高效液相色谱法讲解精选课件PPT
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高效液相色谱法 PPT课件

①固定相:非极性键合相 如十八烷基硅烷(C18,ODS)、辛烷基(C8)
键合硅胶 ②流动相:水为基础溶剂,加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇-水、乙腈-水等 应用:最广。非极性至中等极性的组分,(还有 有机酸、碱及盐等极性组分)
1. 保留机制:
疏溶剂理论 (solvophobic theory)
(二)紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理: 朗伯-比尔 (Lambert-Beer) 定律,响应信号 (吸光度)与浓度成正比A=εCl
2.特点: 灵敏度较高(10-6—10-9 g/ml),噪音低,线性 范围宽,稳定性好,适于梯度洗脱,不破坏样品, 应用广(分析、制备)。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法(partition chromatography) 吸附色谱法(adsorption chromatography) 离子交换色谱法(IEC) 空间排阻色谱法(SEC)
(二)流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性(强度) 正相色谱:溶剂极性越强,洗脱能力越强 反相色谱:极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂,分子间的作用力不同,故 选择性不同
混合溶剂(二元或多元流动相)
以反相色谱流动相的选择为例:
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
键合硅胶 ②流动相:水为基础溶剂,加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇-水、乙腈-水等 应用:最广。非极性至中等极性的组分,(还有 有机酸、碱及盐等极性组分)
1. 保留机制:
疏溶剂理论 (solvophobic theory)
(二)紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理: 朗伯-比尔 (Lambert-Beer) 定律,响应信号 (吸光度)与浓度成正比A=εCl
2.特点: 灵敏度较高(10-6—10-9 g/ml),噪音低,线性 范围宽,稳定性好,适于梯度洗脱,不破坏样品, 应用广(分析、制备)。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法(partition chromatography) 吸附色谱法(adsorption chromatography) 离子交换色谱法(IEC) 空间排阻色谱法(SEC)
(二)流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性(强度) 正相色谱:溶剂极性越强,洗脱能力越强 反相色谱:极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂,分子间的作用力不同,故 选择性不同
混合溶剂(二元或多元流动相)
以反相色谱流动相的选择为例:
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
《高效液相》课件

蛋白质分离与纯化
蛋白质分离
高效液相色谱技术可以用于蛋白质的分离和纯化,通过不 同的分离模式和固定相选择,实现对蛋白质的快速分离和 纯化。
蛋白质性质分析
通过高效液相色谱技术可以对蛋白质的性质进行分析,如 蛋白质的分子量、等电点等,为蛋白质的结构和功能研究 提供有力支持。
蛋白质相互作用研究
高效液相色谱技术可以用于研究蛋白质之间的相互作用, 如蛋白质与配体、抑制剂等之间的相互作用,有助于深入 了解蛋白质的功能和作用机制。
原理
利用不同物质在固定相和流动相之间 的分配系数差异进行分离,通过检测 器进行检测,收集各个组分,达到分 析样品组分的目的。
发展历程
01
02
03
04
起源
20世纪初,俄国植物学家茨 维特发明了色谱法。
1940年代
气相色谱法(GC)出现,并 逐渐发展成熟。
1960年代
高效液相色谱法(HPLC)开 始发展,并逐渐取代气相色谱
02
高效液相色谱仪
仪器组成
进样器
将样品注入色谱柱,是 色谱仪的重要部件之一
。
色谱柱
用于分离样品中的各组 分,由固定相和流动相
组成。
检测器
检测色谱柱流出的组分 ,并将其转换为电信号
。
数据处理系统
用于采集、处理和显示 检测器输出的信号。
重要部件介绍
01
02
03
色谱柱填料
常用的填料有硅胶、氧化 铝、活性炭等,根据不同 分离需求选择合适的填料 。
《高效液相》ppt课件
目录
• 高效液相色谱法简介 • 高效液相色谱仪 • 高效液相色谱分离技术 • 高效液相色谱在生物医药领域的应用 • 高效液相色谱实验技术 • 高效液相色谱技术前沿与展望
高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt

色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法的分类示意图
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪ 高压梯度洗脱(高压混合,高压进柱,2个 泵。)
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪安捷伦泵:小视频 ▪色谱学堂:泵
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett(茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器:
①固定波长:254nm , 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 : 190 ~ 800mm , 钨灯,氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器: 190~700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
waters-e高效液相色谱ppt课件

4.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用甲醇水溶液冲洗。 5.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水冲洗及
保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时,流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶,或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带,高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分,用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元,形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ,何在,工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号,再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实:的验种所类各需及的部配基比分本,参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相:色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数:流速 检测器参数:紫外检测波长,灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置,开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后,约 20s 仪器开始自
检,约 1min 后,显示主屏幕,此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有,准溶进备剂入管“路St都at充us满(溶1 剂),”按屏幕
保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时,流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶,或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带,高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分,用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元,形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ,何在,工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号,再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实:的验种所类各需及的部配基比分本,参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相:色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数:流速 检测器参数:紫外检测波长,灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置,开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后,约 20s 仪器开始自
检,约 1min 后,显示主屏幕,此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有,准溶进备剂入管“路St都at充us满(溶1 剂),”按屏幕
高效液相色谱法培训PPT课件

chromatography)。
8
手性色谱(chiral chromatography) 用于分离手性药物对映体的一种有效技 术,可分为直接法和间接法两类: 直接法 手性固定相法(chiral stationary phase;CSP) 手性流动相法(chiral mobile phase additive;CMPA) 间接法—手性试剂衍生化法 chiral derivatization reagent,CDR)
离子对色谱(ion pair chromatography)— —将反离子加入流动相中,与呈解离状态的被 测物作用,生成脂溶性的中性离子对络合物, 从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度, 改善分离效果,达到分离目的。
常用反离子有:季铵盐 ——用于酸类 烷基磺酸盐——用于碱类
5
离子色谱法( ion chromatography ) 离子色谱是由经典的离子交换色谱 发展起来的一种液相色谱技术,利 用物质在离子交换柱上迁移的差异 而达到分离,用于亲水性阴阳离子 的测定。根据是否采用抑制柱,可 分为抑制型离子色谱和非抑制型离 子色谱。
本法中流动相在检测前已蒸发,故梯度 洗脱基线稳定。
45
喷雾 蒸发 检测
色谱柱流出物
N2
组分的 气溶胶
溶剂 光 源
泵
水不注
、 醋 酸 。
能 含 缓 冲 盐 , 若 调 节
意
: 流 动 相 必 须 是 挥
pH
发
可性
用的
氨,
46
质 谱 检 测 器
47
Flu
10%
Ms
1%
other 4%
Conduc 5%
1
第一节 概述
8
手性色谱(chiral chromatography) 用于分离手性药物对映体的一种有效技 术,可分为直接法和间接法两类: 直接法 手性固定相法(chiral stationary phase;CSP) 手性流动相法(chiral mobile phase additive;CMPA) 间接法—手性试剂衍生化法 chiral derivatization reagent,CDR)
离子对色谱(ion pair chromatography)— —将反离子加入流动相中,与呈解离状态的被 测物作用,生成脂溶性的中性离子对络合物, 从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度, 改善分离效果,达到分离目的。
常用反离子有:季铵盐 ——用于酸类 烷基磺酸盐——用于碱类
5
离子色谱法( ion chromatography ) 离子色谱是由经典的离子交换色谱 发展起来的一种液相色谱技术,利 用物质在离子交换柱上迁移的差异 而达到分离,用于亲水性阴阳离子 的测定。根据是否采用抑制柱,可 分为抑制型离子色谱和非抑制型离 子色谱。
本法中流动相在检测前已蒸发,故梯度 洗脱基线稳定。
45
喷雾 蒸发 检测
色谱柱流出物
N2
组分的 气溶胶
溶剂 光 源
泵
水不注
、 醋 酸 。
能 含 缓 冲 盐 , 若 调 节
意
: 流 动 相 必 须 是 挥
pH
发
可性
用的
氨,
46
质 谱 检 测 器
47
Flu
10%
Ms
1%
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Conduc 5%
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第一节 概述
高效液相色谱法教学课件【全】169页PPT

文 家 。汉 族 ,东 晋 浔阳 柴桑 人 (今 江西 九江 ) 。曾 做过 几 年小 官, 后辞 官 回家 ,从 此 隐居 ,田 园生 活 是陶 渊明 诗 的主 要题 材, 相 关作 品有 《饮 酒 》 、 《 归 园 田 居 》 、 《 桃花 源 记 》 、 《 五 柳先 生 传 》 、 《 归 去来 兮 辞 》 等 。
高效液相色谱法教学课件【全】
6
、
露
凝
无
游
氛
,
天
高
风
景
澈
。
7、翩翩新 来燕,双双入我庐 ,先巢故尚在,相 将还旧居。
8
、
吁
嗟
身
后
名
,
于
我
若
浮
烟
。
9、 陶渊 明( 约 365年 —427年 ),字 元亮, (又 一说名 潜,字 渊明 )号五 柳先生 ,私 谥“靖 节”, 东晋 末期南 朝宋初 期诗 人、文 学家、 辞赋 家、散
36、自己的鞋子,自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢,但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何,且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
40、学而不思则罔,思而不学则殆。——孔子
Байду номын сангаас
1
0
、
倚
南
窗
以
寄
傲
,
审
容
膝
之
易
安
。
谢谢!
高效液相色谱法教学课件【全】
6
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露
凝
无
游
氛
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天
高
风
景
澈
。
7、翩翩新 来燕,双双入我庐 ,先巢故尚在,相 将还旧居。
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吁
嗟
身
后
名
,
于
我
若
浮
烟
。
9、 陶渊 明( 约 365年 —427年 ),字 元亮, (又 一说名 潜,字 渊明 )号五 柳先生 ,私 谥“靖 节”, 东晋 末期南 朝宋初 期诗 人、文 学家、 辞赋 家、散
36、自己的鞋子,自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢,但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何,且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
40、学而不思则罔,思而不学则殆。——孔子
Байду номын сангаас
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倚
南
窗
以
寄
傲
,
审
容
膝
之
易
安
。
谢谢!
高效液相色谱法教学精【全】ppt课件

§1-3 色谱柱的分离效率
一、塔板理论 塔板理论认为: 一根柱子可以分为n
段,每段内组分在两相间迅速达到平衡, 把每一段称为一块理论塔板。
设柱长为L,理论塔板高度为H,则
H=L/N
N为理论塔板数。
理论塔板数一N
①色谱峰对称 : N 16(tR )2
说明:
tW
a. 在给定的操作条件下,N几乎相同
三、高效液相色谱法的特点
高压: 以液体作为流动相,液体流经色谱柱时,
受到阻力较大 必须对流动相施加高压。 一般可达到150~300kg/cm2, 甚至可达700kg/cm2以上。
高速:
分析时间较经典液相色谱少得多(交 换速度快),一个复杂样品的分析仅需几 分钟到几十分钟。
高效:
气相色谱的分离效能很高,高效液相 色谱的柱效则更高(化学键合相),一般 约可达 6000理论塔板/米
②一定色谱条件下,对k’有差异的组
分,则柱效愈高,分离效果愈好。
塔板理论的特点和不足:
(1)当L一定时,N 越大(H 越小),被测组
分在柱内被分配的次数越多,柱效越 高,所得色谱峰越窄。 (2)柱效不能表示被分离组分的实际分离
效果:如两组分的分配系数K 相同,
无论该色谱柱的柱效多大,都无法 分离。
① 柱效较高,ΔK(分配系数)较大,完全分离。 ② ΔK 不是很大,柱效较高,峰较窄,基本分离。 ③ 柱效较低,ΔK 较大,但分离的不好。 ④ ΔK 小,柱效低,分离效果更差。
一.分离度的数学表达式:
Rs
2(tR 2 tR1 ) W2 W1
2(tR 2 tR1 )
1.699 [Y1/ 2(2) Y1/ 2(1) ]
于世林编著)
第一章 高效液相色谱法基本原理 §1-1 概述 一、色谱法
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注意事项与常见问题解答
样品处理注意事项
01
避免样品污染、损失或变质,确保处理过程的准确性和可重复
性。
常见问题及解决方法
02
针对样品处理过程中可能出现的问题,如回收率低、干扰物质
多等,提供相应的解决方法。
安全与防护
03
注意有毒有害试剂的使用安全,做好个人防护和环境保护工作。
04 方法开发与优化策略
梯度洗脱程序设计思路
初始比例确定
根据待测组分的极性差异,选 择合适的初始流动相比例。
梯度斜率设置
根据组分的分离情况,调整梯 度斜率,使各组分在合适的保 留时间内洗脱出来。
梯度时间设置
确保梯度洗脱过程中,各组分 能够充分分离,同时避免过长 的分析时间。
梯度曲线类型
根据实际需求选择合适的梯度 曲线类型,如线性梯度、凹形
梯度或凸形梯度等。
方法验证内容及标准
精密度
准确度
通过添加回收率试验,验证方法 的准确度,确保测定结果可靠。
考察方法的重复性和中间精密度, 确保测定结果的稳定性。
线性范围
确定方法的线性范围,确保待测 组分浓度在该范围内时,测定结 果准确可靠。
专属性
考察方法对待测组分的选择性, 确保其他共存物质不干扰测定。
长期稳定性
考察样品在规定的储存条件下放置一定时间后的稳定性,以确定 样品的保质期和储存条件。
方法学考察
对分析方法本身进行稳定性考察,包括方法的耐用性、重复性和 中间精密度等指标的评估。
质量控制图绘制和应用
质量控制图绘制
根据长期稳定性考察数据,绘制质量控 制图,包括平均值、标准差和控制限等 指标。
VS
发展历程及应用领域
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第一节 高效液相色谱法的主要类型及其固定相和流动相
一、高效液相色谱法的主要类型
1、按固定相聚集状态分为:液液色谱法(LLC)和液 固色谱法(LSC)。
2、按分离机制分为:分配色谱法、吸附色谱法、离子 交换色谱法、分子排阻色谱法。
此外,按分离机制不同,还有亲和色谱法、手性色谱 法、胶束色谱法、电色谱法及生物色谱法等。
(2)弱极性键合相:。常见的有醚基和二羟基键合 相。通常用于反相色谱或正相色谱固定相。
2021/3/2
4
(3)极性键合相:常用氨基、氰基键合相。是分别 将氨丙硅烷基和氰乙硅烷基键合在硅胶是制成。一般用 作正相色谱固定相。
氰基键合相。对双键或含双键的环状化合物有较好 的分离能力。
氨基键合相对糖类化合物的分离选择性好。在酸性 介质中它是一种弱阴离子交换剂,能分离核酸。不宜分 离带羰基的物质
的20色21/3谱/2 特性。
6
(二)其它种类的固定相
1、键合型离子交换剂: 以硅胶为载体的键合型离子交换剂是在全多孔(或 薄壳型)硅胶表面,用化学方法键合上各种离子交换基团。
2、手性固定相: 在硅胶表面上用化学方法键合上各种手性基团。
3、亲和色谱固定相:
由载体和健合在其上的配基组成。载体通常为全多孔 硅胶,配基可分为生物配基和基团配基。
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2、键合相的特点
(1)化学稳定性好,使用过程中不流失,柱寿命长; (2)均一性和重现性好;
(3)柱效高,分离选择性好;
(4)适于梯度洗脱;
(5)载样量大.
3、使用注意事项:(1)源自用硅胶基质的键合相pH应维持在2-8;硅-碳杂化 硅胶等为基质的键合相pH范围宽(2-12);
(2)不同厂家,不同批号的同类键合相也可表现不同
水 甲醇 乙腈 丙酮 二噁烷 乙醇 异丙醇 四氢呋喃
0 3.0 3.2 3.4 3.5 3.6 4.2 4.5
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10
2、混合溶剂的强度
正相色谱法的多元混合溶剂的强度极性参数: n
P混’ = ∑Pi’φi i=1
反相色谱法的多元混合溶剂的强度强度因子: n
S混 = ∑Si’φi i=1
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三、高效液相色谱法的流动相
对流动相的基本要求:
①化学稳定性好;②对试样有适宜的溶解度,使k 在1-10范围内。③必须与检测器相适应;④纯度高, 粘度低。
(一)流动相对分离的影响
r==(√n /4).[(α-1)/α][k2/(1+k2)]
α受溶剂种类影响,k受溶剂配比的影响。改变溶剂 及配比,能够改变分离能力。增加流动相中强溶剂的比例, 其洗脱能力增强,使k变小。
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3、溶剂的选择
斯奈德以溶剂和溶质间的作用力作为溶剂选择性分类 的依据,将常用溶剂分为八组,并得到溶剂选择性分类三 角形,如下图:
处于同一组中的 各溶剂的作用力类型 相同,在色谱分离中 具有相似的选择性, 处于不同组别的溶剂, 其选择性差别较大。 采用不同组别的溶剂 为流动相,能够改变 色谱分离的选择性。
液液分配色谱:固定相是涂在细颗粒载体表面的液体。
液固吸附色谱:固定相主要是全多孔型硅胶和高分子 多孔微球。
液相色谱中应用最多的固定相是化学键合相。
化学键合相是通过化学反应将有机基团键合在载体表 面构成固定相,简称键合相。以键合相为固定相的色谱法。 称为化学键合相色谱法,简称键合相色谱。
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第十八章高效液相色谱法
以液体为流动相的色谱分析方法称为液相色谱法。高效 液相色谱法是以高压液体为流动相,采用高效固定相及高灵 敏度检测器的液相色谱法。
与经典液相色谱相比优点:
1、分离效率高;
2、分析速度快;
3、灵敏度高。
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与气相色谱比优点: 1、应用范围广; 2、分离选择性高; 3、在室温条件下进行分离1 。
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四、正相化学键合色谱法
正相键合相色谱法采用极性键合相为固定相,如氨 基、氰基等。以非极性或弱极性溶剂,如烷烃加适量极 性调整剂如醇类作流动相。
正相键合相色谱法主要用于分离溶于有机溶剂的极 性至中等极性的分子型化合物。
正相键合相色谱法的分离选择性决定于键合相的种 类、流动相的强度和试样的性质。一般规律是:极性强 的组分保留因子k大,后洗出柱。流动相的极性增强,洗 脱能力增加。
3
(一)常用化学键合相的种类和性质
1、常用化学键合相的种类
常用于反相和正相色谱中的化学键合相按所键合基 团的极性可分为非极性、弱极性和极性三类:
(1)非极性键合相:键合相表面基团为非极性烃基。 通常用作反相色谱固定相。
十八烷基硅烷键合相是最常用的,是由十八烷基 硅烷试剂与硅胶表面的硅醇基经多步反应生成的键合 相。
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在正相色谱中,常用溶剂的极性参数(P’) (P’越大,溶剂洗脱能力越强)
苯 乙醚 二氯甲烷 正丙醇 四氢夫喃 三氯甲烷
2.7 2.8
3.1
4.0
4.0
4.1
乙醇 醋酸乙酯 丙酮 甲醇 乙腈 醋酸 水
4.3
4.4 5.1 5.1 5.8 6.0 10.2
反相色谱常用溶剂的强度因子(S) (S越大,溶剂洗脱能力越强)
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(二)溶剂的强度和选择性
1、溶剂的极性和强度 在化学键合相色谱法中,溶剂的洗脱能力即溶剂 强度直接与它的极性有关。
在正相色谱中,溶剂的极性越强,洗脱能力越强,即 极性强的溶剂是强溶剂。
在反相色谱中,溶剂的极性越弱,洗脱能力越强,即极 性弱的溶剂洗脱能力,是强溶剂。
根据斯奈德提出的溶剂极性参数,在分配色谱中,溶剂 的极性强弱顺序如下表:。
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五、反相化学键合相色谱法
反相键合相色谱法采用非极性键合相为固定相,如 十八烷基硅烷、辛基等化学键合相。流动相以水作为基 础溶剂再加入一定量与水混溶的极性调整剂,常用甲醇水、乙腈-水等
反相键合相色谱法适和分离非极性至中等极性的组 分。
目前高效液相色谱法中最常用的固定相是化学键合相,
故这些方法又称为化学键合相色谱法。本章主要介绍化学键
合相色谱法及由其衍变和发展的离子抑制色谱法和离子对色
谱法。
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二、高效液相色谱法的固定相
高效液相色谱法对固定相的要求:1、颗粒细则均匀; 2、传质快;3、机械强度高,能耐高压;4、化学稳定性 高好,不与流动相发生化学反应。