层 析PPT课件

主要机理是分子筛效应,当被分离物质 流经凝胶柱时,因各组份的分子大小不同,在 凝胶受到的阻滞作用有差异,从而造成各组 分在凝胶柱中的迁移速度不同得到分离。
二.基本原理
流动相（洗脱液） 固定相（凝胶） 原理：被分离物质中各组分的分子量
.离子交换层析
（ion-exchange chromatography ）
----利用离子交换剂与各组分之间的离子亲和 力不同而进行层析分离的方法。
.凝胶层析（gel chromatography）
----利用不同组分之间分子大小不同，在通过 凝胶介质时所受到的阻滞作用的差异而进 行分离的方法。
.亲和层析（affinity chromatography）
.薄层层析（thin layper chromatography） ----将适当的吸附剂在玻璃板或 其他材料薄板上铺成薄层，样品 点在上面随后用流动相展开达 到分离鉴定的方法。
三.层析的一般原理
1.分配系数
(Partition chromatography)
混合物在层析过程中不管层析技术采 用哪两种状态的相(流动相和固定相)都能达 到分配平衡，用来叙述一种物质在两种特 定相中的分配程度是用分配系数表示的。
色谱历史
古罗马人分析混合染料（类似辐射纸色谱）
1903（1906）年，Michael Tswett提出色谱法 1931年，Kuhn采用柱色谱分离了类胡萝卜素 1941年，Martin和Synge提出分配色谱法 1944年，Martin等又提出纸色谱法 1952年，Martin和James发明了气液色谱法 1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现 代色谱分析的建立 1956年，Stahl系统研究了薄层色谱法(TLC)2.讨论层析中的移动情况
通常采用平衡过程的研究方法,把层析 柱划分为若干连续部分,每个体系都达到平 衡。
理论板数(n)：在层析柱上，溶剂连续不断加 入，化合物在流动相和固定相中不断分配 平衡，所发生的平衡次数称为理论板数。
凝胶层析
Gel Chromatography
一、定义
凝胶层析…是按照被分离物质分子大 小,经过具有一定孔径的多孔物质进行分离 的一种方法。其又称为凝胶过滤或分子筛 过滤或排阻层析。
层析法进行时有两个相，一个相 称为固定相(Stationary phase )，另一 相称为流动相(Mobile phase )。由于各 组分所受固定相的阻力和流动相的推 力影响不同，各组分移动速度也各异， 从而使各组分得到分离。
二.层析技术的分类
1. 按两相所处的状态分类
以液体作为流动相的层析称为液相层 析，以气体作为流动相的称为气相层析。
液-固层析（liquid-solid chromatography）
液-液层析（liquid-liquid chromatography）
2.按层析过程的机制可分为
.吸附层析(adsorption chromatography ) ----利用吸附剂对不同组分吸附 能力的不同加以分离的方法。
.分配层析(partition chromatography ) ----利用不同组分在流动相和固定相中的 分配系数不同而进行分离的方法。
层析
CHROMATOGRAPHY
▪ 掌握：层析的概念、一般原理 凝胶层析的基本原理 装层析柱的过程及装柱要求
▪ 熟悉：层析技术的分类 凝胶层析的特点 凝胶的结构与性质
▪ 了解：凝胶的选择 柱、样品、洗脱液的选择 凝胶的保存
一.概述
层析Chromatography(色谱),利用混合 物中各组分的物理化学性质间的差异(溶解 度、分子极性、分子大小、分子形状、吸 附能力、分子亲合力等) ，使各组分在支持 物上集中分布在不同区域，借此将各组分 分离。
1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析仪， 确定了核糖核酸的分子结构 1967 年 ， Horvvath 和 Huber 等 研 制 了 高 效 液 相色谱( )仪 high-performance liquid chromatography,HPLC 1975年，Small等提出离子色谱 20世纪80年代，超临界色谱 20世纪90年代，毛细管电泳（1809年Reŭss 第一次电泳实验） 21世纪，联用技术、大分子色谱分离、制备 色谱可望取得更大的发展
分配系数K值大,说明物质在层析中被 固定相吸附得比较牢固,随流动相迁移的速 度较慢,留在固定相中的时间较长,在洗脱液 中后出峰。若分配系数K值小，则该物质在 洗脱液中较早出峰。
从一个混合物中分离和纯化一种生物 物质的纯度如何，取决于混合物中各组分K 值的差异程度。
混合物中各组分若 K值相差较大, 则能 较易地把混合物中的生物物质分离。反 之,K值相差较小,不易把混合物中的生物物 质分离。
其固定相也可有两种状态，一种是以 固体作为吸附剂的固定相，另一种是以涂 布在固体载体表面的液体作为固定相。
层析
气相层析（gaschromatography）
气-固层析（gas-solid chromatography）
气-液层析（gas-liquid chromatography）
液相层析（liquidchromatography）
分配系数----是一种物质在两种特定相中分配，
在特定的温度时这个系数的值是一个常数，即:
溶质在固定相中的浓度
Cs
K= ———————————— = ——
溶质在流动相中的浓度
Cm
有效分配系数：定义为化合物在一个相的总量 除以另一个相中的总量。实际上是分配系数乘 以两个相的体积比。
在不同的层析机制中,分配系数K的含义 不同,在吸附层析中,K为吸附平衡常数;在分配 层析中,K为分配系数;在离子交换层析中K为 交换常数.
----利用生物大分子之间特有亲和力的不同进 分离纯化的方法。
3.按操作技术形式分类
.柱层析（colum chromatography）
----将固定相装在层析柱中，使样品 朝着一个方向移动，通过各组分随流动相流 动而得到分离的方法。
纸层析（paper chrmatography） ----用纸作为液体的载体，样品点在 纸上随后展开达到分离鉴定的 方法。