薄层层析分离方法

4．二维展开
在正方形薄层板上，在两个垂直的方向
进行基于相同或不同机理的展开．将样品点 在薄层板的一个角上，第一方向展开适当距 离后，取出薄层板，并使溶剂完全蒸发，再 以与原点成90º方向展开。第二方向展开可采 用不同溶剂，也可将薄层板进行化学反应后， 再行第二方向展开，通称双向展开.
二维展开常用于复杂较多组分样品的展
2．上行展开 流动相沿薄层固定相向上运动
的展开方式。此时薄层板放置的 角度对流动相移动速率和
斑点形状有一定影响。薄层板水 平角度为75º时，对展开最为有利。 这种展开方式适合于含有粘合剂 的硬板展开。
3．下行展开
在展开槽内薄层板上端放置一个盛
展开剂的溶剂槽，用厚滤纸将溶剂引到 薄层板的上端，使展开剂自上而下流动。 下行法中展开剂受重力和毛细管作用双 重影响，因此展开速度较快。由于这种 展开方式采用的装置比较复杂，目前只 有在葡聚糖凝胶板上展开时或纸色谱中 采用．
直线式展开
直线式展开技术可以分为 近水平展开、上行展开、下行 展开、双向展开和水平展开五 种形式，薄层色谱分寓一般样 品多采用上行展开方法。
1．近水平展开 将适量展开剂倾人长方形玻
璃展开槽中，点样后的薄层板 浸入溶剂0.5cm，薄层上端垫 高使薄层与水平成5～10º角，展 开剂由下而上进行展开，这种 方法常用于不含粘合剂的软板 展开．
component B Less polar!
component A More polar!
origin
Important hint!
Be sure to remove the TLC plate when it appears that the solvent front isn’t moving!
A l
A l
A l
A l
A l
OOOOOO
Acidic: -Al-OH Neutral: -Al-OH + -Al-OBasic: -Al-O-
H 2C OC
H 2C H 2C H 2C H 2C
CH2
NH
OC
CH2 CH2 CH2
NH H 2C
CH2 H 2C
CH2 H 2C
CO
CO
HN
CH2 固定相
• A visualization method can be:
– Ultraviolet light – Iodine vapors to stain spots – Colored reagents to stain spots – Reagents that selectively stain spots while leaving
others unaffected.
Thin-Layer Chromatography: Determination of Rf Values
Rf of component A = dA dS
Rf of component B = dB dS
The Rf value is a decimal fraction, generally only reported to two decimal places
各种特制薄层
混合薄层 酸碱薄层和pH缓冲薄层 络合薄层 : 用AgNO3。等无机试剂的水溶液 代替水调硅胶糊来铺制络合薄层
涂布固定液的薄层
高效薄层:它是由粒度十分均匀，直径最小为5µm，—般为
10µm左右的硅胶吸附剂，加上高度惰性的粘合剂，铺成质地十分致 密、平滑的高效高层预制板。这种预制板性能极稳定，层析展开后 所得斑点仍保持圆形不拖尾，分离清晰，分离效果极好。理论塔板 高度最小可达12µm，一般在20～30µm。展开3~7cm，理论塔板数可 达数千，为一般薄层的十倍。
dS dB
dA
so lven t fro n t com ponent B
com ponent A o rig in
Thin-Layer Chromatography: Qualitative Analysis
A
B unknow n
1、 薄层色谱：薄层色谱法，是 将适宜的固定相涂布于玻璃板上， 成一均匀薄层。等点样、展开后， 与适宜的对照物按同法所得的色 谱图作对比，用以进行药品的鉴 别，杂质检查或含量测定的方法。
Visualization Method
• The previous slide shows colored spots. Most of the time, the spots won’t show unless they are visualized!
• Vizualization is a method that is used to render the TLC spots visible.
3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于 薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，点样直径为2—4mm，点间距离约 为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况 以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤 薄层表面。
3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和， 可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴 二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展 开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正 文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开 室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层 板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂 中），密封室盖，等展开至规定距离（一般 为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各 品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对 色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色 谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。
3 操作方法：
3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份 固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混 合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，
在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布 （厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层 的玻璃板，置水平台上于室温下晾干， 后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的 干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（ 可通过透射光和反射光检视）。
4 注意事项： 4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠 ，光滑平整。
4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并 于室温下晾干后在110℃活化30 分钟，置于有干燥剂的干燥箱或 干燥器中备用。
4.3 点样点一般为圆点，不能太 大。
铺板
铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易
开，通过调节展开剂极性，增加展开距离， 进一步提高分离能力．这种方法多用于定性， 很少用于定量。
5．水平展开
圆形离心式展开
圆形向心式展开
特殊展开技术 :多次展开 、分步 展开 、离心展开 、梯度洗脱展 开 、梯度薄层 、多维技术 、加 压展开 、控温展开 、楔形技术
薄层扫描的方法，除另有规定外，可根 据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明， 结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双 波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果 的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一 定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与 对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比 较并计算定量，以减少误差。各种供试品， 只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才 能获得满意的结果。
• The principle of operation is the same!
Thin Layer Chromatography
The surface of the plate consists of a very thin layer of silica on a plastic or aluminum backing. The silica is very polar. This is the stationary phase. Spot the material at the origin (bottom) of the TLC plate. Place the plate into a glass jar with a small amount of a solvent in the glass jar. This solvent acts as the moving phase. Remove the plate from the bottle when the solvent is close to the top of the plate. Visualize the spots. Non-polar compounds will be less strongly attracted to the plate and will spend more time in the moving phase. This compound will move faster and will appear closer to the top of the plate. Polar compounds will be more strongly attracted to the plate and will spend less time in the moving phase and appear lower on the plate.
薄层层析分离技术
Thin-layer chromatography
• Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography.
• The mobile (moving) phase is a liquid. The stationary phase is usually silica or alumina. This phase is very polar.
接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入 一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏 （CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后 加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液 （0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于 玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄
2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻 璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄 层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器 或定时毛细管，应能使点样位置正确集 中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的 玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子 ，除另有规定外，底部应平整光滑，应 便于观察。
聚酰胺吸附作用原理
O
HO 流动相
Thin-Layer Chromatography: A Two-Component Mixture
solvent front
solvent front
component B
origin mixture
solvent front
component A origin
Increasing Development Time
Reason: the solvent is evaporating as it moves up the plate.
Results: If you don’t remove the plate all of the spots will appear near the top of the plate!!!!! This isn’t a pretty sight and makes it difficult to get good Rf values!
Stationary Phase: Silica (SiO2)
OH
OH
O
OH
OH
OH
Si
Si
O
Βιβλιοθήκη Baidu
Si O O
Si O O
O
O
Si O O
Si O O
Si O O
Si O O
Si O O
O O
Si O O
O
Si
O O
Si
O O
Stationary Phase: Alumina
O O H O H O H O H
2 仪器与材料： 2.1 玻板：除另有规定外，用 5cm×20cm，10cm×20cm或 20cm×20cm的规格，要求光滑
，平整、洗净后的不附水珠，晾 干。
2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶 GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、 硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、 微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求 直径为10—40μm。薄层涂布，一般可分无 粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直