槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备

槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备

杨翊涵（2013级中药学一班）

【摘要】本文整理总结了两次实验的操作过程与实验结果。包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识，以及槲皮素的制备和检识。通过碱溶酸沉的方法提取芦丁，再利用稀酸水解生成槲皮素。通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。

【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。

1. 1 芦丁的提取原理

利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的

性质，可用碱性溶剂进行提取，提

取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉

法）。也可利用芦丁在冷水中溶解

度小，在热水中溶解度大的性质进

行提取。

1.2. 芦丁的分离原理

利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热

溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。

1.3. 芦丁的鉴定原理

（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。

（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。

1.4 实验原理

芦丁浅黄色针状结晶，难溶于冷水，可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。

槲皮素黄色结晶，能溶于冷乙醇

（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），

可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡

啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚

等溶剂。

芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。

2.1 粗芦丁的制备

槐米粗粉50g，加水800ml加热，加氢氧化钠调PH8-9，搅拌加热,95℃保温50min，趁热过滤，滤渣再如上提取一次。合并滤液。向滤液加入10%HCL调PH4-5，抽滤，至于80℃干燥得芦丁粗品。所得粗品一半留备后用，另一半加热溶解，放臵过夜。

2.2 槲皮素的制备

将放臵过夜的芦丁粗品滤液再次抽滤，滤渣干燥后取1g臵于500 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸2.2ml和197.8ml蒸馏水，微沸回流至烧瓶内出现絮状结晶，静臵再次抽滤得槲皮素精品。滤液用碳酸钡中和至中性，过滤，蒸发浓缩至干。

3.1槲皮素的定性实验

（1）锆-枸试验：取样品液适量，然后加 2％ZrOCl2的甲醇溶液，注意观察颜色变化，再加入2％枸椽酸的甲醇溶液，记录颜色变化。

(2)α-萘酚-浓硫酸反应：取样品液适量，加等体积的l0％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。

3.2 芦丁及槲皮素的色谱

支持剂：聚酰胺层析板（5×10cm）。

展开剂：甲醇-丙酮-甲苯-乙酸（8：2：2：1）。

样品：自制槲皮素的乙醇溶液，自制芦丁的乙醇溶液。

对照品：槲皮素标准品的乙醇溶液，芦丁标准品的乙醇溶液。

显色剂：三氯化铝乙醇溶液喷雾，紫外光灯365nm下检识荧光。

3.3糖的纸色谱检识

支持剂：中速层析滤纸（5×20cm）

样品：取水解后的滤液20ml，水浴加热，且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性，过滤，取滤液并浓缩至2mI左右，放冷后，供纸色谱点样用。

对照品：1％葡萄糖标准品醇溶液及1％鼠李糖标准品醇溶液。

展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）。

显色剂：喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105℃烘烤5分钟至斑点显色清晰。

4.1注意事项

（1）用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。

（2）用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。

（3）注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。

4.2小结与讨论

本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。通过种种方法达到实验目的。

根据本次试验汲取经验教训，以后实验一定要认真预习，不是浮于表面，要真正学透、学懂，不能照本宣科，要有主观能动性，只有自己理解的、想通的才能真正记住，成为自己的东西。我们要改变学习方法，多多发挥主动性，并将这种学习方法运用到以后的其他科目中，才会事半功倍。

【参考文献】

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[2] 童婧，郭晓蓉，房文亮，夏云. 槐米中芦丁提取工艺研究.中外医学（临床医学），2011，（26）；41-41.

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