光谱波长

荧光

异硫氰酸荧光素FITC 黄色或橙黄色粉末溶于水或乙醇，分子量389.4，吸收波长490-495nm，发射波长520-530nm，黄绿色荧光

四乙基罗丹明RB200 橘红色粉末，不溶于水，溶于乙醇、丙酮，吸收波长570nm，发射波长595-600 nm，橘红色荧光

四甲基异硫氰酸荧光素TRITC 吸收波长550 nm，发射波长620 nm，橙黄色荧光，荧光效率较低

藻红蛋白R-RE 褐色粉末，不溶于水，溶于乙醇、丙酮，吸收波长565 nm，发射波长578 nm橙色荧光

4-甲基伞酮激发波长360 nm，发射波长450 nm 是β-半乳糖苷酶（β-Gal）作用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU）的产物，β-Gal主要用于均相酶免

镧系元素激发波长300-350 nm，发射波长613±10 nm ，一般利用615±5 nm 滤光片

铕Eu3+ 激发波长340 nm（300-350），发射波长613 nm（613±10）

荧光偏振激发光，蓝光485 nm，发射波长525-550 nm的绿光(用在均相酶免)

对羟基苯丙酸HPA 经HRP作用后，激发波长317 nm，发射波长414 nm

酶免标记

辣根过氧化物酶HRP 由无色糖蛋白（主酶）和亚铁血红素（辅基）组成，辅基是酶的活性基团，吸收峰403 nm，而主酶与酶活性无关，吸收峰275 nm，HRP 纯度用RZ表示，其RZ值要大于3.0。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示制剂真正的纯度，而且RZ值高不代表酶活性也高（酶也可能失活），RZ与酶活性无关

HRP底物

邻苯二胺OPD OPD在HRP作用下显橙黄色，加强酸终止反应后呈棕黄色，吸收峰492nm，性质不稳定，需临时配置。避光显色，致癌

四甲基联苯胺TMB TMB优于OPD，TMB经HRP作用显蓝色，加酸终止反应后显黄色，吸收峰450nm，稳定，无致癌，无须避光，目前应用最广，水溶性差其他：5-氨基水杨酸（5-ASA），2,2-联氮-二胺盐(ABTS)

二氨基联苯胺DAB 呈棕色，主要用在斑点酶免吸附试验（敏感性比ELISA高6-8倍，试剂节约10倍）和免疫组化技术

免疫印迹法中3,3-二氨基联苯胺（棕色）4-氯-1-萘酚（蓝紫色）

碱性磷酸酶AP底物

对-硝基苯磷酸酯p-NPP p-NPP经AP作用后为显黄色的对硝基酚，吸收峰405nm

β-Gal的底物为4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU）

化学发光

一：直接化学发光剂,不需酶催化，直接参与发光反应

吖啶酯在碱性条件下被H2O2 氧化，发出470nm光，发光体为N-甲基吖啶酮，吖啶酯可以直接标记半抗原和蛋白质,为瞬间发光，发光时间短

三联吡啶钌电化学发光剂，和电子供体三丙胺（TPA），在阳极发生氧化反应，可重复发光，时间长，稳定

二：酶促反应发光剂（发光稳定，时间长）

HRP 底物为鲁米诺，异鲁米诺，及其衍生物

AP 底物为AMPPD

固相酶免

金溶胶535nm

免疫组化技术

HRP底物

二氨基联苯胺DAB 呈棕色

AEC 氨基乙基卡巴唑呈橘红色

4-氯-1-萘酚灰蓝色

胶体金颗粒在5-20nm 吸收波长520nm时呈葡萄酒红色

颗粒在20-40nm 吸收波长530nm时呈深红色

颗粒在60nm 吸收波长600nm时呈蓝紫色

主要用于细胞表面成分标记（扫描电镜），利用不同大小的胶体金可以进行双重或多重标记

胶体铁普鲁士蓝反应，电镜定位研究

透射比浊340nm