各种培养基的制作方法

配方一萨氏(Sabouraud's)培养基

蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。

1、营养肉汤培养基

牛肉膏 0.3克

蛋白胨 1.0克

NaCl 0.5克

水 100毫升

pH 7、0～7、2

在烧杯中加水,称取牛肉膏、蛋白胨与NaCl,加热溶化后,调节pH值至7、0～7、2。分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。

2、营养琼脂培养基

在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。

3、肉汁蛋白胨液体培养基

牛肉 500克

蛋白胨 10克

NaCl 5克

pH 7、1～7、2

取新鲜牛肉500克,去净脂肪、筋腱后,绞碎或剁碎,加水1000毫升浸泡,15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤,补足失水。向肉汁中加入蛋白胨与食盐。将肉汁加热,放入苏打(碳酸钠)至红色,调整pH值。分装,高压蒸汽灭菌。

将上述已灭菌得培养基用棉花滤去凝集得蛋白质,制成液体培养基,如需制成固体培养基,可在每100毫升液体中加入2克琼脂,加热溶化后,分装,再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。

4、高氏一号培养基(淀粉琼脂培养基)

可溶性淀粉 2克

K2HPO4 0.05克

MgSO4·7H2O 0.05克

KNO3 0.1克

NaCl 0.05克

FeSO4 0.001克

琼脂 2克

水 100毫升

pH 7、2～7、4

在烧杯中加水95毫升,加热至沸腾,取可溶性溶粉2克,用5毫升水调成糊状,倒入沸水中与匀。再称取其它药品,陆续加入烧杯内(待一种药品溶解后,再加入第二种药品)。待全部药品溶解后,停止加热,补足失水,调pH值至7、2～7、4。分装后,高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。

5、马铃薯蔗糖培养基

马铃薯 200克

蔗糖 10克

琼脂 20克

水 1000毫升

自然pH

称取200克马铃薯片,加水1000毫升,煮沸半小时,用纱布过滤,补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂,加热使琼脂熔化。分装后,高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。

6、麦芽汁培养基

将从啤酒厂买来加有啤酒花得麦芽汁,装入锥形瓶中,加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。

7、察氏培养基

NaNO3 2克

K2HPO4 1克

KCl 0.5克

MgSO4 0.5克

FeSO4 0.01克

蔗糖 30克

琼脂 15～20克

水 1000毫升

自然pH

分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。

8、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)培养基

黄豆芽 100克

葡萄糖 50克

琼脂 15克

水 1000毫升

称取新鲜黄豆芽100克,放入烧杯中,加1000毫升水,煮沸30分钟,用纱布过滤,补足失水。再加葡萄糖(或蔗糖)50克,琼脂15克,加热至融化,补足失水。分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。

9、伊红美蓝培养基(E、M、B培养基)

乳糖 10克

蛋白胨 5克

NaCl 5克

K2HPO4 2克

2%伊红水溶液 20毫升

0、35%美蓝水溶液 20毫升

琼脂 20克

水 1000毫升

pH 7、2

1、配制溶液

向容器内加入所需水量得一部分,按照培养基得配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发得水分,应在全部原料溶解后加水补足。

配制固体培养基时,先将上述已配好得液体培养基煮沸,再将称好得琼脂加入,继续加热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。

2、调节pH值

用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基得pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求得pH值为止。

3、过滤

用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好得培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。

4、分装

已过滤得培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。

分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。

装入试管得培养基量,视试管与锥形瓶得大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米得试管,约装3～4毫升(1/4～1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米得试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入得培养基,一般以其容积得一半为宜。

5、加棉塞

分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞得主要目得就是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥得棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成得圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形得棉塞。棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞得2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞得试管与锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。

6、制作斜面培养基与平板培养基

培养基灭菌后,如制作斜面培养基与平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。

(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0、5～1米左右得木条,厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。

(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌得盛有培养基得锥形瓶与培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基末长杂菌,即可用来培养微生物。

改良得Fries氏液体培养液:蔗糖30g、酒石酸铵5g、NH4NO3 0、5g、KH2PO4 1g、MgSO4·7H2O 0、5g、CaCl2 0、1g、酵母浸汁0、5g、蒸馏水1000mL