实验2 土壤中细菌的分离与纯化

实验十

微生物的分离与纯化

一、目的要求

1.掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作

技术；

2.初步掌握微生物的鉴定技术。

二、实验原理

1.自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研

究某种微生物的特性，首先须使该微生物处

于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得

只含有某一种或一株微生物的过程称为微生

物的分离与纯化。

2.土壤是微生物生活的大本营，可以从中分离

到很多有价值的菌株。本实验将采用三种不

同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。

三、实验器材

1.土样：采集校园土壤

2.培养基：牛肉膏蛋白胨培养基——细菌

高氏Ⅰ号培养基——放线菌

马丁氏培养基——真菌

3.其他：无菌的培养皿、盛90mL无菌水并带

玻璃珠的三角瓶、盛9mL无菌水的试管、小铁铲、吸头、移液器、无菌玻璃涂棒、接种环、显微镜、染色液等。

1.制备土壤稀释液

2.涂布平板

3.培养

4.挑菌落

5.平板划线分离

6.转入斜面

7.观察菌落特征、制片镜检菌体形态

8.菌种保藏

1.制备土壤稀释液

四、操作步骤（3）

2.涂布

四、操作步骤（4）

3.培养：高氏Ⅰ号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置

于28℃培养箱中培养3~5 d，牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于37℃培养箱中培养2~3 d。

四、操作步骤（5）

4.挑菌落

接种和分离工具

1. 接种针；

2.接种环；

3.接种钩；

4.

5.玻璃涂棒；

6.接种圈；

7.接种锄；

8.小解剖刀

四、操作步骤（6）

5. 平板划线分离

四、操作步骤（6）

平板划线法

平板划线分离的方法

1.斜线法；

2.曲线法；

3.方格法；

4.放射法；

5.四格法

四、操作步骤（6）平板划线分离

四、操作步骤（7）

6. 转入斜面

斜面接种时的无菌操作

(1)接种灭菌; (2)开启棉塞; (3)管口灭菌; (4)挑起菌苔; (5)接种; (6)塞好棉塞

四、操作步骤——初步鉴定▪通过已掌握的实验技术，对分离到的纯菌株进

行初步鉴定。

观察和记录菌种的培养特征

革兰氏染色，观察和记录菌体特征与染色特性

芽孢染色

鞭毛染色

查《伯杰氏手册》等文献，初步对菌种进行鉴定。

将转入斜面的菌种置4℃冰箱保藏。

五、实验报告

在三种不同的平板上，你分离得到哪些类群的微生物？简述它们的菌落特征和菌体形态。

六、思考题

1.试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步

骤。

2.如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？