的重要方向 。 但目前国内外尚无副流感病毒的动物模型 , 严重的 制约了疾病机理和药理学研究 。仙台病毒是严重危 害实验动物的传染病之一 , 啮齿类中的大鼠 、小鼠 、 豚鼠等自然感染率都很高[ 2] 。同时仙台病毒也是人 类呼吸道感染的重要病源 , 常散发或混合在流感流 行中 , 可引起婴幼儿下呼吸道严重疾病[ 1 , 3] 。仙台病 毒与人类 HA_2 病毒同属副流感病毒 Ⅰ 型 , 二者间 有十分密切的抗原关系[ 4] 。 因此选择仙台病毒为毒 株建立副流感病毒感染的动物模型 , 不仅对实验动 物的开发而且对临床医药都有十分重要的意义[ 5] 。
n
15d 平均体重(g) Average weight on 15 d
NIH
20
13.90±0.53
1
16.23
KM
20
14.04±0.41
5
17.72±1.47
BA BL c
20
13.97±0.55
14
21.34±1.00
空白组 Control ■
60
13.96±1.42
30
注 :■:3 个空白对照组数据 ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
2006 年 7 月 第 16 卷 第 7 期
中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
July, 2006 Vol .16 No .7
研究报告
副流感病毒小鼠动物模型的建立及病理学研究
杜淑娟1 , 程树军2 , 袁美凤1
(1.广东省中医院 , 广州 510120; 2.广东检验检疫技术中心 , 广州 510623)
仙台病毒(Sendia virus SV)由中山大学实验动物 中心惠赠 , 为标准 Fushimi 株 。 11 d 龄鸡胚 , 购自华 南农业大学实验鸡场 。 采用鸡胚尿囊腔接种法增殖 病毒[ 4] , 每只胚接种 0.2 mL , 孵化 3 d , 收毒 。 1.3 仪器
生物组织自动脱水机 、组织包埋机 、摊片烤片机 、
[ 作者简介] 杜淑娟(1973-), 女 , 硕士 , 主治医师 , 主要研究方向 :中医儿科临床与教学 。
3 88
中国比较医学杂志 2006 年 7 月第 16 卷第 7 期 Chin J Comp Med , July 2006 , Vol .16 .No .7
LEICA 组织切片机 、冰冻切片机、OLYMPUS 显微镜配显 微摄影装置 、岛津电子天平和 LEICA 图像分析仪 。 1.4 对感染小鼠 LD50 的测定
Tab .4 Grade determination of lung histopathological and lymphocyte counting
分组 Gro up
早期(1 ～ 5 d) Ea rly
肺 Lung 中期(5 ～ 10 d)
Me taphase
组别
早期(1～ 5 d)Early
后期(8 ～ 15 d)A naphase
全过程(1 ～ 15 d)Whole process
Gro up
n
x ±SD
n
x ±SD
n
x ±SD
NIH
16
1.31 ±0.21＊＊
3
1.26＊＊
20
1.28 ±0.19＊＊
KM
10
1.15 ±0.13＊＊
5
0.93 ±0.24 ＊
5%
平均生活天数(A verage survival days)
4.9＊＊
注 :■:3 个空白对照组数据 ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
Note :■:Date f rom three control groups ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
KM 50 %＊＊ 25 %＊＊ 8.1＊＊
【摘要】 目的 建立副流感病毒感染的小鼠动物模型 , 为中医中药抗病毒研究提供模 型动物 。 方法 选择与 副流感病毒抗原关系密 切的仙台病毒感染 NIH 、BALB c 和 KM 三 个品系 小鼠 , 观察 不同品系 的动物 对仙台 病毒的 敏感 性和组织学差异 。 结果 KM 小鼠感染仙台病毒 , 病程适中 , 临床症状明显 , 病理变化典型 , 是仙台病 毒感染的 理想品系 。 结论 KM 小鼠感染仙台病毒可作为副流感病毒感染的疾病模型 , 应用于药理学等生物医学研究中 。
20
1.04 ±0.20 ＊
BALB C
4
1.02 ±0.15 ＊
16
0.85 ±0.20
20
0.93±0.19
对照组 Control
30
0.77 ±0.10
30
0.74 ±0.15
60
0.74±0.15
注 :NIH 组 、KM 组与空白组相比 , ＊＊P <0.01 ＊ P <0.05
Note :Comparison of NIH and KM groups with cont rol group , ＊＊P <0.01 ＊ P <0.05
BALB c 80 %＊＊ 70 %＊＊ 12.4
空白组 ■Control 100 % 100 %
15
表 2 实验期间不同组存活小鼠平均体重 Tab .2 Mean body mass of the survival mice in different groups
组别 Gro up
n
给药前平均体重(g) Average weight before medici ne
2 结 果
2.1 临床症状观察 病毒感染后 24 h 内 , 除对照组外 , 实验组动物
表现食欲减退 、活动减少 、呼吸困难 。NIH 病程进展 较快 , 多数动物症状严重 , 7 d 内的急性死亡率明显 高于其它两组 ;BALB c 组仅少数动物症状严重 , 7 d 内急性死亡率较低 ;KM 组介于 NIH 组和 BALB c 组 之间 。实验前后各组动物存活率和平均生活天数的 比较见表 1 。 实验前后存活小鼠体重增长量变化的 统计见表 2 。
经动物 实 验测 得 仙 台病 毒 感 染 小鼠 LD50 为 10-2 , 实验量为 10-1 。 1.5 小鼠副流感病毒感染模型
3 个品系的病毒感染组动物乙醚麻醉后定量从 鼻腔滴入 10-1 感染量的仙台病毒液 0.4 mL(10LD50
鸡胚尿囊液), 造成病毒感染 , 结果以行为学和病理 学检查确定 。空白组动物鼻腔滴入等量无毒鸡胚尿 囊液 。每天观察动物生存状况 , 发现动物濒死 、立即 眼球摘除法处死动物 , 取肺 、气管 、脾等组织 , 准确称 重(精确到 0.01g), 固定于 10 %中性缓冲福尔马林 液 。 观察 15 d 。 1.6 观察指标和数据处理
【关键词】 仙台病毒 ;副流感病毒 ;模型 , 动物 【中图分类号】R56 【文献标识码】A 【文章编号】1671-7856(2006)07-0387-03
Pathology Study and Model Foundation of Parainfluenza Virus Infection in Mice
出 ;气管软骨有点状出血 。空白组气管 、肺等未见明 显异常 。 实验过程中肺脏器 系数的动态变化 见表 3 。多个实验组与对照组之间的比较用 q 检验 , 结果 表明 , 实验过程中 , 实验组肺脏器系数明显高于对照
表 3 实验过程中死亡小鼠肺脏器系数的动态变化
Tab.3 The dynamic variation of lung coefficient in dead mice
表 1 药物对感染仙 台病毒小鼠的保护作用 Tab .1 Protection of medicine in Sendia virus infected mice
NIH
7d 存活率(Survival rate of 7days)
20 %＊＊
15d 存活率(Survival rate of 15days)
Note :■:Date f rom three control groups ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
24.32±2.16
t
28.75＊＊ 16.68＊＊ 4.73＊
2.2 组织病理学观察 2.2.1 肺的大体解剖 :3 个品系动物在攻毒后肺呈 暗红色 , 严重肿胀 , 表面可见大小不等的灰白色结节 状坏死斑和紫色出血斑 , 切面有泡沫状红色液体流
轻 , BALB c 组最为明显(图 1 , 见封 Ⅱ)。各组脾脏中 央小动脉周围淋巴鞘 的淋巴细胞数测定结果 见表 4 。实验组早期脾淋巴滤泡明显增生 , 动脉周围淋巴 鞘淋巴细胞数明显增多 , 炎症症剧烈 , 以 BALB c 组 增生最明显 。
表 4 实验不同时期肺病理组织学分级判定和淋巴细胞计数
【Abstract】 Objective To establish a parainfluenza_virus_infective model in mice and to provid model animals for anti_virus research of TCM .Method NIH, BALB c and KM mice were infected by Sendia virus (SV), whose antigen were closed to parainfluenza virus .Then the change of histopathological was observed.Result The KM mice was an ideal strain for SV infection for its moderate infection duration, obvious clinical symptoms and typical lesion .Conclusion SV_infected KM mice can be used in model of anti_parainfluenza virus infected disease and pharmacology researches .
观察体重变化(精确到 0.1 g), 临床症状 ;计算
每组存活率和平均存活天数 。小鼠肺 、气管 、脾等组 织常规固定 , 石蜡包埋 , 切片 5 μm , HE 染色 , 镜检观 察脏器病理变化 。 肺的病变分六级 , 脾脏淋巴细胞 计算方法和胸腺皮质厚度测量参考李建国等[ 6] 的方 法 , 采用 LEICA 图像分析仪 。同组体重比 较采用 t 检验 , 不同组间的比较用方差分析 。
中国比较医学杂志 2006 年 7 月第 16 卷第 7 期 Chin J Comp M ed , July 2006 , Vol .16.No .7
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组 , 其 中以 NIH 组 最 明 显 , KM 组 介 于 NIH 组与 BABL c来自百度文库组之间 。 2.2.2 显微观察 :表 4 示实验过程中肺组织学变 化的动态描述和分级判定结果 , 早期各品系肺的急 性病变相似 , 中后期各实验组肺的病变不同程度减
1 材料和方法
1.1 实验动物 清洁级 NIH 、BALB c 和 KM 小鼠各 40 只 , 购自
第 一 军 医 大 学 实 验 动 物 中 心 (合 格 证 :粤 检 A0010244), 体重 13 ～ 15 g , 经血凝试验 确认鼠群中 无仙台病毒的自然感染 。每种动物均分为感染组和 对照组两组 , 每组 20 只 。 1.2 病毒
(1.Guangdong Hospital of TCM , GuangZhou 510120, China ; 2.Guangdong Entry_Exit Inspection and Quarantine Technique Center , GuangZhou 510623, China)
【Key words】 Sendia virus;Parainfluenza virus;Model , animal
Ⅰ型和 Ⅲ型副流感病毒是严重危害儿童健康的 主要呼吸道病源体 , 约占儿童病毒感 染的 26 %, 严 重危害儿童健康[ 1] 。中医药在抗呼吸道病毒方面的 作用 , 已成为目前治疗呼吸道病毒感染的重要方向 。 但目前国内外尚无副流感病毒的动物模型 , 严重的 制约了疾病机理和药理学研究 。仙台病毒是严重危 害实验动物的传染病之一 , 啮齿类中的大鼠 、小鼠 、 豚鼠等自然感染率都很高[ 2] 。同时仙台病毒也是人 类呼吸道感染的重要病源 , 常散发或混合在流感流 行中 , 可引起婴幼儿下呼吸道严重疾病[ 1 , 3] 。仙台病 毒与人类 HA_2 病毒同属副流感病毒 Ⅰ 型 , 二者间 有十分密切的抗原关系[ 4] 。 因此选择仙台病毒为毒 株建立副流感病毒感染的动物模型 , 不仅对实验动 物的开发而且对临床医药都有十分重要的意义[ 5] 。
n
15d 平均体重(g) Average weight on 15 d
NIH
20
13.90±0.53
1
16.23
KM
20
14.04±0.41
5
17.72±1.47
BA BL c
20
13.97±0.55
14
21.34±1.00
空白组 Control ■
60
13.96±1.42
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注 :■:3 个空白对照组数据 ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
2006 年 7 月 第 16 卷 第 7 期
中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
July, 2006 Vol .16 No .7
研究报告
副流感病毒小鼠动物模型的建立及病理学研究
杜淑娟1 , 程树军2 , 袁美凤1
(1.广东省中医院 , 广州 510120; 2.广东检验检疫技术中心 , 广州 510623)
仙台病毒(Sendia virus SV)由中山大学实验动物 中心惠赠 , 为标准 Fushimi 株 。 11 d 龄鸡胚 , 购自华 南农业大学实验鸡场 。 采用鸡胚尿囊腔接种法增殖 病毒[ 4] , 每只胚接种 0.2 mL , 孵化 3 d , 收毒 。 1.3 仪器
生物组织自动脱水机 、组织包埋机 、摊片烤片机 、
[ 作者简介] 杜淑娟(1973-), 女 , 硕士 , 主治医师 , 主要研究方向 :中医儿科临床与教学 。
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中国比较医学杂志 2006 年 7 月第 16 卷第 7 期 Chin J Comp Med , July 2006 , Vol .16 .No .7
LEICA 组织切片机 、冰冻切片机、OLYMPUS 显微镜配显 微摄影装置 、岛津电子天平和 LEICA 图像分析仪 。 1.4 对感染小鼠 LD50 的测定
Tab .4 Grade determination of lung histopathological and lymphocyte counting
分组 Gro up
早期(1 ～ 5 d) Ea rly
肺 Lung 中期(5 ～ 10 d)
Me taphase
组别
早期(1～ 5 d)Early
后期(8 ～ 15 d)A naphase
全过程(1 ～ 15 d)Whole process
Gro up
n
x ±SD
n
x ±SD
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x ±SD
NIH
16
1.31 ±0.21＊＊
3
1.26＊＊
20
1.28 ±0.19＊＊
KM
10
1.15 ±0.13＊＊
5
0.93 ±0.24 ＊
5%
平均生活天数(A verage survival days)
4.9＊＊
注 :■:3 个空白对照组数据 ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
Note :■:Date f rom three control groups ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
KM 50 %＊＊ 25 %＊＊ 8.1＊＊
【摘要】 目的 建立副流感病毒感染的小鼠动物模型 , 为中医中药抗病毒研究提供模 型动物 。 方法 选择与 副流感病毒抗原关系密 切的仙台病毒感染 NIH 、BALB c 和 KM 三 个品系 小鼠 , 观察 不同品系 的动物 对仙台 病毒的 敏感 性和组织学差异 。 结果 KM 小鼠感染仙台病毒 , 病程适中 , 临床症状明显 , 病理变化典型 , 是仙台病 毒感染的 理想品系 。 结论 KM 小鼠感染仙台病毒可作为副流感病毒感染的疾病模型 , 应用于药理学等生物医学研究中 。
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1.04 ±0.20 ＊
BALB C
4
1.02 ±0.15 ＊
16
0.85 ±0.20
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0.93±0.19
对照组 Control
30
0.77 ±0.10
30
0.74 ±0.15
60
0.74±0.15
注 :NIH 组 、KM 组与空白组相比 , ＊＊P <0.01 ＊ P <0.05
Note :Comparison of NIH and KM groups with cont rol group , ＊＊P <0.01 ＊ P <0.05
BALB c 80 %＊＊ 70 %＊＊ 12.4
空白组 ■Control 100 % 100 %
15
表 2 实验期间不同组存活小鼠平均体重 Tab .2 Mean body mass of the survival mice in different groups
组别 Gro up
n
给药前平均体重(g) Average weight before medici ne
2 结 果
2.1 临床症状观察 病毒感染后 24 h 内 , 除对照组外 , 实验组动物
表现食欲减退 、活动减少 、呼吸困难 。NIH 病程进展 较快 , 多数动物症状严重 , 7 d 内的急性死亡率明显 高于其它两组 ;BALB c 组仅少数动物症状严重 , 7 d 内急性死亡率较低 ;KM 组介于 NIH 组和 BALB c 组 之间 。实验前后各组动物存活率和平均生活天数的 比较见表 1 。 实验前后存活小鼠体重增长量变化的 统计见表 2 。
经动物 实 验测 得 仙 台病 毒 感 染 小鼠 LD50 为 10-2 , 实验量为 10-1 。 1.5 小鼠副流感病毒感染模型
3 个品系的病毒感染组动物乙醚麻醉后定量从 鼻腔滴入 10-1 感染量的仙台病毒液 0.4 mL(10LD50
鸡胚尿囊液), 造成病毒感染 , 结果以行为学和病理 学检查确定 。空白组动物鼻腔滴入等量无毒鸡胚尿 囊液 。每天观察动物生存状况 , 发现动物濒死 、立即 眼球摘除法处死动物 , 取肺 、气管 、脾等组织 , 准确称 重(精确到 0.01g), 固定于 10 %中性缓冲福尔马林 液 。 观察 15 d 。 1.6 观察指标和数据处理
【关键词】 仙台病毒 ;副流感病毒 ;模型 , 动物 【中图分类号】R56 【文献标识码】A 【文章编号】1671-7856(2006)07-0387-03
Pathology Study and Model Foundation of Parainfluenza Virus Infection in Mice
出 ;气管软骨有点状出血 。空白组气管 、肺等未见明 显异常 。 实验过程中肺脏器 系数的动态变化 见表 3 。多个实验组与对照组之间的比较用 q 检验 , 结果 表明 , 实验过程中 , 实验组肺脏器系数明显高于对照
表 3 实验过程中死亡小鼠肺脏器系数的动态变化
Tab.3 The dynamic variation of lung coefficient in dead mice
表 1 药物对感染仙 台病毒小鼠的保护作用 Tab .1 Protection of medicine in Sendia virus infected mice
NIH
7d 存活率(Survival rate of 7days)
20 %＊＊
15d 存活率(Survival rate of 15days)
Note :■:Date f rom three control groups ＊:P <0.05 ＊＊:P <0.01
24.32±2.16
t
28.75＊＊ 16.68＊＊ 4.73＊
2.2 组织病理学观察 2.2.1 肺的大体解剖 :3 个品系动物在攻毒后肺呈 暗红色 , 严重肿胀 , 表面可见大小不等的灰白色结节 状坏死斑和紫色出血斑 , 切面有泡沫状红色液体流
轻 , BALB c 组最为明显(图 1 , 见封 Ⅱ)。各组脾脏中 央小动脉周围淋巴鞘 的淋巴细胞数测定结果 见表 4 。实验组早期脾淋巴滤泡明显增生 , 动脉周围淋巴 鞘淋巴细胞数明显增多 , 炎症症剧烈 , 以 BALB c 组 增生最明显 。
表 4 实验不同时期肺病理组织学分级判定和淋巴细胞计数
【Abstract】 Objective To establish a parainfluenza_virus_infective model in mice and to provid model animals for anti_virus research of TCM .Method NIH, BALB c and KM mice were infected by Sendia virus (SV), whose antigen were closed to parainfluenza virus .Then the change of histopathological was observed.Result The KM mice was an ideal strain for SV infection for its moderate infection duration, obvious clinical symptoms and typical lesion .Conclusion SV_infected KM mice can be used in model of anti_parainfluenza virus infected disease and pharmacology researches .
观察体重变化(精确到 0.1 g), 临床症状 ;计算
每组存活率和平均存活天数 。小鼠肺 、气管 、脾等组 织常规固定 , 石蜡包埋 , 切片 5 μm , HE 染色 , 镜检观 察脏器病理变化 。 肺的病变分六级 , 脾脏淋巴细胞 计算方法和胸腺皮质厚度测量参考李建国等[ 6] 的方 法 , 采用 LEICA 图像分析仪 。同组体重比 较采用 t 检验 , 不同组间的比较用方差分析 。
中国比较医学杂志 2006 年 7 月第 16 卷第 7 期 Chin J Comp M ed , July 2006 , Vol .16.No .7
38 9
组 , 其 中以 NIH 组 最 明 显 , KM 组 介 于 NIH 组与 BABL c来自百度文库组之间 。 2.2.2 显微观察 :表 4 示实验过程中肺组织学变 化的动态描述和分级判定结果 , 早期各品系肺的急 性病变相似 , 中后期各实验组肺的病变不同程度减
1 材料和方法
1.1 实验动物 清洁级 NIH 、BALB c 和 KM 小鼠各 40 只 , 购自
第 一 军 医 大 学 实 验 动 物 中 心 (合 格 证 :粤 检 A0010244), 体重 13 ～ 15 g , 经血凝试验 确认鼠群中 无仙台病毒的自然感染 。每种动物均分为感染组和 对照组两组 , 每组 20 只 。 1.2 病毒