槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
合并提取液
7
合并提取液
在60～70℃下用浓盐酸调pH≈4-5⑦，搅匀，静置， 抽滤⑧ ， 水洗至洗液呈中性⑨，
60℃干燥⑩ 。
芦丁粗品
8
2、芦丁的精制
1/2粗品（约2g） + 蒸馏水200 ml 煮沸至全部溶解 趁热抽滤 滤液 放置过夜（析晶） 抽滤 精芦丁。
9
3、芦丁的理化鉴定
样品：自制芦丁。 实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。 IR谱图与芦丁标准谱图对照。 DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
12
6、由芦丁的制备槲皮素
苷的水解，苷元和糖的分离 芦丁1g
置150ml圆底烧瓶中，加2％H2SO480ml，加热微沸1h 水解 (注意观察有何现象，为什么?)，放冷后抽滤
滤液
沉淀
(保留作糖的纸色谱鉴定)
水洗至中性，
用乙醇－水（1：1）30ml混合溶剂
重结晶； 加热溶解，趁热抽滤，
放置 析晶，抽干，干燥 ，
苷元(槲皮素)(测定熔点、1HNMR) 13
实验注意事项
芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢； 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还
可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但 pH值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉 淀析出； pH值过低会使芦丁形成烊盐重新溶解，降低收率 （最佳pH值为4-5）
天然药物化学
实验一 槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
1
一、实验目的要求
1、掌握黄酮类化合物的源自文库取和分离的原理和 方法。
2、掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方 法。
3、了解IR及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中 的应用。
2
二、实验原理
中药槐米中的主要化学成分 主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、
OH
OH 3' 4' O
3 OH
OH
O
4
芦丁的性质
芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结 晶，含3分子结晶水（C27H30O16·3H2O）， 加热至185℃以上熔融并开始分解。
芦丁的溶解度，在冷水中1:10000， 沸水中1:200， 沸乙醇中1:60， 沸甲醇中1:7，
5
芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、 丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、 乙醚、氯仿、石油醚。
黄酮苷的一般鉴别方法 Molish反应：取芦丁少量于试管，加乙醇
0.5ml溶解，加1%α-萘酚溶液数滴，沿管壁 滴加浓硫酸0.5ml，观察两液面处有何现象。 三氯化铝反应：取芦丁醇溶液滴于滤纸上， 紫外灯下观察荧光；然后喷三氯化铝试液， 再在紫外灯下观察荧光颜色的变化。
10
4、芦丁的TLC鉴定
14
思考题
苷类结构的检识大体程序如何？ 苷类水解的方法？ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮
素3-OH上？ 苷元的结构怎样确定？ 怎样确定苷键的构型？
15
实验课后总结与讨论
芦丁提取 芦丁的分离纯化 芦丁的理化鉴别 芦丁的苷元-槲皮素的制备 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
16
样品：①自制芦丁乙醇液; ②自制槲皮素乙醇液。
对照品：①芦丁对照品乙醇液; ②槲皮素对照品乙醇液。
吸附剂：聚酰胺薄膜。 展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1);
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干
后，置紫外灯(365nm)下观察。
11
5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
粘液质等。 槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。 芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用
作高血压辅助治疗剂。 芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙
基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。
3
芦丁的化学结构式
槲皮素的化学结构式
HO
O
OH OH
O
OH O
glc rha
HO 7 5
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性， 易溶于碱液中，酸化后又可析出，因此可 以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
6
三、实验过程
1、提取分离 槐米粉末
加约6倍量水①，煮沸， 在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8～9②。 在保持该pH条件下③，微沸20～30分钟， 随时补充失去的水份④， 趁热抽滤⑤， 药渣加 4倍量水⑥，同法再提2次
7
合并提取液
在60～70℃下用浓盐酸调pH≈4-5⑦，搅匀，静置， 抽滤⑧ ， 水洗至洗液呈中性⑨，
60℃干燥⑩ 。
芦丁粗品
8
2、芦丁的精制
1/2粗品（约2g） + 蒸馏水200 ml 煮沸至全部溶解 趁热抽滤 滤液 放置过夜（析晶） 抽滤 精芦丁。
9
3、芦丁的理化鉴定
样品：自制芦丁。 实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。 IR谱图与芦丁标准谱图对照。 DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
12
6、由芦丁的制备槲皮素
苷的水解，苷元和糖的分离 芦丁1g
置150ml圆底烧瓶中，加2％H2SO480ml，加热微沸1h 水解 (注意观察有何现象，为什么?)，放冷后抽滤
滤液
沉淀
(保留作糖的纸色谱鉴定)
水洗至中性，
用乙醇－水（1：1）30ml混合溶剂
重结晶； 加热溶解，趁热抽滤，
放置 析晶，抽干，干燥 ，
苷元(槲皮素)(测定熔点、1HNMR) 13
实验注意事项
芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢； 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还
可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但 pH值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉 淀析出； pH值过低会使芦丁形成烊盐重新溶解，降低收率 （最佳pH值为4-5）
天然药物化学
实验一 槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
1
一、实验目的要求
1、掌握黄酮类化合物的源自文库取和分离的原理和 方法。
2、掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方 法。
3、了解IR及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中 的应用。
2
二、实验原理
中药槐米中的主要化学成分 主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、
OH
OH 3' 4' O
3 OH
OH
O
4
芦丁的性质
芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结 晶，含3分子结晶水（C27H30O16·3H2O）， 加热至185℃以上熔融并开始分解。
芦丁的溶解度，在冷水中1:10000， 沸水中1:200， 沸乙醇中1:60， 沸甲醇中1:7，
5
芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、 丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、 乙醚、氯仿、石油醚。
黄酮苷的一般鉴别方法 Molish反应：取芦丁少量于试管，加乙醇
0.5ml溶解，加1%α-萘酚溶液数滴，沿管壁 滴加浓硫酸0.5ml，观察两液面处有何现象。 三氯化铝反应：取芦丁醇溶液滴于滤纸上， 紫外灯下观察荧光；然后喷三氯化铝试液， 再在紫外灯下观察荧光颜色的变化。
10
4、芦丁的TLC鉴定
14
思考题
苷类结构的检识大体程序如何？ 苷类水解的方法？ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮
素3-OH上？ 苷元的结构怎样确定？ 怎样确定苷键的构型？
15
实验课后总结与讨论
芦丁提取 芦丁的分离纯化 芦丁的理化鉴别 芦丁的苷元-槲皮素的制备 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
16
样品：①自制芦丁乙醇液; ②自制槲皮素乙醇液。
对照品：①芦丁对照品乙醇液; ②槲皮素对照品乙醇液。
吸附剂：聚酰胺薄膜。 展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1);
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干
后，置紫外灯(365nm)下观察。
11
5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
粘液质等。 槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。 芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用
作高血压辅助治疗剂。 芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙
基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。
3
芦丁的化学结构式
槲皮素的化学结构式
HO
O
OH OH
O
OH O
glc rha
HO 7 5
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性， 易溶于碱液中，酸化后又可析出，因此可 以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
6
三、实验过程
1、提取分离 槐米粉末
加约6倍量水①，煮沸， 在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8～9②。 在保持该pH条件下③，微沸20～30分钟， 随时补充失去的水份④， 趁热抽滤⑤， 药渣加 4倍量水⑥，同法再提2次