植物离体快速繁殖和脱病毒技术课件
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第十五章植物离体快速繁殖和脱毒技术
第十五章植物离体快速繁殖和脱毒技术第一节植物离体快速繁殖的概念与应用一、植物离体快速繁殖技术的概念植物离体快速繁殖技术是植物生物技术的一个重要组成部分，通过离体培养，将来自优良植株的茎尖、腋芽、鳞片、叶片等器官、组织或细胞进行离体培养，以期在短期内以更快的速度获得遗传上稳定一致的大量个体。
这种无性繁殖方式与传统无性繁殖方式的区别在于繁殖速度快，不受自然的干扰，使育苗工厂化。
二、植物离体快速繁殖技术的目的与应用前景植物离体快速繁殖技术已广泛应用于花卉、蔬菜、林木和药材生产，目的在于扩大繁殖珍稀植物原始材料和品种资源，繁殖经济效益高但难以繁殖的植物，繁殖和保存无病毒原种材料及销售量大而传统无性繁殖难以满足需求的植物。
植物离体快速繁殖技术已在全球范围内发展起来，试管苗产业已经形成并在迅速发展，前景广阔。
尤其是在发展中国家，由于投资少、见效快，植物离体快速繁殖技术常作为植物生物技术的主要内容。
快速繁殖也是生物技术应用于农业生产的中间环节之一。
目前很多通过基因工程、体细胞无性系变异、原生质体培养等手段获得的新品系或品种，尤其是通过营养繁殖的植物，往往需要通过离体快速繁殖技术才能使其迅速进行田间试验和生产，及早推向市场。
现在试管植物的生产已由早期的以观赏植物为主逐渐发展到果树、林木、蔬菜及某些大田作物。
第二节植物离体快速繁殖技术程序与关键一、植物离体快速繁殖技术的程序植物离体快速繁殖程序如图15.1所示。
图15.1 植物离体快速繁殖技术程序示意图二、植物离体快速繁殖技术的关键1. 防止污染，保证快速繁殖的质量和速度有无污染是影响试管苗质量好坏和整个生产成败的关键因素之一。
植物材料应清洗干净和进行表面消毒，接种后及时检查并弃去污染的培养物，未污染材料进行继代培养和扩大繁殖。
有时已污染的材料由于比较宝贵或认为对培养物的生长影响不大，仍继续使用和扩大繁殖，但应对污染问题予以足够的重视。
污染来源主要有二：一是植物表面消毒不彻底，或是由植物材料内部的微生物随着材料进入培养过程，这些微生物一般不能通过表面消毒清除；二是在操作和培养过程中微生物进入培养器皿。
植物脱毒和快速繁殖技术 ppt课件
力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。
该法尤其适用于类菌原体、类细菌的脱毒，而对于
类病毒的脱毒效果较差，因为类病毒通常有较强的
热稳定性。这种处理方法与1921年首先用于甘蔗的
脱毒，国内用这种方法处理柑橘，可脱除柑橘材料
内的黄龙病类细菌。 PPT课件
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2 低热长时处理法
低热长时处理一般不能使整株植株脱毒，而只能 使个别器官脱毒，大多是使在热处理过程中长出的 茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生 的茎尖嫁接到无毒实生碊木上或将新产生的茎尖进 行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及 不同植物种类的脱毒率差异很大。
明显药害。据分析，抗病毒醚不是直接作用于病毒，而是作 用于寄主的代谢，从而阻止病毒的增殖，使新梢逐渐脱除病 毒。因此，认为在果树植株生长期间定期喷布抗病毒醚，有 可能在苗木顶端部分扩大无病毒区域，进而可增加茎尖培养 的脱毒效率。除抗病毒醚以外，还有报道证明一些其他药剂 也具有同样的作用。
4、合并使用药剂
在应用组织培养方法以获得无病原菌植株时，所用的外植体可以是茎 尖，也可以是茎的顶端分生组织。在这里，顶端分生组织是指最幼龄叶原基 上方的一部分，最大直径约为100，最长长度为250.茎尖则是由顶端分生组 织及下方的1~3个幼叶原基一起构成的。虽然通过顶端分生培养基消除病毒 的机会较高，但在大多数研究中，无病毒植物都是通过培养100~1000长的 外植体得到的，即通过茎尖培养得到。
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二、组织培养脱毒
1.茎尖培养脱毒
Morel等（1952）首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离 出茎尖分生组织（0.25mm）培养得到植株，嫁接在大丽花 实生砧木上检验未无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去 病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花等茎尖 培养脱毒的研究中获得成功。茎尖培养脱毒可脱除多种病毒、 类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除 的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。茎尖培养脱毒直接从茎尖 生长获得植株，很少有变异，能很好地保持品种的特性。
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• (3)诱导胚状体形成
• 是由植物器官、组织和细胞培养直接发生类胚结构， 最后以肧状体成苗的方式。在组织培养条件下胚状体 的发育过程类似于合子胚的发育：细胞经脱分化后， 发生持续细胞分裂增殖，并依次经过原胚期、球形胚 期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期，进而成为成熟 的胚状体。
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• 影响玻璃化苗发生的因素：
① 培养材料：材料种类和外植体不同都有影响。
② 环境因素：液体培养比固体培养更易玻璃化；蔗糖 浓度与玻璃化呈负相关；通气不良；温度过高等都 可导致玻璃化。
③ 培养基成分：铵离子过多可致玻璃化；6-BA浓度与 玻璃化呈正相关等。
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• 控制玻璃化苗的措施： ❖ 采用固体培养，提高蔗糖含量 ❖ 通气，适当提高光强，控制温度 ❖ 降低培养基中NH4+和细胞分裂素浓度 ❖ 其它措施
• 热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒，因此热 处理需与其他方法配合应用，才可获得良好的效果。
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• （2）化学方法
• 许多化学药品(包括嘌呤、嘧啶类似物、抗菌 素等)对离体组织和原生质体具有脱毒效果。 常用的药品有：8—氮鸟嘌呤、2—硫脲嘧啶、 杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。例 如，将100μg 2—硫脲嘧啶加入培养基可除去 烟草愈伤组织中的PVY(马铃薯病毒)。
酶联免疫法是指采用酶标记抗原或抗体的定 量测定法。将抗原固定在支持物上，加入待检 血清，然后加入酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶) 标记的抗体，使待检血清中与对应抗原的特异 性抗体结合，最后用特殊分光光度计测定。此 法是现在灵敏度较高和常使用的方法。
第五章 植物离体快速培养 植物快繁
目前已有近400种植物的离体繁殖已获得成功，其中许多具有 种植物的离体繁殖已获得成功 目前已有近 种植物的离体繁殖已获得成功， 重要经济价值的花卉(如兰花、菊花、石竹 、果树(草莓 草莓、 重要经济价值的花卉 如兰花、菊花、石竹)、果树 草莓、无籽 如兰花 西瓜、葡萄 、经济作物(马铃薯 甘蔗)、林木(桉树 杨树)均 马铃薯、 桉树、 西瓜、葡萄)、经济作物 马铃薯、甘蔗 、林木 桉树、杨树 均 已在种苗生产上广泛应用，取得了巨大的经济和社会效益。 已在种苗生产上广泛应用，取得了巨大的经济和社会效益。
四、快繁的应用及局限性
1. 应用 用于加速某些难繁殖或繁殖速度很低的植物， 用于加速某些难繁殖或繁殖速度很低的植物，或某些 需要加速繁殖的特殊基因型，如名贵花卉、优良资源、 需要加速繁殖的特殊基因型，如名贵花卉、优良资源、 工程植株等等。 工程植株等等。 用于自然繁殖极易感染病毒的植物，如马铃薯、甘薯、 用于自然繁殖极易感染病毒的植物，如马铃薯、甘薯、 甘蔗、香蕉、石竹、百合等等。 甘蔗、香蕉、石竹、百合等等。 用于有性繁殖变异范围大而自然条件下又不易无性繁 殖的植物，如非洲菊、花竹、紫罗兰等。 殖的植物，如非洲菊、花竹、紫罗兰等。
2. 快繁应用的局限性
）、培养苗的玻璃化问题 （2）、培养苗的玻璃化问题 ）、培养苗的玻璃化问题(vitrification )
成因：目前没有一致的结论， 成因：目前没有一致的结论，一般认为是试管苗的 生理失调主要是水分状态不适应的症状，实验发现 生理失调主要是水分状态不适应的症状， 水分状态不适应的症状 以下因素对玻璃化有影响。 以下因素对玻璃化有影响。 材料： 材料： 培养条件：液体培养易玻璃化； 培养条件：液体培养易玻璃化；蔗糖浓度和琼脂浓度低可
2. 培养物的增殖
第五章--植物离体快速繁殖PPT课件
第五，考虑器官的生理状态和发育年龄； 第六，选择大小合适的外植体；
外植体过大，不易灭菌，过小，不易成活。一般0.5-1cm；脱毒培养0.2-0.5cm。
.
9
外植体的灭菌
无菌的外植体材料是植物组织培养成功的重要前提与可靠保证，而消毒
则是获得无菌外植体的有效方法。取来的外植体需要经过仔细的表面灭菌处
理，外植体灭菌常用消毒剂。
第五章 植物离体微繁
主要内容： 1. 植物离体微繁 2. 影响植物离体微繁成功的因素 3. 植物离体微繁过程中常见异常现象及对策
.
1
思 考:
植物有哪些繁殖方法？
.
2
分株繁殖 压条繁殖
播种繁殖
嫁接繁殖
.
3
扦插繁殖
组织培养繁殖
.
4
1.植物离体微繁
植物离体微繁(micropropagation)：是指利用植物组织培养技术进行的 一种营养繁殖方法，是常规营养繁殖方法的一种扩展和延伸。是在短期内 获得大量遗传性状一致的个体的方法。属离体无性繁殖(propagation in vitro) 。又称为快速繁殖（rapid cloneprogagation）。
.
15
外植体接入培养基
.
16
注意
无菌培养体系的建立需注意下面两个问题： 1.采样和表面灭菌； 2.首次接种污染率的估算与对策： 首次接种，小容器，多数量，尽 量分散，互相隔离，效果最好。
.
17
第二阶段：稳定培养系的增殖、生长和增 状时期（诱导外植体生长与分化）
从植物组织培养积累的知识中，可将植物再生过程划分为四种方式： 1) 顶芽和腋芽的发育 2) 不定芽的发育 3) 体细胞胚状体的发生与发育 4) 原球茎的发育
外植体过大，不易灭菌，过小，不易成活。一般0.5-1cm；脱毒培养0.2-0.5cm。
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外植体的灭菌
无菌的外植体材料是植物组织培养成功的重要前提与可靠保证，而消毒
则是获得无菌外植体的有效方法。取来的外植体需要经过仔细的表面灭菌处
理，外植体灭菌常用消毒剂。
第五章 植物离体微繁
主要内容： 1. 植物离体微繁 2. 影响植物离体微繁成功的因素 3. 植物离体微繁过程中常见异常现象及对策
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思 考:
植物有哪些繁殖方法？
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分株繁殖 压条繁殖
播种繁殖
嫁接繁殖
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扦插繁殖
组织培养繁殖
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1.植物离体微繁
植物离体微繁(micropropagation)：是指利用植物组织培养技术进行的 一种营养繁殖方法，是常规营养繁殖方法的一种扩展和延伸。是在短期内 获得大量遗传性状一致的个体的方法。属离体无性繁殖(propagation in vitro) 。又称为快速繁殖（rapid cloneprogagation）。
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外植体接入培养基
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注意
无菌培养体系的建立需注意下面两个问题： 1.采样和表面灭菌； 2.首次接种污染率的估算与对策： 首次接种，小容器，多数量，尽 量分散，互相隔离，效果最好。
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第二阶段：稳定培养系的增殖、生长和增 状时期（诱导外植体生长与分化）
从植物组织培养积累的知识中，可将植物再生过程划分为四种方式： 1) 顶芽和腋芽的发育 2) 不定芽的发育 3) 体细胞胚状体的发生与发育 4) 原球茎的发育
《植物脱毒快繁技术》PPT课件
受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大
幅度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。
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1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药 物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效 药。种子一般不带病毒(豆类植物除外)，种子繁殖 可得无毒植株。但对于无性繁殖植物，必须采取 一些特殊方法脱除病毒。
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合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必
须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长
素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用
NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对某些
植物茎尖培养有用。
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3、茎尖的培养方法
材料选择、消毒 微茎尖的剥取 接种
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3、茎尖的培养方法
②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分 裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势， 使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速 分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植株。
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依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温。利 用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进 行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低， 传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存 活，并加快分裂和生长。
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热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊 花等植物。如：葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。
热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹 果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒 不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效 果更好。
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（二）茎尖培养脱毒
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
第4章-植物快繁与脱毒培养PPT课件
▪病毒(Virus) 个体微小，结构简单，成熟的个体称为病毒 粒体，有球状、杆状、线条状和弹状以及分枝丝状体，直径 或宽度约为10-120nm，体积比细菌小得多，能通过细菌滤 器。是一种严格寄生性的专性寄生物，又称分子寄生物。
.
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病毒在植株体内的扩散：
①短距离移动：通过胞间连丝在植物细胞间移动， 其扩散的速度很慢。如烟草普通花叶病毒运转 速度为6-13um/小时；
离体条件下，在外源细
胞分裂素的作用下可以使顶
芽和腋芽共同发育，形成多
枝多芽的小灌木丛状结构。
.
15
丛生芽增殖
.
16
单茎节增殖
.
17
以顶芽和腋芽发育进行增殖的特点：
利用外植体上已有的芽分生组织，促使其萌 发形成枝条或芽，方法简单，能高度保持遗传稳 定性，繁殖速度较慢。
适用于绝大多数植物的繁殖，对具有特殊观 赏价值的嵌合体(chimera)园艺植物来说，也是 唯一能够保持其原有嵌合特性的繁殖途径。
in vivo
试管苗的移植（stage4）
.
24
（一）供体材料的准备：Stage0
对供体植株及外植体的卫生、生理状态进行改进 。可以减少外植体的污染，易于消毒，并在离体培养 时启动生长较好。
常采用的方法：
供体植株在人工气候箱或温室栽培1-3月；
喷洒抗生素；
供体枝条预培养或黄化处理；
修剪、嫁接、避免顶部浇水和雨后取材等。
第四章 植物离体无性繁殖与脱毒技术
第一节 植物离体无性繁殖技术 第二节 植物脱病毒技术
.
1
有性繁殖 繁殖方式
无性繁殖
无融合生殖 营养繁殖
无融合生殖：在子房和胚珠内不经受精作用而以种子进行 繁殖的方式。
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病毒在植株体内的扩散：
①短距离移动：通过胞间连丝在植物细胞间移动， 其扩散的速度很慢。如烟草普通花叶病毒运转 速度为6-13um/小时；
离体条件下，在外源细
胞分裂素的作用下可以使顶
芽和腋芽共同发育，形成多
枝多芽的小灌木丛状结构。
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丛生芽增殖
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单茎节增殖
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以顶芽和腋芽发育进行增殖的特点：
利用外植体上已有的芽分生组织，促使其萌 发形成枝条或芽，方法简单，能高度保持遗传稳 定性，繁殖速度较慢。
适用于绝大多数植物的繁殖，对具有特殊观 赏价值的嵌合体(chimera)园艺植物来说，也是 唯一能够保持其原有嵌合特性的繁殖途径。
in vivo
试管苗的移植（stage4）
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（一）供体材料的准备：Stage0
对供体植株及外植体的卫生、生理状态进行改进 。可以减少外植体的污染，易于消毒，并在离体培养 时启动生长较好。
常采用的方法：
供体植株在人工气候箱或温室栽培1-3月；
喷洒抗生素；
供体枝条预培养或黄化处理；
修剪、嫁接、避免顶部浇水和雨后取材等。
第四章 植物离体无性繁殖与脱毒技术
第一节 植物离体无性繁殖技术 第二节 植物脱病毒技术
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有性繁殖 繁殖方式
无性繁殖
无融合生殖 营养繁殖
无融合生殖：在子房和胚珠内不经受精作用而以种子进行 繁殖的方式。
修改第四章植物离体快速繁殖ppt课件
6. 鳞茎型 百合的鳞茎切块接种在不同激素配比的修改的MS培养
基上，鳞片基部近轴面或在边缘直接形成带根的小鳞茎。而 卷母的二、三年生幼嫩鳞片，可不经过愈伤组织直接形成小 瘤状或叶状体，再将其切块及时移入修改的ER培养基上，二、 三个月后诱导出与自然界条件下生长相同的贝母鳞茎。
系数高,首先证明 甘蔗、胡萝卜、
细胞的全能性
石刁柏等
原球茎型 球茎芽型
块茎型 鳞茎型
由茎尖或腋芽产生原 遗传稳定,原球茎可作
球茎
为繁殖系母体
兰花
叶柄表面产生圆球形 遗传稳定,球茎芽可直 球茎芽,一端出根另一 接放入土中种植
端出芽
观赏海棠
叶片叶柄上形成粒状 块茎芽可作为繁殖母体,
芋块,进一步分化出根 不断切割繁殖移栽,成
4. 球茎芽型 不同发育阶段的球茎都是茎或枝条的变态形式。由非
茎尖或侧芽的外植体不经脱分化的愈伤组织，直接从圆球茎 分化出芽和根器官的方式叫球茎芽型。
5. 块茎型 块茎是膨大的地下茎，其表面有芽眼。当花叶芋的
叶片或叶柄接种在培养基上，先形成类似愈伤组织的小硬突 起，并逐渐形成粒状的芋块。随着小芋块的增大，分化出的 芽也越密集并形成许多小苗，在小苗基部与芋块交接处分化 出白色的根，与正常块茎切块繁殖的幼苗相同，即首先形成 有分化能力的块茎（芋块），然后在块茎上分化出小芋块， 再在其上分化出芽和根，最后生长发育成小植株。
（4）利用2,4-D和IAA可延缓多酚合成，减轻褐化的产生， 但外植体在高浓度的2,4-D下培养时间过长，愈伤组织变得 松软、呈水渍状，失去分化能力。 （5）降低培养基中的pH值控制酚氧化酶活性和底物利用率， 因为这种酶在pH=6.5时活性最强。
（6）改变氧化-还原势常用的还原剂有维生素C、柠檬酸、 巯基乙醇、谷胱甘肽、二硫苏糖醇、半胱氨酸等。使用方法 可以在外植体材料消毒前快速浸入其中30秒～60秒，浸泡时 间不可过长，否则外植体褐变会更加严重，因为抗氧化剂对 外植体有一定毒害作用；或用它们浸湿滤纸并在其上进行外 植体的切割。
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➢ ④连续转接 对容易褐变的材料可间隔12~24h的培养 后，再转移到新的培养基上，这样经过连续处理7-l0d 后，褐变现象便会得到控制或大为减轻。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
➢ ③培养基成分 无机盐浓度过高、细胞分裂素的水平过 高等都会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而 使褐变现象加深。
➢ ④培养条件不当 如果光照过强、温度过高、培养时间 过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速褐 变程度。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
• 特点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工； 可大量繁殖脱毒苗；利于种质资源的保存和交换等；节约 空间，不受季节限制，有利于植物的工厂化生产；在无菌 条件下进行，不受病虫害侵害。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
第5章 植物离体快速繁殖和 脱病毒技术
• 5.1 植物快速繁殖技术 • 5.2 无病毒植物的培养
5.1 植物快速繁殖技术
• 概念：所谓快速繁殖，就是将外植体在人工培养基和合适 的条件下进行培养，以在短期内获得大量遗传性一致的个 体的方法。
• 肧状体途径优点是增值率高，同时具胚根和胚芽，免 去生根一步；可用于制作人工种子，便于运输和保存。 缺点是肧状体成苗率低，遗传性状不稳定。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
5.1.3 诱导生根
MS、B5、White等培养基，都可用于诱导生根，但 是其含盐浓度要适当加以稀释，它们都抑制根的发生。 应将它们降低到1／2，1／3或1／4，甚至更低的水平。
• 移栽前的练苗
• 移栽前可将培养物不开口移到自然光照下锻炼 2—3d，让试管苗接受强光的照射，或培养基 中加入矮壮素等生长延缓剂等。使苗长得壮实 起来，然后再开口练苗1—2d，经受较低湿度 的处理 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
移栽和幼苗的管理
• 从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部 粘着的培养基，要全部除去，以防残留培养基 滋生杂菌。但要轻轻除去，应避免造成伤根。 栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔， 然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤， 栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水。 栽后轻浇薄水。再将苗移入高湿度的环境中。 搭设小拱棚，以减少水分的蒸发，保证空气湿 度达90%以上。
（1）保证无菌：外植体、培养基、培养室无菌状态。
（2）条件合适：合适的外植体；合适的培养基；适宜 的培养条件。
（3）技术过关：要熟练掌握无菌操作技术。
（4）防止褐变：外植体褐变是指在接种后，其表面开 始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。它的 出现是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，将酚类 化合物氧化成醌类物质，它们多呈棕褐色，会抑制其 它酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。
减轻褐变现象发生的方法
➢ ①选择合适的外植体 一般来说，最好选择生长处于旺 盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。
➢ ②合适的培养条件 无机盐成分、植物生长物质水平、 适宜温度等均可以减轻材料的褐变现象。
➢ ③使用抗氧化剂 在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血 酸、PVP等抗氧化剂能够减轻很多外植体的褐变现象。 另外，使用0.1%-0.5%的活性炭对防止褐变也有较为 明显的效果。
生根培养基适当加大生长素的浓度，不用或少用细胞 分裂素，生长素浓度在1-10mg/l，使用较多的是 NAA，其次为IAA和IBA。
培养基中蔗糖的浓度降低到1.0-1.5%，以增强植株 的自养能力。培养基不宜过硬以免影响生根。
为提高小植株的光合能力，可将光强度增加到300010000lux。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
• 快速繁殖过程一般包括四个阶段，即无菌 培养物的建立、芽的增殖、诱导生根和试 管苗的驯化和移载。
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5.1.1 无菌培养物的建立
初代培养：进行离体繁殖时首先必须建立的无菌培养 物。需注意以下几点：
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
• (3)诱导胚状体形成
• 是由植物器官、组织和细胞培养直接发生类胚结构， 最后以肧状体成苗的方式。在组织培养条件下胚状体 的发育过程类似于合子胚的发育：细胞经脱分化后， 发生持续细胞分裂增殖，并依次经过原胚期、球形胚 期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期，进而成为成熟 的胚状体。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
褐变的主要原因
➢ ①植物种类和基因型 由于多酚氧化酶活性上的差异， 不同品种间的褐变现象是不同的。
➢ ②取材部位和生理状态 处于幼龄期的植物材料褐变程 度较浅，而从已经成年的植株采收的外植体，由于含 醌类物质较多，因此褐变较为严重。
5.1.4 试管苗的驯化和移栽
• 驯化或炼苗：为了适应移栽后较低湿 度和较高光强等环境条件，能顺利进行 自养，必须有一个逐步锻炼和适应的过 程，这个过程叫驯化或炼苗。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
➢ ③培养基成分 无机盐浓度过高、细胞分裂素的水平过 高等都会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而 使褐变现象加深。
➢ ④培养条件不当 如果光照过强、温度过高、培养时间 过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速褐 变程度。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
• 特点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工； 可大量繁殖脱毒苗；利于种质资源的保存和交换等；节约 空间，不受季节限制，有利于植物的工厂化生产；在无菌 条件下进行，不受病虫害侵害。
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第5章 植物离体快速繁殖和 脱病毒技术
• 5.1 植物快速繁殖技术 • 5.2 无病毒植物的培养
5.1 植物快速繁殖技术
• 概念：所谓快速繁殖，就是将外植体在人工培养基和合适 的条件下进行培养，以在短期内获得大量遗传性一致的个 体的方法。
• 肧状体途径优点是增值率高，同时具胚根和胚芽，免 去生根一步；可用于制作人工种子，便于运输和保存。 缺点是肧状体成苗率低，遗传性状不稳定。
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5.1.3 诱导生根
MS、B5、White等培养基，都可用于诱导生根，但 是其含盐浓度要适当加以稀释，它们都抑制根的发生。 应将它们降低到1／2，1／3或1／4，甚至更低的水平。
• 移栽前的练苗
• 移栽前可将培养物不开口移到自然光照下锻炼 2—3d，让试管苗接受强光的照射，或培养基 中加入矮壮素等生长延缓剂等。使苗长得壮实 起来，然后再开口练苗1—2d，经受较低湿度 的处理 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
移栽和幼苗的管理
• 从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部 粘着的培养基，要全部除去，以防残留培养基 滋生杂菌。但要轻轻除去，应避免造成伤根。 栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔， 然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤， 栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水。 栽后轻浇薄水。再将苗移入高湿度的环境中。 搭设小拱棚，以减少水分的蒸发，保证空气湿 度达90%以上。
（1）保证无菌：外植体、培养基、培养室无菌状态。
（2）条件合适：合适的外植体；合适的培养基；适宜 的培养条件。
（3）技术过关：要熟练掌握无菌操作技术。
（4）防止褐变：外植体褐变是指在接种后，其表面开 始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。它的 出现是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，将酚类 化合物氧化成醌类物质，它们多呈棕褐色，会抑制其 它酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。
减轻褐变现象发生的方法
➢ ①选择合适的外植体 一般来说，最好选择生长处于旺 盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。
➢ ②合适的培养条件 无机盐成分、植物生长物质水平、 适宜温度等均可以减轻材料的褐变现象。
➢ ③使用抗氧化剂 在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血 酸、PVP等抗氧化剂能够减轻很多外植体的褐变现象。 另外，使用0.1%-0.5%的活性炭对防止褐变也有较为 明显的效果。
生根培养基适当加大生长素的浓度，不用或少用细胞 分裂素，生长素浓度在1-10mg/l，使用较多的是 NAA，其次为IAA和IBA。
培养基中蔗糖的浓度降低到1.0-1.5%，以增强植株 的自养能力。培养基不宜过硬以免影响生根。
为提高小植株的光合能力，可将光强度增加到300010000lux。
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• 快速繁殖过程一般包括四个阶段，即无菌 培养物的建立、芽的增殖、诱导生根和试 管苗的驯化和移载。
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5.1.1 无菌培养物的建立
初代培养：进行离体繁殖时首先必须建立的无菌培养 物。需注意以下几点：
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• (3)诱导胚状体形成
• 是由植物器官、组织和细胞培养直接发生类胚结构， 最后以肧状体成苗的方式。在组织培养条件下胚状体 的发育过程类似于合子胚的发育：细胞经脱分化后， 发生持续细胞分裂增殖，并依次经过原胚期、球形胚 期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期，进而成为成熟 的胚状体。
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褐变的主要原因
➢ ①植物种类和基因型 由于多酚氧化酶活性上的差异， 不同品种间的褐变现象是不同的。
➢ ②取材部位和生理状态 处于幼龄期的植物材料褐变程 度较浅，而从已经成年的植株采收的外植体，由于含 醌类物质较多，因此褐变较为严重。
5.1.4 试管苗的驯化和移栽
• 驯化或炼苗：为了适应移栽后较低湿 度和较高光强等环境条件，能顺利进行 自养，必须有一个逐步锻炼和适应的过 程，这个过程叫驯化或炼苗。
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