脑脊液检查

标本
直接涂片 染色镜检 分离培养
增菌培养 厌养培养
需氧培养 二氧化碳培养 观察菌落形态 单个菌落 血清学鉴定
Fra Baidu bibliotek
生化鉴定
确定致病菌发出报告
药敏试验
病毒(virus)是只能在活细胞内以复制方式 进行增殖的非细胞性微生物，不能在无生命 的人工培养基上培养。

检查项目：镜检（光镜、电镜）、病毒分离鉴定、
病毒抗原抗体及核酸检测

常用药敏试验：K-B法（琼脂扩散法） WHO推荐的方法

稀释法：肉汤稀释法和琼脂稀释法。
抗生素浓度高→低

E-test：结合稀释法和扩散法原理和特点而设 计的一种操作简便，精确测定MIC的方法。
抗生素灭活酶检测 1.β-内酰胺酶检测 β-内酰胺酶是一种蛋白酶，可裂解青霉素和 头孢类的β-内酰胺键使之失活。 青霉素酶→头孢菌素酶→ESBLs
品等


常见病原体：多为条件致病菌，G-为主 易感宿主：住院患者免疫力低或导尿，手术等
标本采样和送检原则


下呼吸道感染：最常见，G-菌多见 尿路感染:见于有尿路器械操作史的患者 手术切口感染 胃肠道感染、血液感染、皮肤和软组织感染、静脉插管 或针刺部位感染、骨髓感染、心血管系统感染、子宫内 膜炎
体液
无菌培养瓶或无菌 脑脊液、胸水、腹水、 容器 心包积液
伤口脓液
查找病原体
创伤组织脓肿标 无菌棉拭或无菌干 本 燥注射器
创伤、脓肿

显微镜直接涂片检测：
不染色标本： ①采用悬滴法或压滴法观察病原 菌生长、运动方式，螺旋体形 态和运动； ②生理盐水直接涂片，有助于检 查寄生虫虫卵的检查；

显微镜直接涂片检测：
标本
鸡胚 6~8天 组织培养
(试管或小瓶培养)
新生小鼠 观察
1~14天 检查
细胞病变 红细胞吸附 空斑
病毒包涵体
EM
真菌是以腐生或寄 生方式摄取养料的真核 细胞型微生物。


检查方法：直接镜检、分离培养
显微镜下直接观察菌体的形态结构（菌丝和孢子） 是真菌菌种鉴定的重要方法。 抗原检测只适合于检测血清和脑脊液中的隐球菌、 念珠菌、荚膜组织胞浆菌。 抗体检测适用于深部真菌感染的标本。


每种寄生虫(parasite)都以某个特定生活阶段 通过一定生活方式排离宿主，以求得转换宿主 个体而延续宗系 找不同生活阶段的寄生虫，是诊断寄生虫感染 最可靠的方法； 免疫学方法； DNA探针技术和PCR技术。


支原体是一类介于 细菌和病毒之间的 病原体，也是能独 立生活，非细胞内 培养的最小微生物。 分离培养是确诊支 原体感染的重要方 法。

污染的环境是引起医院感染的危险因素，必须 定期对空气、器物表面、医务人员手部和消毒 灭菌效果等进行监测。
监测对象 空气 监测方法 沉降法 计算单位 cfu/m3
器物表面
医务人员手部
压印法
压印法
cfu/cm2
cfu/cm2
环境类别 Ⅰ类 Ⅱ类 Ⅲ类 Ⅳ类
范围 ① ② ③ ④
空气 ≤10 ≤200 ≤500 －
第二十章
临床病原学检查

查明感染性疾病的病原体 测试病原体的药物敏感性
HBV
HSV
SARS
标本采集和运送的要点
避免杂菌污染 标本标示清晰
标本的采集和运送
用抗菌素以前
标本必须新鲜
运送注意保存 采集病变明显部位
不同类型的临床标本的采集和运送
标本类别
血液
送检容器
无菌培养瓶 (含抗凝剂)
标本特点
干燥 观察细菌
染色标本 标本 涂片 固定 染色 形态、染色性

病原体特异性抗原或抗体检测：乙肝，梅毒
螺旋体抗体
荧光技术
已知抗体
酶免技术 化学发光技术 凝集试验 放射免疫技术
未知抗原
已知抗原
未知抗体
沉淀试验

病原体核酸检测：适用于目前尚不能分离培养或很难
分离培养的微生物。 (1)聚合酶链反应 (polymerase chain reaction PCR)


衣原体是一群在光镜下可 以观察到的细胞内微生物， 仅部分引起人类发病。 直接镜检找细胞质内的典 型包涵体 荧光技术 酶免技术 核酸技术

医院感染(nosocomial infection)指患者在入院时
既不存在，也不处于潜伏期，而在医院内发生的感染， 包括住院期间发生的感染和在医院内获得而在出院后发 病的感染。 感染途径：住院病人，医务人员，探视者，医疗器械，血液制
静脉血
临床诊断
备注
菌血症、败血症或脓 发热初期或高峰 毒血症 期抽血 如肝炎、梅毒等 尿路感染 检测特异性 抗体效价 厌氧培养用无菌 厌氧瓶
血清 尿液 泌尿生殖道 标本 粪便 呼吸道标本
无菌试管 无菌试管 无菌棉拭子 清洁容器 清洁容器
静脉血凝固析出 清洁中段尿
尿道 、阴道、宫颈的 性病、盆腔脓肿、疱 淋球菌需保温送 脓性分泌物 疹 检 含脓、血或粘液的粪 便 深部的痰、鼻咽拭子、 通过支气管收集的标 本 腹泻 呼吸道感染 连续送检三次 不合格标本(扁 平上皮细胞≥25 个/LP) 脑脊液应保温 立即送检或床边 接种 厌氧菌送检需 知


高压蒸汽灭菌效果、紫外线灭菌效果的监测：嗜热脂肪 杆菌 化学消毒剂的监测：消毒剂的细菌污染程度、应用效果 的监测


细菌对抗菌药物的敏感试验（药敏试验）：是 指在体外测定药物抑制或杀死细菌能力的试验。 药敏试验有助于筛选有效的抗菌药物，提示所 需的剂量，帮助临床医师选用最佳药物治疗感 染性疾病。
(2)DNA探针杂交技术

病原体的分离培养和鉴定： 1.适宜分离培养的细菌
培养基
+
气体、温度 PH
+
+
？

病原体的分离培养和鉴定： 2.不能在人工培养基上生长的病原体
接种在易感动物、鸡胚或细胞中培养。

细菌毒素的检测： 1.内毒素检测：G-菌死亡后释放的细菌壁脂多
糖 2.外毒素的检测： G+菌或少数G-菌在生长代谢 过程中释放至菌体外的蛋白质
器物表面 ≤5 ≤5 ≤10 ≤15
医务人员手部 ≤5 ≤5 ≤10 ≤15

注①层流洁净手术室、层流洁净病房；②普通手术室、产房、婴 儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、 重症监护病房；③儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、 治疗室、供应室的清洁区、急症抢救室、化验室、各类普通病房； ④传染病科及病房。

2.超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测
ESBL阳性:对头孢噻肟,头孢他啶,头孢曲松,氨曲南耐 药
氨曲南 (30μ g)
克拉维 酸钾(10 μ g/片)
头孢噻肟 (30μ g)
20cm
头孢曲松 (30μ g)
头孢他啶 (30μ g)

临床耐药流行株的检测
耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）检测 耐青霉素肺炎链球菌（PRP）检测 耐万古霉素肠球菌（VRE）检测 病原菌耐药的基因检测

螺旋体是一群细长、柔软、运动活泼、呈螺旋 状的微生物。 暗视野镜检 用RPR或VDRL或TRUST试验进行梅毒初筛试验。 用FTA－ABS或MHA－TP或TPPA进行梅毒确诊 试验。

立克次体是一类仅在宿主细胞内繁殖的原核细 胞性微生物(除罗沙利马体外)。外斐氏试验为 非特异性血清学诊断试验，用于斑疹伤寒、斑 点热和恙虫病的确诊。

耐药性的发生机制 ①药物渗入细菌减少； ②细菌产生灭活抗生素酶和/或钝化酶； ③细菌的抗生素结合蛋白改变； ④细菌靶结构改变； ⑤代谢拮抗剂产生等

常见耐药菌株 1)G+菌：葡萄球菌属、链球菌属等。 2)G-菌：肠杆菌科细菌、假单胞菌属等。 3)厌氧菌：拟杆菌、梭状芽胞杆菌等。 4)其它细菌、病毒、真菌、寄生虫等。
当今感染性疾病的特点
新传染病陆续被发现：埃博拉出血热 原有传染病的复燃：梅毒，结核 多重耐药性细菌的出现 院内感染及条件性致病菌感染的增加 对人类致病的病原微生物约在500种以上


细菌是一大类能在 人工培养基中生长 的原核细胞型微生 物。

检查项目：
直接镜检、分离 培养、鉴定、细菌 毒素及核酸检测、 抗体检测、动物接 种