2020年(生物科技行业)医学微生物学与免疫学实验

（生物科技行业）医学微生物学与免疫学实验

微生物和寄生虫学实验指导目录

实验壹微生物的形态学检测（2学时）

实验二理化因素对微生物的影响（2学时）

实验三肠道致病性细菌的分离和鉴定（4学时）

实验四抗酸染色（2学时）

实验五寄生虫学实验（2学时）

微生物和寄生虫学实验

序言

本实验在于使学生加深和巩固课堂内容，且在掌握系统理论知识的基础上，学习微生物和寄生虫学的基本操作技能，通过实验加强无菌概念，培养独立工作和分析问题的能力，为今后有关的疾病诊断和中医中药的科学研究工作打下良好的基础。

本实验指导共包括五个试验项目，共计教学12学时，按教学计划及大纲要求供我院中医学专业、针灸推拿专业、骨伤学专业、护理学专业、中西医结合等专业学生使用。

实验室规则

本门学科实验的对象大多是病原微生物，如果不慎发生意外，不

仅自身可能遭致感染，且有可能将病原微生物传给他人。因此，

进入实验室必须遵守以下规则：

1.非实验必需物品，不准带进实验室。

2．进入实验室必须穿工作服，按规定就座，保持肃静。

3．上实验课要严格遵守课堂纪律，不得高声谈笑及乱动物品，

禁止吸烟和进食。

4．实验时听从老师指导，牢固树立无菌观点，严格遵守无菌操

作规程，若发生菌液污染，损坏物品等事故，应立即报告老师及

时处理。

5．实验中用过的染菌器材如吸管，试管和用过的玻片等应及时

放人含有消毒液的容器内，不得放在桌上，也不可在水槽里冲洗。

6．爱护公物，节约使用实验材料；注意安全使用水、电、煤气。

7．实验完毕，按要求整理器材物品，打扫卫生。脱下工作服，

消毒洗手后，离开实验室。

8．作业应在规定时间内完成，实验报告要求简洁扼要，字迹清楚，画图力求正确、客观。

实验壹微生物的形态学检测

壹、实验目的

1、掌握细菌的基本形态（球菌、杆菌、弧菌）。

2、掌握革兰氏染色的操作方法。

3、熟悉生物显微镜的使用，特别是油镜的使用和保护；

4、熟悉革兰氏染色的原理。

二、实验内容

（壹）显微镜油镜的使用及保护

1、原理：在壹般微生物学实验中最常使用的是普通光学显微镜的油镜。油镜镜头透镜很小，进入镜筒的光线很少，使用时为了增加亮度，必须在标本玻片和油镜头之间，滴加香柏油，因为香柏油的折光率和载玻片相似，这样就可使通过聚光器进入载玻片的光线不会因折射而散失，几乎全部进入镜筒内，使视野明亮，物象清楚。

2、材料和试剂生物显微镜及香柏油、二甲苯、标本片等。

3、操作步骤

（1）坐姿：使用显微镜油镜时，必须坐端，镜体保持垂直位，不要使载物台倾斜，以免香柏油或悬液标本流出。

（2）识别油镜头：油镜头上壹般刻有“X100”，“Oil”，“HI”等标记。

（3）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强，要抬高聚光器，放大光圈，取得最大亮度。（4）滴加香柏油：将标本放在载物台上固定好。滴加香柏油1滴，换油镜检查。

（5）找焦点：将油镜移至中央对准标本，从侧面注视镜头，且缓慢转动粗螺旋，使物镜筒下降，直至镜头浸于香柏油中且几乎接触到标本为止。然后将视线移至目镜，壹面观察壹面向上慢慢转动粗螺旋，待见到模糊的物象时，即改用细螺旋，调节焦点以寻求清晰的物象。

（6）清洁保养：镜检完毕，将镜筒升起，取出标本片，用镜纸将镜头上的油擦净。若油已干，可用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去油迹，再用擦镜纸揩去二甲苯。然后，将聚光镜降下，各物镜呈“八”字形，套好保护套。

（二）细菌的革兰氏染色法

1、原理G+菌细胞壁结构致密（肽聚糖层厚），且脂质含量少，乙醇不易渗入脱色。G-菌细胞壁结构疏松（肽聚糖层薄），且脂质含量多，乙醇溶解脂质后易渗入细胞而脱色。G+菌菌体含有大量核糖核酸镁盐，可和碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色；G-菌菌体内核糖核酸镁盐含量小，易被乙醇脱色。G+菌等电点比G-菌低，在同壹pH值条件下阳性菌比阴性菌所带负电荷要多，故和带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，不易被乙醇脱色。

2、材料金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌培养液、接种环、酒精灯、革兰染色液（结晶紫、卢戈碘液、95％乙醇、复红或沙黄染液）。

3、操作步骤

（1）标本片制备

①取干净载玻片l块，用玻璃铅笔划壹个区域。

②接种环按无菌操作法挑取少许菌液于区域中涂成壹薄层，接种环在火焰上烧灼灭菌。

③在室温下自然干燥。

④将玻片通过火焰3次固定标本，自然冷却。

（2）染色

①初染：在固定好且已冷却的涂片标本上滴加结晶紫染液，要盖满菌膜。约1分钟后用细水流从玻片的壹端把游离的染液洗去。

②媒染：滴加卢戈碘液数滴，作用l分钟后，轻轻水洗。

③脱色：在玻片上加95％乙醇2～3滴，且轻轻转动玻片数秒钟，使玻片倾斜让乙醇流去，如此重复数次，直至流下的乙醇几乎无色或稍呈淡紫色，流水冲洗。

④复染：滴加稀释复红染液数滴，作用1分钟后流水冲洗。

染色完毕，用吸水纸将标本片吸干，玻片上滴加香柏油，油镜观察。

（3）结果判定：染成紫色者为革兰阳性（G＋）菌，染成红色者为革兰阴性（G-）菌。（三）细菌的基本形态（示教）

油镜下观察：球菌（葡萄球菌）革兰染色片、杆菌（大肠杆菌）革兰染色片、弧菌（霍乱弧菌）革兰染色片，注意观察细菌的形态、大小、排列和染色。

三、作业

1、绘出示教镜下细菌的基本形态（注意标明菌名、形态、排列、染色性）。

2、革兰氏染色结果

（1）、用红蓝铅绘制出镜下所见俩种细菌的形态（注意大小、形态、排列和染色性）。

（2）、叙述革兰氏染色的意义。

四、思考题

1、试比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁结构的特征？