抗酒石酸酸性磷酸酶染色液说明书
抗酒石酸酸性磷酸酶
30-40岁2型糖尿病患者血清TRACP-5b及BALP临床分析目的：分析30-40岁糖尿病患者血清骨形成指标TRACP-5b及BALP 骨吸收指标水平与骨重建失衡的机理，为糖尿病骨质疏松的早期诊断提供可能的依据。
方法：选择30-40岁2型糖尿病患者23例及对照组病例21例，分别对其血清TRACP-5b及BALP进行测量，并做统计分析。
结果：T2DM患者组血清TRACP-5b水平高于对照组（P<0.05）具有统计学差异,T2DM患者组血清BALP水平低于对照组（P<0.05）具有统计学差异。
结论：1. 2型糖尿病患者较健康对照组患者血清骨吸收指标TRACP-5b水平升高，骨形成指标BALP 水平降低，成骨作用小于破骨作用，骨质疏松的风险有增加的可能性。
（2型糖尿病患者骨质疏松风险的增加可能与BALP及TRACP-5b 存在一定的关系）。
2.骨形成标记物BALP及骨吸收标记TRACP-5b可能是2型糖尿病骨质疏松早期预测的敏感指标。
引言：2型糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性疾病，在造成起心、脑、肾损伤的同时，还极易引起骨重建负平衡，导致骨质疏松。
有研究明，TRACP-5b是骨吸收的特异性标志物,可反映破骨细胞的活性及骨吸收的状态；BALP是骨形成的特异性标志物，可反映成骨细胞的活性及骨形成的状态。
本课题通过对40岁以下T2DM患者观察组和健康人对照组的血清TRCAP-5b及BALP水平测量，分析骨重建失衡的机理，为糖尿病骨质疏松的早期诊断提供可能的理论依据。
1.对象和方法1.1研究对象观察组：选取23例为我院2015年3月~2015年6月住院病人，按WHO标准确诊为T2DM 患者，其中男10例，女13例，年龄30-40岁，平均年龄(65. 5 ±1 0. 7)岁, 体质量指数[ BMI=体重( kg) /身高2( m2)] 平均为24. 4 ±3. 1, 病程6月～21 年, 均为口服降糖药及通过饮食控制血糖健康对照组：同期我院健康体检者21例，其中男10例，女11例，年龄30-40岁，平均年龄xx岁，体重指数xx.且经口服葡萄糖耐量试验排除糖尿病。
抗洒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)定量测定
抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP 5b）定量测定一、简介和用途、适用范围大量的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）是由骨吸收的破骨细胞和有活力的巨噬细胞所释放的。
在血液循环中的TRACP有TRACP 5b 和TRACP 5a二种形式， TRACP 5b 来源于破骨细胞，而TRACP 5a来源于巨噬细胞。
由破骨细胞刚分泌到血液中的TRACP 5b是有活性的酶，但当TRACP 5b在血液循环中被清除之前已无活性，并被降解为碎片。
这样TRACP 5b不会因肝、肾功能受损而在血液中积蓄。
血清中TRACP 5b均来源于破骨细胞，此酶在昼夜的活性水平变化不明显，且不受进食的影响，故可在一天的任何时候都可以采集标本进行检验。
此试剂盒依据测定由破骨细胞释放的TRACP 5b的特异性测定方法。
它可以用于测定骨吸收亢进的病人，如原发性骨质疏松和肾性骨病，也可以预测骨折的危险性，并便于了解抗骨吸收治疗的效果。
在肿瘤病人中，当TRACP 5b 的活力增高提示肿瘤骨转移。
在体外，培养基中TRACP 5b的活力大小代表了破骨细胞数量的多少，因此应用于此试剂盒在进行人的破骨细胞培养时，可用于检测破骨细胞的数量。
二、试验原理测试孔内已包被抗TRACP单克隆抗体→加入校准液、质控品和样品→加入释放剂→有活性的TRACP 5b从结合蛋白质上离解→TRACP 5b与孔内包被的抗TRACP单克隆抗体结合→加入底物pNPP孵育→加入终止液终止反应→在酶标仪上检测结果。
此试验的优点1、所测定的TRACP 5b是由破骨细胞专一释放的。
2、此试验对TRACP 5a或其它磷酸酶没有干扰。
3、溶血不影响结果。
4、不受昼夜变化的影响。
5、不受肝脏、肾脏疾病的影响。
6、不受进食的影响。
7、酶标板容易拆卸，方便检测。
三、试剂盒（一）组成1、酶标板：96孔，已包被抗—TRACP抗体。
2、质控液：3×0.5ml。
3、校准液：3×0.5ml(3×1U/L,3×5U/L,3×10U/L)。
trap染色
trap染色答案：Trap染色是用于检测骨组织、骨细胞中特征物质的染色，使破骨细胞呈红色，背景呈绿色或蓝色。
抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）为破骨细胞的标志酶，特异地分布于破骨细胞中，为破骨细胞所特有，通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物。
在含酒石酸的酸性条件下，trap能将萘酚AS-BI 磷酸盐水解，产生的萘酚AS-BI立即与fast red或六偶氮副品红结合，在酶活性部位形成不溶性的红色染料，通过观察红色染料的形成可间接了解酸性磷酸酶的活性，进一步鉴别及分析破骨细胞的状态。
分析：骨组织切片及trap染色实验步骤1、骨组织脱钙：新鲜骨组织固定于4%多聚jia醛24h 以上。
将组织从固定液取出置于EDTA脱钙液内脱钙（不能用含酸的脱钙液脱钙），每3天换一次脱钙液，至骨组织针扎可以顺利通过为止。
2、取材：在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
3、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。
4、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。
先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。
于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
5、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。
切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。
待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
6、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20m in-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
酶类染色液
酶类染色液北京华越洋生物------------------------------------------------------碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×100ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶-PAS联合染色液6×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色与过碘酸雪夫试剂合用,同时显色碱性磷酸酶和PAS阳性物质。
适用于冰冻切片、石蜡切片,碱性磷酸酶活性部位呈黑色,PAS阳性物质呈紫红色。
染色过程中注意控制过碘酸处理的时间,否则容易褪色。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×2ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数100个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×10ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数101个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 4×2ml 酶类染色40% —20℃,避光,6个月用于石蜡切片、冰冻切片、骨髓细胞涂片、血液涂片等的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明货号：G4561有效期：6个月有效。
产品内容：名称规格（4×10ml）保存试剂(A):TRAP固定液50ml4℃避光试剂(B):TRAP孵育液B1:AS-BI Buffer1ml-20℃避光B2:GBC染色液0.1ml4℃避光B3:TRAP Buffer9ml RT避光临用前，按B1:B2:B3=10:1:90混合，即为TRAP孵育液，即配即用。
试剂(C):苏木素染色液10ml4℃避光试剂(D):甲基绿染色液10ml RT避光产品说明：酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。
各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。
血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚不重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。
该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料：1、蒸馏水、恒温箱2、载玻片、推玻片3、光学显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)血液、细胞涂片：1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP微板法)简介：酸酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液，血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。
TRAP一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达，在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。
Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。
在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色，产物黄色越深，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测，检测得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、96孔板2、水浴锅或恒温箱3、酶标仪编号名称TE0043120TStorage试剂(A): ACP Assay buffer15ml 4℃试剂(B): pNPP 2支-20℃避光试剂(C): T artrate Solution 1ml 4℃试剂(D): p-nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃避光使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、配制检测工作液：①配制显色工作液：取出pNPP，恢复至室温后溶解于ACP Assay buffer，混匀，冰上预冷备用。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色方法的改良
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０１９Ｊｕｌ；３５（７）
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①
②
图 １ 大鼠股骨的破骨细胞，传统 ＴＲＡＰ染色：组织切片表面有颗粒 沉淀 图 ２ 大鼠股骨的破骨细胞，改良 ＴＲＡＰ染色：组织切片表 面干净整洁，无颗粒沉淀
色液（ｐＨ５０～５２）为亮红色，切片染色后背景出现颗粒沉 淀，且染色液不易冲洗，导致水洗时间延长，易脱片。当染色 液 ｐＨ值逐渐升高时，染液逐渐由亮红色转变为淡黄色，组 织上非特异性沉淀密集，背景干扰严重，染色效果不理想，脱 片严重。当 ＴＲＡＰ染色液 ｐＨ值调至 ５０以下时，随着 ｐＨ值 的下降染色液颜色逐渐变浅，且切片染色后非特异性沉淀逐 渐减少，当 ｐＨ４６时，染色液呈淡红色，切片染色后无非特 异性沉淀产生，组织不脱片（表 ２）。
３７℃温箱中温育 ３ｈ，使盐酸副品红充分溶解，冷却至室温 经 ０２２μｍ微孔滤膜制成盐酸副品红溶液，置于 ４℃避光贮 存；称取亚硝酸钠 ４００ｍｇ，溶解于 １０ｍＬ蒸馏水中，制成 ４％ 亚硝酸钠溶液（现用现配）；临用前取 １ｍＬ新配置的亚硝酸 钠溶液，缓慢滴加到等量的盐酸副品红溶液中，边滴加边搅 拌，静置 １ｍｉｎ后备用。（３）萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐溶液配制：称 取萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐 １０ｍｇ，溶解于 ０５ｍＬ的 Ｎ，Ｎ二甲基 甲酰胺中，混匀备用。（４）ＴＲＡＰ染色液：将 ９ｍＬ乙酸铵缓 冲液与 ０５ｍＬ六偶氮副品红溶液混合，微调 ｐＨ４６（传统 方法 ｐＨ５０～５２），再加入 ０５ｍＬ萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐溶液 混匀，后加入酒石酸钾钠 １４１ｍｇ，充分溶解经 ０２２μｍ微孔 滤膜配制成 ＴＲＡＰ染色液。 １．２．２ 取材与固定 采用 ＣＯ２麻醉法处死大鼠，取其股骨， 剔除周边软组织，经 ４％多聚甲醛固定，１０％ＥＤＴＡ脱钙（２８ 天），梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋等步骤后，制 成厚度为 ５μｍ的组织切片。 １．２．３ ＴＲＡＰ染 色 取 大 鼠 骨 组 织 切 片，使 用 改 良 后 的 ＴＲＡＰ染色方法染色。切片于二甲苯Ⅰ脱蜡 ８ｍｉｎ，二甲苯Ⅱ 彻底脱蜡 ８ｍｉｎ，随后经 １００％ Ⅰ、１００％ Ⅱ、９５％ Ⅰ、９５％ Ⅱ、８０％梯 度 乙 醇 中 逐 步 水 化 （各 ５ｍｉｎ），水 洗 ３ｍｉｎ，用 ＴＲＡＰ染色液（传统方法 ｐＨ５０～５２）３７℃避光浸染 ３ｈ， 蒸馏水充分水洗，Ｈａｒｒｉｓ苏木精复染 １ｍｉｎ，蒸馏水充分水 洗，最后切片经梯度乙醇（８０％、９５％ Ⅰ、９５％ Ⅱ、１００％ Ⅰ、 １００％ Ⅱ）逐步脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，置于 ４５℃ 烤片机中烤片 １ｈ，光镜下观察（表 １）。
百度文库-抗酸染色液说明书
广州市外显子生物技术有限公司
抗酸染色液
产品说明：
本试剂盒方法学参照世界卫生组织(WHO)所推荐的标准
Ziehl-Neelsen法，主要用于对结核杆菌等抗酸性菌的化学
染色。
抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋-尼
氏(Zieh1-Neelsen)法；②荧光染料金胺O法(也称金胺－罗
丹明法)，本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加
温。
结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或
脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后，酸性酒精的作用亦
是不容易把它脱色。
利用此特性并以增强的染色液予染色，
然后再以酸性酒精加以处理，使其脱色后再对比染色，此时
抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色)，也就易于鉴别。
产品组成：
货号产品规格储存条件
S-1539 石碳酸复红溶液
酸性酒精溶液
亚甲基蓝溶液
10ml
30ml
10ml
RT
-- 说明书1份
有效期：12 个月。
原包装未开封染色液的使用期限为 12 个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后 6 个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
实验步骤：
1.涂片经火焰固定，加石碳酸复红溶液染色5-10分钟。
2.水洗后沥干。
3.酸性酒精溶液脱色2分钟。
4.水洗，如残存红色，再添加酸性酒精溶液至完全脱掉红色。
5.加亚甲基蓝溶液染色30秒，水洗、干燥、镜检。
结果判定：抗酸性菌呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色。
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP))说明书活性
Stop Solution
3ml×1 bottle
6ml×1 bottle
2-8℃
wash solution
（20ml×20fold）
×1bottle
（20ml×30fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1.serum-coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a sterile container,centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,detectthe composition of cells, Dilut cell suspension withPBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached 1 million / ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,Ifprecipitation appeared,Centrifugal again.
凯基抗酒石酸酸性磷酸酶染液试剂盒
凯基抗酒石酸酸性磷酸酶染液试剂盒KEYGEN tartrate-resistant acid phosohate stain，TRAP stain说明书修订日期：2016.01.14 Cat number：KGA221Store at4℃for3monthsFor Research Use Only（科研专用）一、检验原理在酸性的缓冲液中，细胞内酸性磷酸酶催化底物水解，其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联，生成不溶性的偶氮染料沉淀，当底物中存在酒石酸时，该反应只出现在特异性细胞中。
二、试剂组成及配制*简明试剂组成表试剂组成试剂编号包装规格一、固定液40ml×1瓶二、底物液底物反应液（一）甲液①A粉×1支②B液500μL×1支乙液③C粉×1支④D液，500μL×1支底物反应液（二）①E粉×1支②F液，500μL×1支底物反应液（三）G液，1ml×1支底物反应液（四）①H粉×1支②I液，500μL×1支三、复染液苏木素10ml×1瓶甲基绿10ml×1瓶*具体试剂配制及操作一、固定液：液体，40ml×1瓶新鲜血涂片、细胞涂片或爬片、冰冻切片用固定液固定5~10min，石蜡包埋的切片经脱蜡后不需要再固定。
二、底物反应液（一）、（二）、（三）、（四）的组成及配制：底物反应液（一）组成及配制：组成：（1）A粉×1支（2）B液500μL×1支（3）C粉×1支（4）D液500μL×1支配制：临用前用移液器将B液吸入A粉中充分溶解配成甲液，备用。
再用移液器将D液吸入C粉中充分溶解配成乙液，备用。
最后将甲液与乙液混合成底物反应液（一），现用现配底物反应液（二）组成及配制：组成：（1）E粉×1支（2）F液500μL×1支配制：临用前用移液器将F液吸入E粉中充分溶解配成底物反应液（二），备用。
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b定量测定试剂盒(酶联免疫法) 说明书
操作简介 加100 µL抗-RatTRAP 抗体 Ab 到抗体包被的微量板中 MICROPLAT . ↓ 孵育：60分钟@ 20-24°C 并振荡 ↓ 洗板 ↓ 加100 µL 定标 CAL 或质控 CTRL 到抗体包被的微量板上 MICROPLAT . 加75 µL 0.9% NaCl和25 µL样本到抗体包被的微量板上 MICROPLAT . 加25 µL释放剂 RELEASREAG ↓ 60 minutes @ 20-24°C 并振荡 ↓ 洗板 ↓ 加100 µL 底物溶液 ↓ 孵育：2 hours @ 37°C. ↓ 加25 µL终止液 NaOH ↓ 读板 @ 405nm.
3.B.质量控制 正规的质控样本要求使用几种水平的分析物，以确保每天的结果在可接受的范围内。提供一盒试剂足够的试剂。 质控应作为未知物进行检测。质量控制图应按照测试的结果进行绘画。 3.C.结果计算 绘制每个定标的吸光度均值在纵座标与浓度值在横座标的对数相关图。从定标曲线图中读出质控与未知样本的 U/L结果。样本的结果乘以稀释倍数。 要得到每个样本的RatTRAP结果，从曲线上得到的结果乘以稀释倍数(1:4)。如果样本量为20 µL和80 µL和0.9% NaCl，那么稀释倍数应为5。 样本数据分析 这些数据仅用于作为例子介绍，不能用于任何样本结果的计算。每个标准的准确浓度已打印在瓶子的标签上。 孔 描绘 吸光度 平均吸光度 平均吸光度-空白 结果U/L A1, A2 Blank 0.190 0.190 0.189 A3, A4 Calibrator 1 0.326 0.326 0.137 0.5 U/L 0.327 A5, A6 Calibrator 2 0.602 0.604 0.414 1.5 U/L 0.606 A7, A8 Calibrator 3 0.928 0.931 0.742 3.0 U/L 0.935 A9, A10 Calibrator 4 1.515 1.543 1.354 9.0 U/L 1.572 A11, A12 Sample 0.703 0.697 0.508 1.9 0.692 典型的定标曲线：
抗酒石酸酸性磷酸酶-主要是在多核的破骨细胞和单个核的破骨前体细胞中表达
抗酒石酸酸性磷酸酶-主要是在多核的破骨细胞和单个核的破骨前体细胞中表达，抗酒石酸酸性磷酸酶染色是检测破骨细胞的特异标志性酶抗酒石酸酸性磷酸酶-主要是在多核的破骨细胞和单个核的破骨前体细胞中表达，抗酒石酸酸性磷酸酶染色是检测破骨细胞的特异标志性酶。
学术术语来源---不同氧环境中破骨细胞特异性基因的表达文章亮点：1 文章的特点在于，用破骨前体细胞株体外经核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导为成熟破骨细胞，后分别置于常氧(体积分数20%O2)、组织氧(体积分数7%O2)、低氧(体积分数2%O2)环境中培养，抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测不同氧环境下成熟破骨细胞数目的差异，定量PCR检测不同氧环境下在不同时间破骨细胞特异性基因表达的差异。
2 文章结果显示，低氧下形成的成熟破骨细胞数明显少于常氧和组织氧培养下的破骨细胞数，不同氧环境下特异性基因核因子κB受体活化因子表达没有明显改变，常氧和组织氧培养时肿瘤坏死因子受体相关因子6第5天表达最高，抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白激酶K表达随着氧浓度下降，表达时间延后，组织氧培养下可以保持在最高水平。
关键词：组织构建；骨组织构建；破骨细胞；抗酒石酸酸性磷酸酶；联合诱导；肿瘤坏死因子受体相关因子6，巨噬细胞集落刺激因子；氧浓度；核因子κB受体活化因子；组织蛋白酶K主题词：破骨细胞；骨吸收；骨质疏松；组织工程摘要背景：课题组以往研究证实，氧浓度过低乃至处于低氧时(体积分数2%O2)，破骨前体细胞的增殖及破骨细胞的分化和功能都受到抑制，但体外培养的破骨细胞在不同氧环境下的基因表达未见有相关报道。
目的：实验拟观察不同氧环境下破骨细胞各特异性基因的表达规律，探寻氧环境改变影响破骨细胞分化的表达机制。
方法：将破骨前体细胞株经质量浓度均为10 μg/L的核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导成为成熟的破骨细胞，然后分别置于常氧、组织氧、低氧(体积分数20%，7%，2%)条件下培养，用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞形成的变化，并分别在培养第1-7天收集细胞，通过定量PCR方法检测核因子κB受体活化因子，肿瘤坏死因子受体相关因子6，抗酒石酸酸性磷酸酶，组织蛋白酶K基因mRNA的表达。
人抗酒石酸酸性磷酸酶
人抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平。
用纯化的人TRAP抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入TRAP抗体，再与HRP标记的酒石酸酸性磷酸酶抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
医院检验中心酸性磷酸酶染色操作规程
医院检验中心酸性磷酸酶(ACP)染色操作规程
[原理]
酸性磷酸酶在酸性环境中水解甘油磷酸钠，产生磷酸根。
磷酸根与硝酸铅作用生成磷酸铅，定位于胞浆中的磷酸铅再与硫化铵反应生成棕黑色硫化铅沉淀。
[试剂]
1．2mol/L乙酸缓冲液(pH4．7)：1mol／L乙酸100ml 加1mol/L氢氧化钠54．4ml，再加蒸馏水至500mL。
2．孵育液：乙酸缓冲液12m1，508／L硝酸铅2m1，32g ／L β—甘油磷酸钠4ml，蒸馏水74ml。
3．硫化铵溶液：硫化铵1—2ml加蒸馏水到100m1。
4．4．28／L甲基绿：甲基绿2g加蒸馏水100ml。
[操作]
(1)新鲜涂片滴加95％乙醇10滴，固定10分钟。
(2)水洗后晾干。
放入孵育液37℃2—4小时。
(3)水洗数次，置于10g/L硫化铵染色3分钟；
(4)自来水冲洗后，用20g/L甲基绿复染10分钟，水洗，
待干后镜检。
[临床意义]
(1)单核细胞和组织细胞呈阳性反应。
(2) Gaucher3细胞呈强阳性反应，而尼曼—匹克
(Nie-mann-Picks)氏细胞为阴性。
(3)毛细胞性白血病常为阳性反应(加1—酒石酸后
不被抑制)。
(4) T淋巴细胞为阳性。
且被酒石酸抑制；而B淋
巴细胞为阴性。
[附注]
(1)涂片要新鲜，并应尽早固定染色。
若不能及时测定，
应固定后放冰箱保存。
(2)硫化铵试剂出现深黄色，提示有大量硫离子消耗，若
染色效果不佳，应先考虑硫化铵试剂变质，应予更换
后再做试验。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒
西安赫特生物科技有限公司 XAHT-01-014-019-2015抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒该试剂盒可用于血液、骨髓或组织来源的白细胞的酸性磷酸酶染色。
抗酒石酸酸性磷酸酶是一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达。
在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。
抗酒石酸酸性磷酸酶在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧产生和铁离子转运等有关。
抗酒石酸酸性磷酸酶可以被破骨细胞释放到血液中，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。
使用naphthol AS-BI phosphate及fast garnet GBC salt进行染色。
在酸性环境下，可快速偶联，形成不溶解的染料沉淀。
试剂准备1. Fast Garnet GBC Base溶液的配制：使用前，将1管Fast Garnet GBC Base溶于2mL FastGarnet GBC Base缓冲液中，新鲜配置。
2. 固定液：将25mL柠檬酸溶液，65mL丙酮及8mL 37%甲醛混合。
置于玻璃瓶中，盖紧盖子。
保存于2–8°C，可稳定2个月。
如果明显挥发，应丢弃。
使用说明1. 去离子水37°C预热备用；2. 固定液放置室温至18~26°C，将载片浸泡于固定液中，固定30sec。
去离子水冲洗，不要让载片干燥；也可使用4%多聚甲醛固定；3. 准备两支检测试管，每支中均加入0.5mL Fast Garnet GBC Base溶液与0.5mL亚硝酸钠溶液，将其混匀30sec，静置2min；4. 准备两个100mL烧杯，分别标记为A和B，按照下表将各成分混合，尽量避光操作；试剂烧杯A 烧杯B（对照）45mL预热至37°C的去离子水 45mL1.0mL从第三步得到的混合液 1.0mL0.5mLNaphthol AS-Bl Phosphate溶液 0.5mL2.0mL 乙酸缓冲液 2.0mL1.0mL 酒石酸盐溶液 —5. 准备两个玻片染缸，分别标记为A和B，分别将烧杯的溶液倒入相应的染缸中。
抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒
西安赫特生物科技有限公司 XAHT-01-014-017-2015抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒该试剂盒可用于快速、便捷地检测细胞、组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性的试剂盒。
酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也称酸性磷酸酯酶，是一种在溶酶体中含量较高的酸性水解酶，被认为是鉴定溶酶体亚细胞组分的标志物。
酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。
酸性磷酸酶分为两类，一类为抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)，一类为抗氟离子酸性磷酸酶。
抗酒石酸酸性磷酸酶是一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达。
在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。
抗酒石酸酸性磷酸酶在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧产生和铁离子转运等有关。
抗酒石酸酸性磷酸酶可以被破骨细胞释放到血液中，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。
para-nitrophenol (p-nitrophenol)在碱性条件下，呈黄色产物，可以在405nm检测吸光度。
产物黄色越深，说明酸性磷酸酶检活性越高，反之则酶活性越低。
据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测，检测得到的酸性磷酸酶活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶活性。
包括标准品和空白对照，本试剂盒共可进行120个样品的检测。
使用说明1. 试剂准备：将所有试剂取出，恢复至室温使用。
1) 显色底物溶液：取一管显色底物，溶解于2.5mL 的检测缓冲液中，充分溶解和混匀，冰上放置。
抗酸染色液使用说明书
抗酸染色液使用说明书货号：G1170规格：3×50ml/3×100ml/3×250ml保存：室温干燥保存，有效期12个月。
试剂盒组成：抗酸染色液A50ml/100ml/250ml抗酸染色液B50ml/100ml/250ml抗酸染色液C50ml/100ml/250ml产品说明：抗酸染色用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。
常用于对分枝杆菌属进行初步鉴别。
普通细菌染色比较容易着色，而分支杆菌细胞壁含脂质较多，染色比较困难，必须加热才能被Carbolfuchsin solution 着色。
分枝杆菌菌体着色后，能抵抗盐酸酒精等酸性脱色剂的脱色，而其他细菌和细胞等均被脱色。
当再用碱性美蓝复染后，分支杆菌仍为红色，其他细菌与背景呈蓝色。
操作步骤：1、做一适当厚度的涂片，干燥后火焰固定。
2、滴加抗酸染色液A于玻片上，覆盖住样本，在酒精灯上加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时移开，必要时可续加染色剂以免干涸。
加热3-5分钟。
3、移开火，静置5分钟，待标本冷却后以自来水冲洗。
4、用抗酸染色液B脱色（大约1分钟）至无红色染液脱出为止。
完全脱色可避免产生假阳性结果。
5、自来水缓慢冲洗后，滴加抗酸染色液C复染约30秒，水洗。
6、待干后油镜观察。
预期结果：抗酸菌被染成红色，为抗酸阳性；其它细菌染成蓝色，为抗酸阴性。
背景细胞及杂质也被染成蓝色。
注意事项：1.染色程度可通过改变染色时间或染色温度做适当调整。
2.每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
3.本产品有一定的刺激性和腐蚀性，使用时请穿实验服并戴一次性手套操作。
2013血液检验复习指导：抗酒石酸酸性磷酸酶染色的临床意义
酸性磷酶（ACP）与细胞许多生理功能和病理变化有关。
用聚丙酰胺凝胶电泳证明，血细胞的ACP，由7种同工酶组成（ACP、0、1、2、3、3b、4、5、）。
在某些血液病时，同功酶的出现与疾病特点和占优势的细胞类型有关。
1970年发现毛细胞胞浆里含有一种能对抗酒石酸抑制作用的ACP，经证明为ACP5，并认为用细胞化学染色技术显示此酶，在毛细胞白血病的诊断中有重要意义。
如果患者的细胞为中度或弱阳性反应，则不能诊断为毛细胞白血病。
毛细胞的酶反应积分值与患者的白细胞总数和毛细胞绝对数量有关，但只要有少数毛细胞（2个以上）为强阳性反应，就可考虑诊断为毛细胞白血病。
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抗酒石酸酸性磷酸酶染色液说明书
货号：G1492
规格：4×10ml/4×20ml
保存：-20℃避光，3个月
产品内容：
名称4×10ml4×20ml Storage 试剂(A):TRAP固定液50ml100ml4℃避光
试剂(B): TRAP孵育液B1:AS-BI Buffer1ml2×1ml-20℃避光B2:GBC染色液0.1ml0.2ml-20℃避光B3:TRAP Buffer9ml18ml RT避光
临用前，按B1:B2:B3=10:1:90混合，即为TRAP孵育液，即配即用。
试剂(C):苏木素染色液10ml20ml4℃避光
试剂(D):甲基绿染色液10ml20ml RT避光
产品说明：
酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。
各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。
血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。
该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料：
1、蒸馏水、恒温箱
2、载玻片、推玻片
3、光学显微镜
操作步骤(仅供参考)：
(一)血液、细胞涂片：
1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前
方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
3、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5、复染：苏木素染色液染色5min或甲基绿染色液染色2～3min。
6、水洗、晾干、镜检。
(二)冰冻切片：
1、冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1～2min。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定1～3min。
3、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5、复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
6、水洗、晾干、镜检。
(三)石蜡切片：
1、石蜡切片脱蜡5～10min，重复一次。
2、无水乙醇5min，90%乙醇和70%乙醇各2min。
3、水洗2min。
4、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
5、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
6、切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，浸染45～60min，水洗。
7、复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
8、水洗、晾干、镜检。
染色结果：
阳性颗粒紫红色
细胞核蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)
临床意义：
1、毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制，其他细胞均呈阴性或极弱
阳性。
2、急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP反应不一。
3、T淋巴细胞ACP染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。
B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。
4、戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。
注意事项：
1、TRAP孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色
2、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
3、样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4、组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
5、组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。
应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否
则酶活性会减弱或消失。
6、不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。