干细胞冻存及复苏步骤

干细胞冻存及复苏步骤

细胞冻存（缓存）

1、0.25％trypsin（或＋0.02％EDTA）消化5min左右，镜下见细胞回缩间隙增大，即可

吹打脱落。

1、800r离心5分钟，2次（无EDTA，离心一次即可）

2、配制冻存液：甘油:血清:完全培养基=1:2:7

3、50ml培养瓶的细胞（约5×105），用1ml冻存液重悬细胞，放入冻存管中。

4、冻存步骤：4℃1h——－20℃1h——-－80℃1h——- -196℃液氮冻存。（冻存细胞程

序性降温，4℃放置时间40min以上，3h以内，－20℃对细胞损伤最大，1h左右为

宜。）

细胞复苏（速溶）

冻存管直接投入37℃水浴，平摇直至融化，种于50ml培养瓶中。根据细胞贴壁情况换液（一般24-36h换液）。

计算存活率

取一滴冻存细胞悬液，台盼兰染色，活细胞不上色，死细胞染成兰色，计算细胞存活率。（细胞总数－死细胞数）/细胞总数×100％