生物材料的冷冻保存方法
液态冷冻操作方法有哪些
液态冷冻操作方法有哪些液态冷冻操作是一种常用的材料处理方法，在工业和实验室中都有广泛的应用。
液态冷冻操作通过将物质置于低温液体中，使其迅速冷却并形成冷冻状态，可以用于冷冻保存、制备材料、提高金属工艺性能等方面。
下面将详细介绍液态冷冻操作的几种常见方法。
一、液氮冷冻法：液氮是常用的液态冷冻介质，其温度可达到-196，适用于冷冻大部分物质。
液氮冷冻法主要步骤如下：1. 准备好液氮容器，将液氮倒入容器中。
2. 将需要冷冻的样品置于冷冻夹具中，再放入液氮容器中。
3. 等待样品温度降低至目标温度，并保持一定时间。
4. 取出样品并进行下一步处理。
二、液氧冷冻法：液氧的温度可达到-183，较液氮稍高，适用于一些高温超导体的冷冻保存。
液氧冷冻法操作步骤如下：1. 准备好液氧容器，将液氧倒入容器中。
2. 将需要冷冻的样品置于冷冻夹具中，再放入液氧容器中。
3. 等待样品温度降低至目标温度，并保持一定时间。
4. 取出样品并进行下一步处理。
三、混合液冷冻法：混合液冷冻法是将两种或多种冷冻介质按一定比例混合使用，以获得更低的温度。
常用的混合液组成是液氮和液氧。
混合液冷冻法操作步骤如下：1. 准备好混合液冷冻器和混合液。
2. 将需要冷冻的样品置于冷冻夹具中，再放入混合液冷冻器中。
3. 在混合液冷冻器中注入混合液，使样品完全浸泡。
4. 等待样品温度降低至目标温度，并保持一定时间。
5. 取出样品并进行下一步处理。
四、制冰冷冻法：制冰冷冻法是一种简单的液态冷冻方法，适用于一些常温下易融化的物质。
操作步骤如下：1. 准备好制冰盒或冰块。
2. 将需要冷冻的样品置于制冰盒中或与冰块接触。
3. 将制冰盒或冰块与样品用绝缘材料包裹好，以减少热交换。
4. 等待样品温度降低至目标温度，并保持一定时间。
5. 取出样品并进行下一步处理。
液态冷冻操作是一项重要且广泛应用的方法，不仅可以用于冷冻保存生物样品、制备材料、提高金属工艺性能等方面，还可以用于制备多孔材料、纳米材料等高性能材料的制备。
细胞冻存的方法与步骤
细胞冻存的方法与步骤细胞冻存是一种常用的实验室技术，用于保留细胞的生物学特性和遗传信息，以备将来的实验或应用。
下面是细胞冻存方法和步骤的详细说明。
一、选择细胞种类和培养基1.选择要冻存的细胞种类，例如哺乳动物细胞、细菌或真菌等。
2.根据细胞种类和生长特性选择适合的培养基。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等。
二、制备冻存试剂和材料1.冻存试剂：含有冷冻保护剂的冻存液。
常用的冻存液成分有细胞培养基、血清、DMSO（二甲基亚砜）等。
2.安全材料：包括手套、护目镜、口罩等，用于保护实验人员的安全。
此外，还需要准备液氮容器或冰箱进行冻存。
三、细胞处理步骤1.细胞预处理：将培养的细胞从培养瓶中取出，用生理盐水或PBS（磷酸缓冲盐水）洗涤去除残留物。
2.细胞计数：用显微镜和细胞计数仪来测量细胞的数目和浓度。
3.体积调整：根据所需的冻存密度和分装容器的大小，确定冷冻保护剂（如DMSO）的浓度和添加体积。
4.混合：将细胞悬液和冷冻保护剂轻轻地混合均匀。
5.分装：将混合物分装到冻存小管或冻存盒中。
6.封闭：使用不透气的盖子或密封膜封闭冻存管或盒。
四、冷冻过程1.控制冷冻速度：冷冻速度是细胞冻存过程中一个非常关键的因素。
常用的冷冻速度是每分钟1摄氏度以下，最佳速度约为每分钟1-2摄氏度以下。
2.冻存程序：使用冻存机或其他冻结设备进行控制冷冻，以确保温度降到适合储存细胞的温度。
一般常用的冻存温度为-80摄氏度或液氮温度（-196摄氏度）。
五、储存和解冻1.储存：冷冻管或盒应存放在专用的液氮罐中或冷冻设施中，避免频繁开启，以防止温度波动和冻存液的液态氮蒸发。
2.解冻：在需要使用时，将细胞冷冻管或冻存盒快速解封到37摄氏度恢复细胞的活性。
同时，快速将冰冻的细胞悬液转移到预暖的培养基中，以避免冷休克对细胞的伤害。
以上是细胞冻存的一般方法和步骤，实际操作时还要根据具体细胞类型和实验要求进行相应的调整和优化。
细胞冻存保留了细胞的生物学特性和遗传信息，为细胞的长期保存和应用提供了保障。
生物冷冻技术实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生物冷冻技术的原理和方法。
2. 掌握生物样本冷冻保存的操作步骤。
3. 评估冷冻保存对生物样本的影响。
二、实验原理生物冷冻技术是一种利用低温环境减缓生物样本内细胞和分子活动的技术，从而实现生物样本长时间保存的技术。
主要方法包括液氮冷冻、干冰冷冻、低温冰箱保存等。
低温环境可以降低生物分子的代谢速率，减缓细胞衰老和死亡，保持生物样本的活力、功能和完整性。
三、实验材料1. 生物样本：细菌、细胞、组织等。
2. 冷冻设备：液氮罐、干冰、低温冰箱等。
3. 试剂：固定液、解冻液、无菌水等。
4. 实验器具：冷冻管、离心管、移液器、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备工作（1）将生物样本置于无菌环境中，避免污染。
（2）将所需试剂和器具准备齐全。
2. 生物样本冷冻保存（1）液氮冷冻：将生物样本置于液氮中，使其快速冷冻至-196℃。
（2）干冰冷冻：将生物样本置于干冰中，使其缓慢冷冻至-78℃。
（3）低温冰箱保存：将生物样本置于低温冰箱中，使其缓慢冷冻至-20℃。
3. 生物样本解冻（1）液氮冷冻样本：将样本从液氮中取出，立即置于37℃水浴中解冻。
（2）干冰冷冻样本：将样本从干冰中取出，置于室温下自然解冻。
（3）低温冰箱保存样本：将样本从低温冰箱中取出，置于室温下自然解冻。
4. 评估冷冻保存对生物样本的影响（1）观察样本外观，记录细胞形态、活力等变化。
（2）进行显微镜观察，记录细胞核、细胞质等结构变化。
（3）进行生化实验，检测细胞内酶活性、蛋白质表达等指标。
五、实验结果与分析1. 外观观察：冷冻保存后的生物样本，细胞形态基本完整，活力较高。
2. 显微镜观察：冷冻保存后的生物样本，细胞核、细胞质等结构基本完好，未出现明显损伤。
3. 生化实验：冷冻保存后的生物样本，酶活性、蛋白质表达等指标基本正常。
六、实验结论1. 生物冷冻技术可以有效保存生物样本的活力、功能和完整性。
2. 液氮冷冻、干冰冷冻、低温冰箱保存等不同冷冻方法对生物样本的影响较小，可根据实际情况选择合适的冷冻保存方法。
临床试验生物样本备份方法
临床试验生物样本备份方法1. 样本备份是确保临床试验数据的可靠性和可重复性的重要步骤之一。
在临床试验中，常常需要对生物样本进行备份以保留原始样本，以便后续分析或验证。
2. 将生物样本分为不同的小份，每份包装在标有独立编号的容器中。
这样可以确保每个样本都有相应的备份，并可以轻松地找到和识别需要使用的样本。
3. 生物样本备份的最常用方法之一是冷冻保存。
将样本存放在低温条件下，例如-20°C或-80°C的冰箱或冻存库中，可以有效地保护样本的完整性和稳定性。
4. 在进行样本冷冻保存之前，应先选择适当的冻存液。
常用的冻存液包括低温保存缓冲液、甘油溶液等，这些冻存液可以保护样本的结构和功能。
5. 在样本冷冻保存时，可以选择使用冷冻盒或冻存管来存放样本。
冷冻盒能够提供额外的隔热保护，而冻存管则可以方便地进行分装和标记。
6. 临床试验样本备份中的重要一环是及时记录所有备份样本的信息。
包括样本类型、编号、存放位置、冷冻时间等，这些信息对于跟踪和管理样本非常重要。
7. 在实施样本备份过程中，应确保所有使用的器械和容器都是无菌的，以避免样本受到外部污染。
8. 对于液体样本，应确保在备份过程中将其徹底的混合均匀以保证样本的代表性。
9. 对于非液体样本，如组织样本或细胞样本，备份前应考虑相应的处理方法。
可以使用冻切技术将组织样本切片，并将每个切片存储在相应的容器中。
10. 样本备份的频率也需要根据具体情况进行合理的安排。
一般来说，备份频率应足够，以便在需要时能够提供足够的备份样本。
11. 样本备份过程中，应确保样本标识清晰可读，并采取措施避免标识的磨损或褪色。
12. 对于大规模临床试验，可以考虑使用自动化系统来进行样本备份。
这些系统可以提高效率、减少人为错误，并能够及时跟踪和管理备份样本的信息。
13. 样本备份过程中应注意防止样本中的氧气和水分接触以避免样本的氧化和降解。
14. 在生物样本备份中，应注意遵循伦理和法律规定，并确保样本的隐私和安全。
菌种冷冻保藏
7.4采用酒精喷灯进行封管时，烧的温度要适宜。封管后不要立即放在台面上，以防受冷撕裂。
附图：泪滴型安瓿管长颈毛细玻璃管
多头岐管
附：1、冷冻保藏改进方法（一）
因真空冷冻干燥器价格比较昂贵，通常抗生素生产厂都采用自制的简单易行办法，可达到同样的目的。即：
6.2制备脱脂乳
取市售新鲜、清洁、无抗生素污染的原牛奶300ml煮沸，在5000 r/min下离心10分钟，除去上层奶皮、油脂，吸取下层奶液，经脱脂棉过滤，如此反复3次脱去脂肪，然后分装入两个250 ml三角瓶中，加棉塞并用牛皮纸包头、扎牢，在115℃25min高压蒸汽灭菌，冷却后做无菌试验，4℃冰箱保存备用。
6.6预冻
因为迅速超低温预冻可保持菌体细胞结构成份原状，利于细菌存活。故将分装好的冷冻管及指示管置于低温冰箱冷冻室-70℃下快速冷冻过夜。无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。也可用液氮。将冷冻管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。也可用液氮预冻。还可用低温冰箱-80℃预冻1～2小时后转入冷冻真空干燥。
由于同时满足菌种保藏三要素，使微生物始终处在低温、干燥、缺氧的条件下，能克服传代、沙土管简单保藏方法的不足，保藏菌种范围广、时间长（保藏期可达数年至十数年）、存活率高、保存过程不易失活和退化等。
3、主要步骤为：
3.1将待保藏菌种的细胞或孢子悬浮于保护剂（如脱脂牛奶）中；
3.2在低温（-45℃以下）下使微生物细胞快速冷冻；
6.7冷冻真空干燥
真空冷冻干燥器有成套的装置出售（长药厂新近成立菌种中心，购有该机）。按其方法操作。冷冻干燥机要先开机预冷30分钟以上，再根据冷冻干燥机的水分蒸发能力，确定一次放入的冷冻管数量。将预冻好的冷冻管及指示管于次日取出迅速放入已预冷的冷冻干燥机的干燥箱内，开动真空泵进行一级真空抽干，待指示管出现由粉红色变全兰色时，再进行二级抽干12h。二级真空干燥既保持菌体细胞干燥度，又避免细胞反复冻结造成保存中菌体死亡，因而能更长期保存菌种，并能提高其存活率，又不会发生菌株的变异
生物存储技术
生物存储技术
生物存储技术是一种将细胞、组织、生物样本等生物材料保存在低温下，以延长其保存期限和保持其原始状态的技术。
生物存储技术的应用范围广泛，包括实验室研究、医学诊断、植物保护、动物保护等领域。
生物存储技术的发展历程可以追溯到20世纪初期。
最初，冷冻保存和干燥保存是主要的生物存储方法。
然而，这些方法存在一些限制，如保存时间短、样本质量易受损等问题。
随着科学技术的不断进步，新的生物存储技术被不断开发出来，如液氮冷冻保存、超低温保存、冻干保存等。
在生物存储技术中，液氮冷冻保存是最常见的方法。
液氮的温度极低，可以将细胞、组织等生物材料保存在其中，以延长其保存期限。
超低温保存是一种高效的生物存储方法，它可以将生物材料保存在-80℃以下的低温下，以延长其保存期限并减少样本质量损失。
冻干保存是一种将生物材料冷冻到极低温度，然后通过真空干燥的方法保存的技术，它可以有效地保持生物材料的原始状态。
生物存储技术在实验室研究、医学诊断、植物保护、动物保护等领域有着广泛的应用。
例如，在细胞研究中，生物存储技术可以保存不同类型的细胞系，以便进行后续的实验；在医疗诊断中，生物存储技术可以保存患者的生物样本，以进行疾病诊断和治疗；在植物保护中，生物存储技术可以保存珍稀植物物种，以避免其灭绝；在动物保护中，生物存储技术可以保存珍稀动物种类，以便进行后续的保育工
作。
总之，生物存储技术是一种重要的生物学技术，它可以延长生物材料的保存期限并保持其原始状态，对实验室研究、医学诊断、植物保护、动物保护等领域有着广泛的应用前景。
细胞深低温冷冻的标准操作规程
细胞深低温冷冻的标准操作规程一、引言细胞深低温冷冻技术在生物医学研究领域具有广泛的应用，尤其是用于细胞的长期保存和病理标本的保存。
为了确保冷冻过程的可行性和效果，制定一套标准操作规程是至关重要的。
本文旨在介绍细胞深低温冷冻的标准操作规程，以期为科研工作者提供具体指导。
二、材料和设备准备1. 低温细胞冷冻液（含甘油）2. 冷冻管3. 细胞培养基4. 离心机5. 无菌操作台6. 细胞计数板7. 显微镜8. 低温保存设备（例如液氮罐）9. 温度计三、细胞处理与准备1. 准备培养基：根据细胞类型选择适宜的培养基，并进行无菌过滤。
2. 处理细胞：使用标准的细胞培养技术，将细胞移植到培养皿中，在培养箱中培养至达到所需的细胞数。
四、细胞冷冻步骤1. 收集细胞：使用细胞培养器具或离心机，将细胞从培养皿中收集到离心管中。
2. 移液：将收集到的细胞悬浮液平均分配到多个冷冻管中。
3. 加入低温细胞冷冻液：将预先配制好的低温细胞冷冻液加入冷冻管中，在慢慢滴加的同时轻轻摇匀，以保证细胞均匀悬浮。
4. 低温过程：将装有细胞的冷冻管迅速放入预冷的液氮罐中，使其迅速冷却至-196℃以下。
注意不要让液氮直接接触到冷冻管口部。
5. 低温保存：将冷冻管转移到已标识好的低温保存设备中，如液氮罐，确保保存环境的温度恒定。
五、细胞复苏步骤1. 从低温保存设备中取出冷冻管，迅速放入37℃预热的水浴中，使其快速融化。
注意不要让水进入冷冻管内。
2. 快速离心：将融化的细胞悬浮液立即转移到预先准备好的培养皿中，并进行快速离心，去除水分和残留的低温细胞冷冻液。
3. 加入培养基：将适量的预热培养基加入培养皿中，轻轻摇匀，以保证细胞均匀分布。
4. 培养：将培养皿放入恒温培养箱中，在适宜的培养条件下培养细胞。
5. 观察和评估：使用显微镜观察细胞形态和生长状态，根据需要进行进一步的实验操作。
六、安全注意事项1. 在进行细胞冷冻和复苏操作时，佩戴手套和实验室护目镜，以防止低温对人体造成伤害。
生物医学中的低温技术
生物医学中的低温技术随着科学技术的不断发展，常温下无法存活的细胞和组织的存储、运输以及制备等问题，被人们所关注。
而低温技术，尤其是液态氮冷冻技术，成为了解决这类问题的有效手段。
生物医学领域有着广泛的应用场景，下面我们来详细了解一下生物医学中的低温技术。
一、低温技术的基本原理低温技术是指通过控制物体的温度达到所需的物理、化学和生物学目的的技术。
常见的低温技术包括：冰箱、冷库、液氮罐等。
不同的低温技术，其使用的温度范围不同。
其中，液态氮冷冻技术是生物医学领域中最常用的低温技术，其使用温度为-196℃。
二、液态氮冷冻技术在生物医学领域的应用1、冷冻保存液态氮冷冻技术被广泛应用于生物材料的冷冻保存，如细胞、组织、血清、酶、基因、病毒等，几乎涵盖了整个生物体的组成部分。
这样，就可以避免在常温条件下产生腐败、氧化等游离基反应和酶活性的丧失。
同时，在需要时，冷冻物料可以经过简单的复原过程重新使用，保证物质所需的新鲜度和活性。
2、医学诊疗在医学诊疗中，液态氮冷冻技术也是一个不可或缺的工具。
如临床医生可以使用冷冻手术刀，利用液氮的低温使局部病变组织凝固，然后通过切除组织的方式取出病变细胞，从而达到治疗目的；在牙科手术中，也可以使用冷冻机在麻醉的情况下低温处理口腔病变组织，从而达到治疗或者采集样本的目的。
3、细胞冷冻和解冻液态氮冷冻技术还广泛应用于细胞生物学中。
例如，在细胞培养中，液氮将是必不可少的保护宝库。
对于大多数动物细胞来说，仅在-70℃左右下进行短时间的冷冻存储即可存活，并在必要时进行快速恢复。
低温保存的细胞在恢复时能够保持其生物学性质和生长能力。
三、液态氮冷冻技术的不足之处1、运输成本高液态氮冷冻技术在生物医学领域中的最大缺点是它的运输和存储代价高。
液态氮需要特殊容器存储和操作，而且在长期使用过程中可能会出现泄漏的情况，进一步增加了操作成本。
2、设备经验不足液态氮冷冻技术需要专业的设备和技术，这为操作带来了一定的复杂性。
最新微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏
1.1.1.1.1.2微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏国家自然科技资源平台微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程（试行）《自然科技资源收集整理保存技术规程研究制定》项目组二〇〇四年十二月十日目次目次 (1)前言 (2)引言 (3)1 范围 (4)2 规范性引用文件 (4)3 术语和定义 (4)4 内容 (5)参考文献 (10)前言本规程由微生物菌种资源平台建设项目提出。
本规程起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所、中国食品发酵工业研究院。
本规程主要起草人：张月琴、刘红宇、黄明玉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、陈敏、程池等。
引言微生物菌种资源的长期有效保藏是微生物菌种资源有效实施共享的前提，采用操作性简便、保藏周期长、遗传变异率低是菌种资源保藏方法的首要选择。
微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程1 范围本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。
本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。
对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。
国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》GB 19489 实验室生物安全通用要求科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范（试行）3 术语和定义下列术语和定义适用于本规范。
3.1冷冻干燥 freeze-drying将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。
胚胎及卵母细胞的冷冻保存技术
在使用冷冻保护剂时，需要严格控制浓度和暴露时间，以避免对细胞造 成毒性和其他不良影响。
冷冻和融化过程
冷冻过程是在极低温度下将胚胎或卵母 细胞快速冷却到玻璃态的过程。在这个 过程中，细胞内的水分子被固定在玻璃 态中，形成一种类似玻璃的结构，从而
THANKS
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温度变化引起的渗透压变化
在冷冻和复苏过程中，温度的快速变 化可能引起细胞内外的渗透压变化， 导致细胞损伤。
前景展望
新型冷冻保护剂的开发
随着科学技术的发展，新型的、对细胞毒性更小的冷冻保 护剂正在被不断开发出来，这将有助于提高细胞的存活率 和功能。
3D打印技术的结合
3D打印技术可以用于制造具有复杂结构的生物材料，这 些生物材料可以用于模拟细胞生长的三维环境，提高细胞 的存活率和功能。
• 步骤：玻璃化冷冻法包括预处理、玻璃化、解玻璃化和复苏等步骤。预处理阶 段与慢速冷冻法相似；玻璃化阶段会快速将细胞降至-196°C；解玻璃化阶段会 快速升温至适宜温度；复苏阶段同样进行恢复培养。
• 优点：玻璃化冷冻法降温速度快，避免了冰晶形成对细胞的损伤，因此能够提 高胚胎及卵母细胞的存活率。
• 缺点：玻璃化冷冻法操作难度较大，需要使用特殊的设备和试剂，成本较高， 且仍存在一定的细胞损伤和突变风险。
卵母细胞冷冻保存
总结词
卵母细胞冷冻保存技术是一种新兴的生 殖技术，通过低温保存卵母细胞，延长 其存活时间，为女性生育力的保存提供 了可能。
VS
详细描述
随着辅助生殖技术的发展，越来越多的女 性选择通过卵母细胞冷冻保存技术来保存 自己的生育力。这种技术通过将卵母细胞 置于低温下，使其进入休眠状态，以便在 未来需要时进行复苏和受精。这种技术为 女性提供了更多的生育选择和机会，尤其 适用于那些需要进行化疗等治疗的女性患 者。
甘油管冷冻保藏方法收集-2
§菌种管由传统的玻璃菌种管改为带盖塑料离心管。
方法：①将塑料离心管置耐高压塑料离心管盒内并用双层报纸包好，高压蒸汽15磅15min消毒，放烤箱80℃烤干。
②在净化工作台内将脱脂牛奶洗下的浓厚菌悬液用长毛细玻璃滴管加到塑料离心管的底部，每只左右，切记不要将牛奶污染离心管口。
③将加好菌液的离心管盒置-20℃冰箱预冻，预冻好后把离心管盒放置到冷冻干燥机干燥箱内冻干。
④冻干后在净化工作台内压好离心管盖，不抽真空。
贴标签，用封口膜封离心管口。
放-20℃冰箱保存。
§该改良法优点有：⑴操作过程大大简化，菌种管口不需溶封，不抽真空。
⑵菌种管抗破损性极佳；⑶菌种管体积超小。
⑷成本低廉，易于商品化生产、推广。
笔者使用该改良法近七年，本省发放菌种上万只没有破损情况出现；数次发放嗜血杆菌、链球菌、奈瑟氏菌等苛养菌，生长情况良好。
近几年我们还向华东地区部分兄弟省分提供了室间质评菌种四万余只，效果满意。
实验——微生物菌种常规保藏方法录入时间:2011-4-13 9:30:37 来源：天津农学院精品课程菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。
菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。
1目的了解菌种保藏的基本原理掌握几种常用的菌种保藏方法。
2原理菌种保藏的方法很多。
其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。
使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。
依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。
一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。
3材料菌株待保藏的适龄菌株斜面培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。
试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。
器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。
菌种的储存条件
菌种的储存条件菌种的储存条件对于保持菌种的活力和稳定性至关重要。
不同菌种有不同的储存条件，本文将详细介绍菌种的储存条件及其注意事项。
一、冷冻储存条件：冷冻储存是最常用的一种储存方式。
菌种在-80℃或更低温度下存放，可有效地抑制微生物的代谢活动。
冷冻储存条件下，菌种的活力可长期得到保持。
1.冻存液的配制：冷冻菌种时需要配制冻存液。
常见的冻存液成分包括：2%蛋白胨、15%甘油、10%蔗糖等。
菌种与冻存液按一定比例混合后，分装到冻存管中。
2.冻存管的选择：冷冻菌种时应选择质量好、无毒、不易破裂的冻存管。
常见的冻存管材料有聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等。
3.低温保存：菌种在低温保存时应存放于-80℃以下的冷冻设备中，如超低温冰箱、液氮罐等。
冻存时需避免温度变化过大，以免对菌种造成损伤。
4.冷冻菌种的密封：菌种存放在冷冻设备中时，需注意将冻存管严密密封，以防菌种被空气污染、受潮等。
5.冷冻菌种的标签：冷冻菌种应在冻存管上标注清楚菌种名称、保存日期、储存温度等信息。
二、液氮冷冻保存条件：液氮冷冻保存是一种极低温度下的长期保存方式，菌种在液氮温度下存放可以保持较好的存活率。
1.菌种冷冻液的配制：菌种冷冻液通常包括20%的甘油或甘露醇等，以防止冷冻过程中的冷冻损伤。
2.冷冻管的选择：液氮冷冻保存时，应选择耐低温、密封性好的专用冷冻管，以确保菌种的保存质量。
3.菌种冻存管的密封：冷冻管在液氮中保存时，应当严密密封，并确保管内无空气以防菌种受潮。
4.液氮存放设备的选择：液氮冷冻保存时，需要专用的液氮罐进行存放。
液氮罐应有良好的保温性能，以避免液氮的挥发。
5.菌种的取用：在液氮中储存的菌种使用时，要快速取出并尽量避免长时间暴露在室温下，以保持菌种活力。
6.液氮冻存菌种的标签：液氮冷冻保存的菌种要在冷冻管上标注明确的菌种信息、冻存日期和保存温度。
三、干燥保存条件：干燥保存是一种常用的保存方式，将菌种培养液经过干燥处理后，保存在干燥的条件下，可以长期保持菌种活力。
植物材料超低温保存方法
植物材料超低温保存方法摘要：一、引言二、超低温保存方法的原理1.细胞膜的稳定性2.细胞内生物大分子的稳定性3.细胞器的稳定性三、超低温保存方法的步骤1.样本处理2.低温预处理3.快速冷冻4.低温储存四、超低温保存方法的优点1.保存时间长2.保存条件简单3.保存材料活性高五、超低温保存方法的适用范围1.植物组织2.动物组织3.微生物六、注意事项1.低温设备的选用2.冷冻速度的控制3.储存条件的维持七、结论正文：一、引言随着科学技术的不断发展，植物材料超低温保存方法在生物学、农业科学等领域具有重要意义。
这种方法可以长时间保存植物材料，保留其生物活性，为科学研究和农业生产提供了有力保障。
二、超低温保存方法的原理1.细胞膜的稳定性：超低温保存方法可以保持细胞膜的完整性，避免细胞内容物泄漏。
2.细胞内生物大分子的稳定性：低温条件下，生物大分子如DNA、蛋白质等结构稳定，功能完好。
3.细胞器的稳定性：超低温保存方法有利于细胞器的结构和功能保持不变。
三、超低温保存方法的步骤1.样本处理：首先对植物材料进行切片、涂片或粉末处理，以便于后续操作。
2.低温预处理：将处理好的样本放置在4℃条件下，进行低温适应。
3.快速冷冻：将预处理好的样本迅速置于液氮中，快速降低温度。
4.低温储存：将冷冻后的样本放入-196℃的液氮中，长期储存。
四、超低温保存方法的优点1.保存时间长：超低温保存方法可以延长植物材料的保存时间，有利于长期研究。
2.保存条件简单：只需低温设备和液氮，无需复杂设备和技术。
3.保存材料活性高：低温条件下，细胞器和生物大分子保持活性，有利于后续实验研究。
五、超低温保存方法的适用范围1.植物组织：适用于各种植物组织的超低温保存，如叶片、茎尖等。
2.动物组织：适用于动物组织样本的超低温保存，如胚胎、肌肉等。
3.微生物：可用于微生物菌株的超低温保存。
六、注意事项1.低温设备的选用：选择合适的低温设备，确保样本在低温条件下得到有效保存。
透射电镜生物样品冷冻保存方法的探讨
１������ １ 固定和取材 正常 ３ 月龄 Ｃ５７Ｂ / Ｌ 小鼠经 ２������ ５％戊二醛和 ４％
多聚甲醛灌注固定ꎬ取脑、肺、心肌、肾和小肠组织ꎬ 上述组织采用 ２������ ５％戊二醛固定液于 ４ ℃ 冰箱固定 ２ ｈꎬ０������ １ ｍｏｌ������Ｌ－１ＰＢ 充分洗涤后待用ꎮ １������ ２ 冷冻保护液的配制
的技术产生ꎬ组织包埋块的保存形式将影响对样品 进行多元化的研究和应用ꎮ 因此ꎬ探索一种行之有 效的ꎬ可长期冷冻保存电镜样品的方法至关重要ꎮ
低温冷冻 是 保 存 生 物 样 品 的 可 行 方 法ꎬ 但 是ꎬ 生物组织冷冻最大的问题是产生冷冻损伤ꎮ 导致 冷冻损伤主要有两个因素ꎬ第一是由于冷冻速度过 快导致细胞 内 冰 晶 形 成ꎬ 破 坏 组 织 结 构ꎻ 第 二 是 由 于冷冻速度过慢导致的细胞内、外液渗透压产生差 异ꎬ最终导致细胞损伤ꎬ结构破坏[３] ꎮ 近年来ꎬ研究 者建立了玻璃化深低温冻存方法ꎬ解决了上述冷冻 保存组织细胞的问题ꎮ 玻璃化的液体无固定形状ꎬ 不存在晶体 结 构ꎬ 与 固 态 相 比ꎬ 它 更 像 一 种 极 端 粘 滞、呈现固态的液体[４] ꎮ 因此ꎬ在玻璃态下组织和 细胞内不形成冰晶ꎬ冷冻样品的结构成分以及生物 活性可保持稳定ꎬ因此被公认为是保存生物体的最 理想方法ꎬ现 今 已 广 泛 应 用 于 再 生 医 学ꎬ 推 进 了 临 床研究和治疗的发展[５－６] ꎮ 另外ꎬ免疫电镜的一种 样品制备方法———Ｔｏｋｕｙａｓｕ 技术ꎬ利用高浓度蔗糖 (２������ ３ Ｍ) 作为冷冻保护剂ꎬ可使样品在液氮中达到 玻璃化ꎬ继而 对 其 进 行 冷 冻 超 切ꎬ 样 品 的 超 微 结 构 保存良好[７] ꎮ
树脂包埋块被普遍认为是对电镜样品保存的 最好形式ꎬ这 种 保 存 方 法 固 然 具 有 可 长 期 保 存ꎬ 不 易受环境因素影响等优点ꎮ 但有些研究者收集样 品需要一个 漫 长 的 过 程ꎬ 如 临 床 样 品 的 收 集ꎬ 实 验 者为保证实验结果的一致性ꎬ往往希望对所有样品 进行统一包埋处理ꎮ 另外ꎬ近年冷冻电镜、断层扫 描成像、冷冻超切和免疫电镜等技术已经得到快速 发展ꎬ并且随着电镜技术的不断发展还可能有更新
细胞膜保存方法
细胞膜保存方法
细胞膜的保存方法主要有以下几种：
1. 冷冻保存法：将细胞在含有保护剂的溶液中进行冷冻，可以有效地防止冰晶的形成，从而保护细胞膜的完整性。
这种方法适用于长期储存。
2. 化学固定法：通过使用化学物质（如甲醛或戊二醛）来稳定细胞膜的结构。
这种方法的优点是可以快速固定细胞膜，但可能会改变细胞膜的一些特性。
3. 液氮速冻法：将细胞迅速冷却至液氮温度(-196℃)，使得细胞内的水分瞬间冻结成玻璃态，避免了冰晶对细胞膜的破坏。
这种方法能最大程度地保持细胞膜的原始状态。
4. 低温保存：将冷冻的细胞膜样品转移到低温冰箱中保存。
通常，-80°C的低温冰箱是较为常用的保存温度，可以保持细胞膜的完整性和功能较长时间。
5. 避光保存：细胞膜样品应避免阳光直射，因为光照会导致脂质氧化和膜蛋白的降解。
可以将样品放置在避光的容器中，或者用铝箔包裹。
6. 防止冻融循环：为了避免细胞膜的冻融循环对其造成的损伤，保存时尽量避免频繁的冻融操作。
如果需要使用部分样品，可以将样品分装成小份，每次只解冻一小份。
以上方法仅供参考，具体选择哪种方法还需要根据实际情况来决定。
生物冷冻蛋白技术
生物冷冻蛋白技术生物冷冻蛋白技术是一种先进的生物学技术，它可以将蛋白质冷冻保存，并在需要时重新激活。
这项技术对于生物医学研究、药物开发和生物材料的保存等领域具有重要意义。
生物冷冻蛋白技术是利用低温冷冻的原理，将蛋白质保存在极低的温度下，以防止其活性和功能的丧失。
这种技术可以有效地延长蛋白质的保存时间，并在需要时重新激活蛋白质，使其恢复活性。
在生物医学研究领域，蛋白质是研究的重要对象。
通过冷冻蛋白技术，科研人员可以将蛋白质保存在冷冻状态下，以便长期研究。
这对于一些需要长时间进行实验的研究项目非常重要。
同时，冷冻蛋白技术还可以避免蛋白质在保存过程中的降解和变性，确保研究结果的准确性和可靠性。
在药物开发领域，冷冻蛋白技术也发挥着重要作用。
药物研发过程中，往往需要大量的蛋白质进行药物筛选和活性研究。
通过冷冻蛋白技术，科研人员可以将蛋白质保存在冷冻状态下，以便于随时进行药物筛选和活性测试。
这极大地提高了药物研发的效率和成功率。
冷冻蛋白技术还可以用于生物材料的保存。
生物材料是一类具有生物活性的材料，常用于组织工程、再生医学和生物传感器等领域。
这些生物材料往往需要保存一段时间后才能使用，因此需要一种有效的保存方法。
冷冻蛋白技术可以将生物材料冷冻保存，以防止其降解和失活，从而确保其在使用时的完整性和功能。
值得注意的是，冷冻蛋白技术在实施时需要注意一些关键因素。
首先是选择合适的冷冻介质和冷冻条件。
不同的蛋白质对冷冻介质和温度的要求可能有所不同，因此科研人员需要根据具体的蛋白质特性来确定最佳的冷冻条件。
其次是冷冻蛋白质的速度和方法。
较快的冷冻速度可以减少蛋白质的降解和变性，但过快的速度可能会导致结晶和损伤。
因此，科研人员需要在实践中进行不断探索和改进。
生物冷冻蛋白技术是一项具有重要意义的技术，它可以有效地延长蛋白质的保存时间，并在需要时重新激活。
这项技术在生物医学研究、药物开发和生物材料的保存等领域具有广泛的应用前景。
蜂脾巢虫的保存方法
蜂脾巢虫的保存方法引言蜂脾巢虫是一种常见的微生物，它对环境的适应力强，生长繁殖能力高。
因此，研究人员经常将它用于科学实验。
为了确保实验的稳定性和准确性，正确的保存蜂脾巢虫是非常重要的。
本文将介绍一些常用的蜂脾巢虫保存方法。
常见的保存方法冷冻保存法冷冻保存法是最常用的一种保存蜂脾巢虫的方法。
具体步骤如下：1. 选择健康、活跃的蜂脾巢虫作为保存对象。
2. 将蜂脾巢虫置于适当的培养基中，加入一定浓度的甘油。
甘油可以起到一定的保护作用，并降低蜂脾巢虫受冻的危险。
3. 缓慢降温至-80C或更低的温度。
可以使用冰箱或液氮进行冷冻。
在降温过程中要注意避免冷冻过程中的温度震荡，可以使用缓冲介质提供稳定的环境。
4. 使用低温保存箱或液氮罐保存冷冻蜂脾巢虫。
5. 在需要使用时，将冷冻蜂脾巢虫从低温环境中迅速解冻，然后进行培养或实验。
干燥保存法干燥保存法也是一种有效的保存蜂脾巢虫的方法。
具体步骤如下：1. 将蜂脾巢虫培养液通过过滤或离心等方法，去除多余的培养基。
2. 将蜂脾巢虫均匀分散在无菌纸或滤纸上，待其完全干燥。
3. 将干燥的蜂脾巢虫装入无菌试管或瓶中，密封保存。
4. 在需要使用时，将蜂脾巢虫重新悬浮于培养基中，进行培养或实验。
冷冻干燥保存法有些情况下，冷冻保存或干燥保存都无法满足实验需求，这时候可以考虑使用冷冻干燥保存法。
具体步骤如下：1. 将蜂脾巢虫培养液通过过滤或离心等方法，去除多余的培养基。
2. 将蜂脾巢虫均匀分散在无菌纸或滤纸上，待其完全干燥。
3. 将干燥的蜂脾巢虫置于冷冻干燥机中，在低温下进行冷冻干燥处理。
4. 干燥完毕后，将蜂脾巢虫密封保存在无菌试管或瓶中。
5. 在需要使用时，将蜂脾巢虫重新悬浮于培养基中，进行培养或实验。
注意事项在保存蜂脾巢虫时，需要注意以下几个事项：1. 选择健康、活跃的蜂脾巢虫作为保存对象，以保证后续实验的可靠性。
2. 保存环境要保持无菌，以避免外界微生物的污染。
3. 在保存过程中，温度的控制非常重要。
木耳放冷冻最好几天 木耳怎么放冰箱进行冷冻保存
木耳放冷冻最好几天木耳怎么放冰箱进行冷冻保存
木耳是生活中常见的一种食用菌，深受人们的喜爱和欢迎，但是木耳一般比较难被保存，经常被人们放冰箱冷冻，那么木耳放冷冻最好几天？木耳怎么放冰箱进行冷冻保存？
一、木耳放冷冻最好几天
建议冷冻1-2周的时间即可。
木耳在冰箱的冷冻的条件下，可以帮助抑制细菌以及微生物的滋生，从而在一定程度上延长木耳的保质期，但是由于木耳中含有一定的水分，将其放在冰箱冷冻时间过长，那么是很容易导致木耳流失水分以及营养的，所以一般建议把木耳放在冰箱冷冻1-2周的时间即可。
二、木耳怎么放冰箱进行冷冻保存
一般冷冻的木耳都是泡发好的，具体做法如下：
1、首先把泡发好的木耳拿出。
2、然后准备一个保鲜袋。
3、之后将木耳放进去，密封完全。
4、最后将其放在放进冰箱中保存即可。
三、木耳煮熟了可以隔夜食用吗
可以。
煮熟之后的木耳容易与空气中的物质发生反应而导致变质，但只要保存的比较好，木耳没有发生变质，那么就可以食用，因为没有变质的木耳并不会对人体的健康造成威胁，适量食用是没有关系的，不
用太过于担心。
四、木耳怎么吃营养价值高
材料：木耳、排骨、食盐、味精、生姜、调和油。
做法：
1、首先将准备好的排骨放在清水里煮沸，将血水煮出来。
再将排骨捞出来。
2、同时将木耳放在清水浸泡十几分钟左右，再洗净备用。
3、将捞出来的排骨再倒入锅中，重新放入清水，放入盐，生姜，再文火煮二十分钟左右。
4、然后煮好了排骨之后，放入泡好的木耳，再文火煮十分钟左右。
现放入味精。
5、之后将其装碗盛出锅即可。
生物材料的保存方法
生物材料的保存方法
1. 冷藏法。
将生物材料以冷至温度为-80℃进行冷藏，可以延长其保存时间。
2. 冷冻法。
将生物材料以温度低至-196℃进行冷冻，可以有效防止其细胞结构的退化损失。
3. 曝气法。
用低温条件下的干冰干燥，通过干冰曝气和干燥的形式，用低温条件下的干冰凝固使生物材料变得乾燥而保存，能够延长存活时间。
4. 稀释法。
将物质稀释为极低的浓度，有一定的抗菌活性，能够有效地延长生物材料的保存时间。
5. 用化学消毒剂法。
在生物材料中添加一定量的低浓度杀菌剂，能够有效地缓解细菌的污染，从而延长生物材料的保存时间。
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刊名：武汉科技大学学报（自然科学版）
年，卷(期)：2005,28(2)
绵羊卵母细胞
冷冻基础液、卵黄、糖类、sTM、sDs(十二烷基磺酸钠)配制成的冷冻液
成熟卵母细胞(成熟培养22h)移入5％冷冻液平衡5min。再移人10％冷冻液平衡5min，然后每20枚左右卵母细胞迅速装入0．25 mL细管。放人冷冻仪进行冷冻，起始温度20℃，l℃／min的速度降温至一6．3℃植冰．平衡lOMin后，0．3℃／min的速度降温至一33℃，投入液氮保存。
猪皮肤பைடு நூலகம்织块
甲基亚砜、甘油和乙二醇为冷冻保护剂
直径9 cm玻璃培养皿硅化处理后，分区滴加浓度不同的9种冷冻保护液和对照组DMEM液，随机挑取3～6块组织块分别浸入冷冻保护液中，22℃渗透平衡25rain；平衡后将组织块分别加入盛有0．5mL不同浓度保护液的冷冻管(1．8mL)中，采用快速降温方法进行冻存。快速冷冻：组织块加入冷冻管后直接投入液氮中保存。
常规冷冻保存的卵母细胞进行体外受精后卵裂率为26．06％，远远低于正
常体外受精的比例(67．7％)。
绵羊卵母细胞冷冻保存方法的研究
作者：李辉，张居农
刊名：云南畜牧兽医
年，卷(期)：2002(4)
莎能奶山羊皮肤成纤维细胞
细胞悬液：胎牛血清：DMs()=7：2：1的比例配制成细胞冷冻保存悬液
纯化后传代培养的成纤维细胞贴壁生氏达90％左右，倒去培养液，用生理盐水清洗，每个25mI，组织培养瓶加入300μL Trypsin—EDTA(0．25％Trypsin，lmmol／L EDTA、4Na)消化3～5min，在显微镜下观察细胞的收缩情况，DMEM／F12+20％胎牛清+100Iu／mL双抗完全培养液终止消化后，用移液枪将细胞轻轻吹打下来，1000r／min、离心5min．弃上清液后并收集细胞，重悬于DMEM双抗完全培养液，经过两次离心和收集细胞，得到的细胞按细胞悬液：胎牛血清：DMs()=7：2：1的比例配制成细胞冷冻保存悬液，加入到1．8mI冻存管(Corning)中，然后将冻存管分类冻存。先在4C预冷平衡0.5h液氮罐口气念氮悬挂4h，然后沉人液氮。
活细胞率为84．8％，培养48h后细胞贴壁率为85．4%
莎能奶山羊皮肤成纤维细胞几种冷冻保存方法的研究
作者：王亮，刘婷婷，彭涛，帅志强，张达江，朱海，陈军，李卫华，汪汉卿
刊名：西北农业学报
年，卷(期)：2005,14(6)
牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同时期的胚胎
采用以NaCl、KCI、CacCl·2H20、MgCI，·6H2O、
快速冷冻条件下各处理均无组织块生长
猪皮肤组织块冷冻保存方法的研究
作者：程旭梅，倪黎纲，吴晓伟，孙鹏翔，葛剑辉，戴建明，李碧春，
刊名：扬州大学学报（农业与生命科学版）
年，卷(期)：2008,29(3)
不同时期牙鲆胚胎在玻璃化液中的存活率随着胚胎发育期不同，尾芽期以前逐步升高，心跳期以后逐步降低，尾芽期与心跳期存活率最高，心跳期略高于尾芽期，但差异不显著
不同抗冻剂对牙鲆胚胎毒性研究以及玻璃化颗粒冷冻保存方法的应用
作者：刘本伟，陈松林，田永胜，孔晓瑜，王春花
刊名：中国水产科学
年，卷(期)：2007,14(5)
材料的个体特性
使用的冷冻液体（配方等）
冷冻的程序
效果
来源文献
洪山公鸡精液
PSE(Beitsville Poultry
Semen Extender，BPSE) J，谷氨酸钠0．867 g，果糖0．500 g，磷酸氢二钾1．270g，TES
0．195g，柠檬酸钠0．064 g，醋酸钠0．430g溶于100mL双蒸水，高压灭菌后，4℃冰箱保存待用。
细管型冷冻精液解冻后的存活率显著高于颗粒型冷冻精液(P<0．01)。细管型冷冻精液解冻后的顶体完整率为0．613±0．049，颗粒型冷冻精液解冻后的顶体完整率为0．4760．057(n=20)，两者差异显著(P<0．05)。颗粒型冷冻精液的受精率显著高于细管型(p<0．01)。
洪山公鸡精液冷冻保存方法及效果的研究
颗粒型精液的冷冻方法从不同个体采集到的新鲜精液混合后用BPSE加甘油(Sigma公司产品)(甘油占最终体积的11％，v／V)以1：2稀释后置5℃冰箱平衡1h。之后，用吸管直接将精液滴入液氮当中，每一滴大约为0．1mL。
细管型精液的冷冻方法用与冷冻颗粒型精液相同的程序将精液作1-2稀释(甘油浓度同上)，然后将一端用铁珠封口的细管(0.5mL)倒置插入盛经稀释后精液的烧杯，置5℃冰箱lh后取出，并将细管平铺在铜筛(直径20cm)上，吊人液氮罐。通过调节铜筛底距液氮面的距离，并用低温温度计的探头(MCT-11一T)监测温度下降的速度，将温度下降的速度控制在3～5。C／min之间，温度降到-35％时将细管浸入液氮。
NaHC03配制而成的基础液。与渗透性抗冻剂l，2一丙二醇(PG)、甲醇(MeOH)、甘油(Gly)、乙二醇(EG)、二_甲基甲酰胺(DMF)、二甲基业砜(DMSO)、酒精(EtOH)，非渗透性抗冻剂聚乙烯毗咯N(PVP)、蔗糖(Suct-ose)、葡萄稀(Glucose)、葡聚糖(Dex)、D果糖(D—fructose)配成不同浓度的抗冻液(液体试剂v／v，固体试剂m／V)
按1．5筛选到的PM与DMsO混合比例(体积比3：1)配置总体积分数为35％的混合抗冻液，添加5％的非渗透性抗冻剂蔗糖配成玻璃化液。室温条件下平衡牙鲆尾芽期至心跳期胚胎：分步平衡足先在1／4浓度的玻璃化液中平衡90 min，再于1／2浓度的玻璃化液Il-平衡10min，最后放入玻璃化液中立即开始冷冻，10min后停止冷冻，冷冻胚胎中包括最后一步平衡时间为lmin至20min的胚胎；一步平衡时，将胚胎直接加入玻璃化液平衡5 min，然后开始冷冻，直至胚胎在玻璃化液平衡20min时停止冷冻。