质谱和液质联用快速入门
液相色谱质谱联用 ppt课件
负离子检测 -[M-H]- 碱性条件 -[M+X]- X=溶剂或缓冲溶液中 的阴离子 -[M-H+S]- 溶剂加合离子
名义分子量和平均分子量
对于分子C6H3Cl3 平均分子量为 6(12.01115)+3(1.000797)+3(35.453) MW=181.428
6(12.000)+3(1.00078)+3(34.9989)=179.9990 精确质量/单同位素质量
小结：流动相的考虑
金属离子缓冲盐影响离子化 表面活性剂影响去溶剂化 离子对试剂可以离子化，而导致高背景噪音 强离子对试剂可与待测物反应，导致待测物不
能离子化 TEA 干扰正离子模式(m/z102) TFA 扰负离子模式(m/z113) 增塑剂（邻苯二甲酸酯）背景干扰，
(m/z149,315, 391)
1 电离模式的选择 2 查阅文献，参考样品前处理的技术路线和色谱分离条件 、质谱参数条件等。 3 MRM 参数优化 使用标准品优化 fragmentor 和 collision energy 4 离子源参数的优化（源温度、流速） 5 LC分离方法的优化，1-3 min为理想
MRM 参数优化
扫描（MS2 Scan）
液相色谱质谱联用
Agilent LC-MS/MS 6420
精品资料
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• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
速和温度 选择母离子：准分子离子，[M+H]+、[M-
H]-优先，避免选择加和离子[M+Na]+,所 需能量较低，灵敏度好。 子离子的选择：高质量端的特征离子。
液质联用操作方法
液质联用操作方法
液质联用（LC-MS）是一种结合液相色谱和质谱分析技术的方法，用于分析和鉴定化合物。
液相色谱（LC）部分步骤如下：
1. 样品预处理：将待测样品制备成液态，并进行适当的前处理（如提取、浓缩）。
2. 样品注射：将处理好的样品注射到液相色谱柱中。
3. 色谱分离：使用适当的流动相在柱上进行色谱分离。
根据样品的特性，可以选择不同的柱材和分离条件。
4. 数据采集：使用色谱检测器对分离出的化合物进行检测，并记录数据。
质谱（MS）部分步骤如下：
1. 离子化：通过引入电离源，将色谱分离出的化合物转化为带电荷的离子。
2. 分析：使用质谱仪分析离子的质量-荷比，并进行质谱图的记录和解释。
3. 数据处理：对质谱数据进行处理和解析，包括离子识别、质量准确度计算、离子结构推测等。
液质联用操作方法一般如下：
1. 准备样品并进行前处理。
2. 将样品注射到液相色谱装置中，进行色谱分离。
根据需要，可以选择不同的柱材和分离条件。
3. 将分离出的化合物引入质谱仪中，进行质谱分析。
可以选择不同的离子化方
式和质谱分析模式。
4. 记录和解释质谱数据，进行化合物的鉴定和定量分析。
5. 对数据进行处理和解析，进行结果的报告和解释。
液质联用方法在化学、生物、药物等领域中广泛应用，可用于定性和定量分析、代谢研究、蛋白质组学研究等。
具体的操作方法可以根据实验需求和仪器设备的不同进行调整和优化。
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
流量。
高流速需进行分流
需要提高毛细管温度
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
大气压化学电离源(APCI)
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• ESI
• 离子在液态产生 • 有益于热不稳定化合物的分
ionization，APCI）
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
正离子模式：ESI(+)或APCI(+)
适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨 或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。
负离子模式：ESI(-)或APCI(-)
适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较 多的强负电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模 式。
大气
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• 离子源的作用
去溶剂 离子化 液相色谱与质谱的接口
真空过渡
去除干扰
• 大气压电离源（Atmosphere pressure ionization，API）
电喷雾电离源（Electrospray ionization，ESI） 大气压化学电离源（Atmosphere pressure chemicel
推荐使用水、甲醇、乙腈、异丙醇 不能使用四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷、氯仿
酸
不能使用无机酸(可能会导致腐蚀) 推荐使用醋酸和甲酸
三氟乙酸（TFA）会产生离子抑制作用
液质联用_精品文档
液质联用摘要：液质联用是一种分析方法，在液相色谱（LC）与质谱（MS）的联用之下，可以实现样品的分离与定性分析。
本文将介绍液质联用的原理、方法和应用领域，并探讨其在分析化学领域中的重要性。
引言液质联用是液相色谱与质谱技术的有机结合，自从20世纪70年代引入以来，已经成为分析化学领域中的一种重要技术。
液质联用的出现解决了传统的液相色谱技术无法解决的复杂样品中成分分离和定性分析的问题。
液质联用技术的出现不仅扩大了色谱技术的应用领域，同时也提高了分析的灵敏度和选择性。
一、液质联用的原理液质联用是通过将液相色谱分析系统（包括流动相送进层析管柱）与质谱仪连接，将色谱分离物根据其保留时间通过电离源送入质谱仪，然后通过质谱仪对物质进行离子化，进一步分析和鉴定物质结构。
这种联用技术将色谱分离和质谱检测有机地结合起来，使得液相色谱分离与质谱检测同步进行，提高了分析的灵敏度和选择性。
（一）色谱分离液相色谱分离是液质联用的第一步，它通过色谱柱的分离作用将复杂的样品分离成不同的成分。
在液质联用中，常用的色谱柱有反相柱、离子交换柱和亲和柱等。
色谱柱的选择主要取决于样品的性质和分析目的。
（二）质谱检测质谱仪的作用是对物质进行离子化和鉴定。
通过电离源对分离出的化合物进行电离，生成荷质比，然后通过质量分析仪分析质荷比。
质谱仪的检测器有质量分析器、荷质比分析器和飞行时间质谱仪等，根据不同分析目的选择合适的检测器。
二、液质联用的方法液质联用有几种常用的方法，包括离子化方式、接口结构和离子来源。
（一）离子化方式常见的离子化方式有电喷雾离子化（ESI）和大气压化学电离（APCI）等。
ESI是指将液相色谱分离后的化合物通过电喷雾离子源离子化，形成带电状态；APCI则是将气相组分通过大气压离子源离子化。
根据样品的特性和需要，选择合适的离子化方式。
（二）接口结构接口是将液相色谱分离柱与质谱仪相连接的部分，主要有引导管、雾化室和渗透区等。
接口结构的选择直接影响到液质联用的效果，需要根据实验需求选择合适的接口结构。
液质联用
现代分析技术之液相色谱-质谱联用技术一、 概述1、质谱质谱法（Mass Spectrometry）即质谱分析法不同质荷比的离子经质量分析器分离，而后被检测并记录下来的谱图叫做质谱图(Mass Spectrum)质谱图的横坐标是质荷比（m/z)，纵坐标是离子强度2、质谱检测的是离子质量质谱中采用的质量单位—Da=Dalton（道尔顿）质量单位，等于一个碳原子（12C）质量的十二分之一，约为1.66×10-24克；一克约为6×1023道尔顿—amu=atomic mass unit，原子质量单位1amu=1Da3、质量数¾名义质量数—采用元素质量数的整数进行计算，例如：C=12，H=1，O=16¾单同位素质量数或准确质量数—用丰度最大的同位素准确质量数计算—例如：12C=12,1H=1.0078,16O=15.9948¾平均质量数或化学质量数—考虑到所有天然同位素丰度的该元素原子量来计算—例如：C=12.001，H=1.00794，O=15.9994¾质谱获得的单电荷离子的m/z值，是单同位素质量数4、分子量的计算利血平，C33H40N2O9的MW的计算5、液质联用（LC/MS）色谱质谱的联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。
6、LC/MS中的液相色谱液质联用的前提和基础=进样+分离根据化合物的化学特性分离样品（比如极性化合物，非极性化合物，酸性化合物，碱性化合物等）LC的特点：分离技术分离效率高连续流出，峰宽有限有时需要使用缓冲盐提高分离度高压环境工作（>1000 psi）7、LC/MS中的质谱质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱分析物被转化为气相离子而被分析离子按其质荷比（m/z）被分离及检测MS的特点：灵敏度高定性/定量高真空环境工作溶剂参与反应（API电离源）8、LC/MS的局限性异构体，立体化学方面区分能力差。
质谱讲义及液质联用的实例
分析过程的质量控制对质谱确证方 法的要求
¾ 对于每个诊断离子，信噪比 >3:1 ¾ 测定至少一对离子丰度比 ¾ 相对离子丰度最大容许偏差 不能超过下表
相对丰度 （%基峰）
>50%
EI-GC-MS （相对）
±10%
CI-GC-MS、GC-MSn LC-MS、LC-MSn （相对）
±20%
>20%到50%
O CH3 [M+H]+
100
CH3
315.1
CH3
O
%
316.1
0
m/z
200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400
全扫描(M/Z200-400)
子离子扫描
MS1
Product Ion Scan
Argon gas
Collision
Cell
MS2
Precursor
R1 L-Arg L-Tyr L-Leu L-Leu L-Leu L-Leu L-Leu
H
R2 L-Arg L-Arg L-Arg L-Ala L-Tyr L-Try L-Phen
ADDA
OCH3 H
D-Glu
H COOH
H3C H
H
HN O
H
CH3 CH3
NH H CH3 H
H
[R2]
CH3
N
O O
3、液质联用法（确认与定量法）目前国内未建立 检出限：0.01ng/ml以下
酶标板
ELISA板最常用的材料是聚苯乙烯。聚苯乙烯 具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原 吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价 格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯ELISA 板由于 原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差 异很大，良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白 值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间 性能相近。
LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍
LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍LC-MS是液相色谱-质谱联用技术，是将液相色谱（LC）与质谱（MS）两种分析技术结合起来，对化合物进行分离和定性定量分析。
液相色谱将混合物中的化合物分离开来，而质谱则对分离后的单个化合物进行分子结构和组成的分析。
LC-MS的原理是首先通过液相色谱将混合物中的化合物分离开来。
液相色谱采用一个固定相（如柱子内的填料）和一个移动相（溶剂），将待分离的化合物通过不同的亲和性与固定相进行交互，从而使化合物逐步分离。
分离后的化合物进入质谱部分进行分析。
质谱主要是通过离子化技术将分离后的化合物转化为离子，并在电场作用下进行分离和检测。
常见的离子化技术包括电喷雾离子源（ESI）和化学电离（CI）等。
在质谱仪中，离子化的化合物被加速到一定能量，通过一个磁场进行分离，根据离子的质量与荷比（m/z）比值，可以得到化合物的分子质量。
LC-MS的基础知识包括液相色谱和质谱。
液相色谱（LC）：液相色谱是一种在液体流动相中通过固定相分离化合物的技术。
在液相色谱中，通过调节流动相的组成、温度、流速等参数，可以改变溶剂在固定相上的极性和亲和力，从而实现化合物的分离。
常见的液相色谱技术包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）、离子色谱（IC）等。
质谱（MS）：质谱是一种通过分析分子离子的质荷比来确定化合物的结构和组成的分析技术。
质谱主要包括离子化、质量分析和信号检测等步骤。
离子化可以通过不同的技术实现，如电喷雾离子源（ESI）、化学电离（CI）等。
质量分析部分主要通过加速离子，使其通过磁场分离，根据离子质量与荷比，可以得到化合物的质量。
信号检测主要是在质谱仪内部检测加速离子之后的荷电粒子。
LC-MS在许多领域中有广泛的应用。
例如，在生物医药领域，LC-MS 可以用于药物代谢和药物残留的研究；在环境科学中，LC-MS可以用于检测水体和土壤中的有机污染物；在食品安全监测中，LC-MS可以用于检测食品中的农药残留和添加剂等。
液相色谱质谱联用仪使用方法说明书
液相色谱质谱联用仪使用方法说明书一、概述液相色谱质谱联用仪（Liquid Chromatography Mass Spectrometry,LC-MS）是一种高效、灵敏、准确的分析仪器，可广泛应用于药物研发、食品安全、环境监测等领域。
本说明书将详细介绍液相色谱质谱联用仪的使用方法，以帮助用户正确操作设备、获得准确可靠的实验结果。
二、仪器准备在操作液相色谱质谱联用仪前，必须先保证仪器和设备处于正常工作状态。
以下是仪器准备的步骤：1. 检查仪器的电源和通电线路，确保供电正常。
2. 打开仪器主机，并等待其启动完成。
3. 检查液相色谱部分的压力、流速等参数是否正常设置。
4. 检查质谱部分的离子源、质谱扇区等参数是否正常设置。
5. 检查进样部件及其周围的管线是否干净，无杂质。
6. 检查色谱柱的连接是否牢固，无泄漏。
三、样品处理在进行液相色谱质谱联用分析之前，需要对样品进行适当的前处理。
以下是样品处理的一般步骤：1. 收集样品，并进行必要的前处理，如固相萃取、溶解等。
2. 确保样品处理过程中不受外界污染物的干扰。
3. 对于浓度较高的样品，需进行稀释，以避免过高的信号干扰质谱仪器。
4. 在样品处理过程中，注意保持操作环境的洁净和无尘。
四、仪器操作液相色谱质谱联用仪的操作需要严格按照下述步骤进行：1. 启动液相色谱模块和质谱模块，并确保它们的连接稳固。
2. 在液相色谱控制软件中设置样品信息、进样体积和流速等参数。
3. 使用自动进样器或手动进样装置将样品注入，务必避免空气进入系统。
4. 开始液相色谱分离过程，注意实时观察结果，确保色谱峰的分离良好。
5. 通过质谱软件设置离子源和扇区等参数，将样品引入质谱进行离子化。
6. 在质谱软件中选择所需的检测模式和离子反应监测。
7. 开始质谱分析，观察质谱峰的出现和相对丰度。
8. 根据实验需要，可进行质谱检测参数的优化和调整。
9. 实验结束后，关闭仪器，并做好相关的仪器保养和维护。
液相色谱与质谱联用操作规程
液相色谱与质谱联用操作规程1开机步骤1.1 分别打开质谱、液相色谱和电脑电源，此时质谱内置的CPU会通过网线与电脑主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
1.2待液相色谱通过自检，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
a.Degasser On(打开脱气机)。
b.Wet Prime(湿灌注)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
1.3双击桌面上的MassLynx 4.1图标进入质谱软件。
如果进入软件时出现提示：“The embedded system is not responding, The system will run in standalone mode”，则说明质谱内置的CPU（EPC）与电脑主机的通讯联系还未建立，请稍等后再进入软件，如果打开软件仅为处理数据则没有关系（质谱主机电源未开时进入软件也会有同样提示）。
1.4点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。
1.5选择菜单“Options > Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
等达到真空要求后，仪器前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
1.6点击真空状态图标，检查真空规的状态，确认真空达到要求。
1.7确认氮气气源输出已经打开，输出压力为90 psi。
1.8设置源温度（Source Temp）到目标温度。
2.质谱调谐窗口各项参数设定2.1大气压化学电离源（APCI）2.2.1在质谱调谐窗口选择要使用的离子模式，Ion Mode>APCI+。
2.2.2进入Source界面，设定Source界面里各项参数。
Corona 高压放电针电流，正离子模式一般在0－10之间优化，负离子模式一般在0－5之间优化。
Source Temp 源温度，一般在120℃－150℃之间优化。
APCI Probe Temp APCI加热器温度，一般在300℃－600℃之间优化。
Waters_液质联用基础知识(waters中国培训中心)
质量过滤器 质子过滤器
离子检测器
数据采集及控制
离子源
分析器
检测器
数据处理
接口
HPLC
色谱分离 质谱图
样品引入 样品引入
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质谱的种类及相关联用技术
GC LC CE Flow Inj Probe FB/EI ESI APCI TSP FAB MALDI Quadrupole Magnetic Sector Time of Flight Ion Trap FT-MS Electron Multiplier Photomultiplier Microchannel Plate
C
原子序数 = 质子数 具有相同的元素符号,在元素符号的左上角表明其质量数
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天然同位素丰度
原子符号 氮
14N 15N
质量, amu 14.0031 15.0001 31.9721 32.9715 33.9679 34.9689 36.9659 78.9183 80.9163
4.00 2.27 7.22 9.12 11.59 14.87 2.04 9.98 19.12 13.15 17.40 25.16 21.42 22.52 26.8228.84
1: Scan AP+ BPI 8.29e4
%
33.78 35.04 38.26 39.52 33.32
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
MS的历史
60’s-70’s 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛 应用) 70’s-80’s 开始广泛研究 LC/MS 1979年 1982年 1984年 1988年 …... 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
液相色谱质谱联用技术操作流程
液相色谱质谱联用技术操作流程1.首先，准备好所需的色谱质谱联用仪器和设备。
First, prepare the necessary instruments and equipment for liquid chromatography mass spectrometry.2.然后，准备样品并确保样品处理的准确性和完整性。
Next, prepare the samples and ensure the accuracy and integrity of sample handling.3.接着，进行色谱柱的装载和平衡，确保色谱柱的稳定性和准确度。
Then, load and equilibrate the chromatography column to ensure stability and accuracy.4.将待测样品按照预定的方法进行注射到色谱柱中。
Inject the test sample into the chromatography column according to the predetermined method.5.同时启动质谱联用检测仪器，调整参数，使其达到稳定状态。
Start the mass spectrometry detector at the same time, adjust the parameters to reach a stable state.6.开始进行色谱分离，根据样品的特性选择合适的分离条件。
Begin the chromatographic separation, and select the appropriate separation conditions based on the sample characteristics.7.运行色谱质谱联用程序，记录分离过程中的数据并实时分析结果。
Run the liquid chromatography mass spectrometry program, record the data during the separation process, and analyze the results in real time.8.注意监测色谱质谱联用设备的运行状态，及时调整和处理异常情况。
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氯霉素的质谱图
[M-H]-=321.3
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MS 检测的是离子质量
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质谱基础知识
质谱中采用的质量单位
– Da=Dalton (道尔顿 ) 质量单位,等于一个碳原子(12C)质量的十二分之一， 约为1.66×10 -24克;一克约为6×10 23道尔顿 – amu=atomic mass unit ,原子质量单位 1amu=1Da
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MS是高真空技术
质谱仪之所以在高真空下工作是为了 ...
– 尽量减少离子-分子之间的碰撞 (即,得到最大平均自 由程) 碰撞可能导致离子偏离所期望的由离子源到检测 器的通道 碰撞可能导致产生意外的离子或反应 平均自由程:1 atm~10 -6 m ; 10-4 torr ~ 0.5 m – 防止在高电压 (用于某些离子聚焦)下生成电弧 – 减少污染/化学噪音
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MS的历史
1910年 1917年 1918年 1943年 1953年 1955年 1960’s
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世界上第一台现代意义质谱仪在英国剑桥 Cavendish实验室出现 电喷雾(Electrospray) 物理现象被发现 (并非 为了 MS) 世界上第一台实际意义质谱仪在美国芝加哥 大学实验室出现(扇型磁场MS) 世界上第一台商业质谱仪 四极杆质量分析器质谱仪 飞行时间质量分析器质谱仪 开发GC/MS
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waters液质联用-质谱基础知识介绍讲义
1: Scan AP+ BPI 8.29e4
%
33.78 35.04 38.26 39.52 33.32
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
Time 40.00
为什么使用 LC/MS? …...
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快速得到丰富的结果
世界上第一台现代意义质谱仪在英国剑桥Cavendish实验室出现 电喷雾(Electrospray) 物理现象被发现 (并非为了 MS) 世界上第一台实际意义质谱仪在美国芝加哥大学实验室出现 (扇型磁场MS) 世界上第一台商业质谱仪 四极杆质量分析器质谱仪 飞行时间质量分析器质谱仪 开发GC/MS 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛应用) 开始广泛研究 LC/MS 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
LC/MS中的质谱
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Mass Spectrometry-质谱
质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱 分析物被转化为气相离子而被分析 这些离子按其质荷比 (m/z)被分离而被检测 质谱图即是相关的离子流对m/z的图
•灵敏度高 •定性/定量本领高 •脉冲扫描采集数据 •高真空环境工作 •溶剂参与反应(API电离源)
为什么使用 LC/MS?
极高的灵敏度 (2)
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为什么使用 LC/MS?
极佳的定量结果(3)
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5 orders of magnitude linear dynamic range . over the concentration range 0.1pg to 10000pg, producing a coefficient of determination of 0.9975 for sulfadimethoxine injected on column,
液相质谱联用技术
A metabonomic approach to chemosensitivity prediction of cisplatin plus 5-fluorouracil in a human xenograft model of gastric cancer
• The prediction of chemosensitivity is a challenging problem in the management of cancer. In the present study, a metabonomic approach was proposed to assess the feasibility of chemosensitivity prediction in a human xenograft model of gastric cancer. BALB/c-nu/nu mice were transplanted with MKN-45 cell line to establish the xenograft model. The mice were then randomized into treatment group (cisplatin and 5-fluorouracil) and control group (0.9% sodium chloride), and their plasma were collected before treatment. Metabolic profiles of all plasma samples were acquired by using high-performance liquid chromatography coupled with a quadrupole time-of-flight mass spectrometer (HPLC/Q-TOF-MS). Based on the data of metabolic profiles and k-Nearest Neighbor algorithm, a prediction model for chemosensitivity was developed and an average accuracy of 90.4% was achieved. In addition, a series of endogenous metabolites, including 1-acyllysophosphatidycholines,polyunsaturated fatty acids and their derivatives, were determined as potential indicators of chemosensitivity. In conclusion,our results suggest that the proposed metabonomic approach allows effective chemosensitivity prediction in human xenograft model of gastric cancer. The approach presents a new concept in the chemosensitivtiy prediction of cancer and is expected to be developed as a powerful tool in the personalized cancer therapy.
液质联用方案
液质联用方案简介液质联用（LC-MS）是一种结合液相色谱（LC）和质谱（MS）的分析技术，广泛应用于食品、化学、药物、生物医学等领域。
本文将介绍液质联用方案的基本原理、仪器配置和实验操作步骤。
一、液质联用基本原理液相色谱是通过溶液在固定液体相中的分配和分离过程，质谱是通过离子化样品分子，并根据相对离子分子的质荷比进行分析。
液质联用技术将这两种分析技术结合起来，既能实现复杂样品的分离提纯，又能实现高灵敏度和高选择性的质谱分析。
液质联用的基本原理是将流出的液相色谱流体，通过产生离子化电流或其他途径载入质谱仪系统进行质谱分析。
色谱和质谱之间的接口是一个关键部分，用于将液相色谱分离得到的化合物直接转化为气态离子，送入质谱进行检测。
二、液质联用仪器配置液质联用技术需要配备液相色谱仪和质谱仪两个主要仪器。
1. 液相色谱仪液相色谱仪主要由以下部分组成：•柱温箱：用于控制色谱柱的温度，提高分离效果；•注射器：用于将样品注入色谱柱；•泵：用于控制溶液的流动速率；•柱：用于分离样品中的化合物；•检测器：用于检测通过柱的化合物。
2. 质谱仪质谱仪主要由以下部分组成：•离子源：用于将气态化合物转化为离子；•质量分析器：用于对离子进行分析和检测；•探测器：用于检测和记录质谱的数据。
3. 液质联用接口液质联用接口将液相色谱仪和质谱仪连接起来，使得色谱柱分离得到的化合物能够直接进入质谱仪进行检测。
常见的液质联用接口有电喷雾（ESI）和气动动力（APCI）等。
三、液质联用操作步骤液质联用实验操作步骤如下：1.准备工作：检查液相色谱仪和质谱仪的运行状态，确保两台仪器正常工作。
检查色谱柱是否需要更换，是否存在堵塞情况。
2.样品处理：根据需要，对待测样品进行预处理，如溶解、稀释等。
3.色谱分离：根据待测样品的特性选择适当的液相色谱分离条件，设置流动相组成、流速和柱温等参数。
进行色谱分离。
4.质谱检测：根据液相色谱系统的输出信号，在质谱仪中设置离子源的参数，如产生离子的电压和电流等。
干货液质联用入门帖
干货：液质联用入门帖！关于液质联用呢，对于菜鸟来说，似乎总有说不完的点，也总有各种新的疑问冒出来。
为什么呢？因为你不通原理、仪器构造，不会举一反三。
但如何做到？这只能靠自己，师傅讲太多，你不去用仪器、拆仪器，仍白搭，所以，多学学、多用用、多想想、多拆拆就是玩转仪器的必备秘诀啦。
本帖只挑重点说，不让你错过任何一个关于液质的必备知识点。
液质联用到底是咋回事？质量分析器的类型了解LC-MS的接口也很重要1.种类及发展：1.传送带(moving belt)式的LC-MS: 目前已经停用2.热喷雾(TSP) LC-MS接口: 已经很少使用3.粒子束(PBI)4.大气压电离源(API):目前最常用的方法电喷雾(ESI)、大气压化学电离源(APCI)。
2.各接口应用范围3.大气压电喷雾质谱应用范围两种接口各有何不同？正、负离子化模式的选择?流动相的选择流量和色谱柱的选择辅助气体流量和温度的选择【这些你知道吗？】1、由于液质的流速较小（ESI一般为0.2ml/min），所以配置样品的溶剂强度不能太大，尽量小于起始比例，否则，会出现保留时间偏移等问题。
2、如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的。
3、磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐。
4、缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，<10mM。
5、去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生，表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次。
来自网友的忠告1.前处理：样品一定要干净，不管是为了质谱还是为了保护柱子，生物样品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，尽量高转速12000rpm以上，低温离心，最好离2次（保险一点），转移样品也要仔细，从中间慢慢吸，有时会有漂浮物。
2.样品浓度：质谱是灵敏度很高的仪器，进样浓度一定不能太高，1－2μg/ml已经可以啦，太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留，而且定量也会不准啦。
液相色谱质谱联用的原理详解ppt课件
ESI是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化 合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性 强的有机化合物。
ESI的最大特点是容易形成多电荷离子。目前采用电喷雾 电离，可以测量大分子量的蛋白质。
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大气压化学电离源(APCI)
APCI喷嘴的下游放置一个 针状放电电极，通过放电电 极的高压放电，使空气中某
4.流量和色谱柱的选择
不加热ESI的最佳流速是1—50ul／min，应用 4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流，目前大多采 用 l—2.1 mm内径的微柱，TIS源最高允许lml ／min，建议使用200—400ul／min
APCI的最佳流速～lml／min，常规的直径4.6mm 柱最合适。
为了提高分析效率，常采用＜ 100 mm的短柱 （此时UV图上并不能获得完全分离，由于质谱 定量分析时使用MRM的功能，所以不要求各组分 没有完全分离）。这对于大批量定量分析可以 节省大量的时间。
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电喷雾与大气压化学电离的比较
电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而APCI电离是高压 放电发生了质子转移而生成[M＋H]+或[M-H]-离子。
样品流速：APCI源可从0.2到2 ml／min；而电喷雾源 允许流量相对较小,一般为0.2-1 ml／min.
断裂程度；APCI源的探头处于高温，对热不稳定的化 合物就足以使其分解.
一般质谱仪都采用机械泵预抽真空后，再用高效率扩散 泵连续地运行以保持真空。现代质谱仪采用分子泵可获 得更高的真空度。
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离子源
离子源的作用是将欲分析样品电离，得到带有样品 信息的离子。
1.质谱检测的是离子 2.离子源=接口
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电喷雾电离（ESI）
ESI是近年来出现的一种新的电离方式。它主要应用于液相色谱-质谱 联用仪。流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气 帘；从而雾化、蒸发溶剂、阻止中性溶剂分子进入后端检测。
液质联用之质谱部分详解
液质联用之质谱部分详解1. 质谱是啥？质谱啊，就像是给物质做一个超级详细的身份鉴定。
咱们都知道，不同的物质就像不同的人，都有自己独特的“特征”。
质谱就是把这些物质分子打碎，然后根据碎片的质量和数量等信息，来判断这个物质是什么。
打个比方，就像把一个复杂的机器拆成一个个小零件，然后通过这些小零件来判断这个机器是啥型号、啥功能的。
质谱仪的构造也是很有讲究的。
它有进样系统，这个就像是一个入口，让样品能进入到质谱仪里面。
然后有离子源，离子源的作用可大了，它能把样品分子变成离子。
这就好比是给物质分子穿上了一层特殊的“衣服”，让它们能在质谱仪里面“排队”接受检测。
2. 离子源的种类。
有电子轰击离子源。
这个离子源就像是一个“大力士”，它用电子去撞击样品分子，把分子中的电子撞掉，从而让分子带上正电荷变成离子。
这种离子源的优点是能产生比较多的离子，而且离子的能量比较高。
但是呢，它也有缺点，就是对于一些比较不稳定的分子，可能会把分子打得太碎，就像把一个脆弱的小物件用力过猛给打碎了，这样就不太好判断原来物质的结构了。
还有化学电离离子源。
这种离子源相对来说就比较“温柔”啦。
它是通过化学反应来让分子变成离子的。
比如说，它可以让样品分子和一些试剂气体发生反应，然后产生离子。
这种离子源产生的离子比较少，但是对于那些不稳定的分子就比较友好，不会把它们打得太碎。
3. 质量分析器。
质量分析器就像是一个“裁判”，它的任务就是把不同质量的离子区分开来。
比如说四极杆质量分析器，它就像是一个有特殊规则的“赛场”，只有符合特定质量电荷比（m/z）的离子才能顺利通过。
它的原理有点复杂，但是简单来说，就是通过在四根电极上施加不同的电压，来控制离子的运动轨迹。
就像在一个迷宫里，只有走对了路线的离子才能到达终点。
还有飞行时间质量分析器。
这个就更有趣了，它是根据离子在飞行管中的飞行时间来确定离子的质量的。
离子就像一个个小“运动员”，质量小的离子飞得快，质量大的离子飞得慢。
质谱和液质联用快速入门
质谱(MS) mass spectrometry质谱法是将样品离子化，变为气态离子混合物，并按质荷比（m/z）分离的分析技术;质谱仪是实现上述分离分析技术,从而测定物质的质量与含量及其结构的仪器。
质谱分析法是一种快速,有效的分析方法,利用质谱仪可进行同位素分析,化合物分析,气体成分分析以及金属和非金属固体样品的超纯痕量分析。
在有机混合物的分析研究中证明了质谱分析法比化学分析法和光学分析法具有更加卓越的优越性，其中有机化合物质谱分析在质谱学中占最大的比重,全世界几乎有3/4仪器从事有机分析, 现在的有机质谱法，不仅可以进行小分子的分析，而且可以直接分析糖，核酸，蛋白质等生物大分子，在生物化学和生物医学上的研究成为当前的热点，生物质谱学的时代已经到来，当代研究有机化合物已经离不开质谱仪。
一.仪器概述1.基本结构质谱仪由以下几部分组成供电系统┏━━━━━┳━━━━━━╋━━━━━━━┳━━━━━━┓进样系统离子源质量分析器检测接收器数据系统┗━━━━━┻━━┳━━━┻━━━━━━━┛真空系统(1)进样系统:把分析样品导入离子源的装置,包括:直接进样,GC,LC及接口,加热进样,参考物进样等。
(2)离子源:使被分析样品的原子或分子离化为带电粒子(离子)的装置,并对离子进行加速使其进入分析器，根据离子化方式的不同,有机常用的有如下几种,其中EI,FAB最常用。
EI(Electron Impact Ionization):电子轰击电离——最经典常规的方式,其他均属软电离，EI 使用面广，峰重现性好，碎片离子多。
缺点：不适合极性大、热不稳定性化合物，且可测定分子量有限，一般≤1,000。
CI(Chemical Ionization):化学电离——核心是质子转移，与EI相比，在EI法中不易产生分子离子的化合物，在CI中易形成较高丰度的[M+H]+或[M-H]+等‘准’分子离子。
得到碎片少，谱图简单，但结构信息少一些。
ESI MS液质
高效液相色谱与质谱联用实验目的1. 掌握高效液相色谱与质谱联用的工作原理及仪器的基本结构2. 了解仪器的操作方法实验原理液质联用（HLPC-MS）又叫液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。
样品在色谱部分被分离，通过接口进入质谱，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。
不同离子的质荷比及其在电场中运动的速度不同，质量分析器便能依此进行分离检测并记录，得到质谱图。
而对比色谱图与质谱图中峰的位置可进行定性和结构分析，根据峰的强度可进行定量分析。
液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。
主要仪器HPLC-ESI-MS实验所用的质谱仪为电喷雾电离和离子阱检测。
电喷雾电离条件温和，分子不易形成碎片，有大量的分子离子。
离子阱能有效地保留进入质谱的离子，提高检测器中的离子浓度，有更高的灵敏度。
操作步骤1.样品预处理。
2.选择合适的工作条件，进样分析。
3.处理数据。
4.在记录质谱数据时可以更据需要选择碎片离子峰的二次或多次质谱图。
思考题1.质谱仪由哪几部分组成？质谱仪主要由真空系统、进样系统、离子源、质量分析器和离子检测器五部分组成。
2.为什么实验中要维持高真空？空气中的大量氧会烧坏离子源的灯丝；残余气体分子会使产生信号，干扰质谱图；残余气体分子会引起额外的离子-分子反应，改变裂解模型，使图谱复杂化；残余气体会干扰离子源中电子束的正常调节；大量气体分子还会使离子很快淬灭，达不到检测器；质谱中的加速电压会使残余气体分子放电，影响检测。
3.离子源的作用是什么？说出几种常见的离子源。
试样中各组分在离子源中发生电离，生成不同荷质比的带正电荷的离子以便被电场加速，进而进入质量分析器被分别记录。
即离子源的作用是将分子转化成离子，以便进行检测。
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质谱(MS) mass spectrometry质谱法是将样品离子化，变为气态离子混合物，并按质荷比（m/z）分离的分析技术;质谱仪是实现上述分离分析技术,从而测定物质的质量与含量及其结构的仪器。
质谱分析法是一种快速,有效的分析方法,利用质谱仪可进行同位素分析,化合物分析,气体成分分析以及金属和非金属固体样品的超纯痕量分析。
在有机混合物的分析研究中证明了质谱分析法比化学分析法和光学分析法具有更加卓越的优越性，其中有机化合物质谱分析在质谱学中占最大的比重,全世界几乎有3/4仪器从事有机分析, 现在的有机质谱法，不仅可以进行小分子的分析，而且可以直接分析糖，核酸，蛋白质等生物大分子，在生物化学和生物医学上的研究成为当前的热点，生物质谱学的时代已经到来，当代研究有机化合物已经离不开质谱仪。
一.仪器概述1.基本结构质谱仪由以下几部分组成供电系统┏━━━━━┳━━━━━━╋━━━━━━━┳━━━━━━┓进样系统离子源质量分析器检测接收器数据系统┗━━━━━┻━━┳━━━┻━━━━━━━┛真空系统(1)进样系统:把分析样品导入离子源的装置,包括:直接进样,GC,LC及接口,加热进样,参考物进样等。
(2)离子源:使被分析样品的原子或分子离化为带电粒子(离子)的装置,并对离子进行加速使其进入分析器，根据离子化方式的不同,有机常用的有如下几种,其中EI,FAB最常用。
EI(Electron Impact Ionization):电子轰击电离——最经典常规的方式,其他均属软电离，EI 使用面广，峰重现性好，碎片离子多。
缺点：不适合极性大、热不稳定性化合物，且可测定分子量有限，一般≤1,000。
CI(Chemical Ionization):化学电离——核心是质子转移，与EI相比，在EI法中不易产生分子离子的化合物，在CI中易形成较高丰度的[M+H]+或[M-H]+等‘准’分子离子。
得到碎片少，谱图简单，但结构信息少一些。
与EI法同样，样品需要汽化，对难挥发性的化合物不太适合。
原理R + e-→R+·+ 2e-（电子电离）反应气为含H的R为反应气体分子R+·+ R →RH+ + (R-H)·分子,例如异丁M为样品分子RH+ + M →R + (M+H)+ (质子转移）烷,甲烷,氨气,R浓度＞＞M浓度R+·+ M →R + M+·（电荷交换）甲醇气等R+·+ M →(R+M)+·（加合离子）FD(Field Desorption):场解吸——大部分只有一根峰, 适用于难挥发极性化合物，例如糖,应用较困难，目前基本被FAB取代。
FAB(Fast Atom Bombardment):快原子轰击——利用氩,氙,80年代初发明,或者铯离子枪(LSIMS,液体二次离子质谱)，高速中性原子或离子对溶解在基质中的样品溶液进行轰击，在产生“爆发性”汽化的同时，发生离子-分子反应，从而引发质子转移，最终实现样品离子化。
适用于热不稳定以及极性化合物等。
FAB法的关键之一是，选择适当的（基质）底物，从而可以进行从较低极性到高极性的范围较广的有机化合物测定，是目前应用比较广的电离技术。
不但得到分子量还能提供大量碎片信息。
产生的谱介于EI与ESI之间,接近硬电离技术。
生成的准分子离子，一般常见[M+H]+和[M+底物]+。
另外：还有根据底物脱氢以及分解反应产生的[M-H]_容易提供电子的芳烃化合物产生M+⋅甾类化合物、氨基霉素等还产生[M+NH4]+糖甙、聚醚等一般可（产生）观察到[M+Na]+由底物与粒子轰击（碰撞）诱导发生还原反应来产生[M+nH]+ (n>1),二量体（双分子）[M+H+M]+及[M+H+B]+等。
因此，进行谱图解析时，要考虑底物和化合物的性质，盐类的混入等进行综合判断。
ESI(Electrospray Ionization):电喷雾电离——与LC,毛细管电泳联用最好，亦可直接进样,属最软的电离方式，混合物直接进样可得到各组分的分子量。
APCI(Atmospheric Pressure Chemical Ionization):大气压化学电离——同上，更适宜做小分子。
MALDI(Matrix Assisted Laser Desorption):基体辅助激光解吸基质辅助激光解吸电离——是一种用于大分子离子化方法，利用对使用的激光波长范围具有吸收并能提供质子的基质（一般常用小分子液体或结晶化合物），将样品与其混合溶解并形成混合体，在真空下用激光照射该混合体，基体吸收激光能量，并传递给样品，从而使样品解吸电离。
MALDI的特点是准分子离子峰很强。
通常将MALDI用于飞行时间质谱和FT-MS，特别适合分析蛋白质和DNA等大分子。
(3)质量分析器:是质谱仪中将离子按质荷比分开的部分,离子通过分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的M/Z离子聚焦在一起,组成质谱。
(4)检测接收器:接收离子束流的装置,有:二次电子倍增器光电倍增管微通道板(5)数据系统:将接收来的电信号放大、处理并给出分析结果。
包括外围部分.例如终端显示器,打印机等。
现代计算机接口,还可反过来控制质谱仪各部分工作。
(6)真空系统:由机械真空泵(前极低真空泵),扩散泵或分子泵(高真空泵)组成真空机组,抽取离子源和分析器部分的真空。
只有在足够高的真空下,离子才能从离子源到达接收器,真空度不够则灵敏度低。
(7)供电系统:包括整个仪器各部分的电器控制部件，从几伏低压到几千伏高压。
2.分类:常见下列几种:双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector)四极质谱仪(Q)离子阱质谱仪（TRAP）飞行时间质谱仪(TOF)付利叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS)┏混合型如四极+TOF,磁式+TRAP等串列式多级质谱仪(MS/MS) ━┫三重四极┗TOF+TOF3.分析原理:磁质谱基本公式：M/Z=H2R2/2VM:质量Z:电荷V:加速电压R:磁场半径H:磁场强度磁质谱经典,可高分辨,质量范围相对宽;缺点是体积大,造价高,现在越来越少。
四极分析器quadrupole是一种被广泛使用的质谱仪分析器。
由两组对称的电极组成。
电极上加有直流电压和射频电压（±(U+Vcosωt)）。
相对的两个电极电压相同，相邻的两个电极上电压大小相等，极性相反。
带电粒子射入高频电场中，在场半径限定的空间内振荡。
在一定的电压和频率下，只有一种质荷比的离子可以通过四极杆达到检测器，其余离子则因振幅不断增大，撞在电极上而被“过滤”掉，因此四极分析器又叫四极滤质器。
利用电压或频率扫描，可以检测不同质荷比的离子。
优点是扫描速度快,比磁式质谱价格便宜,体积小,常作为台式进入常规实验室,缺点是质量范围及分辨率有限。
飞行时间质谱仪:利用相同能量的带电粒子,由于质量的差异而具有不同速度的原理,不同质量的离子以不同时间通过相同的漂移距离到达接收器。
公式M/Z=2E/v2v=d/t 代入M/Z=Kt2E:离子动能v:离子速度d:飞行距离t:飞行时间K:常数=2E/d2优点:扫描速度快,灵敏度高,不受质量范围限制以及结构简单,造价低廉等.FT-MS:在射频电场和正交横磁场作用下,离子作螺旋回转运动,回旋半径越转越大,当离子回旋运动的频率与补电场射频频率相等时,产生回旋共振现象,测量产生回旋共振的离子流强度,经付立叶变换计算,最后得到质谱图。
是较新的技术,对于高质量数,高分辨率及多重离子分析,很有前途,但使用超导磁铁需要液氦，不能接GC，动态范围稍窄，目前还不太作为常规仪器使用。
离子阱Ion trap 通常由一个双曲面截面的环形电极和上下一对双曲面端电极构成。
从离子源产生的离子进入离子阱内后，在一定的电压和频率下，所有离子均被阱集。
改变射频电压，可使感兴趣的离子处于不稳定状态，运动幅度增大而被抛出阱外被接收、检测。
用离子阱作为质量分析器，不但可以分析离子源产生的的离子，而且可以把离子阱当成碰撞室，使阱内的离子碰撞活化解离，分析其碎片离子，得到子离子谱。
离子阱不但体积很小，而且具有多级质谱的功能，即做到MS n，但动态范围窄,低质量区1/3缺失,不太适合混合物定量.多级质谱联用仪现在，几乎所有的商品质谱仪上均配有GC-MS，但对难挥发、强极性和大分子量混合物，GC-MS无能为力，为了弥补GC-MS的不足，经过20多年的探索，通过开发上述几种软电离技术，特别是ESI和APCI等，解决了LC与离子源接口问题（1987年完成），从而实现了LC-MS联用，是分析化学的一次重大进展，而串联质谱仪更具有许多优点。
串联质谱仪（MS/MS或Tamdem）:离子源—→第一分析器—→碰撞室—→第二分析室—→接收器MS1 MS2进行MS/MS的仪器从原理上可分为两类。
第一类仪器利用质谱在空间中的顺序，是由两台质谱仪串联组装而成。
即前面列出的串列式多级质谱仪。
第二类利用了一个质谱仪时间顺序上的离子储存能力，由具有存储离子的分析器组成，如离子回旋共振仪（ICR）和离子阱质谱仪。
这类仪器通过喷射出其它离子而对特定的离子进行选择。
在一个选择时间段这些被选择的离子被激活，发生裂解，从而在质谱图中观测到碎片离子。
这一个过程可以反复观测几代碎片的碎片。
时间型质谱便于进行多级子离子实验，但另一方面不能进行母离子扫描或中性丢失。
一般采用ESI、CI或FAB等软离子化方法,以利于多产生分子离子,通过MS1的离子源使样品离子化后，混和离子通过第一分析器,可选择一定质量的离子作为母体离子,进入碰撞室,室内充有靶子反应气体(碰撞气体：He、Ar、Xe、CH4等)对所选离子进行碰撞，发生离子—分子碰撞反应，从而产生‘子离子’，再经MS2的分析器及接受器得到子离子（扫描）质谱（product ion spectrun）。
一般称做MS/MS-CID谱，或者简称为CID(collision-induced dissociation) 谱,碰撞诱导裂解谱，及MS/MS谱。
另外，也有母找子离子的MS/MS谱，（MS/MS spreursor ion spectrum）研究MS/MS谱（一般指子离子质谱，与在源内裂解产生的正常碎片质谱类似，但有区别，现不能检索），可以了解到被分析样品的混合物性质和成分，对一些混合物（目前，多用最软电离的ESI或APCI的MS/MS。
不必进行色谱分离可直接分析，与色谱法相比，有很快的响应速度，省时省样品省费用，具有高灵敏度和高效率的优点。
另外一个特点是通过子→母及母→子MS/MS谱可以掌握一定的结构信息,做为目前有力的结构解析手段。
因此，现在利用串联质谱仪进行药物研究越来越得到重视，特别是在药物代谢以及混合物的微量成分分析和结构测定等方面正在起到越来越重要的作用。