呼吸道标本的培养与鉴定

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呼吸道标本培养(51页)精选全文

17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。202 4/10/2 2024/1 0/22024 /10/22 024/10/ 2ຫໍສະໝຸດ 析前一、痰（细菌）培养适应症
针对肺部感染患者：
特别是ICU及住院的社区获得性肺炎（CAP）慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD) 肺脓肿（咳痰非最适标本）等适应症可疑细菌性病原引起的肺部感染患者（见附录A）
下呼吸道感染细菌培养
痰的来源？是否被上呼吸道污染？
草绿色链球菌奈瑟菌属嗜血杆菌属莫拉菌属
细胞内病原引起非典型肺炎： • 肺炎支原体 • 肺炎/ 鹦鹉热衣原体 • 嗜肺军团菌 • 柯克斯体（Q热）
常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌： • 肺炎链球菌 • 流感嗜血杆菌上呼吸道正常菌群 • 金黄色葡萄球 • 卡他莫拉菌
注3：暴露在特殊气溶胶环境：与飞沫有关的结核分枝杆菌、与尘暴和鸟排泄物有关的双相真菌等。
痰涂片对下呼吸道感染病原菌诊断的作用
除引起社区非典型肺炎的病原不能常规培养外，其他常见肺部感染的病原菌均可常规培养方法分离；
但培养方法敏感性低，无法判断分离菌的来源。
涂片革兰染色方法：
宿主细胞、蛋白质和肺部炎症反应的分泌物等来自下呼吸道痰的组分，可反映感染的状况；痰经咳嗽从肺深部进入气道，未受损的粘膜纤毛运动将痰送入口腔，痰标本会被上呼吸道和口腔定植菌污染； √评价痰标本是否合格； √涂片还可发现培养不能生长的细菌。 √涂片方法提高了培养方法的特异性及敏感性。
厌氧菌，金黄色葡萄球菌，需氧G-b
医院获得性肺炎
G-b (肠杆菌属/克雷伯菌属/不动杆菌属/假单胞菌属)，金黄色葡萄球菌，厌氧菌，社区获得性肺炎的典型菌
军团菌，肺炎链球菌

呼吸道标本的处理

标本从扁桃体和后咽部采集标本的咽拭子
选择性培养基（如表1） 5%羊血琼脂含抗生素的Thayer Martin 琼脂（GC+）和无抗生素的<GCO>(仅用于淋病奈瑟菌病例) 巧克力琼脂（仅用于会厌炎和喉气管炎病例）
质量控制培养基使用之前，QC由培养基组负责。
上呼吸道标本处理程序
即使符合标准，也要结合临床和放射检查结果判断。慢阻肺、或支气管插管病人即使没有肺实质感染的症状，也有持续性脓痰且可连续分离出占
第七部分临床细菌室报告制度的规范
细菌实验室应对不同的细菌检验报告时间和内容应有相应的规定，并告诉临床各科，依此
可防止不明原因的报告延迟
应分两种报告形式：
1.
危重感染报告：
2.
常规报告：
涂片报告
1、革兰染色：危重报告30分钟报告。报告内容应包括染色反应、是细菌或真菌、细菌形态。有无细胞内吞嗜现象，有无菌丝。
4. 有条件的单位可开展真菌药敏试验（应用稀释法报告MIC结果），真菌耐药监测为临床用药提供参考。
第五部分药物敏感试验规范
基层细菌室应开展K-B纸片扩散法药敏试验，应用WHONET软件开展本单位的耐药监测为临床用药提供参考
药敏标准
1.
用CLSI指南推荐的K-B药敏标准进行常规药敏试验判断
构。如革兰染色见到革兰阳性球菌，是葡萄状排列；又如革兰染色见到真菌小分生孢子及菌丝。 2、抗酸染色：抗酸染色报告应显示找到或未找到或可疑抗酸杆菌三种结果，报告中应加号体现标本中抗酸杆菌的存在量。如找到抗酸杆菌++；见到染色不典型抗酸杆菌+，建议再送标本。
趋向性鉴定试验
革兰阳性球菌：触酶试验、凝固酶试验革兰阴性杆菌：氧化酶试验

呼吸道标本细菌学检验

呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。

2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。

3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。

3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。

3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。

3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。

3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。

3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。

首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。

3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。

3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。

3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。

4.检验步骤4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种环分区划线接种。

4.2 涂片在接种的同时进行涂片。

用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。

4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。

4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。

先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。

标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。

表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。

呼吸道感染实验室诊断流程

呼吸道感染实验室诊断流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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呼吸道标本的采集与送检要求

呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择：常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。

对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集，不推荐用于病原体的检测。

2.采集时间：最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集，对于特定病原体如流感病毒等，应在症状出现48小时内采集。

3.采集方法：采用无菌的采集器具，如棉签、拭子等。

采集咽拭子时，应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置，不应担心引起患者咳嗽反射。

鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内，盘旋擦拭鼻腔黏膜。

4.采集指导：采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。

采集过程中需要保持呼吸道的湿润，确保采集到的标本质量。

5.标本保存与运输：采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中，封口完好。

若运输时间不长，可将标本放入4℃冰箱保存，不得冷冻。

如果运输时间较长，应采用冷冻方式运输（-20℃）。

运输过程中应尽量避免震动或损坏。

6.标本的处理：采集得到标本后，应尽快送往实验室进行处理。

痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。

对于支气管肺泡灌洗液等标本，需要在接收实验室前制备样本。

7.实验室检测：送往实验室后，应当及时进行病原体的检测。

常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测（如PCR）、真菌培养等。

根据病情需要，还可以进行药敏试验、抗体检测等。

8.结果解读与报告：实验室所得结果需要专业人员进行解读，并及时生成报告。

报告应如实反映标本的检测结果，并提供相应的临床意义和建议。

在进行呼吸道标本的采集与送检时，需要确保采集者具备必要的知识与技能，并严格按照采集与送检要求进行操作，以保证最终的结果准确可靠，为诊治提供有力的支持。

下呼吸道感染微生物检验的标本留取和运送的要求

下呼吸道感染微生物检验的标本留取和运送的要求发布时间：2021-03-22T02:36:38.082Z 来源：《健康世界》2020年16期作者：李晓英[导读] 下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。

李晓英成都锦江大观医院四川成都 610000下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。

而感染性疾病的诊断金标准为病原学诊断，只有了解药敏结果和病原学结果才能够合理选择抗菌药物，正确用药，以此来避免细菌耐药现象的发生，但是病原学诊断结果正确与否，取决于标本的管理，故临床医护人员应该知晓下呼吸道感染微生物检验标本在留取和运送方面的要求，为接下来的微生物检验和临床诊断奠定可靠的基础。

一、下呼吸道感染微生物检验标本类型下呼吸道感染微生物检验标本主要有两种，其一是纤维支气管镜采集的标本，经过纤维支气管镜获取到的支气管肺泡灌洗液和保护性毛刷更适合做细菌定量培养，当潜在的致病菌菌落数高于阈值时，诊断下呼吸道感染的特异度即可达到82%至91%。

纤维支气管镜获取到支气管灌洗液只用于诊断由严格致病菌引起的肺炎，如结核分支杆菌、军团菌，内源性真菌引起的感染，对其他病原菌的检查效果比较差。

其二就是痰标本，分自然咳痰和诱导痰，自然咳痰适合定性培养，且必须结合痰涂片判断标本的质量，提高感染病原菌诊断的特异性和敏感性。

诱导痰不能通过细菌的浓度判断是否有意义，只适用于检测结合分支杆菌以及卡式肺孢子菌，对其他病原菌的检查效果比较差。

相对来讲，纤维支气管镜的诊断价值远高于痰标本。

临床痰培养及下呼吸道标本采集指征、采集方法、注意事项和标本运送指南

临床痰培养及下呼吸道标本采集指征、采集方法、注意事项和标本运送指南采集指征有下列体征采集体征：①咳嗽、咳痰，痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨阳痰。

②咯血包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。

③呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。

④发热伴白细a胞增高尤其是中性粒细胞或CRP、PCT明显增高。

⑤胸部影像学检查提示有感染可能。

采集方法1、自然咳痰法。

以晨痰为佳，咳痰前先用冷开水、纯净水反复漱口三次，然后用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰杯中，1h 内送检，尽可能在用抗菌药物之前采集标本。

标本量应＞1ml。

痰量少或无痰者可采用雾化吸入加温至45℃的10%Nacl水溶液，对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。

2、对昏迷、重症、难治或伴免疫抑制或疑是厌氧菌引起的可采用纤维支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、支气管肺泡灌洗法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法采集标本，注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群污染。

3、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。

幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。

注意事项痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。

室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。

标本运送不能及时送检的标本，室温保持＜2h,4℃冰箱保存＜12h。

一般每天只需做一次。

痰及下呼吸道标本失效无意义：1、咽拭子、咳痰、吸出分泌物做厌氧菌培养无意义。

2、申请填写完整无误，标本标识必须唯一。

3、标本容器必须符合规定。

4、痰标本呈水样或唾液样，不能有明显食物残渣、灰尘纸屑。

呼吸道标本的细菌培养

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国内概况：
• 国内最早儿童肺炎链球菌脑膜炎个案报告
在1942年。60年代中期以前研究资料显示 SP肺炎、脑膜炎在冬春季发病较多，是儿科住院病人中常见病例多发生在婴幼儿。 SP性脑膜炎占化脑的11.1-22.1％，仅次于流脑。SP也是小儿肺炎的重要病原菌之一， SP所致大叶性肺炎，5岁以下儿童中可占70 ％。
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（三）痰标本细菌培养存在的问题。
• 痰标本的培养时间：
呼吸道(痰)标本培养应该为24~72小时。24小时培养后细菌生长稀少或未生长的平板应继续培养到72小时后再作报告，防止一些生长缓慢的细菌会遗漏，如卡他莫拉菌、奴卡菌、嗜血杆菌等。
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（四）呼吸道（痰）标本的接种处理
儿童呼吸道常见细菌培养鉴定技术
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1
病原菌确定原则
• 自从发现细菌以来，已经确定上百种疾病的病原菌，对这
些常见的传染病，通常只要检出已经确定的病原菌，就可以认定这种疾病的原因。
• 新出现的传染病，需要用确定病原菌的古老标准来确定。
• 对病人组织、器官中分离到的一种微生物，不足以说明就
是疾病的原因。对于细菌性疾病，需要满足郭霍原则（Koch）。
齐。
• 不典型的SP菌落有水滴样，菌落较大，边缘不整
齐；还有细小、似草绿色链球菌但较湿润的菌落也需注意。
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细菌染色形态
• 革兰氏染色阳性，呈矛头状，成双或链状排列，
有荚膜；在痰标本中大多数成双排列。
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鉴定要点：
• Optochin敏感，胆汁溶菌和荚膜肿
胀试验阳性，菊糖分解试验阳性，小鼠毒力试验阳性。

呼吸道标本采集

试剂要求：应使用无菌、无热原、无杂质、无刺激性的试剂，确保采集到的呼吸道标本质量可靠。
采集容器：应选择密封性好、防漏、不易变形、易于灭菌的采集容器，以便于保存和运输呼吸道标本。
采集工具：应使用一次性或经过严格消毒的采集工具，避免交叉感染和污染。
采集环境及安全要求
采集环境：选择清洁、安静、通风良好的环境，避免交叉
相关法律法规及规定
涉及的法律法规：涉及《医疗废物管理条例》、《传染病防治法》等相关法律法规
采集人员的资质要求：必须具备相应的医学知识和技能，并经过相关培训和考核
采集过程中的伦理要求：尊重患者的知情权和自主权，保护患者隐私，确保患者安全
涉及的法律责任：违反相关法律法规及规定可能面临行政处罚或刑事责任
咽拭子标本采集
采集方法：使用医用棉签擦
拭咽部
采集部位：咽后壁、扁桃体
隐窝等处
采集目的：检测呼吸道病毒、细菌等病原体
注意事项：采集前应告知患者注意事项，采集时应避免损伤咽部粘膜
支气管肺泡灌洗液标本采集
采集方法：通过纤维支气管镜，将灌洗液注入肺泡内，然后回收采集目的：用于诊断肺部感染、肺泡蛋白沉积症等疾病优点：可以直接观察到肺泡内的病变情况，提高诊断的准确性注意事项：采集前需要评估患者的病情和肺功能状态，避免出现不良反应
呼吸道标本采集
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目录
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呼吸道标本采集的种类呼吸道标本采集的质量控制
呼吸道标本采集的步骤
呼吸道标本采集的临床意义
呼吸道标本采集的伦理和法律问题
01
添加章节标题
02
呼吸道标本采集的步骤

儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议(病毒篇)

指南·标准·共识
DOI：10.19538/j.ek2018090601
儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议（病毒篇）
中华医学会儿科学分会呼吸学组呼吸道感染协作组《中国实用儿科杂志》编辑委员会
执笔：张海邻，陈小芳参与讨论和审阅的专家（按姓氏笔画排序）：王文建（深圳市儿童医院），王颖硕（浙江大学医学院附属儿童医院），申阿东（首都医科大学附属北京儿童医院、北京市儿科研究所），田曼（南京医科大学附属儿童医院），刘恩梅（重庆医科大学附属儿童医院），李向阳（温州医科大学附属第二医院育英儿童医院），李昌崇（温州医科大学附属第二医院育英儿童医院），杨永弘（首都医科大学附属北京儿童医院、北京市儿科研究所），辛德莉（首都医科大学附属北京友谊医院），张海邻（温州医科大学附属第二医院育英儿童医院），陆小霞（华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院），陆敏（上海交通大学附属儿童医院），陈小芳（温州医科大学附属第二医院育英儿童医院），陈强（江西省儿童医院），陈慧中（首都儿科研究所附属儿童医院），林立（温州医科大学附属第二医院育英儿童医院），罗征秀（重庆医科大学附属儿童医院），季伟（苏州大学附属儿童医院），郑跃杰（深圳市儿童医院），钟礼立（湖南省人民医院），姚开虎（首都医科大学附属北京儿童医院、北京市儿科研究所），曹玲（首都儿科研究所附属儿童医院），董琳（温州医科大学附属第二医院育英儿童医院），谢正德（首都医科大学附属北京儿童医院、北京市儿科研究所）中图分类号：Ｒ72 文献标志码：C
3 实验室检测方法
3.1 呼吸道标本的检测方法 3.1.1 病毒分离培养经典病毒分离培养方法有动物培养、鸡胚培养和组织细胞培养。组织细胞培养因操作相对简单且成本较低而被广泛采用。应在生物安全二级（bio-safety level-2，BSL-2）条件下进行，当临床样本可能来自疑似高致病性病毒感染（如禽流感病毒）患儿时，病毒分离培养操作应在 BSL-3 或生物安全条件更高的实验室中进行。

五呼吸系统标本微生物检验

支气管肺泡灌洗液
应尽快送检，室温下不超过2小时；如不能及时送检，应4℃保存，不超过24小时。
呼吸系统感染常见微生物
01
02
03
细菌
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌
等。
病毒
呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等。
真菌
白色念珠菌、曲霉菌等。
04
其他微生物
支原体、衣原体等。
定期演练和培训
定期组织实验人员进行应急演练和培训，提高应对生物安全事件的能力和水平。
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肺炎链球菌检验
通过血平板培养、Optochin敏感试验和胆汁溶菌试验等方法进行鉴定。
流感嗜血杆菌检验
采用巧克力平板进行分离培养，并通过卫星现象、X因子和V因子依赖试验等方法进行鉴定。
05 微生物检验结果解读与临床意义
检验结果解读原则及注意事项
遵循微生物学原则
在解读检验结果时，需遵循微生物学的基本原则，包括微生物的种类、数量、生长特性等。
高度的敏感性和特异性。
真菌学检验
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直接镜检
采集患者的呼吸道分泌物或组织样本，在显微镜下直接观察真菌的形态和结构特征，以初步判断真菌的种类。
培养法
将样本接种于适当的培养基上，进行真菌培养，观察真菌的生长情况和菌落特征，以鉴定真菌种类。
血清学检测
利用特异性抗体与真菌抗原的结合反应，进行血清学检测，如凝集试验、沉淀试验等，以辅助诊断真菌感染。
病毒
如流感病毒、呼吸道合胞病毒等，病毒感染一般采取对症治疗和支持治疗。
真菌
如白色念珠菌、曲霉菌等，真菌感染多见于免疫力低下患者，治疗需考虑抗真菌药物。

呼吸道标本采集

（4）标本运送：
咽拭子标本的运送宜采用带保湿功能的运送培养基，避免由于送检时间过长而干燥。如未采用运送培养基，应于 0.5h 内送检。即使采用运送培养基，室温保存也不应超过24h。
02 痰液标本
痰培养仅用于下呼吸道感染，主要是肺部感染的诊断。
（1）临床采样指征：
咳嗽、脓性痰，伴有发热，影像学检查出现新的或扩大的浸润影；气道开放患者，出现脓痰或血性痰；考虑下呼吸道感染患者采集痰液标本，同时送血培养标本。
（3）标签及申请单：
申请单除应包括患者基本信息外，患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、检测目的，标识是普通培养、抗酸杆菌还是真菌培养。一定要注明标本种类为肺泡灌洗液，以及采集时间。无菌管上的标签要求有唯一标识号或条码，注明标本采集时间、检测目的。
（4）标本运输：
标本采集后需尽快送到实验室，不要冷藏标本。
质量不合格标本：显微镜下细胞学检查发现标本受口咽部菌群污染。合格痰标本鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野，白细胞＞25个/低倍视野，或白细胞与鳞状上皮细胞的数量比值＞2.5。
无标签或标签贴错。
标识信息不明，未提供采集时间及送检目的等。
超过2h送达实验室，且未正确保存的标本。
运送容器有渗漏。
同一天同一项目重复送检的痰标本。
（2）采集要求：
痰标本的采集时机十分关键，应严格遵循以下原则采集标本：
争取首剂抗菌药物治疗使用前及更换抗菌药物前采集。标本采集后保证2h内送达实验室并得到接种。只要有可能得到合格的痰标本，应马上采集、送检。宜在医护人员直视下留取合格痰标本。送检痰标本后三天内不主张再次送检。
（3）标本采集：

呼吸道感染的实验室诊断

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检验方法
涂片
细菌涂片真菌涂片抗酸染色奴卡菌涂片六胺银染色
培养
细菌培养真菌培养厌氧培养 TB培养奴卡菌培养
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呼吸道标本细菌培养
血平板
• 肺炎链球菌 • β溶血链球菌 • 金黄色葡萄球
菌 • 卡他莫拉菌 • 奴卡菌
万古巧克力
• 流感嗜血杆菌 • 副流感嗜血杆
肺部特殊病原体感染：放线菌，组织胞浆菌，结核分枝杆菌，奴卡菌，隐球菌，马红球菌，立克次体
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痰涂片的目的
确定标本是否合格：帮助分辨是感染、污染或正常菌群
为临床提供第一手资料，初步判定是否有病原菌存在：细菌、真菌、分枝杆菌等
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痰涂片的影响因素
标本是否合格

镜下检查
痰涂片制备
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SECTION
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根据痰涂片评价标本质量
注释：分类中1-3类不做培养，要求重新留取标本；4、5类为合格标本； 6类为气管穿刺时，如未见白细胞，而鳞状上皮细胞>10/低倍视野应重新留取标本。

呼吸道标本的细菌培养11.10

（三）痰标本细菌培养存在的问题。

痰标本的培养时间：
呼吸道(痰)标本培养应该为24~72小时。 24小时培养后细菌生长稀少或未生长的平板应继续培养到72小时后再作报告，防止一些生长缓慢的细菌会遗漏，如卡他莫拉菌、奴卡菌、嗜血杆菌等。
（四）呼吸道（痰）标本的接种处理

涂片革兰氏染色，观察痰标本是否合格。血琼脂：哥伦比亚琼脂或胰大豆胨琼脂、 5％绵羊血、或加适量抑制剂如庆大霉素有利于肺炎链球菌生长。巧克力琼脂：哥伦比亚琼脂+5％马血或兔血+3mg/100mL去甲万古霉素或杆菌肽，有利于嗜血杆菌的分离培养。
本地耐药情况和趋势：
结论：广州地区临床治疗儿童SP感染应首选青霉素加霉抑制剂的复合药物或三代头孢菌素。
SP血清学分型：

肺炎链球菌的血清分型可以为肺炎链球菌疫苗研究提供可靠依据，也是一种流行病学调查手段。肺炎链球菌的抗原成分较多，有菌体核蛋白、菌体种属特异性抗原、荚膜多糖抗原等。
培养基

血琼脂平板：胰大豆蛋白胨琼脂或哥伦比亚琼脂加5%绵羊血；加庆大霉素的血琼脂平板：在普通血琼脂中加入抑制剂庆大霉素注射液，混匀倾倒平板，琼脂中庆大霉素最后浓度相当于1.25 mg/250mL。
标本接种及培养条件

用鼻咽拭子采取患儿鼻咽分泌物、痰、咽拭子、肺泡灌洗液等呼吸道标本接种庆大霉素血平板或普通血平板，置于35℃，5％CO2温箱培养 18-24小时。初次分离培养在5~10%的CO2条件下生长良好。血液、脑脊液标本用血培养基增菌后转种庆大霉素血平板或普通血平板置于35℃5％CO2温箱培养18-24小时。
国内概况：

呼吸道标本采集

呼吸道标本采集
【一】评估和观察要点
1.评估患者年龄、病情、治疗、排痰情况及配合程度。

2.评估患者口腔黏膜有无异常。

3.观察痰液的颜色、性质、量、分层、气味、黏稠度和有无肉眼可见的异常物质等。

【二】操作要点
1.自行咳痰采集法晨痰为佳，用冷开水漱口，深吸气后用力咳出呼吸道深部痰液，标本量不少于1ml，痰量少或无痰患者可采用10%盐水加至45度左右雾化吸入后，将痰液咳出。

2.难于自然咳痰、不合作或人工辅助呼吸患者的痰液采集法患者取适当卧位，先叩击患者背部，然后将集痰器与吸引器连接，抽吸痰液2~5ml于集痰器内。

3.气管镜采集法协助医生在气管镜引导下，直接采集标本。

4.咽拭子采集法患者用清水漱口，取出无菌拭子蘸取少量无菌生理盐水；用压舌板轻压舌部，迅速擦拭患者口腔两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物，避免咽拭子触及其他部位；迅速把咽拭子插入无菌试管内塞紧。

5.24h痰标本采集法在广口集痰瓶内加少量清水。

患者起床后进食前漱口后第一口痰开始留取，至次日晨进食前漱口后最后一口痰结束，全部痰液留入集瓶内，记录痰标本总量、外观和性状。

【三】指导要点
1.告知患者正确留取标本对检验结果的重要性
2.告知患者痰标本留取的方法及注意事项
3.告知患者避免将唾液、漱口水鼻涕等混入痰中。

【四】注意事项
1.除24h痰标本外，痰液收集时间宜选择在清晨。

2.查痰培养及肿瘤细胞的标本应立即送检。

3.避免在进食后2h内留取咽拭子标本，以防呕吐，棉签不要触及其他部位以免影响检验
结果。

市第一人民医院细菌室下呼吸道标本的细菌学检验

市第一人民医院细菌室下呼吸道标本的细菌学检验1. 下呼吸道标本培养常见病原菌
金黄色葡萄球菌
脑膜炎奈瑟氏菌
化脓性链球菌
流感嗜血杆菌
肺炎链球菌
肠杆菌科细菌
结核分支杆菌
非发酵菌
白喉棒状杆菌
嗜肺军团菌
假丝酵母菌
2.标本收集：
2.1下呼吸道标本采集的基本要求是采集深部的痰液，具体方法有以下几种：1.自然咯痰法 2.气管镜采集法
3.小儿取痰法
4.气管穿刺法
5.胃内采痰法。

2.2标本采集的注意事项
2.2.1标本采集以晨痰为佳，咳前应充分嗽口，减少口腔正常菌群的污染。

2.2.2标本采集后应及时送检，以防某些细菌在外环境中死亡。

做结核分枝杆菌或真菌培养的痰液如不能及时送检，应放入4℃冰箱，以免杂菌生长。

3.检验步骤：
3.1一般细菌涂片检查挑取痰液的脓性或带血部分放在两张玻片中，置室温自然干燥，经火焰固定后，做革兰氏染色，另一张根据检验需要做抗酸染色或其他染色。

如标本中每个低倍视野内鳞状上皮细胞多于25
个，脓细胞又少于10个，并找不到病变部分，表示标本来自唾液，标本不合格，不必进一步检查，要求重新送检。

3.2分离培养一般细菌培养分别接种于血平板、麦康凯、巧克力平板，巧克力应置于CO2环境中35℃培养18～24小时。

4.报告结果：检出细菌，应报告菌名和药敏结果。

下呼吸道感染细菌学检验操作规范

下呼吸道感染细菌学检验操作规范下呼吸道感染细菌学检验操作规范1. 检验前准备检验前要检查所需器材是否齐备，且有使用期限、试剂是否过期。

根据标本性质准备适当的试验室和器材，如培养基、消毒剂、培养皿、显微镜、荧光显微镜等。

2. 标本的采集下呼吸道感染标本需由医生经过特殊训练后采集。

标本采集应在患者用药前进行，避免影响细菌培养。

应采集晨起的第一口咳痰标本，或在空腹情况下采集医生所要求的标本。

标本采集应该避免因细菌其他来源被污染。

3. 标本的存储和运输标本应在采集后尽快送至检验室。

标本在送到检验室的途中应密封，并且避免被震动或过热过冷。

气管切开标本应立即进行培养，对于咳痰标本应在收到后的半小时内进行处理。

4. 标本的处理将留有量行的痰液用橡皮塞挤入干净的西门子杯内，有时也可采用锡制雾化器或喷雾器快速将痰液或分泌物喷在玻片上。

用火焰或消毒器对冷凝吸入性肺炎标本进行消毒，尽可能在细菌沉淀区进行采样。

迅速挤压蓝色鼻咽拭子并置入培养皿内。

标本处理时要注意避免散播细菌。

5. 涂片染色将涂片涂上标本，然后进行染色。

无需特殊之处，可以参照常规的涂片染色法。

6. 培养用普通、选择性和不同的富集培养基进行培养。

常用的培养条件和相关的检测菌株如下：a. 长链球菌–用5%的羊血琼脂培养，将其置于CO2孵育箱中。

b. 肺炎球菌，草绿色链球菌，葡萄球菌–用血精灵琼脂培养。

c. 肺炎链球菌–用富集培养基，如VP培养基、耐苯唑芥庚烷琼脂（PBG琼脂）等。

为了纯化不同类型的肺炎链球菌，还可以选择使用灭菌的吞噬细胞进行富集，例如照片长杆菌（F. tularensis.）。

d. 泡沫状微生物和厌氧菌–分别用PPLO或厌氧和普通琼脂培养。

7. 鉴定和鉴别根据培养结果和临床表现，可对菌株进行初步鉴定和分类。

在进行鉴定过程中，应遵循规范化的步骤，选择正确的API、鉴定手段等，并在鉴定手册中查找相关鉴定概念、流程、依据以及最近的病原学方面的知识，避免误判或漏判。

下呼吸道细菌感染标本评估

量和可追溯性。
03
标本处理
处理方法
采集
通过痰液、支气管肺泡灌洗液等途径采集下呼吸道标本。
保存
将采集的标本放入无菌容器中，并立即送往实验室进行检测。
预处理
在实验室中对标本进行预处理，包括离心、去沉淀物、稀释等步骤。
处理注意事项
01
02
03
避免污染
采集和保存标本时应严格遵守无菌操作，避免外界细菌污染。
对标本进行预处理，包括离心、去沉淀物、稀释等步骤。
对预处理后的标本进行细菌培养、药敏试验等检测分析，以确定病原菌种类和药物敏感性。
04
评估指标
评估标准
01
准确性
评估结果应与实际感染情况相符，误差小。
敏感性
评估结果应能及时反映感染情况，避免漏诊。
03
02
可靠性
评估结果应稳定可靠，不受其他因素干扰。
下呼吸道细菌感染标本评估
目录
• 引言 • 标本采集 • 标本处理 • 评估指标 • 评估结果分析
01
引言
目的和背景
目的
评估下呼吸道细菌感染标本，为临床诊断和治疗提供依据。
背景
下呼吸道细菌感染是常见的呼吸系统疾病，其诊断依赖于对标本的准确评估。随着医疗技术的进步，对下呼吸道细菌感染标本的评估要求也越来越高。
特异性
评估结果应能准确区分感染与非感染情况，避免误诊。
04
评估方法
1 2
实验室检测
通过细菌培养、涂片镜检、免疫学检测等方法进行评估。
临床诊断
结合患者症状、体征、影像学检查等进行评估。
3
流行病学调查
了解患者感染来源、传播途径等信息，为评估提供参考。