lcms液质联用方法开发_沃特斯培训教材_
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
– 有丰富的m/z 102离子存在（三乙胺加质子的峰）。 – 抑制弱碱性化合物的ESI+电离，但能提高弱碱性化合物的
ESI-电离。
• THF（四氢呋喃）
– 100% 的四氢呋喃可能会着火。 – 当喷雾气是空气时，在APCI电离方式，不能用四氢呋喃。 – 腐蚀PEEK管
不恰当的溶剂和缓冲盐
• 不挥发性缓冲盐 (磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸 盐等)－堵塞管路和探头
• 表面活性剂－抑制电离 • 无机酸 (硫酸、磷酸等)－腐蚀
• 腐蚀 PEEK
– HNO3 – H2SO4
用PEEK管时注意溶剂的使用
• 溶胀 PEEK
– DMSO – THF – CH2Cl2
溶样的溶剂 – 乙腈／水
利谷隆
溶样的溶剂 –甲醇／水
溶剂的选择
用同位素模型算同位素峰
两种不同有机溶剂的比较
NH
O
N
CH3
Cl
H3C
O
Cl
Linuron 利谷隆+ve ion
(M+H)+ (M-H)-
CH3 H3C
CH3 O
OH
Ibuprofen布洛芬 -ve ion
正离子方式 – 分析碱性化合物
用有机酸调整 pH 值 如：甲酸或乙酸
负离子方式 – 分析酸性化合物
用碱调整 pH 值 如：氢氧化铵/氨水
pH 值的影响
流动相配比的影响
等度 LC
HPLC等度和梯度方法比较
梯度 LC
样品全溶解于水中
分析物溶解
样品溶解于流动相中
流速对大气压电离的影响
Relative intensity
100 50
0
0.5
1.0
1.5
2.0
流速 (ml/min) (50/50 ACN/H20)
APCI
Pneumatically assisted ESI ‘Pure’ ESI
LC流速一般根据色谱柱规格和电离方式来确定
0.5-2 ml/min
Байду номын сангаас
3.9-4.6 mm i.d.
0.1-0.3 ml/min
2.1 mm i.d.
40-50 µl/min
1 mm i.d.
< 10 µl/min
Capillary column
APcI 0.2-2 ml/min ESI 5-300 µl/min routinely (1 ml/min possible)
HPLC色谱柱的影响
色谱柱的选择
• 当进样量相同时，一般情况下，内径小的色谱 柱比内径大的色谱柱有更高的响应。
• 用ESI电离方式时，一般建议用2.1mm内径的色 谱柱，用APCI电离方式时，用3.9mm内径的色谱 柱。
色谱柱温度变化的影响
质谱能适应的流动相流速
APCI 0.2 - 1 ml/min (不用分流)
ESI 1 - 300 µl/min (需要分流，约 250 µl 进入质谱)
分流器的连接
PEEK 管 分析色谱柱
死体积为零的三通
电雾喷探头
PEEK 管 废液池或溜分收集器
LC流速对质谱的影响
LC流速对质谱的影响
HPLC色谱柱的选择
LC-MS液质联用方法开发
LC-MS配置
色谱柱
分流器
探头
液相色谱仪和进样器
废液或馏分收集 器
基质干扰: Loop 进样
In Methanol
In Tomato Juice
基质干扰: 用色谱柱将基质和分析物分离
In Methanol
In Tomato Juice
正离子方式或负离子方式?
碱性化合物 (-NH2) 酸性化合物 (-CO2H, -OH)
pH 值的影响
pH 值的影响
溶剂
水 乙腈 甲醇 异丙醇
一般所用溶剂和缓冲盐
缓冲盐
甲酸 乙酸 氢氧化胺 乙酸胺*
* 缓冲盐浓度应不超过10 mM 。
溶剂和添加剂的选择
• TFA（三氟乙酸）- 用于分析蛋白和多肽
– 它能抑制ESI+电离至少 0.1%。 – 它将很大程度上抑制ESI-电离。
• TEA（三乙胺）
ESI-电离。
• THF（四氢呋喃）
– 100% 的四氢呋喃可能会着火。 – 当喷雾气是空气时，在APCI电离方式，不能用四氢呋喃。 – 腐蚀PEEK管
不恰当的溶剂和缓冲盐
• 不挥发性缓冲盐 (磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸 盐等)－堵塞管路和探头
• 表面活性剂－抑制电离 • 无机酸 (硫酸、磷酸等)－腐蚀
• 腐蚀 PEEK
– HNO3 – H2SO4
用PEEK管时注意溶剂的使用
• 溶胀 PEEK
– DMSO – THF – CH2Cl2
溶样的溶剂 – 乙腈／水
利谷隆
溶样的溶剂 –甲醇／水
溶剂的选择
用同位素模型算同位素峰
两种不同有机溶剂的比较
NH
O
N
CH3
Cl
H3C
O
Cl
Linuron 利谷隆+ve ion
(M+H)+ (M-H)-
CH3 H3C
CH3 O
OH
Ibuprofen布洛芬 -ve ion
正离子方式 – 分析碱性化合物
用有机酸调整 pH 值 如：甲酸或乙酸
负离子方式 – 分析酸性化合物
用碱调整 pH 值 如：氢氧化铵/氨水
pH 值的影响
流动相配比的影响
等度 LC
HPLC等度和梯度方法比较
梯度 LC
样品全溶解于水中
分析物溶解
样品溶解于流动相中
流速对大气压电离的影响
Relative intensity
100 50
0
0.5
1.0
1.5
2.0
流速 (ml/min) (50/50 ACN/H20)
APCI
Pneumatically assisted ESI ‘Pure’ ESI
LC流速一般根据色谱柱规格和电离方式来确定
0.5-2 ml/min
Байду номын сангаас
3.9-4.6 mm i.d.
0.1-0.3 ml/min
2.1 mm i.d.
40-50 µl/min
1 mm i.d.
< 10 µl/min
Capillary column
APcI 0.2-2 ml/min ESI 5-300 µl/min routinely (1 ml/min possible)
HPLC色谱柱的影响
色谱柱的选择
• 当进样量相同时，一般情况下，内径小的色谱 柱比内径大的色谱柱有更高的响应。
• 用ESI电离方式时，一般建议用2.1mm内径的色 谱柱，用APCI电离方式时，用3.9mm内径的色谱 柱。
色谱柱温度变化的影响
质谱能适应的流动相流速
APCI 0.2 - 1 ml/min (不用分流)
ESI 1 - 300 µl/min (需要分流，约 250 µl 进入质谱)
分流器的连接
PEEK 管 分析色谱柱
死体积为零的三通
电雾喷探头
PEEK 管 废液池或溜分收集器
LC流速对质谱的影响
LC流速对质谱的影响
HPLC色谱柱的选择
LC-MS液质联用方法开发
LC-MS配置
色谱柱
分流器
探头
液相色谱仪和进样器
废液或馏分收集 器
基质干扰: Loop 进样
In Methanol
In Tomato Juice
基质干扰: 用色谱柱将基质和分析物分离
In Methanol
In Tomato Juice
正离子方式或负离子方式?
碱性化合物 (-NH2) 酸性化合物 (-CO2H, -OH)
pH 值的影响
pH 值的影响
溶剂
水 乙腈 甲醇 异丙醇
一般所用溶剂和缓冲盐
缓冲盐
甲酸 乙酸 氢氧化胺 乙酸胺*
* 缓冲盐浓度应不超过10 mM 。
溶剂和添加剂的选择
• TFA（三氟乙酸）- 用于分析蛋白和多肽
– 它能抑制ESI+电离至少 0.1%。 – 它将很大程度上抑制ESI-电离。
• TEA（三乙胺）