葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)
牛葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)elisa试剂盒说明书
牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见组成部分：1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP。
2）抗体：在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)。
3）抗原：在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。
主要有三类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。
4 人E选择素(ESelectin/CD62E)检测试剂盒包被：将免疫活性物质(抗原或抗体)结合于固相载体上的过程称为包被。
常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素生物素间接包被法5）固相载体：固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。
常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。
牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒样本实验前准备：ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清室温血液自然凝固1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：用无菌管收集。
离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
（5）培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.27.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明
葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒使用说明分光光度法货号：BC0930规格：50管/48样产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体47.5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；试剂四：液体×1支，-20℃保存；产品说明：葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本的前处理：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周；2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。
3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
g6pd实验室检查项目
g6pd实验室检查项目G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）是一种重要的酶，它在人体中扮演着关键角色。
G6PD实验室检查项目是通过测量血液中G6PD酶的活性来评估患者是否存在G6PD缺乏或缺陷。
下面将详细介绍G6PD实验室检查项目的意义、方法和结果的解读。
G6PD是一种参与氧化还原过程中的酶，它在细胞内负责将葡萄糖-6-磷酸转化为6-磷酸葡萄糖，并产生NADPH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐），NADPH在细胞内起着重要的抗氧化作用，并参与脂质和蛋白质的合成。
如果G6PD酶活性降低或存在突变，会导致G6PD缺乏或缺陷，并进而引发一系列相关疾病。
G6PD实验室检查一般采用静脉采血的方式进行，通常在早上空腹进行。
采集的血液样本会送到实验室进行检测。
目前最常用的检测方法是测量血液中G6PD酶的活性水平。
该方法主要通过检测血红蛋白的还原能力，由于G6PD在氧化磷酸葡萄糖过程中产生的NADPH对还原剂有较强的还原能力，故G6PD活性越高，还原能力越强。
常见的测定方法有定量比色法、酶免疫测定法和筛选性比色法等。
G6PD实验室检查的结果通常是通过比较被测者的G6PD活性水平与正常参考范围来进行判断。
一般来说，正常成年人的G6PD活性范围在4-15单位/克血红蛋白。
如果活性水平低于正常范围，说明该患者存在G6PD缺乏或缺陷。
根据不同的检测方法和实验室的设备和标准，可能会有略微的差异，因此准确的结果需要结合临床医生的判断。
G6PD缺乏或缺陷与一些药物和食物有关，例如氯喹（抗疟疾药）、石碱（染料）和苯妥英钠（抗癫痫药物）等。
对于患有G6PD缺陷的人，这些药物或食物可能会引发溶血危机。
因此，在临床应用中，如果患者怀疑自己患有G6PD缺乏或缺陷，或者需要使用相关药物治疗，就需要进行G6PD实验室检查。
G6PD缺乏或缺陷是一种遗传性疾病，主要表现为溶血性贫血和黄疸。
在溶血危机期间，患者的红细胞会受到破坏，导致贫血。
黄疸是由于溶血引起的大量胆红素释放到血液中，无法被肝脏正常代谢而堆积在体内。
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC2100规格:50T/48S产品内容：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。
；产品说明：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。
此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：一、样本的处理称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。
二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。
3.加样表：在比色皿中依次加入试剂名称（μL）测定管（μL）空白管（μL）样本100-蒸馏水-100试剂一700700试剂二100100试剂三100100于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。
记△A测定=A2测定-A1测定，△A空白=A2空白-A1空白。
三、6PGDH活性计算：1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。
6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=536×(△A测定-△A空白)÷Cpr（2）按样本鲜重计算活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。
葡萄糖-6-磷酸检测标准
葡萄糖-6-磷酸检测标准葡萄糖-6-磷酸(G6PD)缺乏是遗传性的红细胞缺陷，影响到葡萄糖代谢。
该缺陷可能会在接触到某些药物、疾病或环境压力后导致溶血性贫血。
因此，对G6PD缺乏的筛查尤为重要，而G6PD缺乏筛查的标准就是G6PD检测。
G6PD检测是通过分析红细胞中G6PD酶活性来确定G6PD缺乏。
下面将会介绍G6PD检测的标准方法。
1. G6PD活性检测G6PD活性检测是最常见的G6PD检测方法，它的思路是测量红细胞中G6PD酶的活性。
常用的测量方法有酵母三磷酸脱氢酶(yeast triosephosphate dehydrogenase)法和比色法。
酵母三磷酸脱氢酶法的原理是比较待测血液与正常血液在同一时间内对酵母三磷酸脱氢酶活性的变化，然后计算G6PD酶活性。
比色法是根据G6PD酶的还原剂作用来测量NADP/H的形成。
在进行G6PD活性检测的时候，需要注意以下几点：1)对于新生儿，G6PD酶活性会在出生后数日内升高，因此最好在出生后1个月后再测量。
2)血液抽取应注意避免对红细胞的损伤，通常采用静脉抽血或经表皮血流动力学监测系统(EMLA)麻醉后进行皮下抽血。
3)使用酶活性仪分析，不同仪器标准、笔头、反应体积等有较大影响，不同仪器的测量结果并不一致。
2.基因检测基因检测是另一种诊断G6PD缺乏的方法，其思路是检测G6PD基因的序列或突变。
现代基因检测技术使得这种方法越来越准确和可靠。
基因检测的优点是能够检测到隐性G6PD缺乏，而基于酶活性的检测方法无法检测到隐性缺陷。
此外，基因检测也更能够指导个性化的治疗计划。
3.红细胞形态学检测红细胞形态学检测是另一种筛查G6PD缺乏的方法。
红细胞在G6PD 缺乏的情况下更容易受损或产生微小的有色附着物质。
通过检查血涂片上红细胞的形态和有色附着物质，就可以初步判断是否存在G6PD缺乏的可能性。
在实际检测中，红细胞形态学检测通常与G6PD活性检测或基因检测结合使用，以增强诊断准确性。
小鼠葡萄糖 6磷酸脱氢酶 (G6PD) 酶联免疫分析试剂盒 使用说明书
小鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号：E0716m10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
11. 覆膜：5张12. 使用说明书：1份自备物品1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2. 微量加液器及吸头，EP管3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液50μl，余孔分别加标准品或待测样品50μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 立即在每个孔中加入检测溶液A工作液50μl（在使用前半小时内配制），轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 弃去液体，甩干，洗板3次。
每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)简介：葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ，G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。
Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD 被还原成NADPH ，其反应公式如下：G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。
在上述偶联反应中，NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比，通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度上升速率(ΔA /min)，上升速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，直接计算酶的活性单位。
100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、生理盐水2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、预备溶血液：取新奇抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤，每次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存备用。
临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液。
4℃保存10h ，编号名称TE0085 100TStorage试剂(A): 样本稀释液100ml -20℃ 避光试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支-20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液10mlRT 使用说明书1份-20℃保存48h。
一种简易检测6-磷酸葡萄糖的方法
Ｎｕｔｒ，２０１３，６７（１）：６４－７０．
ＩｍｐｒｏｖｅｄＭｅｔｈｏｄｓＢａｓｅｄｏｎＡＳＴＭ Ｅ２１９７－１１［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＰｕｂｌｉｃ
［１６］梅四卫，朱涵珍．大蒜研究进展［Ｊ］．中国农学 通报，２００９，２５
Ｈｅａｌｔｈ，２０１８，６：１８．
（８）：１５４－１５８．
［２２］ＲｅｎＨ，ＳｕＹ Ｔ，ＧｕｏＸ Ｈ．Ｒａｐｉｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
仪（ＦＴ－ＩＲ），ＡＰＰＬＩＥＤＳＹＳＴＥＭＳ公司的 ＤｕｒａｓａｍｐｌＩＲ衰减
收稿日期：２０１８－０１－０８ 基金项目：国家自然科学基金（编号：３１３７０２８７）。 作者简介：徐 婷（１９９２—），女，安徽马鞍山人，硕士研究生，主要从
事油脂代谢分子生物学和生物化学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：１２０９２５０５１８＠ ｑｑ．ｃｏｍ。 通信作者：陈钰佩，硕士，主 要 从 事 油 脂 代 谢 分 子 生 物 学 和 生 物 化 学 研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｕｉｗｅｉｐｅｉ２０１４＠１６３．ｃｏｍ。
江苏农业科学 ２０１９年第 ４７卷第 １０期
徐 婷，薛金?，陈亚东，等．一种简易检测 ６－磷酸葡萄糖的方法［Ｊ］．江苏农业科学，２０１９，４７（１０）：２０９－２１２． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１９．１０．０４７
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一种简易检测 ６－磷酸葡萄糖的方法
徐 婷，薛金?，陈亚东，刘 华，陈钰佩
６－磷酸葡萄糖（Ｇ６Ｐ）是细胞内一种常见的化合物，它由 （Ｇ６ＰＤ）的作用生成 Ｇ６Ｐ，同时伴随着 ＮＡＤＰＨ和中间产物的
葡萄糖在己糖激酶的作用下生成，在细胞内主要参与 ３种代 谢途径：（１）进入糖酵解途径，为生物合成提供细胞能量或碳
6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)、苹果酸酶(ME)两种酶酶活测定方法
6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)、苹果酸酶(ME)两种酶酶活测定方法(1)6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定方法根据文献略有改动6979。
测定反应体系(5ml)为：0.1mI浓度为1M的Tris-HCl缓冲液、0.1ml 浓度为25mM的底物G-6-P溶液、0.1ml浓度为2mM的NADP+、0.1ml 浓度为0. 2 M的氯化镁溶液及2.5ml ddH20，混合均匀后，在340 nm 下测定吸光度值A0，作为空白值。
再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与25℃条件下保温，每30S于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。
以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。
根据公式计算酶活力。
酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟G6PDH催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。
式中：△A/min为340 nm处每分钟吸光度的变化值；V为酶促反应体积(mL)；为NADH的摩尔消光系数(6.22×103L／mol·cm-1)；b 为比色皿光程(cm)。
(2)苹果酸酶(ME)活力测定测定反应体系(3ml)为：0.5 mI浓度为0.4 M的Tris-HCl缓冲液、0.1 ml 浓度为30 mM的底物苹果酸溶液、0.2ml浓度为3.4 mM的NADP+、0.1ml浓度为0.12 M的氯化镁溶液及2 ml ddH20，混合均匀后，在340 nm下测定吸光度值A0，作为空白值。
再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与250C条件下保温，每30s于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。
以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。
根据公式2-1计算酶活力。
酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟ME催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。
赣州市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺失症筛查分析
赣州市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺失症筛查分析发布时间：2022-03-10T06:01:38.876Z 来源：《医师在线》2021年11月22期作者：刘聪邹翠翠李小玉张丽琴肖德俊唐金凤[导读]刘聪邹翠翠李小玉张丽琴肖德俊唐金凤（赣州市人民医院检验科分子遗传室；江西赣州341000）[摘要] 目的对赣州市新生儿葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PD）缺失症的基因测序结果进行分析。
方法收集赣州市2018年11月至2019年11月出生的共计1000例新生儿标本，采用酶法进行G6PD活性筛查，并对筛查阳性者进行基因测序分析。
结果初筛检出50例阳性，初筛阳性率为2.0%，其中男性 44例，女性6例；通过对50例阳性患者进行基因测序分析。
结论总体赣州市新生儿G6PD突变率较低，其中以G1388A为主，G1376T次之，A95G较少见，采用G6PD酶活性检测有利于提高女性杂合子表型存在差异的患者的检测率。
[关键词] 新生儿；葡萄糖-6磷酸脱氢酶缺乏症；酶法；实时荧光定量法Screening and analysis of neonatal glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in Ganzhou [Abstract] Objective To investigate the distribution of glucose-6 phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency in newborns in Ganzhou city. Methods A total of 1,000 specimens of newborns born in Ganzhou City from November 2018 to November 2019 were collected, and G6PD activity was screened by the enzymatic method, and gene sequencing analysis was performed on those who were screened positive. Result Preliminary screening detected 50 positive cases, with a positive rate of 2.0%, including 44 male cases and 6 female cases. Gene sequencing was performed in 50 positive patients. Conclusion Overall, the neonatal rate of G6PD mutation rate is low, among which G1388A is followed by G1376T and A95G is rare. The detection of G6PD enzyme activity is conducive to improve the detection rate of female patients with different heterozygous phenotypes [Keywords] The newborn; Glucose-6 phosphate dehydrogenase deficiency; Enzym-atic; Real-time fluorescence quantification葡萄糖-6磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase,G-6PD）缺乏症是人类常见的酶缺陷遗传病之一，该酶是磷酸戊糖旁路途径的第一个限速酶，伴有X染色体不完全显性，其发病率存在地区与种族差异[1]，迄今全球有近4亿人发病[2]。
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4358
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号: UPLC-MS-4358规格: 50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
溶液的配制：1、试剂二：临用前配制，加入5 mL 试剂一，混匀；2、试剂三：临用前配制，加入5 mL 试剂一，混匀。
产品说明：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。
此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。
6PGDH 催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH 在340nm 有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 吸光度增加速率，计算6PGDH 活性。
注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称约0.1g 组织，加入1mL 试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清粗酶液，待测。
二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴预热30min 以上。
3.于340nm 处测定3min 内吸光值变化，第0s 吸光值记为A1，第180s 吸光值记为A2。
记ΔA 测定=A2 测定-A1 测定，ΔA 空白=A2 空白-A1 空白。
三、6PGDH 活性计算（1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。
6PGDH 酶活性(U/mg prot) =[(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ε×d)×109×V 反总]÷(Cpr×V 样)÷T=536×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷Cpr（2）按样本质量计算活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒(葡萄糖-6-磷酸底物法)临床方案模板-G6PD-体外诊断试剂-IVD
方 案 版 本 : V1.0
方案日期: 2017/03/27
拟试验时间: 2018 年 8 月 至 2018 年 12 月
临床研究者姓名（签字）: 临床研究者所在单位（盖章）： *****医院 联系方式（电话）:
临床试验类型：
□新诊断试剂产品的研究 ■已有同品种批准上市产品的临床研究 □关于变更申请中产品临床研究
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒（葡萄糖-6-磷酸底物法）临床试验方案-v1.0-来自017/03/02目录
摘要................................................................................................................................4 试验研究人员................................................................................................................5 1. 基本内容...................................................................................................................6 2. 申办者信息...............................................................................................................7 3. 考核试剂相关信息...................................................................................................7 4. 参比试剂...................................................................................................................8 5. 研究设计.................................................................................................................10 6. 研究步骤.................................................................................................................12 7. 研究试剂管理.........................................................................................................15 8. 文件管理.................................................................................................................16 9. 数据管理.................................................................................................................17 10. 统计考虑...............................................................................................................18 11. 可行性分析...........................................................................................................20 12. 质量控制与质量保证...........................................................................................21 13. 临床研究伦理方面...............................................................................................22 14. 不良事件预测及应当采取的措施.......................................................................24 15. 对临床试验方案的修正规程...............................................................................24 16. 临床试验方案的偏离...........................................................................................24 17. 研究总结与终止...................................................................................................25 18. 保密原则...............................................................................................................25 19. 研究结果发表约定...............................................................................................25 20. 各方承担的职责...................................................................................................26 21. 各方研究方案签署...............................................................................................26
新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶定量测定(实验注意事项)
Neo-G6PD定量测定试剂盒实验步骤及注意事项1. 试剂的准备G6PD底物试剂(复溶后+2～+8℃稳定一月)：在每个冻干的G6PD底物试剂小瓶中加入11ml G6PD复溶缓冲液（配制后的溶液为1个96微孔板用量），轻轻混匀。
2. 将所需数量的空白反应条（白色不透明板）置室温平衡( 23-28℃，30分钟)。
注意事项及建议：本实验受温度影响，在一定范围内随温度的提高，反应加快。
平衡温度可保证实验反应的均一性3. 用打孔器轧下校准品、质控品和待测样品的滤纸干血片（每片直径3.0 mm左右），按顺序放入微孔反应条小孔中，然后各孔加入100 μl 复溶G6PD底物试剂，盖上封片，室温慢速振动孵育30分钟。
注意事项及建议：（a）用自动打孔器轧下滤纸干血片取样时，应尽量向中间靠拢，避免取边缘血片而造成检测时CV值增大（血片中心到边缘的1/2以内区域是检测的最佳部位）。
每个校准品滤纸干血片打孔最好不要多于4个；（b）尽量避免手接触血片，以免造成血片污染4. 每孔加铜试剂200 μl，并加贴封条，室温无振动孵育。
注意事项及建议：加铜试剂时，吸头应悬空，避免因吸头碰到小孔边缘或其中试剂而造成铜试剂污染5. 15～20分钟内，在激发波长355nm，发射波长460nm时测定荧光值。
注意事项及建议：（a）血片漂浮对G6PD测定将造成影响，测定荧光值前请用小镊子或者大头针将漂浮血片挑出后再检测，以免造成假阳性结果；（b）质控品在受控范围内，反之，则该次实验无效，应重复实验；（b）务必在15～20分钟内检测完毕，否则曲线会漂移。
其他：（1）不同批号的试剂盒不要混用。
（2）本试剂盒各组分只能一次性使用，不能重复使用（3）为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和粘膜。
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)
简介：
葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ，G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。
Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD 被还原成NADPH ，其反应公式如下：
G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。
在上述偶联反应中，NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比，通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度升高速率(ΔA /min)，升高速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，直接计算酶的活性单位。
100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 生理盐水
2、 水浴锅
3、 比色杯
4、 分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备溶血液：取新鲜抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤，每
次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存备用。
临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液。
4℃保存10h ，
编号 名称
TE0085 100T
Storage
试剂(A): 样本稀释液 100ml -20℃ 避光 试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支 -20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液 10ml
RT 使用说明书
1份
-20℃保存48h。
2、配制NADP储存液：取NADP溶解于G6PD assay buffer，充分混匀，配制成NADP
储存液(18mg/ml)，-20℃保存备用。
3、配制检测工作液：取NADP储存液和G6PD assay buffer，按NADP储存液(18mg/ml)：
G6PD assay buffer混合，即为检测工作液。
-20℃保存，一个月有效。
4、配制G-6-P工作液：取G-6-P 1支溶解于G-6-P稀释液，混匀，即为G-6-P工作液，
分装成小份后，-20℃保存备用。
5、分光光度计检测：按照下表设置空白管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避
免产生气泡。
如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物空白管测定管
检测工作液(μl)(37℃预温) 880 880
G6PD assay buffer (μl) 20 －
溶血液(μl) －20
混匀，孵育。
G-6-P工作液(μl) 100 100
混匀，37℃孵育60s，在340nm处各管吸光度变化，计
算各管ΔA/min。
6、生化分析仪检测：按照下表设置主要参数。
如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用
量或适当稀释后再进行测定。
波长340nm
反应温度37℃
孵育时间90s
连续监测时间60s
比色杯光径 1.0cm
系数8040
待测样品6μl
检测工作液264μl
G-6-P工作液33μl
计算：
分光光度计计算公式：G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(1000/20)=ΔA/min×8040 式中：6220=NADH的吸光度
1000=反应液的总体积(μl)
20=待测样品体积(μl)
生化分析仪计算公式：G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(303/6)=ΔA/min×8040 式中：ΔA/min=测定的340nm吸光度的升高速率
6220=NADH的吸光度
303=反应液的总体积(μl)
6=待测样品体积(μl)
参考范围：
成年健康人红细胞G6PD：8-18U/g Hb
注意事项：
1、血清中G6PD活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。
2、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
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