[28]蝉花真菌的分离及液体发酵培养

植物内生菌的分离

植物内生菌的分离 钱昆121140041 一、实验目的 1、掌握对植物内生菌的分离处理方法。 2、熟练掌握对细菌、真菌的染色观察技术。 3、了解微生物分子实验的基本操作流程。 二、实验原理 在植物的生态环境中，存在着各种各样的微生物,它们有的附着于植物的表面，有的则生活于植物体内。对于附着于植物表面和根际的微生物已有很多研究，而对于植物体内微生物的研究却刚刚起步。但有资料显示, 一些植物内生微生物与宿主发生关系时，可明显增强宿主的抗病性，提高植物的生产力。因此，合理利用植物的内生微生物具有重要的理论意义和实用价值。植物内生菌作为微生物研究领域之一，近年来一直备受关注。 内生菌概念在1866年首先由Bary提出的，指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织或器官内部的微生物（主要为真菌和细菌）。其后的很长时间内，内生菌研究进展缓慢。直到1993 年，美国蒙大拿州立大学Strobel等从短叶红豆杉的韧皮部位分离到一株产新型抗癌物质紫杉醇的内生真菌，从而启发人们可从植物内生菌寻找与植物产生的相同或相似的化合物，由此促进了植物内生菌的研究。植物内生菌为植物组织内的正常菌群，包括植物内生真菌、内生细菌和内生放线菌，广泛分布于各种陆生及水生的低等植物和高等植物中。 内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。这类真菌中，有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成孢子（或者孢子果），不容易识别。真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。 对于现已分离得到的植物内生细菌，一般可分为专性内生细菌与兼性内生细菌，前者指至今只能在植物体内分离得到的细菌；后者指能在植物根际与土壤中分离得到，也能在植物体内分离得到的细菌，而且种类居多。根据内生细菌对宿主植物生长发育的影响可以将其分成三类：第一类对植物的作用是中性的，即尚未发现它们的内生定殖对宿主植物生长与繁殖有影响；第二类对植物生长发育有促进作用，如能提高宿主植物抗病、抗逆能力，或能通过固氮与分泌激素促进植物生长发育等；第三类对植物生长具有负面影响，在特别条件下接种到原宿主植物或另外的宿主植物会诱发植物病害。但需要注意的是，同种细菌定殖于不同宿主植物可能对宿主植物产生不同的影响。 除根瘤菌外，还有放线菌侵入多种被子植物宿主，形成根瘤的共生固氮体系。早在十九世纪后期，人们就发现了这类非豆科的根瘤，并发现根瘤内有生微生物，1881年布隆科斯特将它称为Frankia，但当时并不知道它是什么微生物。确定内

金蝉花的食用方法

金蝉花的食用方法 金蝉花参汤 材料：金蝉花3-5只，西洋参3-5克。 做法：1.金蝉花洗净沥干备用。 2.将金蝉花和西洋参一起放入炖盅内，加适量水，隔水慢火炖3个小时，即可食用。 功能：消除疲劳，增强体质，提高免疫力。 金蝉花老鸭汤 材料：金蝉花5-8只，老公鸭半只，姜4-5片，料酒、盐少许。 做法：1.金蝉花洗净沥干备用。 2.老鸭洗净，切块、备用。 3.将金蝉花、老鸭、姜片一起放入砂锅内，掺加适量料酒净水，文火炖3个小时以上，食用时加适量盐即可。 功能：滋阴清热，补肾益精。 金蝉花土鸡汤 材料：金蝉花5-8只，土鸡半只，火腿2片，姜2片，料酒、盐少许。 做法：1.金蝉花洗净沥干备用。 2.土鸡洗净，切块、备用。 3.将金蝉花、土鸡、火腿片、姜片，加入适量净水，隔水慢火炖3-5小时，食用时加适量盐即可。 功能：壮阳补肾，填精益髓。 金蝉花清蒸乳鸽 材料：金蝉花3-5只，乳鸽1只，党参1根，白莲子数颗，姜3-4片，料酒，盐适量。 做法：1.金蝉花洗净沥干备用。 2.乳鸽洗净，飞水，捞起沥干水份，党参切断，白莲洗净。 3 .将金蝉花、党参，白莲放入炖盅底部，然后放上乳鸽、姜片，加入料酒，加入适量清水，隔水蒸3小时，食用时加适量盐即可。 功能：补益元气，生津安神，补脾养肺。 枸杞猪腱煨金蝉花 材料：金蝉花3-5只，枸杞5克，猪腱250克，姜2片，料酒、盐少许。 做法：1.金蝉花洗净沥干备用。 2.猪腱切块，飞水洗净。 3 .将金蝉花、猪腱、枸杞、姜片放入炖盅内，加进料酒，加入适量净水，文火炖2-3小时。食用时加适量盐即可。 功能：益精壮阳，养肺明目。 金蝉花水鱼鸡汤

材料：金蝉花3-6、只，水鱼1条，鸡半只，火腿肉1两，姜4片，葱少许，料酒、盐适量。 做法：1.金蝉花洗净沥干备用。 2.水鱼和鸡洗净，飞水，沥干备用。 3 .将金蝉花、水鱼、鸡、姜片，葱放入锅内，加入料酒、适量清水，武火煲沸后，再用文火炖3小时，食用时加适量盐即可。 功能：大补元气，强身健体。 金蝉花神仙粥 材料：人参3克，茯苓3克，麦冬3克，黑米80克，金蝉花5克，北糖15克。 做法:按一般煲粥办法即可。 适用：高血脂、高胆固醇、冠心病、老年性水肿。 金蝉花止咳化痰粥 材料：百合10克，杏仁10克，慧仁米20克，小米20克，红枣10枚，红小豆30克，金蝉花3-5克。 做法：按一般煲粥办法即可。 适用：久病久咳，胸中沉悶，白痰粘滞。 金蝉花安息茶 材料：炒枣仁10克，五味子6克，白茅根8克，金蝉花3-5克。 适用：神衰，失眠。 金蝉花降压茶 材料：山楂8克，金蝉花5克，苦丁茶8克，草决明8克。 做法：用开水一起泡，饮水即可。 适用：中老年人高血压、高血脂。 （一）蝉花明目方 处方：蝉花6克，防风6克，羌活3克，赤药10克，茯苓9克，苍术6克，川芎9克，石决明l克，刺蒺藜12克，当归6克，夏枯草10克。 制作：将全部原料放入砂锅内，加水用文火煎煮，滤取煎汁服用。 用法：每天1剂。 食疗功效：治疗眼目胀痛、羞明、黑眼、眼前有星点 （二）蝉花地骨皮方 处方：蝉花（微炒）、地骨皮（炒黑）各30克。 制作：将蝉花、地骨皮共碾成细末。 用法：每次服l茶匙，用水酒调下。 食疗功效：治疗痘疹、遍身作痒，1～2剂即有效。 （三）蝉花创伤方 处方：蝉花、青黛各15克，蛇蜕（烧存性）30克，细辛8克。 制作：将全部原料一起碾成细末。 用法：每次服10克，用酒调下。

真菌的分离培养及形态观察

真菌的分离培养及形态观察 真菌分离培养应考虑所分离真菌的特性，配制合适的培养基，选择所需的气体环境。同时, 由于真菌分离材料常污染有大量细菌，所以可在培养基中加入抗菌素并在分离培养过程中严格执行无菌操作。 目的要求 1．掌握真菌分离培养方法。 2．认识真菌菌落的特征，比较与细菌菌落有何不同。 3．了解真菌载片培养法。 4．掌握观察真菌的基本方法，并观察其形态特征。 操作步骤 —、真菌的分离培养方法 （－）平板划线分离法 1．取适合真菌的琼脂培养基融化，冷至45℃，注入无菌平皿中，每皿15～20ml，制成平板待用。 2．取要分离的材料（如田土、混杂的或污染的真菌培养物、真菌）少许，投入盛无菌水的试管内，振摇，使分离菌悬浮于水中。 3．将接种环经火焰灭菌并冷却后，蘸取上述菌悬浮液，进行平板划线(同细菌的划线法)。 4．划线完毕，置温箱中培养2～5d，待长出菌落后，钓取可疑单个菌落先作制片检查，若只有一种所需要的真菌生长，即可进行钓菌纯培养。如有杂菌可从单个菌落中钓少许菌制成悬液，再作划线分离培养，有时需反复多次，才得纯种。另外，也可在放大镜的观察下，用无菌镊子夹取一段待分离的真菌菌丝，直接放在平板上作分离培养，可获得该种真菌的纯培养。 （二）稀释分离法 1．取盛有无菌水的试管5支（每管9ml），分别标记1、2、3、4、5号。取样品（如田土等）1g，投入1号管内，振摇，使悬浮均匀。 2．用1ml灭菌吸管，按无菌操作法，从1号管中吸取1ml悬浮液注入2号管中，并摇匀；同样由2号管取1ml至3号管，依此类推，直至5号管。注意每稀释一管应更换一支灭菌吸管。 3．用2支无菌吸管分别由4号、5号试管中各取1ml悬液，并分别注入2个灭菌培养皿中，再加入融化后冷至45℃的琼脂培养基约15ml，轻轻在桌面上摇转，静置，使冷凝成平板。然后倒置温箱中培养，2～5d后，从中挑选单个菌落，并移植于斜面上。 二．真菌培养性状观察 （一）真菌在固体培养基上的生长表现 1 .酵母菌菌落：酵母菌在固体培养基上多呈油脂状或蜡脂状，表面光滑、湿润、黏稠，有的表面呈粉粒状、粗糙或皱褶。菌落边缘有整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色或红色等。 2. 霉菌菌落：将不同霉菌在固体培养基上培养2～5d，可见霉菌菌落呈绒毛状、絮状、蜘蛛网状等。菌落大小依种而异，有的能扩展到整个固体培养基，有的有一定的局限性（直径1～2mm或更小）。很多霉菌的孢子能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、青色、黑色、橙色等。 （二）真菌在液体培养基中的生长表现 1. 酵母菌注意观察其混浊度、沉淀物及表面生长性状等。

分离植物内生真菌操作流程

分离植物内生真菌操作流程 1.材料准备：植物样本、剪刀、镊子、70%乙醇、3%次氯酸钠（本实验用4%84）、 酒精灯、计时器、平板、锥形瓶，无菌水，离心管（带盖，灭菌）、打开无菌操作台灭菌30min。 （1）植物样本的采集：选取生长状态良好，不要有病斑或者枯枝烂叶，每种植物采取三株标本，要带有叶子、叶柄和枝条及其他部位，将样本名字写在 小纸条上放在装标本的袋子里，采下来的标本与写有名字的纸条一同拍照，样本上有脏东西时，请用纸轻轻擦掉，若不清楚植物名字，请将整棵植物 拍照留用于鉴定，并做好相关记录。 （2）制作PDA固体培养基，在无菌操作台中倒平板，每瓶250ml的培养基大概倒15个板，待其凝固后用于接种。 2.清洗：认真用清水将标本洗净，洗去标本表面的灰尘，去除枯叶，备用。 3.取样： （1）在叶片的左上、右上、左下，右下和正中五个部位进行取样，剪取5mm*5mm的叶片，如果是叶柄或枝干，则剪取5~10mm，若是比较 粗的枝干或圆圆的果实之类的，总之比较大的，则将它切开，再剪取 样本，样本不要剪的太大或太小。 （2）每种植物的叶子，叶柄，枝干等其他部位，每种部位接种两块板，大板每个要接种五个样本即左上、右上、左下，右下和正中，小板每个 接种四个样本即左上、右上、左下，右下，计算好所要剪的样本数， 尽量多剪几个，以免后面的表面灭菌中冲洗时被冲掉。 （3）若植物标本有剩余，且是没有洗过的，重新装好，放到冰箱里，备用，洗过的扔掉。 （4）每种植物标本所剪的样本放在一个50ml的离心管中，放在试管架上，并且每个离心管上要标好所对应的植物标本。 4.表面灭菌：在无菌操作台中进行 （1）先向各离心管内倒入适量（10~20ml）70%乙醇，拧紧盖子，用计时器开始计时1min,每10秒钟晃动离心管几次，使其充分灭菌。 （2）1min后，拧松盖子，将乙醇倒入事先准备的锥形瓶中，注意不要将管

黄连内生真菌分离培养条件筛选

黄连内生真菌分离培养条件筛选 摘要：本试验采用压贴法通过对黄连根、茎、叶在不同次氯酸钠浓度及不同表面消毒时间的PDA培养基上的培养，选出黄连内生真菌的适宜培养条件；在获得适宜培养条件后重新培养所有部位，待其长菌后挑选菌落边缘菌丝再培养，如此反复，直到获得纯培养物为止。通过培养筛选在主根、须根、叶柄、叶片四个部位共获得了60多种菌株，并对分离出的菌株进行保种，为后续的菌株鉴定、菌株抗菌活性的测定做准备。 关键词：黄连，内生真菌，分离条件，培养条件 Endophyticfungi of Coptis separation and culture conditions screening Abstract: The test select the suitable cultivation condition of endophytic fungi ,using pressure stick method cultivate roots, stems and leaves on PDA medium at different concentrations of sodium hypochlorite and different surface sterilization time.Recultivate all parts after acquising suitable cultivation,then select ege colonies and recultivate when they grow fungi,then circulate the procedure,until get pure culture.By cultivating and selecting the roots,fibrous roots,petiole and leaves, more than 60 kinds of fungi are found ,and isolated strains are breed,which is preparation for subsequent strains of identification, the determination of strains antimicrobial activity. Keywords:Coptis, Endophytic fungi, Separation conditions, Culture conditions 黄连（Coptis chinensis Franch）是我国名贵中药材之一，含有大量的异喹啉类生物碱[1]（小蘖碱、黄连碱、甲基黄连碱、小蘖红碱、药根碱、阿魏酸等）。尤其是小蘖碱对人体病原细菌和皮肤真菌[2]具有广谱的抗菌活性，在医药中被广泛应用；同样，小蘖碱对许多植物病原真菌和细菌也有显著的抑制作用。Hirano, H.等用硫酸小蘖碱处理大麦种子减轻了大麦条纹花叶病毒病（BBMV）的发生[3]。 黄连的药理研究主要以小蘖碱和黄连解毒汤为重点，主要包括抗微生物作用（抗菌、抗病毒）[4]、镇静作用、止泻作用、健胃作用[5]、对心脏心率[6]和心律作用等[7]。黄连及复方

真菌的培养及形态观察

题目：真菌的培养及形态观察 动物科学1204班聂孝明 20121546 指导教师：邹玲 摘要：了解酵母菌和霉菌的菌落特征及在培养基中的生长表现，还有真菌的分离培养方法和载片培养，学习真菌水浸片的制备及形态观察。本实验通过真菌的固体培养，酵母菌水浸片旳制备观察及划线分离培养的方法进行形态观察。在固体培养基上，观察到A菌落成绿色比较光滑、有分生孢子、菌丝有横隔为青霉。D菌落有大量直立菌丝并且顶部发黑、有孢子囊、菌丝无横隔为根霉。B菌落大而光滑、显微镜下菌体较大、有假菌丝并且出芽生殖的为酵母菌。 关键词：酵母菌霉菌形态观察分离培养 引言：真菌在自然界中分布广、数量大、种类多。酵母菌是单细胞微生物，细胞核和细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大10倍左右，多为圆形或卵圆形，无性繁殖为出芽生殖，可以形成假菌丝，有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片可以观察期外形和区分细菌的死活。霉菌的营养体是分支的丝状体，较大，分为基内菌丝和气生菌丝，不同的霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子，细胞易收缩变形，孢子容易分散。利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料，可以得到清晰，完整，保持自然状态的霉菌形态。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种：酵母菌，青霉，根霉的斜面培养菌种 1.1.2试剂：沙堡培养基、美蓝染色液、70%酒精、无菌水等 1.1.3其他：解剖针、玻片、盖玻片、接种环、显微镜等 1.2方法 1.2..1真菌的划线分离培养 培养基：将沙堡琼脂培养基融化后，冷却至45摄氏度，注入无菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板备用。 接种：取待分离的材料少许，投入无菌水试管中，振荡，使分离菌悬浮于水中，将接种环火焰灭菌后冷却，取上述悬液，进行平板划线分离。 培养与观察：划线完毕后，置于28摄氏度温箱培养2~5天，待形成子实器官后，取单个菌落部分，制片镜检。若只有一种菌，既得纯培养物。如有杂菌可取培养物少许制成悬液，用作划线分离，有时反复多次可获得纯种。也可在放大镜下观察，用无菌镊子夹取一段分离的真菌菌丝，在平板上分离培养，即可得到真菌的纯培养物。 1.2.2真菌在固体培养基上的生长表现： 酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或蜡质状，表面光滑、湿润、粘稠，有的表面呈现粉粒状，粗糙或褶皱，菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色、红色等。将不同的霉菌在固体培养基上培养2~5d，可见霉菌有绒毛状、絮状、绳索状等。大小依霉菌种类而异，很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。 1.2.3真菌的形态观察 1.2.3.1酵母菌水浸片的制备：将美蓝染色液或蒸馏水滴于干净的载玻片中央，用接种环以无菌及操作取培养48h的酵母菌少许，均匀涂于液滴中，染色2~3min后加盖玻片。注意切勿产生气泡，然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式，注意酵母菌的形态、大小和芽体，同时可以根据是否染上颜色来区别死活细胞。 1.2.3.2挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中，震荡试管制成孢子悬液，用灭菌滴管吸取

植物内生真菌

植物内生真菌 一、内生真菌的概念 内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。这类真菌中，有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成的孢子（或者孢子果）不容易识别。真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。 草本植物内生真菌侵染种子内部，播种后，真菌随着幼苗的生长和植株的发育成熟而生长，这些真菌没有吸器，出现在茎、叶、花序组织，而不出现在根内，这一点与菌根真菌不同。受侵染的植株在营养生长阶段不表现出被内生真菌侵染的特点，但是，当植物开花的时候，就可以观察到浸染的真菌。 与内生真菌容易混淆的一个概念是内生菌根，菌根是高等植物的根与真菌形成的共生联合体，内生苗根是菌根当中的一种类型，内生菌根的共同特征是根的表面不产生菌套，仅有稀疏的外生菌丝，菌丝在根部皮层组织的细胞间延伸，但不产生哈蒂氏网，菌丝体可侵入细胞内部，并形成不同形状的吸器，而宿主植物的根一般无形态及颜色的变化。故内生菌根用肉眼很难识别。 二、内生真菌的一般特征 内生真菌存在于根以外的植物组织细胞，可以用显微镜观察，也可以通过纯培养把它们分离出来进行研究。分离内生真菌时要对植物组织进行表面消毒，然后切成小片放在培养基上培养3～5天，内生真菌就生长在培养基上，可根据孢子和菌丝的特征，对它们进行分类鉴定。 可以按常规方法把内生真菌从多种植物上分离出来，已经发现的内生真菌包括许多子囊菌和半知菌、一些担子菌及少量的卵菌。主要的内生真菌包括药用Chloroscypha和Lophodermium（散斑壳属）中的一些种类以及Cryptoxline、Cryptosporriopsis（拟隐孢菌属）、Phomopsis（拟茎点霉属）和 Phyllosticta（叶点霉属）中的一些种类。其中许多可以从植物组织中偶然分离到。这类真菌的共生生活方式与其占主导地位的腐生生活方式来讲，似乎是次要的。比如说，担子菌中有许多种类生长在木头上或粪堆上，但有时也可在植物细胞内发现。 苔鲜植物、蕨类植物、裸子植物和被子植物中都发现有内生真菌。Petrini（1986）在对热带、温带和阿尔卑斯山地区的200多种植物调查之后发现，几乎所有生活的植物体内均有内生真菌的存在。在内生真菌中，宿主的专一性变化很大，一些真菌能够从生长在不同的生态和地理条件下的属于不同科属的多种宿主植物内分离出来，但是其它一些内生真菌仅限于某一特殊种属的几种宿主植物，仅有少数几种内生真菌专一地出现在某一种特定的植物中。 内生真菌在一些植物及农作物中广泛传播具有重要意义，农业科学家对牧草的内生真菌有特别的兴趣，因为这些真菌会产生真菌毒素，从而对动物产生毒性。此外这些真菌也有潜在的应用价值，例如利用抗、感品种的植株或器官对病原真菌毒素的敏感性反应上的差异，人们可以应用毒素进行快速、准确地鉴定大批的品种资源，一则可以直接发现抗病材料，在生产上推广应用；二则可以选出一些农艺性状虽然不太理想，但具有抗病性的材料，作为今后常规育种的亲本材料。 三、草本植物的内生真菌 l．草本植物内生真菌的形成许多草本植物的内生真菌都是属于麦角菌科（Clavicipitaceae）的真菌，其中传播最广的可能是香柱菌（Epichloe typhina），它寄生在禾本科牧草上，在70多种草坪植物中均存在，它的无性世代是半知菌类的顶孢霉属（Acremonium）。香柱菌属真菌子座淡色，平铺状，包围在禾本科植物茎和叶上，像一个套子；子囊壳理生在子座内，子囊细长，单膜；顶端加厚，具有折光性的顶帽；子囊孢子丝状，无色，有隔膜。 麦角菌属（ Claviceps）内生真菌，寄生在禾本科植物的子房内，后期在子房内形成圆形到香蕉形的黑色或白色的菌核，菌核越冬后，产生子座；子座直立，有柄，可孕头部近球形，子囊壳埋在整个可孕头部的表层内；子囊孢子无色，丝状，无隔膜。麦角菌（C．purpurea）寄生的患病植物在种子上形成紫色、弯曲的菌核，即表角；麦角内含有生

蝉花子实体的免疫调节作用及其机制

硕士学位论文 蝉花子实体的免疫调节作用及其机制 专业名称：卫生毒理学 研究生姓名： _ 导师姓名：IMMUNOLOREGULATION EFFECT AND MECHANISM OF FRUITING BODIES OF

CORDYCEPS DIDADAE A Dissertation Submitted to Southeast University For the Academic Degree of Master of Medicine BY Du Jinsha Supervised by Researcher Wang Minsheng School of Public Health Southeast University May 2013 东南大学学位论文独创性声明

本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名：日期： 东南大学学位论文使用授权声明 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理。 研究生签名：导师签名：日期：

真菌的分离及常用培养基

真菌的分离及常用培养基 关键词：真菌抗生素念珠菌白假丝酵母菌北纳创联北京标准物质网 医学真菌形态学观察是认识真菌的第一步，但仅通过光学显微镜对其进行观察并不能直接鉴定为真菌，需要对疑似相关病变部位的标本进行采集及分离，然后在合适的培养基进行培养。 一、病变部位标本的采集分离 通常采集疑似病变部位的皮肤附属物、分泌物、血液、痰液、脑脊液等体液，注意标本的新鲜度、无菌性、充足性，而且要对所采集标本进行正确消毒，杀死其中混有的杂菌。标本为脑脊液时，需进行离心，收集沉淀物进行培养，标本为血液时，需要先行增菌培养后再分离，这样可增加阳性率，未增菌培养的阴性结果并不能排除阳性结果。 二、真菌培养常用的培养基 目前商品化的真菌培养基多为干燥脱水的形式，可以按照配制说明书进行配制，值得注意的是，使用后的装培养基的瓶盖须拧严，防止受潮，以各下次使用。 1.沙保弱培养基及含抗生素的沙保弱培养基沙保弱培养基是培养真菌最常用的培养基，绝大多数的真菌均可以在其上生长，沙保弱培养基还可以添加抗生素，从而抑制多数细菌和污染真菌的生长速度。含抗生素的沙保弱培养基多用于皮肤癣菌和绝大多数致病真菌的分离和培养，但值得注意的是含有抗生素的培养基会抑制念珠菌属、隐球菌和少量丝状真菌的生长。 2.玉米粉（厚膜孢子）培养基多用于鉴别念珠菌属，培养基中的吐温可以促进白假丝酵母菌产生厚膜孢子，同时可以加入1％葡萄糖促进红色毛霉菌生长，并抑制须毛霉菌的生长。 3.土豆葡萄糖培养基土豆培养基中需将土豆切成小于1cm。的小块，常用于诱导真菌形成孢子或产生色素。 4.脑-心浸液琼脂培养基是一类营养丰富的真菌培养基，人工配制过程较为烦琐，一般通过商品化的培养基按照说明书进行配制。BHI多用于室温培养致病真菌，也可用于35～37℃培养致病真菌的酵母相。

植物内生真菌的分离

植物内生真菌的分离 一、实验目的 1．理解内生真菌存在的普遍性和多样性 2.掌握常规的微生物分离纯化方法 3.掌握分菌过程中的一些基本操作技能 二、实验原理 植物内生真菌( Ｅnｄophｙte) 是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌，而宿主植物一般不表现出外在的症状。所有植物中几乎都存在内生菌. 由于植物内生真菌与宿主在长期的进化过程中形成了特殊的生态关系,因而内生真菌能产生与宿主相同或相似的具有生理活性的次生代谢产物，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物越来越成为微生物次生代谢产物的研究热点之一。 采用微生物学常规的组织分离法从植物中分离内生真菌 三、实验材料 板蓝根新鲜健康的叶片 试剂:次氯酸钠、无水乙醇、葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素 培养基：PDA培养基、分离培养基 四、实验步骤 （一)、配制PDA培养基 10月27号晚上：

(1）配置ＰDA培养基,用电子称称取去皮的土豆10０g，煮沸30min，4层纱布过滤，滤液加热,加入琼脂７.5克，琼脂完全融化后加入葡萄糖10g，待稍冷却后加水至5０0毫升。 (2)准备1０瓶无菌水，每瓶150ml左右。 (3)包好烧杯,培养皿，涂布棒等实验仪器，等待消毒。 (二)、配制分离培养基 28号中午： （1）配置分离培养基，将PDA培养液均分成两份，一份备用,另一份待高温灭菌后,加入青霉素１0０mg／L、链霉素200mg/L的混合液20mｌ，即得到分离培养基。 （2）用消毒后的培养皿在通风橱中倒平板,注意在整个过程中保证无菌操作。 (三)、采集新鲜板蓝根叶片 ２8号晚上到实验室外采集新鲜健康叶片完整的板蓝根叶片。(四)、植物组织表面消毒 2８号晚上将新鲜、健康的板蓝根叶片于自来水下冲洗干净，用吸水纸吸干表面水分后剪成小段(片）做如下表面消毒处理:75%酒精漂洗3ｍin，无菌水冲洗4~5次,5％次氯酸钠溶液漂洗叶3ｍin,无菌水冲洗4~5次，无菌滤纸吸干水分。 （五）、接种并培养 28号晚上: (1）将上述表面消毒后的材料剪切成0.５ｃm 2 小块,放入含

蝉花功效

随着国民生活水平、文化层次的提高，人们对自身保健和科学养生愈加追求，补益食品、药品几乎成了家家户户不可或缺的生活必需品。食补，这里暂且不谈，单说滋补身体的药物，可说是五花八门，不胜枚举。本文将介绍的，是一种冬虫夏草(虫草)的代用品—中药蝉花. 蝉花又名虫花，是麦角菌科真菌大蝉草的分生孢子阶段，即蝉棒束孢菌及其寄主山蝉幼虫的干燥体。中医认为，蝉花是一种功效与冬虫夏草近似的珍贵药材。有关文献记载，蝉花味甘、性寒，归肝经，具疏散风热、定惊解痉之功效。用于目翳，惊痫，小儿夜啼，麻疹未透。常用量3～10克。 宋·苏颂《本草图经》对蝉花有这样的描述：“今蜀中有一种蝉，其蜕壳头上有一角，如花冠状，谓之蝉花……入药最奇。“上溯至南北朝，雷校《雷公炮炙论》对蝉花有加工记载：“蝉花，凡使，要白花全者。收得后，于屋下东南角悬干，去甲、土后用浆水煮一日，至夜焙干，研细用之。“这可能是对蝉花的最早记载。历代本草中还记载，蝉花为寄生昆虫，主要有蝉科山蝉、蝼蛄及黑蚱等，近年来，研究人员又从竹蝉若虫寄生物中分离出与前者相同的真菌菌株。据《证类本草》记载：“蝉花，七月采，生苦竹林者良，花出土上。“近年有报道，蝉花一般生长在针阔叶混交林带，森林覆盖率为65．3％，大多分布在海拔7 00～950米，坡度为30。～40。的向阳山坡上，呈明显的垂直分布状态。蝉花主产于长江以南热带和亚热带地区，在我国为浙江、四川、云南、江苏等地。自然界中大蝉草很稀少，常采到的是蝉拟青霉及其寄主山蝉若虫的干燥体。根据历史产区浙江的l 467份样品的调查，药材蝉花主要是蝉拟青霉寄生的虫菌复合体。蝉拟青霉又名雌蝉花，属半知菌类或有丝分裂孢子真菌，其孢梗囊自虫体头部丛聚成束长出，浅黄色，长1．5～6．0厘米，前端膨大，呈纺锤形。其主要鉴别特征是分生孢子梗上的分枝，多局限于顶部，瓶梗粗而短，密集，分生孢子较大，常弯曲。据有关资料介绍，蝉花含肝糖元、虫草酸、多种必需氨基酸、D一甘露醇、多种生物碱及麦角甾醇等。研究人员测定了蝉花中腺苷的含量，测定结果为，每克蝉花中含有135毫克腺苷。另有人对冬虫夏草和蝉花的多糖成分进行了比较研究，检测结果表明，冬虫夏草菌子座及其虫菌复合体，与蝉花菌子座及其虫菌复合体均含有多糖成分，且蝉花菌子座多糖含量高于冬虫夏草，但虫草菌复合体多糖含量高于蝉花。对蝉拟青霉中营养成分的研究表明，蝉拟青霉中含甘露醇2．18％、多糖21．73％，蝉拟青霉中所含氨基酸、多糖、甘露醇均与冬虫夏草相似，在对其中所含重金属砷、汞、铅的含量的检测中发现，蝉花中砷、铅的含量均比冬虫夏草低，而汞在蝉花中未检出，说明蝉拟青霉比冬虫夏草更加安全可靠。通过两者成分的比较，研究人员认为，蝉拟青霉具有与冬虫夏草相似的化学成分，故蝉拟青霉可能具有与冬虫夏草相似的药用价值，从而为蝉拟青霉作为冬虫夏草的替代品提供了理论依据。蝉花有多种药理作用： 1．免疫调节作用 研究人员将蝉花菌株进行人工发酵产生蝉花菌丝，从中提取蝉花多糖，并以冬虫夏草多糖为阳性对照物，对小鼠进行淋巴转化试验、Ea及E玫瑰花试验、特异性免疫玫瑰花试验、巨噬细胞吞噬试验、抗绵羊红细胞抗体效价试验，结果表明蝉花多糖具有明显提高免疫功能作用。 2．滋补强壮作用

几种真菌的分离与鉴定

常见真菌的分离与鉴定 病原真菌的一般特性 真菌（Fungi）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞，其他都有分支或不分支的丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌。 一、基本性状 （一）形态结构 真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌（yeast）一般呈球形或卵圆形，后者称为霉菌（mold）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。 真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样，分述如下。 1．菌丝（Hypha）真菌在合适的环境中，由孢子生出嫩芽，称为芽管。芽管逐渐延长呈丝状，称菌丝。菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交织组成菌丝体。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体。气生菌丝体能产生孢子者称为生殖菌丝体。菌丝中各个细胞间有明显分隔者，称为有隔菌丝。主要见于病原性真菌。很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，称为无隔菌丝。有些菌丝可呈各种特殊形式，如球拍状、破梳状、螺旋状、结节状、关节状、鹿角状、假菌丝。 2．孢子生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。真菌孢子的抵抗力、形态及作用等均与细菌芽胞不同，分为无性孢子及有性孢子两大类。不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子，这一繁殖过程称为无性繁殖。常见的无性孢子有5种：关节孢子、厚壁孢子、孢子囊孢子、芽孢和分生孢子。病原真菌属于不完全菌纲，很少产生有性孢子，大多数是无性孢子。 （1）厚壁孢子：当真菌在不利环境中，由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。

真菌学实验指导

本课程，本课程是大学本科生物技术、生物科学专业的选修课程。介绍真菌分类现状、分类方法（包括传统与现代分类方法的比较）、分类依据及其原则。本课程的教学不限于介绍研究的成果，重在介绍分析和解决问题的方法，以培养学生分析问题和创新的能力。所以在理论学习的同时开设综合性实验，培养学生观察、分析和动手能力。基本掌握真菌分离、鉴定的方法，并应用于真菌其它领域的研究。 本指导书适用于生物技术和生物科学专业。

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实验内生真菌的分离及鉴定 实验学时：18 实验类型：综合 实验要求：选修 一、实验目的 1.了解真菌形态的基本特征。 2.掌握丝状真菌制片方法和真菌鉴定方法。 二、实验内容 采集植物样品包括叶、茎、根、花、种子或果实，然后对分离样品的内生真菌，并进行形态和分子生物学方法的鉴定。 三、实验原理、方法和手段 （一）实验原理 根据真菌的形态特征和ITS序列等分子证据对分离到真菌进行归类和鉴定。 （二）实验手段和方法 1、内生真菌分离纯化方法 1.1样品的表面消毒及预处理 分别取根、茎、叶、果实，用洗涤剂在自来水下洗净。 老树皮用75%酒精进行表面消毒后，用镊子取出，于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊，切成1×1cm2大小置于PDA固体培养基上。 对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒： 75%的酒精漂（浸）洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间（共设置7个梯度）→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小块 将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开，并切成0.5×0.5cm2大小。将果实的外种皮去掉，消毒之后将内种皮去掉。 灭菌时，沥干的植物材料转放到烧杯中，记好时间，倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻搅动，以促进材料各部分与消毒溶液充分接触，驱除气泡，使消毒彻

金蝉花：金蝉花的功效与作用

金蝉花：金蝉花的功效与作用 吕迪 金蝉花又名蝉花、蝉花菌、蝉花虫草、大虫草、蝉虫草等，为一味古老而珍稀的食用菌菌药。 【金蝉花性味】金蝉花味甘；寒；无毒 【金蝉花归经】金蝉花归肺、肝、肾经 【金蝉花炮制】《雷公炮炙论》：凡使（蝉花），要白花全者。收得后于屋下悬干，去甲、土后，用浆水煮一日，至夜焙干，研细用之。 【金蝉花的功效与作用】 金蝉花的功效与作用，金蝉花疏散风热；透疹；熄风止痉；明目退翳。主外感风热；发热；头昏；咽痛；单板机疹初期；疹出不畅；小儿惊风；目赤肿痛；翳膜遮睛；夜啼等。 【金蝉花用法用量】 金蝉花的功效与作用：金蝉花内服：煎汤，3-9g；金蝉花冲剂，养生1-3克，一般慢性病如失眠、焦虑、肾病、肾功能不全、帕金森综合征、免疫力低下等2-4，抗肿瘤、抗肿瘤放化疗毒性6-15克 【金蝉花毒副作用】金蝉花无毒 【金蝉花的功效与作用的各家论述】 1.《证类本草》论述金蝉花的功效与作用：金蝉花主小儿天吊，惊痫，夜啼，心悸。 2.《纲目》论述金蝉花的功效与作用：金蝉花功同蝉蜕。又止疟。 【金蝉花的功效与作用的现代研究】 金蝉花的功效与作用：

1.金蝉花失眠、抗焦虑 2.金蝉花改善肾功能，延缓甚至控制肾小球肾小管间质纤维化，降肌酐、降蛋白尿等，改善骨髓功能状态 3.金蝉花显著调节免疫力 4.金蝉花延缓神经退化、衰退，延缓改善帕金森综合征的症状及进展 5．金蝉花抗肿瘤特别肺癌、胰腺癌等协同现代医学治疗疗效非常显著，一般6-8周可显著好转 5.1.金蝉花显著延缓、抑制肿瘤的进展 5.2.金蝉花预防传统化疗后因免疫力低而导致的感染 5.3.金蝉花缓解癌性疼痛 5.4. 金蝉花的功效与作用保护肝肾脏免受化疗药物的损伤 5.5.金蝉花保护骨髓免受化疗药物损伤等 5.6.金蝉花减少脱发、改善恶心呕吐症状等放化疗的毒副作用 5.7. 金蝉花的功效与作用，金蝉花改善和缓解肿瘤患者的焦虑状态，改善患者失眠症状

川芎内生真菌的分离与鉴定

川芎内生真菌的分离与鉴定 汪杨丽，严铸云，郭晓恒，宋杰，陈新，万德光 成都中医药大学药学院中药材标准化实验室，四川成都 (610075） E-mail：wangyangli27@https://www.360docs.net/doc/6f14822325.html, 摘要：目的：探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法：采用平板分离法分离川芎的内生真菌，采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果：从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株，经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论：不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异，推测川芎的道地性可能和川芎内生真菌种群有关。 关键词：川芎，内生真菌，分离鉴定 川芎为伞形科（Umbelliferae）藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛的功效，是著名的川产道地药材。四川都江、彭州为川芎的主要产区。此外，云南丽江、甘肃庄浪和华亭、江西等地也产，分别称“云芎”、“西芎”、“抚芎”[1～3]。有关不同产地及不同品种川芎的化学成分品质、药理、药效的研究报道较多[4]，但至今未见从川芎根茎分离内生真菌及其内生真菌种群多样性的研究报道。根据内生真菌和植物互惠共生的关系[5，6]，本文对不同产地及不同品种的川芎进行内生真菌的分离，探讨川芎在特定生境中的微生物群落结构的特征。 1. 材料与方法 1.1材料 1.1.1植物来源（见表1） 1.1.2 培养基 PDA培养基[7]（马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液[8]（用于分离）；PDA 培养基；促孢培养基（KH2PO41g、KNO31g、MgSO4.7H2O 0.5g、KCl 0.5g、淀粉0.2g、葡萄糖 0.2g、蔗糖 0.2g、琼脂15～20g、蒸馏水 1000ml、PH自然)。 表1 各种川芎的样品情况 药材名原植物部位采集地采集时间 川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 根茎四川彭州敖平2006.5.20 川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川都江堰石羊2006.5.22 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川彭州小鱼2006.7.24 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川汶川水磨2006.8.10 西芎L. sinense Oliv. 根茎甘肃平凉市华亭马峡2006.9.14 云芎L. chuanxiong Hort. cv. Jinxiong根茎云南丽江泸沽湖2006.8.17注：以上品种经成都中医药大学严铸云副教授鉴定 1.2方法 1.2.1. 内生真菌的分离先去掉新鲜川芎的须根，用自来水将川芎根茎表面洗净，用5%的NaClO溶液浸泡5min，用自来水反复的漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下，用75％酒精中浸泡5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块种植于PDA培养基内，每个培养皿中放7小块，每个样品6个培养皿，置28℃恒温箱中培养3～15d，观察到培养基上从各植物组织块内部向周围

金蝉花的功效与作用

大虫草金蝉花的功效与作用 上海肾病临床康复委员会吕迪 一、金蝉花简介 二、金蝉花应用人群 三、金蝉花质量区别 一、金蝉花简介 金蝉花、冬虫夏草同为麦角菌科虫生真菌，分别俗称为大小虫草，金蝉花是我国发现最为古老的虫生真菌名贵滋补中药材之一，是和冬虫夏草药性、适应人群互补的一对“阴阳虫草（太极虫草）”。金蝉花药性偏凉，冬虫夏草为温热，药性恰好相反；金蝉花适宜阴虚内热体质人群，冬虫夏草适宜内寒体质人群，因而，医药界称之为阴阳虫草、太极虫草实不为过。金蝉花是由蝉的幼虫感染麦角菌科真菌而形成的虫草，而冬虫夏草是由蝙蝠蛾科昆虫的幼虫感染麦角菌科真菌而形成的虫草而已。大虫草金蝉花早在3000年前就有古籍记载，也是我国发现最早的虫生真菌，在我国三大虫生真菌（金蝉花、冬虫夏草及僵蚕）中，较冬虫夏草早800余年，僵蚕近千年。《本草图经》、《雷公炮炙论》、《证类本草》、《中药大辞典》等医药书籍均有记载。金蝉花含有丰富的唯金蝉花特有的药物活性物质和营养素，如蝉花素、蝉花多糖、蝉花虫草酸、蝉花腺苷、蝉花类麦角甾醇、蝉花类透明质酸等。 中药材权威专家认为优质金蝉花具备以下几个条件1、产于横断山脉或天目山脉，2、虫体为苦竹蝉，3、感染的真菌为麦角

菌科真菌。 二、金蝉花应用人群 金蝉花性寒、味甘、无毒；具有疏散风热、定经镇痛、明目透疹、滋补强壮的功能，临床应用研究证实，金蝉花独有的药物活性物质对以下疾病具有预防和治疗作用，适应以下人群： 1、慢性肾病、肾功能不全、蛋白尿等，显著阻止减缓尿毒症的发生。 2、神经衰弱、失眠； 3、肿瘤辅助治疗；肿瘤化疗、放疗毒副作用的预防和治疗； 4、糖尿病、高脂血症、心肌缺血、冠心病，高血压； 5、治疗视力下降，预防治疗白内障等眼科视力疾病 6、养颜美容功效,抗衰老延年益寿作用；对亚健康人群、中老年人群具有极佳的综合养生调养保健作用。 （一）治疗慢性肾病、尿毒症改善肾功能的作用 国家重点学科上海中医药大学附属龙华医院肾内科陈以平教授领导的科研团队采用云南野生苦竹蝉金蝉花治疗慢性肾病、蛋白尿、泡沫尿、肾衰、尿毒症、保护残余肾功能、血尿等因取得显著临床疗效而荣获国家卫生部科技成果二等奖、上海市科技一等奖。 陈以平教授临床研究表明，金蝉花具有降低血、尿肌酐，提高体内生肌酐清除率，改善血清蛋白含量，减少尿蛋白的排出等功能。对慢性肾病；早、中期慢性肾功能不全患者疗效确切，一

植物病原真菌的分离培养精选文档

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实验十三植物病原真菌的分离培养 一、实验原理 植物患病组织内的真菌菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养，从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开，并从寄主植物中分离出来，再将分离到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病菌的分离培养。植物病原真菌的分离一般都是采用组织分离法，就是切取小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗过后，移到人工培养基上培养。 二、实验目的： 植物病原菌的分离培养是植物病理学实验最基本的操作技术之一，它对原害鉴定，病原形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手段。通过本实验，要求植物病原菌分离培养的一般原则和方法。 三、实验材料及准备： 1．分离材料：梨黑斑病（Alternaria kikuchiana），柿树圆斑病（Pestnlotia sp）及杉木炭疽病（Glomerella cingolata）新发病的病叶；杨树烂皮病（Cytospora chrysosperma）国槐腐烂病（Dothiorella sp.）的带有新病斑的枝条；油松种子。 2．分离用具（每小组为单位）

酒精灯4个，手术剪4把，眼科镊4把，PDA培养基3瓶，培养皿 （Φ9cm）24套，小烧杯（5ml）4个，大烧杯1个，斜面培养基12管，灭菌水4瓶，75%酒精瓶1个（内放脱脂棉球）%升汞瓶1个，5%乳酸瓶（60ml）1个，火柴1盒，湿、干纱布各4张。 四、实验方法及步骤： （一）、分离前的准备工作： 1．工作环境的清洁和消毒 分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）上进行，无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘，并用药物或紫外线照射消毒（常用消毒药物为70%酒精，2%煤酚皂液，5%石炭酸液等喷雾。若用紫外线灯照射则需20-30分钟）。在没有上述设备条件时，在清洁房间里关闭门窗，避免空气流动，经过喷雾除去空气及地面灰尘后进行操作，也可获得较好的结果。工作前擦净桌面，最好铺上湿纱布。将所需用的物品按次序放在工作台上，避免工作时走动，工作人员最好穿上灭菌后的工作服，带上口罩，并用肥皂洗手，用70%酒精或%新洁尔灭擦手。 2．分离用具的消毒 凡是和分离材料接触的器皿（刀、剪、镊、针等）都要随时（至少在使用时）保持无菌，将这些用具浸于70%酒精中，使用时在灯焰上灭菌烧去酒精，如此2-3次（刀、剪、镊等不宜在灯焰上烧时过长，以防退火）。再次使