血涂片和骨髓片的制备及瑞氏染色

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一、目的
掌握血涂片、骨髓涂片的制作及染色技术。 鉴别外周血中各种白细胞的形态特点及分 类计数方法。
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二、原理
瑞氏染液是由伊红美兰所组成的复合物， 经物理吸附及化学作用对细胞进行染色。
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三、材料
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大淋巴细胞
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呈圆形，直径13-18um。
胞核圆形或椭圆形，偏于一侧或着边。染 色质常质密呈块状，排列均匀，深染呈深 紫红色。
胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而 稀疏的嗜天青颗粒。
• 小淋巴细胞
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• 呈圆形或椭圆形，直径6-10um • 胞核圆形或椭圆形，或有切迹，核着边，染色质
粗糙致密，呈大块状，染深紫红色。 • 胞质量极少，仅在核的一侧见到少量淡蓝色胞质，
有时几乎不见而似裸核，一般无颗粒。
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单核细胞 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。 (Monocyte)
• 圆形或不规则形，直径12-20ห้องสมุดไป่ตู้m，边缘常见伪足 突出。
• 胞核形状不规则，常呈肾形、马蹄形、笔架形、 “S”形等，并有明显扭曲折叠。染色质疏松细致， 呈淡紫红色丝网状。
• 胞质丰富，呈淡灰蓝色或淡粉红色，可见多数细 小、分布均匀、细尘样淡紫红色颗粒。
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血针、玻片、酒精棉光学显微镜、香柏油、 二甲苯、一次性采血针
四、方法
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㈠ 血涂片的制作
⒈ 采血：每组两个同学，练习耳垂采血（包括消 毒、扎针、挤压、取血），用推片取血液一滴， 于玻片右端，从其右侧接触血液，使之成40度角， 均匀平稳地向左侧推进，，至血滴推尽为止，其 厚度要适中，且有头体尾之分。
性颗粒。
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嗜碱性粒细胞
嗜碱性粒细胞胞体直径10-12um 胞核分叶不明显，或融合呈堆集状。 胞质中有稀疏的大小不一、分布不均、呈紫
黑色的嗜碱性颗粒，颗粒常掩盖在核上，致 使核的轮廓和结构模糊不清。
血 小板
直径2-5um ，约为成熟红细胞的1/4--3/4， 类圆形，星形与不规则形，淡红色，无核。
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成熟红细胞
正常形态呈双凹盘形，直径7.5um，瑞氏染色为 红色中心稍淡染
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细胞呈圆形，直径10－15um。 胞核狭长，弯曲呈带状，两端钝圆。核染色质
粗糙呈块状，染深紫红色。 胞质中含特异性颗粒的不同，也可分为中性、
嗜酸性、嗜碱性杆状核粒细胞三种，颗粒特点 同中幼粒细胞。
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中性分叶核细胞
细胞呈圆形，直径10－15um。 胞核常分为2－5叶，以分3叶者多见，叶
⒉ 蘸取骨髓适量（选择骨髓小粒部分），以 30~45度角，用力推开，速度适宜。然后将玻片于 空中挥动，使之干燥，以免细胞缩小或细胞皱缩。
⒊ 骨髓片制备好后，用标记笔在膜的头部注明病 人的姓名、取材部位及穿刺部位。
五、结果 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
杆状核粒细胞 (Stab Granulocyte)
与叶之间有细丝状相连或完全断开，核 染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。 胞质丰富，呈淡红色，布满细小紫红色 的中性颗粒。
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嗜酸粒细胞
嗜酸粒细胞胞体直径11－16um， 胞核多分为近似对称的两叶。 胞质中充密集粗大、大小均匀的桔红色嗜酸
⒉ 待血片干后，滴加瑞氏染液数滴（盖住血膜）， 静置40 秒，加缓冲液等量混匀，染10~20分钟， 用水冲洗，干燥后镜检。
⒊ 镜检计数：在血膜头尾交界处，计数100个白 细胞，并对其进行分类。
㈡
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骨髓片的制备
⒈ 将临床医生所取骨髓至玻片高端（在准备涂片 时，将两玻片倾斜放置），使过多血液流下。