常见荧光定量PCR仪资料
实时荧光定量PCR仪技术参数
实时荧光定量PCR仪品牌：美国Bio-Rad型号：CFX96技术要求及配置：1.1检测容量：96x 0.2ml普通PCR反应管,可以使用单个PCR f, 8联反应条，96孔反应板*1.2反应体积：5-30 ^11.3升降温方式：半导体加热，制冷*1.4最大升温速度：5C /秒*1.5最大降温速度：5C /秒*1.6温度控制范围：0-100 C1.7温度精确度：土 0.2 C1.8温度均一性：土 0.4 C*1.9具有温度梯度功能，温度梯度范围：30-100 C,不低于室温30C，温度梯度温差范围：1-24 C1.10 LED冷光源或高能卤钨灯激发光源，光源使用寿命》15000小时以上1.11检测器材采用6个独立的检测器1.12荧光激发波长通道：*1.13 可检测的荧光素包括：FAM? SYBFGreen I?、VIC?、HEX? TET? CalGold 540?、ROX? TEXAS RED? Cal Red 610?、Quasar 670?和 Quasar 705?等1.14检测灵敏度：能检测1拷贝人基因组DNA S因1.15顶部扫描检测1.16动态范围：10个数量级*1.17中文和英文操作、分析软件*1.18试剂完全开放，可以使用任何进口和国产试剂*1.19数据分析模式：标准曲线定量、融解曲线、△ CT , Paffla分析法进行基因表达分析、内参基因分析和扩增效率计算、多个内参基因的表达分析、等位基因分析、终点分析*1.20 具有多个反应板分析软件，能够进行反应板之间的校正，确保分析结果准确。
*1.21 不依赖于计算机运行，电脑死机后仪器仍然能够按照已编程序正常运行，并导出实验数据，不需要重新做实验。
2．配置：2.1定量PCF仪主机1台2.2分析控制软件 1 套2.3电脑1套：酷睿双核5400 (2.5G)/1G内存/320G硬盘/DVD光驱/键盘鼠标/19LCD 宽/XP-P-SP3专业系统2.4大容量品牌UPS 1台，1000V Y停电后能维持供电2小时以上。
实时荧光定量PCR仪介绍
实时荧光定量PCR仪介绍 | QPCR的国际标准---MIQE | 联系我们仪器名称实时荧光定量PCR仪英文名称Real-Time QPCR System国产/进口进口产地/品牌美国品牌，德国制造型号Mx3000P/Mx3005P实时荧光定量PCR仪【性能参数】美国安捷伦Stratagene公司实时荧光定量PCR仪Mx3000P/Mx3005PMx3000P系统性能指标：激发光源：石英卤钨灯检测器：扫描光电倍增管(PMT）多重检测：四个光学通道，并提供用户选择的滤光系统加热系统：Peltier的热循环加热模块内置芯片在断电或连接中断时自动保存数据样品量：96孔高通量平台，反应体系10-100ul外形尺寸：33cm(宽) x 46cm(长) x 43cm(高)，重量：20kgMx3000P系统参数配置：动力学范围：10个数量级激发光范围：350—750nm发射光范围：350—700nm温度均一性：+/- 0.25℃温度精确性：+/- 0.25℃升降温速率：2.5℃/秒兼容所有常规荧光染料：FAM、SYBR Green I 、Texas Red、ROX、TET 、Cy3、Cy5、HEX、JOE、VIC 、TAMRA、ALEXA Fluor 350等标准配置的滤光片组为：Cy5，HEX，FAM，ROX具有快速QPCR功能(反应时间在50分钟内)Mx3000P软件功能：•分析功能强大：通过一台计算机可连接和控制6台QPCR仪;可同时分析12个独立的96孔板;也可以在同一块板上进行和分析不同的实验•设置和运行简单：根据实验目的和方法不同，可选择多种实验设置：（多重）绝对定量PCR、相对定量PCR、Sybr Green定量及熔解曲线分析、SNP分析、Molecular Beacon熔解曲线分析等使用简便：实验条件设置、反应过程监控、数据显示分析三大功能模块从同一界面链接，直观简便•实时观测和数据分析：反应过程中可实时监测和收集荧光信号，在实验还未结束的情况下便可对现有数据进行分析提供多种数据显示模式：用户可根据自己需要选择：扩增曲线模式、熔解曲线模式、标准曲线模式、原始荧光信号模式、最终定量结果模式等•多种数据传输格式：所有结果可以原始数据的形式显示，也可输出到Excel 中作进一步分析，曲线和表格等结果可直接用于PowerPoint、Text等文档中。
罗氏荧光定量pcr仪器
罗氏荧光定量PCR仪器简介罗氏荧光定量PCR仪器（Roche Real-Time PCR System）是一种用于荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）的仪器。
PCR技术是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，可以在体外大量复制DNA序列。
荧光定量PCR通过荧光信号的强度来定量PCR反应产物的数量，具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点，被广泛应用于生命科学研究、疾病诊断和药物研发等领域。
罗氏是一家全球领先的医药和诊断解决方案提供商，旗下的荧光定量PCR仪器采用先进的技术和设计，为用户提供可靠和精确的PCR分析结果。
主要特点1.高灵敏度：罗氏荧光定量PCR仪器采用先进的光学系统，能够检测和定量非常低浓度的荧光信号，提高了实验的灵敏度。
2.高准确性：仪器内置的精确温度控制系统和优化的PCR反应条件，保证了实验结果的准确性和可重复性。
3.高通量：罗氏荧光定量PCR仪器支持多样品同时进行PCR反应，大大提高了实验的通量，节省了时间和成本。
4.灵活性：仪器配备了多样的PCR试剂和芯片，可以适应不同实验需求的扩增反应。
5.友好的用户界面：仪器具有直观的用户界面和易于操作的软件，用户可以轻松设置实验参数、监控实时反应和分析数据结果。
主要应用罗氏荧光定量PCR仪器在各种领域都有广泛的应用，包括但不限于以下几个方面：1.基因表达分析：通过定量PCR技术，可以准确测量基因在不同组织、细胞或疾病状态下的表达水平，帮助科研人员了解基因的功能和调控机制。
2.微生物检测：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于检测和定量微生物如细菌、病毒、真菌等的核酸序列，广泛应用于食品安全、临床微生物学和环境监测等领域。
3.病毒载量检测：病毒载量是评估病毒感染严重程度的重要指标，罗氏荧光定量PCR仪器可以定量分析病毒的核酸含量，用于临床病毒学研究和病毒感染诊断。
4.药物研发：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于药物研发过程中的基因表达分析、药物代谢相关基因的筛选和药物安全性评估等方面，为药物研发提供有力支持。
荧光定量PCR仪技术参数
荧光定量PCR仪技术参数●▲通道数：6色激发光通道和6色检测光通道可自由组合●▲模块规格：支持4种模块——标准96孔模块、快速96孔模块、384孔模块和微流体芯片模块，35分钟可完成384孔板40个循环反应●反应体积：标准96孔模式10-100 μL、快速96孔模式、10-30 μL；• 384孔模式：5-20μL；•微流体芯片模快：1μL●支持耗材：常规96孔(0.2 mL) 反应板与光学盖膜•快速96孔(0.1 mL) 反应板与光学盖膜•384孔反应板与光学盖膜,384孔微流体芯片●▲温控模块最高升降温速率：6.5°C/秒(快速96孔模块), 4°C/秒（标准96孔模块）, 3°C/秒（384孔模块）●温度范围：4°C–100°C●温度准确度：±0.25°C●温度均匀性：±0.50 °C，温度范围35°C 至95°C●熔解曲线分辨率：小至0.04°C●▲光学系统：卤钨灯、6色激发滤光片，6色检测滤光片、CCD成像●安装时已校准染料：FAM™, SYBR®, SYTO®9 (MeltDoctor™), Fluorescein, SYPRO®Orange，VIC®, JOE™, TET™, HEX™，TAMRA™, NED™, BODIPY® TMR-X，Texas Red®，LIZ™，Alexa Fluor®, Joda-4●▲被动参照染料：软件支持Rox荧光校正去除移液误差●数据采集：对所有反应孔收集所有检测光通道的数据，试验结束后反应板设置可修改●触摸屏：LCD/ Full VGA (640x480)/32K 色●符合欧盟体外诊断医疗器械指令(98/79/EC) 的要求供应商具备2019新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂盒的生产能力全自动核酸提取仪技术参数。
实时荧光定量PCR仪
实时荧光定量PCR仪仪器原理及应用实时荧光定量PCR仪是一种基于PCR技术的分子生物学仪器。
它可以实时监测PCR 反应过程中的荧光信号，从而实现对靶标DNA的定量分析。
该仪器的原理基于原始的聚合酶链式反应（PCR）技术，通过PCR产生的DNA序列与特定荧光探针的结合，释放出荧光信号进行定量测量。
实时荧光定量PCR仪在生物医学研究、基因表达分析、病原体检测等方面具有广泛的应用。
通过该仪器，科研人员可以快速、准确地检测靶标DNA的含量，并获得相应数据用于后续分析。
仪器特点实时荧光定量PCR仪具有以下几个特点：1. 高灵敏度实时荧光定量PCR仪可以检测非常低浓度的靶标DNA，甚至达到单个分子的级别。
这一特点使得该仪器在医学诊断和疾病早期检测中具有很大潜力。
2. 高准确性该仪器采用荧光定量技术，能够实时监测PCR反应过程中的荧光信号，从而避免了传统PCR反应后的测量误差。
同时，实时荧光定量PCR仪还具有内标校正功能，能够准确地计算出靶标DNA的含量。
3. 广泛应用实时荧光定量PCR仪在生物医学领域有着广泛的应用。
它可以用于基因表达分析、病原体检测、遗传疾病的检测等方面。
同时，该仪器还可以应用于农业科学、环境监测、食品安全等领域。
使用方法使用实时荧光定量PCR仪进行实验需要以下步骤：1. 样本制备首先需要从待测样品中提取目标DNA，并进行纯化和扩增。
这一步骤可以根据具体实验目的选择不同的提取方法。
2. 反应液的配置将所需的PCR反应药物配置出合适的反应液。
其中包括靶标DNA的引物和荧光探针，以及聚合酶和其他辅助物质。
3. 仪器设置将PCR反应液加入到实时荧光定量PCR仪的孔板或管条中，然后将样品放入仪器中。
根据实验需要设置合适的温度和时间条件。
4. 实时检测启动仪器后，开始进行PCR反应和实时荧光检测。
仪器会不断地记录PCR反应过程中的荧光信号，并将数据输出保存。
5. 数据分析使用相应的分析软件对实时荧光定量PCR仪的输出数据进行处理和分析。
常见荧光定量PCR仪汇总讲解
而3320为双通道检测（FAM，HEX），支持三种荧光染料
杭州 博日FQD-48a
性能描述
FQD-48a具有单通道和4通道两种规格，通
过硬件转换可升级至4通道，支持0.2mlPCR 管，支持本公司体系：40ul 梯度温度范围：1℃~24℃ 升温速率：4.0℃/S 光路：LED激发+PMT检测
杭州 博日FQD-66A
孔数：96孔（10-100ul）检测1小时,384孔（5-20ul）检
测40min 材料：专用板，理论支持本公司PCR体系：40ul
集多个优点于一身，目前市面上最强悍的PCR仪
LightCycler Nano
优缺点：
检测通道：12个以上 加热模式：空气加热/冷却
升温：20℃/S
孔数： 32孔（4×8联管） 理论支持本公司PCR体系：40ul,价格为LC480的一半
进口定量PCR仪器厂商
市 场 占 有 率
ABI
ROChe （罗氏）
Bio-Rad （伯乐）
市 场 价 格
ROChe ABI Bio-Rad
ROChe
厂家介绍：
市 场 罗氏公司始创于1896年，总部位于瑞士巴塞尔，主要涉及药品、医疗诊 占 断、维生素和精细化工、香精香料等四个领域。LightCycler以运行速度 有 快而著称，在国内市场占有率单款最高 率
支持本公司体系：40ul
杭州 博日 linegene-3310/3320
性能描述
linegene-3310/3320具体的型号为FQD -33a 。最多检测33个样本， 支持0.2mlPCR管和8联管，支持本公司体系：40ul 升温速率：6℃/秒，通过Peltier技术控温 光路：LED激发+PMT检测 其中3310为单通道检测（FAM），支持两种荧光染料 （FAM/SYBR）
罗氏实时荧光定量PCR仪课件
02
罗氏实时荧光定量PCR仪 介绍
仪器的基本结构
仪器外观
操作界面
罗氏实时荧光定量PCR仪外观为长方 体，尺寸适中，便于实验室放置。
仪器配备彩色触摸屏，操作界面友好 ，方便用户进行参数设置和实验操作 。
内部结构
仪器内部包括加热模块、光学检测系 统、电脑控制系统等部分，各部分协 同工作完成PCR扩增和荧光检测。
制定仪器的维护保养计划，按照 计划进行保养，保证仪器的正常
运行和使用寿命。
THANKS
感谢观看
通过比较不同样本之间的基因表达数据，可以筛选出差异表达的基 因，进一步研究其在生物学过程中的作用。
基因表达调控机制研究
通过实时监测基因转录水平的变化，有助于深入了解基因表达的调 控机制，为相关疾病的研究和治疗提供线索。
在病毒检测中的应用
1 2 3
病毒载量测定
利用罗氏实时荧光定量PCR仪，可以快速、准确 地测定病毒载量，为临床诊断和治疗提供依据。
02
根据错误提示查找相关资料或联系技术支持解决。
仪器运行结果不准确
03
检查样品是否符合要求，运行程序是否正确，仪器是否经过校
正等。
仪器的保养与校正
定期清洗仪器内部
根据仪器使用情况定期清洗仪器 内部，包括清洗反应管、更换滤
芯等。
校正仪器
定期邀请专业技术人员对仪器进 行校正，确保仪器准确性。
建立维护保养计划
详细记录实验数据，包括荧光信号的 变化、扩增曲线等，并对数据进行整 理和分析。
实验后处理
仪器清洁与保养
数据审核与报告撰写
实验结束据进行审核，撰写详细的实验报 告，包括实验目的、方法、结果和结论等 。
样品处理
常见荧光定量PCR仪汇总
常见荧光定量PCR仪汇总常见的荧光定量PCR仪（Fluorescence Quantitative PCR Instrument）主要有以下几种：1. Applied Biosystems 7500 Fast System：该系统是ABI公司旗下产品之一，具有优秀的性能和稳定性。
其特点包括快速准确的PCR结果、高通量PCR样品处理能力以及灵活的试剂和探针选择。
该系统可应用于基因表达分析、SNP检测、病毒定量等多个领域。
2. Bio-Rad CFX96 Touch System：这个PCR仪是Bio-Rad公司的产品之一，具有高精度的温控技术和可靠的荧光检测系统。
它支持多种共轭染料和探针，可以同时检测多个靶序列，适用于基因表达分析、蛋白质分析和病毒检测等多个应用领域。
3. Roche LightCycler 480 System：这是一款高通量的PCR仪，可同时处理多达384个孔的样品，适用于高通量基因表达分析和蛋白质研究。
该系统具有高分辨率荧光检测和精确的温度控制能力，可提供更准确和一致的PCR结果。
4. Thermo Fisher QuantStudio 6 Flex Real-Time PCR System：该PCR仪具有灵活多样的探针和染料选择，可以满足不同的研究需求。
它具有宽广的检测动态范围和高灵敏度，适用于基因表达分析、SNP分型和病毒定量等多个应用领域。
5. Qiagen Rotor-Gene Q：这是一款高通量PCR仪，可同时处理多达72个样品。
它具有快速高效的PCR扩增速度和精确的荧光检测能力，适用于基因表达分析、基因突变检测和染色体融合分析等多个研究领域。
6. Stratagene Mx3000P/QPCR System：这是Agilent Technologies旗下的产品，具有高精度和稳定性的特点。
它支持多种探针和染料，可以同时检测多个靶序列，适用于基因表达分析、非编码RNA研究和表观遗传学研究等多个领域。
常见荧光定量PCR仪汇总
ROChe
03
ROChe （罗氏） Bio-Rad （伯乐） 市场价格 ABI Bio-Rad
如何选择荧光定量 PCR 仪器？
1 、仪器使用的广泛程度
2 、仪器的检测通量（反应孔数）
3、仪器的通道数量
4、耗材的开放性
5、硬件设计特点
6、运行速度
7、灵活性
PART 01
Chromo 4
Opticon 2
CFX96
IQ 5
代理公司：
上海劢瑞，上海甄明，创博环球，北京赛伯乐，黑龙江万联顺等
优缺点：
检测孔数：96孔板 激发光源：6色LED 加热模块：其基座为半导体加热模块，反应模块为专利蜂巢设计，升温5℃/S，温控准确性好。 运行时间：55min完成40个循环。 检测通道：5通道，PMT扫描机制，无需ROX校正 可以脱离电脑控制，独立运行 具有温度梯度功能
LightCycler
优缺点：
优缺点：
检测通道：6通道 加热模式：空气加热/冷却 升温：20℃/S 孔数：32孔 材料：玻璃毛细管 20ul和100ul 两种规格 实验成本：体系小，成本低，一般是ABI的一半 理论支持本公司PCR体系：20ul
LightCycler 2.0
检测通道：6通道 加热模式：半导体加热制冷模块 升温：5℃/S 孔数：96孔（10-100ul）检测1小时,384孔（5-20ul）检 测40min 材料：专用板，理论支持本公司PCR体系：40ul 集多个优点于一身，目前市面上最强悍的PCR仪
LightCycler 480
优缺点：
优缺点：
LightCycler Nano 检测通道：12个以上 加热模式：空气加热/冷却 升温：20℃/S 孔数： 32孔（4×8联管） 理论支持本公司PCR体系：40ul,价格为LC480的一半
CFX 系列实时荧光定量 PCR 仪说明书
CFX 系列实时荧光定量 PCR触摸屏可让您无需电脑即可并在实验过程中实时浏览独特的离线操作模式 使之成为真正无需外接电脑控制的定量 PCR 仪的设计理念 每台仪器的光学系统出厂时都经过校正 安装使用过程中也反应模块设计实现超大大缩短运行时间配的温度梯度功能是帮助您筛选最佳反应条件的有力工具 节省通道多重5 µl 也能得CFX384 Touch反应也能得到理想运行结束后实验结果可作为您更多信息 请浏览 /qpcrsystems2.5˚C/sPeltier0–100˚C±0.2˚C90˚C 10秒达到LEDsFiltersFilters Photodiodes通过彩色 LCD触摸屏完成仪器操控和运行状态实时监控CFX96 Touch Deep Well ™ 定量 PCR 仪1020 3040CFX Connect ™ 定量 PCR 仪及双通道检测器320 10 20 30 40500 10 20 30 40 50432320 10 20 30 40500 10 20 30 40 50302520151034 5 6 7 8 90 10 20 30 40 50432010203040502345010203040502345人性化的界面 高效简洁的设置向导■ CFX Manager Software 3.0 提供了多种相对定量的分析方法供您选择 包括 法 法 多内参校正法 结Gene Study 无限量数据合并分析■ CFX Manager 能与 LIMS 系统兼容 并符合美国 FDA 21 之要求伯乐生命医学产品 上海 有限公司地址 上海市浦东东方路 18 号保利广场 E 栋 3 楼电话 021 - 6169 8500传真 021 - 6169 8599邮编 200120北京办事处地址 北京朝阳区曙光西里 5 号A 栋凤凰置地广场 22 楼电话 010 - 5939 0088传真 010 - 5939 0160邮编 100028广州办事处地址 广州市环市东路 403 号广州国际电子大厦 1302 - 03 室电话 020 - 8732 2339传真 020 - 8732 2332邮编 510095中国呼叫中心 800 - 820 - 5567 ************欢迎访问 Ordering Information Catalog # Description184-5384 CFX 384™ Optical Reaction Module, for use withC1000 Touch thermal cycler chassis, includes CFXManager software, license for qbase PLUS software,communication cable, reagents, consumables185-5484 CFX384 Touch Real-Time PCR Detection System,includes C1000 Touch thermal cycler chassis,CFX384 optical reaction module, CFX Managersoftware, license for qbase PLUS software,communication cable, reagents, consumables184-5096 CFX96™ Optical Reaction Module, for use withC1000 Touch thermal cycler chassis, includes CFXManager software, license for qbase PLUS software,communication cable, reagents, consumables185-5196 CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System,includes C1000 Touch thermal cycler chassis,CFX96 optical reaction module, CFX Managersoftware, license for qbase PLUS software,communication cable, reagents, consumables184-5001 CFX Manager Software, Security Edition, includes 1user license, installation CD, HASP HL key184-5025 Precision Melt Analysis Software, includes 2 userlicenses, installation CD, 2 HASP HL keys, meltcalibration kit184-5008 CFX Manager Software, Chinese Edition, includes3user licenses, installation CD, 3 HASP HL keys185-4096 CFX96 Touch Deep Well Real-Time PCR DetectionSystem, includes C1000 Touch thermal cyclerchassis, CFX96 Deep Well™ optical reactionmodule, CFX Manager software, license forqbase PLUS software, communication cable,reagents, consumables185-4095 CFX96 Touch Deep Well Real-Time PCR DetectionSystem, includes C1000 Touch thermal cyclerchassis, CFX96 Deep Well optical reaction module,CFX Manager software, license for qbase PLUSsoftware, communication cable184-4096 CFX96 Deep Well Optical Reaction Module, for use with C1000 Touch thermal cycler chassis, includesCFX Manager software, license for qbase PLUSsoftware, communication cable, reagents,consumables185-5200 CFX Connect Real-Time PCR Detection System,includes CFX Connect thermal cycler chassis, CFXConnect optical reaction module, CFX Managersoftware, license for qbase PLUS software,communication cable, reagents, consumables 185-5201 CFX Connect Real-Time PCR Detection System,includes CFX Connect thermal cycler chassis, CFXConnect optical reaction module, CFX Managersoftware, license for qbase PLUS software,communication cable184-5008 CFX Manager Software, Chinese Edition, includes 3user licenses, installation CD, 3 HASP HL keys184-5025 Precision Melt Analysis Software, includes 2 userlicenses, installation CD, 2 HASP HL keys, meltcalibration kit172-5200 SsoFast™ EvaGreen® Supermi x 2 ml, 2x real-timePCR mix, contains dNTPs, Sso7d fusion polymerase,MgCl2, EvaGreen dye, stabilizers, for 200 x 20 μlreactions172-5210 SsoFast™ EvaGreen® Supermix with Low ROX 2ml, 2x real-time PCR mix, contains dNTPs, Sso7dfusion polymerase, MgCl2, ROX passive referencedye, stabilizers, for 200 x 20 μl reactions172-5120 iTaq™ Universal SYBR® Green Supermix 2 ml (2 x1ml), 2 x qPCR mix, contains dNTPs, iTaq DNApolymerase, MgCl2, SYBR® Green I, enhancers,stabilizers, fluorescein, ROX normalization dyes, for200 x 20 μl reactions172-5130 iTaq™ Universal Probes Supermix 2 ml (2 x 1 ml),2 x qPCR mix, contains dNTPs, iTaq DNApolymerase, MgCl2, enhancers, stabilizers, ROXnormalization dyes, for 200 x 20 μl reactions172-5270 SsoAdvanced Universal SYBR® Green Supermix 2ml (2 x 1ml), contains dNTPs, Sso7d fusionpolymerase, MgCl2, SYBR® Green I, enhancers,stabilizers, fluorescein, ROX normalization dyes, for200 x 20 μl reactions172-5280 SsoAdvanced Universal Probes Supermix 2 ml (2 x1 ml), contains dNTPs, Sso7d fusion polymerase,MgCl2, enhancers, stabilizers, ROX normalizationdyes, for 200 x 20 μl reactions172-5996 SsoFast EvaGreen Control Assay, predesigned kitfor verifying performance of real-time PCR systemsor training new users, includes template DNA,primers, supermix, waterHSP-9601 Hard-Shell® Thin-Wall 96-Well Skirted PCR Plates,white shell, clear well, 50MSB-1001 Microseal® 'B' Adhesive Seals, optically clear, 100China/Printed in China13-121 0613。
qPCR仪器介绍(新)
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
二、荧光定量PCR仪器的组成
• 滤光镜
二、荧光定量PCR仪器的组成
• 荧光检测器 1. 光电倍增管 （PMT）；MX3005P；rotor-gene;博日Fqd系列；国产 2. 电荷耦合元件 （CCD）；ABI 7500；V7；7300; light cycler 480II；iQ5 3. 光敏二极管（PHT）；stepone / stepone plus; light cycler 2.0 ;CFX96； PMT/PHT是电子管技术，CCD是半导体技术
SYBR® Green I 染料
part1荧光定量PCR技术发展及原理
SYBR® Green I 染料
part1荧光定量PCR技术发展及原理
SYBR® Green I 染料
part1荧光定量PCR技术发展及原理
SYBR® Green I 染料的缺点
非特异结合任意 双链DNA
非特异性PCR产物信号
part1荧光定量PCR技术发展及原理
PCR
一滴残留在裙子上的精液使得美 国总统Bill Clinton不得不坦承他与白 宫实习生有不正当的关系。
将极微量的生物标本化为可供鉴定的 现代技术正是PCR具有的特色之一。 这也是分子生物医学令人震撼的一例。
part1荧光定量PCR技术发展及原理
PCR 的发展史
市面现有荧光定量PCR仪器对比介绍简介-pyp
ABI 仪器光学路径
ABI 仪器：校正染料ROX
Rox：(5-carboxy-x-rhodamine) 5-羧基-X-罗丹 明
Rox的功能： 1）校正单次反应运行中由于泡沫或蒸发/冷凝而导致的信号改变； 2）为故障分析提供一项强有力的诊断工具：每次循环采集参比染料信号，不受PCR反 应影响； 3）均一化校正由于移液误差或蒸发所导致的批内体积差异； 4）均一化校正批间体积差异，提供更连续一致的批间重复Ct值。
4、加热系统：半导体加热系统
特点： 温控范围大（ 4℃ to 99℃） ，均 一性（＜±0.5 ℃）； 灵活性好：可以做温度梯度； 样本数量多（96孔和384孔)； 但其加热速度比空气加热稍慢。
风扇制冷
5、制冷系统
压缩机制冷
半导体制冷
优点 缺点
风扇制冷
压缩机制冷
半导体制冷
价格低
制冷快； 精确性好
➢ 国产 • 杭州博日（Bioer ） • 上海宏石（Slan） • 西安天隆（Tianlong） • 上海枫岭（Funglyn） • 厦门安普利（Amplly） • 广州达安（DA） • 上海科华（Fluocycler）
2007年：ABI Step one/Plus
2010年：ABI ViiA 7
样本容量
32×（10-20ul）
32 ×(20ul，100ul)
检测通道模式
F1: SYBR Green I; F2：LC Red 640; F3: LC Red 705
Roche LC 480 Roche LC480 热循环系统组成和特点：
1. Thermal Block Cycler包括了样本底座（96孔或384孔），Peltier元件，配合 Therma-BaseTM 热均衡器，银质散热块和电子元件。
ABI实时荧光定量PCR仪OLYMPUS共聚焦显微镜简介资料
运输和传递，递质受体，离子内外流。 （七）微生物学和寄生虫学：细菌、寄生虫形态结构（表面和
内部结构）； （八）病理学研究及病理学临床诊断：活检标本的快速诊断，
肿瘤诊断，自身免疫性疾病的诊断，宫颈上皮细胞涂片诊断 受体，离子通道，细胞内离子含量、分布及其动态分析。
硬件：激光源 共聚焦显微镜 步近器 检测器 光电倍增管 计算机 图象输出设备（显示器 彩色打印机）。 软件：显微镜自动控制和扫描系统、图像处理和分析系统
原理简图
1、由于pinhole的 存在，使得部分杂
散光（红黄线部分） 没有被PMT探测器 探测到，从而提高 了成像效果。
2、通过对样品在xy方向上的逐点扫 描，可以形成二维
ABI Step One / Step one plus
ABI Step one system
光源系统：LED激发+PMT扫描机制 检测孔数：48孔 检测通道：3通道 理论支持本公司PCR体系：30ul
ABI Step one plus system
检测孔数：96孔 检测通道：4通道 加热模块：半导体加热模块，升温3℃/S 具有独特的Veriflex TM 加块，控温效果大大提高 理论支持本公司PCR体系：30ul
（一）细胞生物学：细胞结构：细胞骨架，细胞膜结构、流动 性、受体，细胞器结构和分布变化，细胞凋亡、细胞周期等。
（二）生物化学：酶、核酸、荧光原位杂交、受体分析。 （三）药理学：药物对细胞的作用及其动力学分析。 （四）生理学：膜受体、离子通道、细胞内离子含量、分布、
动态。 （五）遗传学和胚胎学：细胞生长、分化，细胞组织的三维结
荧光定量PCR仪参数
ABI 7500 荧光定量PCR仪参数1.工作条件220V电压，10A电源。
相对湿度<80%。
热功率<2600W2 技术规格2.1 热循环系统2.1.1加热冷却方式半导体2.1.2升降温速率3.5℃/秒以上*2.1.3 温度范围4℃-99.9℃*2.1.4 控温精确度±0.25℃2.2 样品系统2.2.1样品通量单管、8联管、96孔板，并无需适配器2.2.2反应体积10-100ul2.2.3运行时间<2小时2.2.4机械设计样品无需移动2.2.5反应后保存可降温至4℃保存2.3 荧光系统2.3.1 荧光染料FAM TM/SYBR Green I, VIC /JOE TM,NED TM/TAMRA TM/Cy3, ROX TM/Texas Red, Cy52.3.2荧光校正软件支持Rox荧光校正去除误差2.4 光学系统2.4.1激发光源卤钨灯，配备时间监测及自我诊断程序2.4.2滤光系统五色光源滤光片结合荧光滤光片（630nm-650nm，570nm-590nm，540nm-550nm，510nm-530nm，455nm-485nm）2.4.3检测系统CCD摄像机一次成像2.4.4 检测方式实时动态检测，动态显示，可同时检测5种荧光染料，必须有520nm，550nm，580nm，610nm，650nm这五块滤光片*2.4.5 实验要求必须能同时检测FAM、VIC、TAMRA、ROX四种荧光，能进行探针法定量，开展CNV研究2.5 检测性能2.5.1检测灵敏度能检测到≤10个拷贝数的模板，置信度99.7%2.5.2线性范围109以上2.5.3检测分辨率99.7%置信度下能有效分辨5000和10000模板拷贝数的差异2.6 分析功能2.6.1定量量型能进行绝对定量和相对定量,可同时对无限个数据同时进行分析，比对和作柱形图2.6.3分析应用可以进行熔解曲线分析、突变分析、等位基因分析等2.7 软件系统2.7.1 定量PCR软件有绝对定量和相对定量软件*2.7.2PrimerExpress软件有，含正版引物与探针设计软件，可进行Taqman MGB探针的设计及合成2.7.3 荧光校正软件有*2.7.4 拷贝数分析软件有，含CopyCaller分析软件2.7.5独立相对定量软件有，可同时对无限个数据同时进行分析*2.7.6 SNP分析软件有，含AutoCaller分析软件2.8 试剂盒2.8.1安装试剂盒有2.8.2基本试剂盒原厂家可提供完备的基本试剂盒供选择2.8.3SNP试剂盒可提供原厂家500万种SNP检测试剂盒2.8.4转基因检测试剂盒原厂家可提供国际标准的转基因检测试剂盒2.8.5拷贝数试剂盒可提供原厂家160万种SNP检测试剂盒并有配套分析模块2.8.6药物代谢酶分型试剂盒原厂家可提供药物代谢酶SNP分型试剂盒2.8.7 MicroRNA分析试剂盒原厂家可提供包含有针对人、小鼠、大鼠、拟南芥、果蝇和线虫的MicroRNA分析产品。
ABI7500荧光定量PCR仪参数
ABI 7500 荧光定量PCR仪参数1. 工作条件 220V电压，10A电源。
相对湿度<80%。
热功率<2600W2 技术规格2.1 热循环系统2.1.1 加热冷却方式半导体2.1.2 升降温速率3.5?/秒以上*2.1.3 温度范围 4?-99.9?*2.1.4 控温精确度 ?0.25?2.2 样品系统2.2.1 样品通量单管、8联管、96孔板，并无需适配器2.2.2 反应体积 10-100ul2.2.3 运行时间 <2小时2.2.4 机械设计样品无需移动2.2.5反应后保存可降温至4?保存2.3 荧光系统TMTM2.3.1 荧光染料 FAM/SYBR Green I, VIC /JOE,TMTMTM NED/TAMRA/Cy3, ROX/Texas Red, Cy5 2.3.2 荧光校正软件支持Rox 荧光校正去除误差2.4 光学系统2.4.1 激发光源卤钨灯，配备时间监测及自我诊断程序2.4.2 滤光系统五色光源滤光片结合荧光滤光片(630nm-650nm，570nm-590nm，540nm-550nm，510nm-530nm，455nm-485nm) 2.4.3 检测系统CCD摄像机一次成像2.4.4 检测方式实时动态检测，动态显示，可同时检测5种荧光染料，必须有520nm，550nm，580nm，610nm，650nm这五块滤光片 *2.4.5 实验要求必须能同时检测FAM、VIC、TAMRA、ROX四种荧光，能进行探针法定量，开展CNV研究2.5 检测性能2.5.1 检测灵敏度能检测到?10个拷贝数的模板，置信度99.7%92.5.2 线性范围 10以上2.5.3 检测分辨率 99.7%置信度下能有效分辨5000和10000模板拷贝数的差异 2.6 分析功能2.6.1 定量量型能进行绝对定量和相对定量, 可同时对无限个数据同时进行分析，比对和作柱形图2.6.3 分析应用可以进行熔解曲线分析、突变分析、等位基因分析等 2.7 软件系统2.7.1 定量PCR软件有绝对定量和相对定量软件*2.7.2PrimerExpress软件有，含正版引物与探针设计软件，可进行Taqman MGB探针的设计及合成2.7.3 荧光校正软件有*2.7.4 拷贝数分析软件有，含CopyCaller分析软件2.7.5 独立相对定量软件有，可同时对无限个数据同时进行分析*2.7.6 SNP分析软件有，含AutoCaller分析软件2.8 试剂盒2.8.1 安装试剂盒有2.8.2 基本试剂盒原厂家可提供完备的基本试剂盒供选择2.8.3 SNP试剂盒可提供原厂家500万种SNP检测试剂盒 2.8.4 转基因检测试剂盒原厂家可提供国际标准的转基因检测试剂盒 2.8.5 拷贝数试剂盒可提供原厂家160万种SNP检测试剂盒并有配套分析模块 2.8.6 药物代谢酶分型试剂盒原厂家可提供药物代谢酶SNP分型试剂盒 2.8.7 MicroRNA分析试剂盒原厂家可提供包含有针对人、小鼠、大鼠、拟南芥、果蝇和线虫的MicroRNA分析产品。
实时荧光定量PCR仪比较表
ABI Step One/Plu
s
Bio-Rad CFX96
Eppend orf:2 / 4
Color Systems
RotorGene 6000
Roche LightCy
cler 1.5/2.0
Roche LC480
检测动态范 围
10个
10个
9个
9个
9个
9
10个
9个
10
简评
宽广的动态范围有利于摸索实验条件
s
Bio-Rad CFX96
Eppend orf:2 / 4
Color Systems
RotorGene 6000
Roche LightCy
cler 1.5/2.0
Roche LC480
简评
检测光范围 350-700nm 350-700nm 500-660nm
450-730 nm
530， 640 ，705nm/ 460nm/510n 530， m/555nm/61 560，610， 430-630nm 0nm/660nm 640 ，
极管的检测灵敏度低。
滤光系统
4个激发光滤 5个激发光滤 5个激发光滤 带有3个/4个
镜与4个发射 镜与5个发射 镜与5个发射 检测端滤光
光滤镜
光滤镜
光滤镜
片
6个激发与6 个检测
激发端没有 滤光片发射 端有2/4个滤
光片
检测滤镜片
3个/6个发射 光检测滤光
镜
５个激发端 滤光片和６ 个检测断滤
光片
激发光与发射光的双重过滤能排除杂光的影 响，从而提高检测的准确性
5通道，能与 Taqman探 针很好的匹 配，软件使 用麻烦，需 要校正染料 。仪器搬动 后需要校正 光路。有引 物探针设计 软件，但只 能设计引物 与Taqman探 针。有单独 的相对定量
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决定其通道数ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
荧光定量PCR技术的优点
ABI荧光定量PCR仪
厂家介绍：
市
场
美国应用生物系统占公司，经营生产生命科学设备
仪器和试剂，其荧光PC有率R仪成系列，市场占有率高。
荧光PCR仪型号：
﹥ ﹥ ﹥ ﹥ ABI 7500
ABI 7300 ABI 7900 ABI stepone ABI ViiA7
优缺点：
ABI ViiA7
ABI第7代产品，优点比7900有所提升，理论支持本公司PCR体系：40ul 1.检测孔数：96孔板，384孔板，Taqman 低密度表达谱芯片 2.激发光源：齿钨灯 3.加热模块：半导体加热模块，升温3℃/S，温控准确性好。 4.运行时间：35min完成40个循环。 5.检测通道：6通道，除去ROX后5通道
优缺点：
LightCycler 2.0
检测通道：6通道 加热模式：空气加热/冷却 升温：20℃/S 孔数：32孔 材料：玻璃毛细管 20ul和100ul 两种规格 实验成本：体系小，成本低，一般是ABI的一半 理论支持本公司PCR体系：20ul
优缺点：
LightCycler 480
检测通道：6通道 加热模式：半导体加热制冷模块 升温：5℃/S 孔数：96孔（10-100ul）检测1小时,384孔（5-20ul）检
价 格
率
Bio-Rad （伯乐）
ROChe ABI Bio-Rad
ROChe
厂家介绍：
市
场占 罗氏公司始创于1896年，总部位于瑞士巴塞尔，主要涉及药品、医疗诊 有 断、维生素和精细化工、香精香料等四个领域。LightCycler以运行速度
率 快而著称，在国内市场占有率单款最高
荧光PCR仪型号：
﹥ ﹥ ﹥ LightCycler 2.0 LightCycler LightCycler 480 LightCycler Nano 代理公司：
常见荧光定量PCR仪介绍
技术发明史
概述
1992年由日本科学家Higuchi在报告中提出
1996年由美国Applied Biosystems公司推出
技术发展趋势
从单一的染料染色法发展到特异性更高的探针法
从最初的只能检测单一波长光源发展到可以检测多种波长 光源
进口定量PCR仪器厂商
ABI
市
市
场
场
占 有
代理公司：
达安基因，上海创萌，创博环球，北京博凌科为，北京
优尼康，北京鼎盛伟业等
优缺点：
ABI 7900
7900是ABI第二代PCR产品，目前最强PCR仪。价格70-80万RMB，理论
支持本公司PCR体系：40ul 1.检测孔数：支持8联管，96孔板，384孔板，Taqman 低密度表达谱芯片 2.激发光源：氩离子激光，全波长检测 3.进样时可以采用ABI自动机械臂，方便快捷 4.加热模块：半导体加热模块，升温3℃/S 缺点：
ABI 7500 fast
7500 fast是7500快速反应模式仪器，理论支持本公司PCR体系：20ul 检测孔数：兼容96孔和8联管。 检测通道：5通道，除去ROX后4通道。 反应时间：30~40min 激发光源：齿钨灯。
优缺点：
ABI 7300
ABI7300就是ABI7000的简单升级版，硬件设计上几乎没有改 变，只是换过几个性能更好的配件，软件有所升级。价格2030万RMB，理论支持本公司PCR体系：40ul 检测孔数：兼容96孔和8联管。 检测通道：4通道，除去ROX后3通道。 激发光源：齿钨灯。 加热模块：半导体加热模块，升温3℃/S
ROChe （罗氏）
价 格
率
Bio-Rad （伯乐）
ROChe ABI Bio-Rad
如何选择荧光定量 PCR 仪器？
1 、仪器使用的广泛程度 2 、仪器的检测通量（反应孔数） 3、仪器的通道数量 4、耗材的开放性 5、硬件设计特点 6、运行速度 7、灵活性
热模块系统
荧光定量PCR的光学系统
测40min 材料：专用板，理论支持本公司PCR体系：40ul 集多个优点于一身，目前市面上最强悍的PCR仪
优缺点：
LightCycler Nano
检测通道：12个以上 加热模式：空气加热/冷却 升温：20℃/S 孔数： 32孔（4×8联管） 理论支持本公司PCR体系：40ul,价格为LC480的一半
ABI Step One / Step one plus
ABI Step one system
光源系统：LED激发+PMT扫描机制 检测孔数：48孔 检测通道：3通道 理论支持本公司PCR体系：30ul
ABI Step one plus system
检测孔数：96孔 检测通道：4通道 加热模块：半导体加热模块，升温3℃/S 具有独特的Veriflex TM 加块，控温效果大大提高 理论支持本公司PCR体系：30ul
上海浩然，达安基因，上海博尼，山东艾克韦，济南朋远，北京博凌，上海 众华，北京普生瑞等
优缺点：
LightCycler
检测通道：3通道 加热模式：离心式空气加热/冷却 升温：20℃/S 孔数：32孔 材料：玻璃毛细管 20ul和100ul 两种规格 实验成本：体系小，成本低 理论支持本公司PCR体系：20ul
体积大，价格贵，性能比上不如7500。
各孔板基座 96孔板
384孔
8联管
芯片板
优缺点：
ABI 7500
7500是ABI第三代PCR产品，目前ABI市场占有率最高，最成功PCR仪。 价格40万RMB，理论支持本公司PCR体系：40ul 检测孔数：兼容96孔和8联管。 检测通道：5通道，除去ROX后4通道。 加热模块：半导体加热模块，升温3℃/S 激发光源：齿钨灯。
缺点：价格昂贵，体积大
综上所述，以上几款为ABI常见的荧光定量PCR仪器， 像ABI7700,7000已被市面所淘汰。ABI系列是市场占有 率最大的荧光PCR仪器厂商，但由于硬件设计上的缺陷， 需要额外的ROX染料进行校正，且ABI维修费用相当高。
进口定量PCR仪器厂商
ABI
市
市
场
场
占 有
ROChe （罗氏）
综上所述：LightCycler系列检测速度快，稳定性 非常好，灵敏度明显比其它仪器高。但操作过程是以 毛细管进行，操作时应特别小心。Roche使用的耗材 的通用性差，成本高(毛细管)，且每次的检测数量低。