抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。
在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，通过分光光度比色法测定400～415nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液： 取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于2ml ALP Assay buffer ，混匀，冰上预冷备用。
新配制的显色工作液应在6h 内用完。
② 配制标准品工作液。
2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer 稀释。
编号 名称TE0003 100T Storage试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 试剂(D): Stopping Solution 12mlRT 使用说明书1份3、加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
抗酒石酸酸性磷酸酶
30-40岁2型糖尿病患者血清TRACP-5b及BALP临床分析目的：分析30-40岁糖尿病患者血清骨形成指标TRACP-5b及BALP 骨吸收指标水平与骨重建失衡的机理，为糖尿病骨质疏松的早期诊断提供可能的依据。
方法：选择30-40岁2型糖尿病患者23例及对照组病例21例，分别对其血清TRACP-5b及BALP进行测量，并做统计分析。
结果：T2DM患者组血清TRACP-5b水平高于对照组（P<0.05）具有统计学差异,T2DM患者组血清BALP水平低于对照组（P<0.05）具有统计学差异。
结论：1. 2型糖尿病患者较健康对照组患者血清骨吸收指标TRACP-5b水平升高，骨形成指标BALP 水平降低，成骨作用小于破骨作用，骨质疏松的风险有增加的可能性。
（2型糖尿病患者骨质疏松风险的增加可能与BALP及TRACP-5b 存在一定的关系）。
2.骨形成标记物BALP及骨吸收标记TRACP-5b可能是2型糖尿病骨质疏松早期预测的敏感指标。
引言：2型糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性疾病，在造成起心、脑、肾损伤的同时，还极易引起骨重建负平衡，导致骨质疏松。
有研究明，TRACP-5b是骨吸收的特异性标志物,可反映破骨细胞的活性及骨吸收的状态；BALP是骨形成的特异性标志物，可反映成骨细胞的活性及骨形成的状态。
本课题通过对40岁以下T2DM患者观察组和健康人对照组的血清TRCAP-5b及BALP水平测量，分析骨重建失衡的机理，为糖尿病骨质疏松的早期诊断提供可能的理论依据。
1.对象和方法1.1研究对象观察组：选取23例为我院2015年3月~2015年6月住院病人，按WHO标准确诊为T2DM 患者，其中男10例，女13例，年龄30-40岁，平均年龄(65. 5 ±1 0. 7)岁, 体质量指数[ BMI=体重( kg) /身高2( m2)] 平均为24. 4 ±3. 1, 病程6月～21 年, 均为口服降糖药及通过饮食控制血糖健康对照组：同期我院健康体检者21例，其中男10例，女11例，年龄30-40岁，平均年龄xx岁，体重指数xx.且经口服葡萄糖耐量试验排除糖尿病。
骨标记物临床意义
骨标记物临床意义一、骨标记物的概述骨标记物是一类反映骨代谢和骨形成过程的生物标志物，其在临床诊断、病情监测和治疗评估等方面具有重要价值。
骨标记物可以分为以下两类：1.骨形成标志物：如骨钙素（BGP）、Ⅰ型胶原羧基端前肽（P1NP）等，它们在骨形成过程中起到关键作用，水平升高表明骨形成活跃。
2.骨吸收标志物：如抗酒石酸盐酸性磷酸酶（TRAP）、钙离子浓度等，它们与骨吸收过程密切相关，水平升高提示骨吸收增加。
二、骨标记物的临床应用骨标记物在临床应用中主要包括以下方面：1.诊断骨质疏松症：通过检测骨形成和骨吸收标志物，有助于评估患者骨质疏松症的风险和发展程度。
2.评估骨折风险：骨标记物水平低下时，提示骨折风险增加，需采取相应预防措施。
3.监测骨代谢性疾病：如甲状旁腺功能亢进症、骨代谢异常等，骨标记物检测有助于病情监测和治疗效果评估。
4.评估骨移植和骨科手术效果：骨标记物水平的变化可作为评估骨移植和骨科手术疗效的指标。
三、常见骨标记物的临床意义1.钙离子浓度：钙离子是骨形成和骨吸收的关键调节因子，其浓度变化反映骨代谢状态。
2.骨碱性磷酸酶（BALP）：主要来源于成骨细胞，活性升高表明骨形成活跃。
3.骨钙素（BGP）：由骨细胞分泌，水平升高提示骨形成增加。
4.Ⅰ型胶原羧基端前肽（P1NP）和Ⅰ型胶原羧基端肽（PYD）：为骨胶原降解产物，水平升高表示骨形成增加。
5.抗酒石酸盐酸性磷酸酶（TRAP）：来源于破骨细胞，活性升高提示骨吸收增加。
四、骨标记物在临床应用中的注意事项1.骨标记物的检测方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）等方法进行检测。
2.结果的解释和评估：需结合患者年龄、性别、骨密度等相关因素，综合分析骨标记物水平。
3.与其他检测方法的结合应用：如双能X线吸收法、骨密度测量等，以获得更全面的诊断依据。
五、未来发展趋势与展望1.新型骨标记物的研发：随着科学技术的进步，新型骨标记物将不断涌现，为临床诊断提供更多依据。
抗洒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)定量测定
抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP 5b）定量测定一、简介和用途、适用范围大量的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）是由骨吸收的破骨细胞和有活力的巨噬细胞所释放的。
在血液循环中的TRACP有TRACP 5b 和TRACP 5a二种形式， TRACP 5b 来源于破骨细胞，而TRACP 5a来源于巨噬细胞。
由破骨细胞刚分泌到血液中的TRACP 5b是有活性的酶，但当TRACP 5b在血液循环中被清除之前已无活性，并被降解为碎片。
这样TRACP 5b不会因肝、肾功能受损而在血液中积蓄。
血清中TRACP 5b均来源于破骨细胞，此酶在昼夜的活性水平变化不明显，且不受进食的影响，故可在一天的任何时候都可以采集标本进行检验。
此试剂盒依据测定由破骨细胞释放的TRACP 5b的特异性测定方法。
它可以用于测定骨吸收亢进的病人，如原发性骨质疏松和肾性骨病，也可以预测骨折的危险性，并便于了解抗骨吸收治疗的效果。
在肿瘤病人中，当TRACP 5b 的活力增高提示肿瘤骨转移。
在体外，培养基中TRACP 5b的活力大小代表了破骨细胞数量的多少，因此应用于此试剂盒在进行人的破骨细胞培养时，可用于检测破骨细胞的数量。
二、试验原理测试孔内已包被抗TRACP单克隆抗体→加入校准液、质控品和样品→加入释放剂→有活性的TRACP 5b从结合蛋白质上离解→TRACP 5b与孔内包被的抗TRACP单克隆抗体结合→加入底物pNPP孵育→加入终止液终止反应→在酶标仪上检测结果。
此试验的优点1、所测定的TRACP 5b是由破骨细胞专一释放的。
2、此试验对TRACP 5a或其它磷酸酶没有干扰。
3、溶血不影响结果。
4、不受昼夜变化的影响。
5、不受肝脏、肾脏疾病的影响。
6、不受进食的影响。
7、酶标板容易拆卸，方便检测。
三、试剂盒（一）组成1、酶标板：96孔，已包被抗—TRACP抗体。
2、质控液：3×0.5ml。
3、校准液：3×0.5ml(3×1U/L,3×5U/L,3×10U/L)。
破骨细胞酸性磷酸酶染色后快速半定量分析
ｔａｌ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ，Ｃｈｉｎａ Ｃｏ￣ｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＹＡＮＧ Ｄｅ—ｈｏｎｇ ．Ｅ —ｍａｉｌ：ｄｒｍｙａｎｇ＠ ｙａｈｏｏ．ｃｏｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ａ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｏｒ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｔａｒｔｒａｔｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｓｔａｉ． ｎｉｎｇ（ｔｈｅ ＴＲＡＰ ｉｎ ｓｉｔｕ ｓｔａｉｎｉｎｇ）；ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓ ｏｆ ｌｉｇｈｔ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ；ａｎｄ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｗｉｔｈ ｔａｒｔｒａｔｅ ｒｅ—
ｓｉｓｔａｎｔ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ ｍｅｔｈｏｄ．ｔｈｕｓ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆａｓｔ ｓｅｎｉ—ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ
碧云天酸性磷酸酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：酸性磷酸酶检测试剂盒产品编号产品名称包装P0326 酸性磷酸酶检测试剂盒120次产品简介：碧云天生产的酸性磷酸酶检测试剂盒(Acid Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性的试剂盒。
酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也称酸性磷酸酯酶，是一种在溶酶体中含量较高的酸性水解酶，被认为是鉴定溶酶体亚细胞组分的标志物。
酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。
酸性磷酸酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。
溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
血浆中的酸性磷酸酶活性范围在2-7.9U/L，血清中酸性磷酸酶的活性范围在2.5-11.7U/L。
精液(semen)中含有高浓度的酸性磷酸酯酶，活力可以达到87-436KU/L。
本试剂盒可以检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液或纯化的酶样品等中的酸性磷酸酶活性。
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。
para-nitrophenol (p-nitrophenol)在碱性条件下，呈黄色产物，可以在400-415nm检测吸光度。
产物黄色越深，说明酸性磷酸酶检活性越高，反之则酶活性越低。
据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
包括标准品和空白对照，本试剂盒共可进行120个样品的检测。
trap染色
trap染色答案：Trap染色是用于检测骨组织、骨细胞中特征物质的染色，使破骨细胞呈红色，背景呈绿色或蓝色。
抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）为破骨细胞的标志酶，特异地分布于破骨细胞中，为破骨细胞所特有，通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物。
在含酒石酸的酸性条件下，trap能将萘酚AS-BI 磷酸盐水解，产生的萘酚AS-BI立即与fast red或六偶氮副品红结合，在酶活性部位形成不溶性的红色染料，通过观察红色染料的形成可间接了解酸性磷酸酶的活性，进一步鉴别及分析破骨细胞的状态。
分析：骨组织切片及trap染色实验步骤1、骨组织脱钙：新鲜骨组织固定于4%多聚jia醛24h 以上。
将组织从固定液取出置于EDTA脱钙液内脱钙（不能用含酸的脱钙液脱钙），每3天换一次脱钙液，至骨组织针扎可以顺利通过为止。
2、取材：在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
3、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。
4、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。
先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。
于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
5、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。
切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。
待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
6、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20m in-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明货号：G4561有效期：6个月有效。
产品内容：名称规格（4×10ml）保存试剂(A):TRAP固定液50ml4℃避光试剂(B):TRAP孵育液B1:AS-BI Buffer1ml-20℃避光B2:GBC染色液0.1ml4℃避光B3:TRAP Buffer9ml RT避光临用前，按B1:B2:B3=10:1:90混合，即为TRAP孵育液，即配即用。
试剂(C):苏木素染色液10ml4℃避光试剂(D):甲基绿染色液10ml RT避光产品说明：酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。
各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。
血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚不重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。
该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料：1、蒸馏水、恒温箱2、载玻片、推玻片3、光学显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)血液、细胞涂片：1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色方法的改良
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０１９Ｊｕｌ；３５（７）
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①
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图 １ 大鼠股骨的破骨细胞，传统 ＴＲＡＰ染色：组织切片表面有颗粒 沉淀 图 ２ 大鼠股骨的破骨细胞，改良 ＴＲＡＰ染色：组织切片表 面干净整洁，无颗粒沉淀
色液（ｐＨ５０～５２）为亮红色，切片染色后背景出现颗粒沉 淀，且染色液不易冲洗，导致水洗时间延长，易脱片。当染色 液 ｐＨ值逐渐升高时，染液逐渐由亮红色转变为淡黄色，组 织上非特异性沉淀密集，背景干扰严重，染色效果不理想，脱 片严重。当 ＴＲＡＰ染色液 ｐＨ值调至 ５０以下时，随着 ｐＨ值 的下降染色液颜色逐渐变浅，且切片染色后非特异性沉淀逐 渐减少，当 ｐＨ４６时，染色液呈淡红色，切片染色后无非特 异性沉淀产生，组织不脱片（表 ２）。
３７℃温箱中温育 ３ｈ，使盐酸副品红充分溶解，冷却至室温 经 ０２２μｍ微孔滤膜制成盐酸副品红溶液，置于 ４℃避光贮 存；称取亚硝酸钠 ４００ｍｇ，溶解于 １０ｍＬ蒸馏水中，制成 ４％ 亚硝酸钠溶液（现用现配）；临用前取 １ｍＬ新配置的亚硝酸 钠溶液，缓慢滴加到等量的盐酸副品红溶液中，边滴加边搅 拌，静置 １ｍｉｎ后备用。（３）萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐溶液配制：称 取萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐 １０ｍｇ，溶解于 ０５ｍＬ的 Ｎ，Ｎ二甲基 甲酰胺中，混匀备用。（４）ＴＲＡＰ染色液：将 ９ｍＬ乙酸铵缓 冲液与 ０５ｍＬ六偶氮副品红溶液混合，微调 ｐＨ４６（传统 方法 ｐＨ５０～５２），再加入 ０５ｍＬ萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐溶液 混匀，后加入酒石酸钾钠 １４１ｍｇ，充分溶解经 ０２２μｍ微孔 滤膜配制成 ＴＲＡＰ染色液。 １．２．２ 取材与固定 采用 ＣＯ２麻醉法处死大鼠，取其股骨， 剔除周边软组织，经 ４％多聚甲醛固定，１０％ＥＤＴＡ脱钙（２８ 天），梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋等步骤后，制 成厚度为 ５μｍ的组织切片。 １．２．３ ＴＲＡＰ染 色 取 大 鼠 骨 组 织 切 片，使 用 改 良 后 的 ＴＲＡＰ染色方法染色。切片于二甲苯Ⅰ脱蜡 ８ｍｉｎ，二甲苯Ⅱ 彻底脱蜡 ８ｍｉｎ，随后经 １００％ Ⅰ、１００％ Ⅱ、９５％ Ⅰ、９５％ Ⅱ、８０％梯 度 乙 醇 中 逐 步 水 化 （各 ５ｍｉｎ），水 洗 ３ｍｉｎ，用 ＴＲＡＰ染色液（传统方法 ｐＨ５０～５２）３７℃避光浸染 ３ｈ， 蒸馏水充分水洗，Ｈａｒｒｉｓ苏木精复染 １ｍｉｎ，蒸馏水充分水 洗，最后切片经梯度乙醇（８０％、９５％ Ⅰ、９５％ Ⅱ、１００％ Ⅰ、 １００％ Ⅱ）逐步脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，置于 ４５℃ 烤片机中烤片 １ｈ，光镜下观察（表 １）。
2020届高三生物3-4月模拟试题汇编专题01 细胞的组成(解析版)
专题01 细胞的组成1．（2020·东北师大附中高三一模）下列关于组成细胞的糖类和脂质的说法正确的是（）A．糖类和脂质均只由C、H、O三种元素组成B．糖类与脂质相连构成的糖脂位于细胞膜外侧C．一分子乳糖由一分子半乳糖和一分子果糖形成D．细胞主要通过氧化分解脂肪为生命活动供能【答案】B【解析】糖类和脂质共同的元素有C、H、O三种元素，磷脂中还有P元素，A错误；在细胞膜上由糖类与脂质相连可以形成糖脂，位于细胞膜的外侧，B正确；一分子乳糖由一分子半乳糖和一分子葡萄糖形成，C 错误；细胞主要通过氧化分解葡萄糖为生命活动供能，D错误。
故选B。
2．（2020·福建省莆田市高三教学质量检测）下列有关生物体内化合物的叙述，正确的是（）A．葡萄糖、纤维素、肝糖原都是生物大分子B．ATP、DNA、RNA都含有C、H、O、N、P五种元素C．酶、抗体、激素都是由氨基酸脱水缩合而成的D．脂肪、磷脂、胆固醇都是动物细胞膜的组成成分【答案】B【解析】生物大分子是指由多个单体聚合而成的多聚体，一般以若干个相连的碳原子形成的碳链构成基本骨架。
大多数酶的本质为蛋白质，少部分酶的本质为RNA。
识记生物大分子的组成元素、基本单位和功能等，是本题的解题关键。
葡萄糖属于单糖，不是生物大分子，A错误；ATP、DNA和RNA中都含有五碳糖、含氮碱基和磷酸，因此组成元素均为C、H、O、N、P，B正确；部分酶的本质为RNA，激素不都是蛋白质，例如性激素的本质为固醇，不都是由氨基酸脱水缩合形成的，C错误；动物细胞膜的成分不包含脂肪，D错误；故选B。
3．（2020·广东省广州市育才中学高三零模）阐明生命现象的规律，必须建立在阐明生物大分子结构的基础上。
下列有关生物大分子核酸和蛋白质的叙述正确的是（）A．血红蛋白的功能与其分子组成中的大量元素Fe有关B．胰岛素和抗体的差异与组成它们的氨基酸数目、种类和连接方式有关C．伞藻细胞主要的遗传物质是DNAD．变形虫细胞DNA与RNA的基本骨架组成成分不同【答案】D【解析】Fe是构成生物体的微量元素，A错误；组成不同蛋白质的氨基酸的连接方式相同，都是形成肽键，B错误；伞藻细胞的遗传物质是DNA，C错误；磷酸、脱氧核糖交替连接，构成DNA的基本骨架，磷酸和核糖交替连接，构成RNA的基本骨架，D正确。
南京建成生物工程研究所价目表
南京建成生物工程研究所价目表南京建成生物工程研究所价目表二○○四年七月一、抗氧化检测试剂及科研试剂：（注：**为新试剂盒）序号产品名称规格单位检测方法售价厂家A001 超氧化物歧化酶（SOD）测试盒100T 盒羟胺法240.00 建成50T 盒羟胺法130.00 建成A003 丙二醛（MDA）测试盒100T 盒TBA法150.00 建成50T 盒TBA法90.00 建成A002 黄嘌呤氧化酶（XOD）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A015 总抗氧化能力（T-AOC）测试盒50T 盒比色法120.00 建成25T 盒比色法70.00 建成A018 羟自由基测试盒50T 盒比色法150.00 建成A052 超氧阴离子自由基（O ）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A044 髓过氧化物酶（MPO）测试盒50T 盒比色法160.00 建成A007 过氧化氢酶（CAT）测试盒紫外分光光度法100T 盒紫外比色法100.00 建成可见光分光光度法100T 盒钼酸铵法100.00 建成A064 过氧化氢（H2O2）测试盒50T 盒比色法50.00 建成A004 谷胱甘肽—S转移酶（GSH—ST）测试盒80T 盒比色法200.00 建成A005 谷胱甘肽—过氧化物酶（GSH—PX）测试盒50T 盒比色法200.00 建成A062 谷胱甘肽－还原酶(GR)测试盒50T 盒比色法200.00 建成A006 还原型谷胱甘肽（GSH）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A061 氧化型谷胱甘肽(GSSG) 测试盒50T 盒比色法180.00 建成A063 巯基（-SH）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A034 单胺氧化酶（MAO）测试盒50T 盒紫外比色法150.00 建成A012一氧化氮（NO）测试盒(硝酸还原酶法) 50T 盒比色法300.00 建成25T 盒比色法180.00 建成A013 一氧化氮（NO）测试盒（化学法测NO2—）100T 盒比色法150.00 建成A014 -1 一氧化氮合成酶（NOS）测试盒[（T－NOS、iNOS、cNOS）三型同时出结果] 50T 盒比色法480.00 建成25T 盒比色法260.00 建成A014-2 一氧化氮合成酶（NOS）测试盒[总NOS（T－NOS）] 50T 盒比色法350.00 建成25T 盒比色法200.00 建成A019-1 乳酸（LD）测试盒（测全血）50T 盒紫外比色法240.00 建成50T 盒可见光比色法240.00 建成A019-2 乳酸（LD）测试盒（测血清、组织）50T 盒比色法200.00 建成A020 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒100T 盒比色法240.00 建成50T 盒比色法130.00 建成A016-1 A TP酶测试盒（组织及细胞膜需高速离心）(可测Na+K+、Ca2+Mg2+ ATPase) 100T 盒比色法240.00 建成50T 盒比色法150.00 建成A016-2 A TP酶测试盒（组织及细胞膜不需高速离心）(可测Na+K+、Ca2+Mg2+ ATPase) 100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成A057 Cu-A TP酶（Cu-A TPase）测试盒100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成序号产品名称规格单位检测方法售价厂家A069 氢－钾A TP酶（H+-A TPase）测试盒100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成A070-1 超微量A TP酶测试盒（可测Na+K+、Ca2+Mg2+ A TPase、总ATPase）200T 盒比色法390.00 建成100T 盒比色法230.00 建成A070-2 超微量A TP酶测试盒（可测总A TPase）100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成A021 苹果酸脱氢酶测试盒50T 盒紫外比色法面议建成A022 琥珀酸脱氢酶测试盒50T 盒比色法240.00 建成A032 肌酸激酶（CK）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A023 胆碱酯酶（CHE）测试盒50T 盒比色法70.00 建成A024 乙酰胆碱酯酶（T-CHE）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A025 丁酰胆碱酯酶测试盒50T 盒比色法150.00 建成A027 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）测试盒50T 盒比色法100.00 建成A031 b-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）测试盒50T 盒比色法260.00 建成A053 β-葡萄糖醛酸苷酶测试盒50T 盒比色法200.00 建成A055** 红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测试盒50T 盒比色法260.00 建成A059 碱性磷酸酶（AKP）测试盒50T 盒比色法100.00 建成A060 酸性磷酸酶（ACP）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A049 前列腺酸性磷酸酶（PACP）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A058 抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A068 钙调神经磷酸酶（CaN）测试盒25T 盒比色法200.00 建成A072 全血2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）测试盒50T 盒比色法面议建成A047 谷氨酰胺合成酶（GS）测试盒50T 盒比色法300.00 建成A048 腺苷脱氨酶(ADA)测试盒50T 盒比色法130.00 建成A073** 谷氨酰胺测试盒50T 盒比色法200.00 建成A074** 谷氨酸测试盒50T 盒比色法260.00 建成A075** 谷氨酰胺、谷氨酸（两种均可测）50T 盒比色法480.00 建成A076** 丙酮酸激酶（PK）测试盒50T 盒比色法面议建成A077** 己糖激酶（HK）测试盒50T 盒比色法面议建成A036 唾液酸（SA）测试盒(带SA标准) 50T 盒比色法200.00 建成A017-1 细胞凋亡测试盒（TdT酶、稀释液、POD）10片盒TUNEL法1450.00 建成A017-2 细胞凋亡测试盒（TdT介导的原位末端切口平移双标记法）(全套）10片盒TUNEL法1850.00 建成A008 维生素E（VE）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A009 维生素C（VC）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A010 维生素B1（V B1）测试盒50T 盒比色法面议建成A011 维生素B2（V B2）测试盒50T 盒比色法面议建成A026 总氨基酸（T—AA）测试盒80T 盒比色法100.00 建成A030-1 羟脯氨酸测试前处理试剂消化液50T 瓶比色法100.00 建成调PH试剂50T 瓶比色法70.00 建成A030-2 羟脯氨酸（Hyp）测试盒（可测血清、培养液、尿液、心肌、皮肤、软骨、肝脏等等）50T 盒比色法180.00 建成A041 5’-核苷酸酶（5’-NT）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A035 D—木糖测试盒50T 盒比色法100.00 建成A056 糖化血红蛋白（GHb）测试盒15T 盒比色法55.00 建成A037 糖化血清蛋白（GSP）测试盒（果糖胺法）（带标准）50T 盒比色法150.00 建成25T 盒比色法80.00 建成A043 肝/肌糖元测试盒50T 盒比色法160.00 建成A038 脂蛋白（a）[LP（a）]测试盒96T 盒ELISA法380.00 建成A054 脂肪酶测试盒50T 盒比色法200.00 建成A067 总脂酶【脂蛋白脂酶（LPL）/肝脂酶（HL）】测试盒100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法160.00 建成A042 游离脂肪酸(NEFA)测试盒50T 盒比色法160.00 建成A033 脂褐质测试盒50T 盒荧光比色法100.00 建成A039 血清铁测试盒50T 盒比色法100.00 建成A040 总铁结合力(TIBC)测试盒50T 盒比色法180.00 建成A029 铜兰蛋白（CP）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A071 微量游离血红蛋白测试盒50T 盒比色法80.00 建成A028 白蛋白测试盒（溴甲酚绿法）100T 盒比色法30.00 建成A045-1 总蛋白定量测试盒（双缩脲法）100T 盒比色法30.00 建成A045-2 总蛋白定量测试盒（考马斯亮兰法）100T 盒比色法30.00 建成A046 蛋白标准品(总蛋白、白蛋白) 1ml 支7.00 建成A050-1 溶菌酶（LZM）测试盒（带标准）30T 盒试管比浊法60.00 建成A050-2 溶菌酶（LZM）测试盒（带标准）30T 盒平板法60.00 建成A050-3 溶菌酶标准品2mg 支6.00 建成A050-4 微球菌粉30mg 支40.00 建成A065 解脲（溶脲）支原体快速培养基（UU培养基）每人份支培养基10.00 建成A066 人型支原体快速培养基每人份支培养基10.00 建成A051-1 肝素溶液10ml 支20.00 建成A051-2 肝素抗凝管10ml 支2.00 建成二、不孕症系列酶免疫试剂：序号产品名称规格单位检测方法售价厂家B001 抗心磷脂抗体测试盒（ACL）IgG类48T 盒ELISA 160.00 建成抗心磷脂抗体测试盒（ACL）IgA类48T 盒ELISA 160.00 建成抗心磷脂抗体测试盒（ACL）IgM类48T 盒ELISA 160.00 建成B002 抗精子抗体测试盒（AsAb）IgG类48T 盒ELISA 160.00 建成抗精子抗体测试盒（AsAb）IgA类48T 盒ELISA 160.00 建成抗精子抗体测试盒（AsAb）IgM类48T 盒ELISA 160.00 建成B003 抗子宫内膜抗体测试盒（EmAb）IgG类48T 盒ELISA 260.00 建成抗子宫内膜抗体测试盒（EmAb）IgA类48T 盒ELISA 260.00 建成抗子宫内膜抗体测试盒（EmAb）IgM类48T 盒ELISA 260.00 建成B004 抗卵巢抗体测试盒（AoAb）IgG类48T 盒ELISA 260.00 建成抗卵巢抗体测试盒（AoAb）IgA类48T 盒ELISA 260.00 建成抗卵巢抗体测试盒（AoAb）IgM类48T 盒ELISA 260.00 建成三、常用试剂：序号产品名称规格单位检测方法售价厂家C001 钾（K）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）45.00 建成30T 盒比浊法（手工）35.00 建成C002 钠（Na）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）45.00 建成30T 盒比浊法（手工）35.00 建成C003 氯（Cl）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）45.00 建成30T 盒比色法（手工）28.00 建成C004 钙（Ca）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）40.00 建成30T 盒比色法（手工）30.00 建成C006 磷（Pi）测试盒（带标准）100T 套孔雀绿显色39.00 建成A059 碱性磷酸酶（AKP）测试盒50T 盒比色法100.00 建成A060 酸性磷酸酶（ACP）测试盒50T 盒比色法130.00 建成C009 谷丙转氨酶（SGPT）测试盒100T 盒比色法30.00 建成C010 谷草转氨酶（SGOT）测试盒100T 盒比色法30.00 建成C018 总胆红素、直接胆红素测试盒80T 套咖啡因比色法65.00 建成80T 套一步法65.00 建成C017 Υ—谷氨酰转移酶（Υ—GT）测试盒100T 套比色法88.00 建成C020 尿胆红素测试盒50T 套哈里森氏法25.00 建成C033 尿胆原测试盒50T 套25.00 建成C013 尿素氮（BUN）测试盒100T 套脲酶比色法36.00 建成100T 套二乙酰－肟比色法27.00 建成C016 淀粉酶（AMS）测试盒100T 套淀粉一碘比色法39.00 建成C012 尿酸测试盒50T 套比色法40.00 建成C011-1 肌酐（Cr）测试盒（苦味酸法）100T 套比色法（除蛋白）60.00 建成C011-2 肌酐（Cr）测试盒（苦味酸法）100T 套比色法（不除蛋白）40.00 建成C021 血红蛋白稀释液（测试液）5ml 支HICN比色法4.50 建成C022 血红蛋白标准品5ml×4支套比色法12.00 建成C023 血红蛋白校正液250ml 瓶比色法35.00 建成100ml 瓶比色法14.00 建成C024 血小板稀释液（计数液）100ml 瓶8.00 建成C025 白细胞稀释液（计数液）100ml 瓶8.00 建成C037 红细胞稀释液（计数液）100ml 瓶8.00 建成C026 血细胞仪清洗液250ml 瓶25.00 建成C028 CO2结合力测试盒2ml×3×10 套滴定法40.00 建成C034 脑脊液蛋白测试盒50T 盒磺基水杨酸法50.00 建成C038 血沉测试液100ml 瓶10.00 建成C039 嗜酸粒细胞直接计数液40ml×1 瓶50.00 建成C040 网织红细胞计数液8 ml×2 套试管法30.00 建成10 ml×1 瓶玻片法20.00 建成C035-1 尿蛋白定性测试盒100T 盒磺基水杨酸法30.00 建成C035-2 尿蛋白定量测试盒100T 盒CBB法30.00 建成C041 尿糖试剂100ml 瓶班氏法40.00 建成C027 尿粪隐血测试盒100T 套联苯胺法15.00 建成100T 套邻联甲苯胺法15.00 建成A051-1 肝素溶液10ml 支20.00 建成A051-2 肝素抗凝管10ml 支2.00 建成四、染液类序号产品名称规格单位检测方法售价厂家D001 碱性磷酸酶染液50片套染色50.00 建成D002 酸性磷酸酶染液50片套染色50.00 建成D003-1 酸性酯酶染液5.0ml×4 盒染色50.00 建成D003-2 中性酯酶染液5.0ml×4 盒染色50.00 建成D003-3 碱性酯酶染液5.0ml×4 盒染色50.00 建成D003-4 双重酯酶染液5.0ml´4 盒染色60.00 建成D009 快速血细胞染液50ml×2 套染色40.00 建成D004 糖元染液10ml×4 盒染色40.00 建成D005 苏木素染液50ml×1 瓶染色40.00 建成D019 伊红染液100ml×1 套染色50.00 建成D006 H-E染液套染色55.00 建成D007 瑞氏染液50ml×2 套染色40.00 建成D010 瑞氏一姬姆萨复合染液50ml×2 套染色40.00 建成D011 姬姆萨染液套染色30.00 建成D015 巴氏染液（脱落细胞染色）套染色50.00 建成D017 快速H-E组织细胞及脱落细胞染液10ml×4 染色20.00 建成D008 革兰氏染液50ml×4 套染色50.00 建成D012 抗酸染液50ml×2 套染色40.00 建成D013 溴酚兰溶液1.0ml 支染色10.00 建成D014 溴乙淀溶液1.0ml 支染色20.00 建成D016 细胞活性鉴别染液20ml 瓶伊文斯蓝法20.00 建成D018 血管通透性测试染液20ml 瓶美蓝法20.00 建成D020** 过氧化物酶染液5ml 套染色20.00 建成五、各种浓度及PH值的缓冲液：(注: 以下缓冲液PH值、摩尔浓度按客户要求配制。
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP))说明书活性
Stop Solution
3ml×1 bottle
6ml×1 bottle
2-8℃
wash solution
（20ml×20fold）
×1bottle
（20ml×30fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1.serum-coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a sterile container,centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,detectthe composition of cells, Dilut cell suspension withPBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached 1 million / ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,Ifprecipitation appeared,Centrifugal again.
trap含量检测
小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)酶联免疫分析(ELISA)最近更新时间：2011年3月8日提供商：上海研辉生物科技有限公司资料大小：0K文件类型：下载次数：0次资料类型：浏览次数：48次相关产品：详细介绍：小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
抗酒石酸酸性磷酸酶-主要是在多核的破骨细胞和单个核的破骨前体细胞中表达
抗酒石酸酸性磷酸酶-主要是在多核的破骨细胞和单个核的破骨前体细胞中表达，抗酒石酸酸性磷酸酶染色是检测破骨细胞的特异标志性酶抗酒石酸酸性磷酸酶-主要是在多核的破骨细胞和单个核的破骨前体细胞中表达，抗酒石酸酸性磷酸酶染色是检测破骨细胞的特异标志性酶。
学术术语来源---不同氧环境中破骨细胞特异性基因的表达文章亮点：1 文章的特点在于，用破骨前体细胞株体外经核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导为成熟破骨细胞，后分别置于常氧(体积分数20%O2)、组织氧(体积分数7%O2)、低氧(体积分数2%O2)环境中培养，抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测不同氧环境下成熟破骨细胞数目的差异，定量PCR检测不同氧环境下在不同时间破骨细胞特异性基因表达的差异。
2 文章结果显示，低氧下形成的成熟破骨细胞数明显少于常氧和组织氧培养下的破骨细胞数，不同氧环境下特异性基因核因子κB受体活化因子表达没有明显改变，常氧和组织氧培养时肿瘤坏死因子受体相关因子6第5天表达最高，抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白激酶K表达随着氧浓度下降，表达时间延后，组织氧培养下可以保持在最高水平。
关键词：组织构建；骨组织构建；破骨细胞；抗酒石酸酸性磷酸酶；联合诱导；肿瘤坏死因子受体相关因子6，巨噬细胞集落刺激因子；氧浓度；核因子κB受体活化因子；组织蛋白酶K主题词：破骨细胞；骨吸收；骨质疏松；组织工程摘要背景：课题组以往研究证实，氧浓度过低乃至处于低氧时(体积分数2%O2)，破骨前体细胞的增殖及破骨细胞的分化和功能都受到抑制，但体外培养的破骨细胞在不同氧环境下的基因表达未见有相关报道。
目的：实验拟观察不同氧环境下破骨细胞各特异性基因的表达规律，探寻氧环境改变影响破骨细胞分化的表达机制。
方法：将破骨前体细胞株经质量浓度均为10 μg/L的核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导成为成熟的破骨细胞，然后分别置于常氧、组织氧、低氧(体积分数20%，7%，2%)条件下培养，用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞形成的变化，并分别在培养第1-7天收集细胞，通过定量PCR方法检测核因子κB受体活化因子，肿瘤坏死因子受体相关因子6，抗酒石酸酸性磷酸酶，组织蛋白酶K基因mRNA的表达。
人抗酒石酸酸性磷酸酶
人抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平。
用纯化的人TRAP抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入TRAP抗体，再与HRP标记的酒石酸酸性磷酸酶抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
trap染色原理
trap染色原理染色是一种用于对细胞、组织或病原体进行可视化的方法，以研究其结构、功能以及相关疾病的技术。
其中，trap染色是一种特殊的染色技术，用于检测和可视化细胞内和组织中的酸性磷酸酶活性。
本文将详细介绍trap染色的原理及其在生物实验中的应用。
trap染色的原理基于细胞中酸性磷酸酶（acid phosphatase）的活性。
酸性磷酸酶是一类催化酸性环境下磷酸酯水解反应的酶，它可以使底物产生染色反应。
而trap染色通常使用一种底物叫做naphthol AS-MX phosphate，通过活性的酸性磷酸酶作用后，底物分解成一种酚类产物，再与已经添加的染料（通常是Fast Red）反应形成红色的染色产物。
这种染色产物的形成，可以通过显微镜观察并记录结构和相关的细胞或组织。
所以，为了进行trap染色，一般需要准备以下试剂和材料：1.10%缓冲氧化铅溶液：用于抑制内源性碱性磷酸酶的活性。
2. naphthol AS-MX phosphate：trap活性底物。
3. Fast Red TR盐：染色试剂，通常为红色。
4.缓冲液：用于将上述试剂和样品混合，保持酸性环境，常用的缓冲液包括醋酸钠缓冲液和酒石酸缓冲液等。
具体的trap染色步骤如下：1.准备与样品相匹配的缓冲液，并在适当的温度下预温。
2.处理样品：根据需要，可以对细胞、组织进行固定、切片和染色前处理等步骤。
3. 清洗：将已处理的样品进行清洗，去除与trap染色无关的组织液和其他杂质。
4. 添加底物：将样品放入所选择的缓冲液中，并添加naphthol AS-MX phosphate作为底物。
根据所研究的细胞和标本，可以选择不同浓度的底物。
5. trap反应：将样品置于所选的缓冲液中，保持适当的酸性条件，使酸性磷酸酶与底物发生反应。
反应时间通常为1-2小时，具体时间取决于样品和所用条件的不同。
6. 停止反应：通过快速冲洗样品来停止trap反应。
7. 添加染色试剂：在缓冲液中加入Fast Red TR盐，使其与底物反应，生成红色的染色产物。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒
西安赫特生物科技有限公司 XAHT-01-014-019-2015抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒该试剂盒可用于血液、骨髓或组织来源的白细胞的酸性磷酸酶染色。
抗酒石酸酸性磷酸酶是一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达。
在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。
抗酒石酸酸性磷酸酶在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧产生和铁离子转运等有关。
抗酒石酸酸性磷酸酶可以被破骨细胞释放到血液中，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。
使用naphthol AS-BI phosphate及fast garnet GBC salt进行染色。
在酸性环境下，可快速偶联，形成不溶解的染料沉淀。
试剂准备1. Fast Garnet GBC Base溶液的配制：使用前，将1管Fast Garnet GBC Base溶于2mL FastGarnet GBC Base缓冲液中，新鲜配置。
2. 固定液：将25mL柠檬酸溶液，65mL丙酮及8mL 37%甲醛混合。
置于玻璃瓶中，盖紧盖子。
保存于2–8°C，可稳定2个月。
如果明显挥发，应丢弃。
使用说明1. 去离子水37°C预热备用；2. 固定液放置室温至18~26°C，将载片浸泡于固定液中，固定30sec。
去离子水冲洗，不要让载片干燥；也可使用4%多聚甲醛固定；3. 准备两支检测试管，每支中均加入0.5mL Fast Garnet GBC Base溶液与0.5mL亚硝酸钠溶液，将其混匀30sec，静置2min；4. 准备两个100mL烧杯，分别标记为A和B，按照下表将各成分混合，尽量避光操作；试剂烧杯A 烧杯B（对照）45mL预热至37°C的去离子水 45mL1.0mL从第三步得到的混合液 1.0mL0.5mLNaphthol AS-Bl Phosphate溶液 0.5mL2.0mL 乙酸缓冲液 2.0mL1.0mL 酒石酸盐溶液 —5. 准备两个玻片染缸，分别标记为A和B，分别将烧杯的溶液倒入相应的染缸中。
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抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP微板法)
简介：
酸酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液，血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。
TRAP一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达，在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。
Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。
在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色，产物黄色越深，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测，检测得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、96孔板
2、水浴锅或恒温箱
3、酶标仪编号
名称TE0043
120T
Storage
试剂(A): ACP Assay buffer15ml 4℃
试剂(B): pNPP 2支-20℃避光试剂(C): T artrate Solution 1ml 4℃
试剂(D): p-nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃避光使用说明书1份
操作步骤(仅供参考)：
1、配制检测工作液：
①配制显色工作液：取出pNPP，恢复至室温后溶解于ACP Assay buffer，混匀，冰上预冷备用。
新配制的显色工作液应在6h内用完。
②配制标准品工作液：取出p-nitrophenol(10mM) 恢复至室温后，取溶解于ACP Assay buffer，使浓度达到。
2、准备样品：
①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用PBS或生理盐水进行适当匀浆，一般细胞数量在106以上，组织应在100mg以上，离心取上清，-20℃冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。
③植物样品：取适量的植物组织加入少量生理盐水或PBS，充分捣碎或研磨，静置，用纱布或滤纸过滤，离心，留取上清液并测量体积，-20℃冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶，可以使用ACP Assay buffe、PBS或生理盐水稀释后再行检测。
3、加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，
并注意避免产生气泡。
标准品的用量分别为4、8、16、24、32、40μl，待测样品直接加40μl。
如果样品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置平行孔。
空白对照孔标准品孔待测样品孔ACP Assay buffer 40μl (40-x)μl (40-y)μl
显色工作液40μl 40μl 40μl
Tartrate Solution 5μl 5μl 5μl
待测样品——yμl
标准品工作液—xμl —
1、轻轻混匀，37℃孵育25～30min。
2、每孔加入Stopping Solution终止反应。
3、酶标仪检测吸光值，如果无法检测410nm，亦可检测400～415nm范围内吸光值，一
般应数小时内检测完毕。
计算：
酸性磷酸酶活性单位的定义：pH4.8 37℃条件下，每分钟水解para-nitrophenyl phosphate显色底物产生1微摩尔p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。
根据酶活性定义，计算出样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。
注意事项：
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色杯的最小检
测体积，尽量采用小体积的比色杯。
4、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用ACP Assay buffer稀释样品后重新测定。
5、一支显色工作液配制后需当日使用完毕，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。
6、p-nitrophenol溶液对人体有害，反应终止液有腐蚀性，请小心操作。
7、如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时应精确计时，此时推荐采用孵育30min
或更长时间，以减小操作过程中的时间误差。
8、待测样品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DC0032 Masson三色染色液
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TE0002 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)。