抗原抗体反应及其应用

疏水作用力>氢键结合力>静电引力>范德华引力
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2、抗原抗体亲和力和亲合力
亲和力（affinity)
是指抗体分子上一个抗 原结合点与对应的抗原决
定簇之间相适应而存在着
的引力，是抗原抗体间固 有的结合力。
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2、抗原抗体亲和力和亲合力
亲合力(avidity)
亲和力是指反应系统中复杂
抗原与相应抗体之间的结合
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2、放射免疫技术及其应用
用放射性同位素标记技术来检测抗原抗体反应的高灵敏度方法。
反应特点：灵敏，精确；不稳定 ；安全性差
标记Ag或Ab
标记物纯化
抗原抗体反应
现临床实验室 应用较少
测定其放射活性
抗原抗体复合物沉淀
广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、 小分子药物和肿瘤标志物的定量分析等
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3、酶免疫技术
将待测抗原或抗体吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反应板），与酶标 记的抗体或抗原反应后，加入底物反应（显色或发光）的分析方法。
酶标板吸附 抗原或抗体
洗涤
加入酶标抗体或抗原
显色反应
加入酶作用底物
Ag-Ab酶 或 Ab-Ag酶
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方法 （1）直接法（可检测抗原或抗体）： 酶标板吸附 抗原或抗体 洗涤
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抗原抗体反应的类型
反应类型 中和反应 实验技术 病毒中和试验 结果判断 检测病毒感染性
毒素中和试验
荧光免疫技术 放射免疫技术
检测外毒素毒性
检测荧光现象 检测放射性强度 检测酶底物显色
免疫标记
酶免疫技术
发光免疫技术
金免疫技术
检测发光强度
检测金颗粒沉淀
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三、免疫标记技术的应用
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免疫标记技术的应用
1、传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗体、乙肝三对、
丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮 状病毒等； 2、细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等； 3、也用于一些蛋白质的检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿
瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）
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电荷引力（静电引力） 范德华引力 氢键结合力 疏水作用力
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1、抗原抗体结合力
--静电引力（electrostatic forces）
静电引力或库仑引力（Cou-lombic forces）是因抗原、抗体带有 相反电荷的氨基（—NH3+）与羧基基团（—COO-）间相互吸引的 能力，之间的引力，距离越近引力越大。
Ag
Ab - Ag
洗涤
Ab酶
Ab - Ag - Ab酶
显色反应
② 间接夹心法
酶标板吸附抗体 洗涤
2Ab酶
Ag
Ab － Ag
1Ab
Ab － Ag－ 1Ab
Ab －Ag－1Ab－ 2Ab酶
底物
显色反应
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酶联免疫吸附实验——夹心法
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3、酶免疫技术的应用
ELISA 应用的范围很广，而且正在不断地扩大。 临床实验室主要应用于：
强于范德华引力 ，能量大于范德华引力。
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1、抗原抗体结合力
--疏水作用力（hydrophobic interactions）
水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的
排斥而趋向聚集的力。作用力最强，占总结合力的50％。
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1、抗原抗体结合力
静电引力：异性相吸 （electrostatic forces），离子键 （Ionic bond） 范德华引力: 作用最小 （van der Waals interactions） 氢键: 最具特异性 （hydrogen bond ） 疏水作用力: 作用最大 （hydrophobic interactions）
Ab酶或
Ag酶
Ag－Ab酶 或 Ab－Ag酶
底物
显色 反应
27 （2）间接法（有两种抗体参与，一抗做反应桥梁） 1Ab 2Ab酶 酶标板吸附抗原 Ag－1Ab 洗涤 底物 显色反应
Ag－1Ab－2Ab酶
一抗 二抗
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（3）夹心法（不同抗体将抗原夹在中间反应） ① 直接夹心法 酶标板吸附抗体 底物
见的抗原抗体复合物。
抗原 (亲水胶体)
+
抗体 (亲水胶体)
抗原抗体复合物 电解质 可见反应 (沉淀) (疏水胶体)
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二、抗原抗体反应的类型
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抗原抗体反应的类型
反应类型 沉淀反应 抗原 可溶 抗体 无标记 补体 无
凝集反应
补体参与反应 中和反应 免疫标记
颗粒
细胞 毒素等 标记
或
无标记
无标记 无标记 标记
免疫标记技术是用荧光素、放射性同位素、酶等标记抗体或抗 原等所进行的抗原抗体反应。
特点：敏感度高 特异性强 快速 容易观察
能进行定性、定量、定位检测等
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1、荧光免疫技术
将结合有荧光素的荧光抗体进行抗原抗体反应的技术。 常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（FITC)和罗丹明（RB200)等。它们可
与抗体球蛋白中赖氨酸的氨基结合，在蓝紫光激发下，可分别出现鲜明
能力。与抗体结合价、抗体 的亲和性、抗原有效表位数 目等相关。
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抗体和大多数抗原同属蛋白质。在通常的血清学反应条件下均带有负电荷，
使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体，因此蛋白质不会自行凝 集出现沉淀。当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化层变薄;而且由于抗原 抗体复合物形成后，与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏水胶体。此 时在电解质(如NaCl，的作用下，使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀，形成可
无
有 无 无
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抗原抗体反应的类型
反应类型
沉淀反应
实验技术
液相沉淀试验 免疫电泳技术 直接凝集试验
结果判断
观察沉淀，检测浊度 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 观察凝集现象 观察凝集现象 观察凝集现象 观察测定溶血现象 观察测定溶血现象
凝集反应
间接凝集试验 抗球蛋白试验
补体参与 反应
Baidu Nhomakorabea
补体溶血试验 补体结合试验
抗原抗体反应及应用
傅慧
2018年2月
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内容
一、抗原抗体反应的基本原理
二、抗原抗体反应的类型
三、免疫标记技术的应用
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一、抗原抗体反应的基本原理
抗原抗体反应
抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。
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Ag
Ab
（
）
（
）
如同钥匙和锁的关系
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6
抗原抗体反应的原理
抗原抗体反应的原理 1、抗原抗体结合力（4种） 2、抗原抗体亲和力和亲合力 3、亲水胶体转化疏水胶体
的黄绿色及玫瑰红色。
Ab － Ag光 或 Ag－Ab光
光激发
固相吸附抗原或抗体
Ab光或Ag光
发光
荧光免疫技术的应用
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欧蒙 ①自身抗体检测
抗核抗体 (均质型)
抗核抗体 (斑点型)
抗核抗体 (核膜型)
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荧光免疫技术的应用
②病原体检测
呼吸道合胞 病毒
流感病毒 A/B型
副流感病毒
③免疫病理检测 ④细胞表面抗原和受体检测 ⑤特殊应用：流式细胞分析
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1、抗原抗体结合力
--范德华引力（Van der Waals forces）
分子间（或原子间)相互接近，分子极化产生引力，其作用取决于分 子空间构型，如：凹槽与凸起互补，抗原与抗体，酶与底物。能量 小于静电引力。
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1、抗原抗体结合力
--氢键结合力（hydrogen bond ）
是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较