胡萝卜素含量的测定(精)
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高效液相色谱 法测定 β— 胡萝卜素含量
实验指导
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器材料 四、实验操作步骤 五、实验结果 六、实验思考题
1、实验目的
1、理解高效液相色谱法的目的和意义； 2、理解和掌握高效液相色谱法的原理和方法； 3、掌握高效液相色谱仪的操作。
2、实验原理
高效液相色谱仪的组成与工作主要流程如下图所示：
思考题：
•
• • • •
1、高效液相色谱仪的组成与工作主要 流程？ 2、高效液相色谱的特点？ 3、进行高效液相色谱仪检测β-胡萝卜素 时要对待测样品进行哪些预处理？ 4、色谱图中β-胡萝卜素吸收峰峰高、峰 面积与样品中β-胡萝卜素浓度和纯度有 何关系？
色谱条件
• • • • • • 色谱柱：C18柱； 流动相：甲醇； 流速：1.5ml/min； 紫外检测波长：440nm； 进样量：20微升。 样品进样前需要用0.45微米的滤膜过滤， 装入进样瓶中。
5、实验结果和计算
• HPLC外标法定量 • • • • • • •
m1 A2 V 2 10 m m 2 A1 V 1
（1）标准溶液的配制：精确称取100mg的含量为30%的β-胡
萝卜素标准品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量 瓶中。进样时取1ml，稀释定容到100ml。
（2）样品的制备：取样品，捣碎成浆状，称取10g，加甲醇、
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正己烷各10ml研磨。过滤后，滤液以及用乙酸乙酯洗 涤渣的滤液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕 色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。
式中 m：10g(mL)样品中β-胡萝卜素含量（mg）； m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（mg）； m2：样品称样质量（g或mL）； A1：标样峰面积值； A2：样品峰面积； V1：样品进样质量（μL）； V2：样品定容体积（mL）。
实验注意事项 • 1、样品的预处理； • 2、流动相的过滤脱气处理； • 3、色谱条件的选择。
β-胡萝卜素含量测定原理
β-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在于各
种动植物体内，可以直接用有机溶剂提取后进行 检测，然后利用反相色谱法分析。
3、. 实验仪器和材料
仪器：
高效液相色谱仪 紫外检测器等。 试剂材料：β-胡萝卜素； 乙酸乙酯； 正己烷； 色谱甲醇； 新鲜胡萝卜。
4、实验操作步骤：
实验指导
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器材料 四、实验操作步骤 五、实验结果 六、实验思考题
1、实验目的
1、理解高效液相色谱法的目的和意义； 2、理解和掌握高效液相色谱法的原理和方法； 3、掌握高效液相色谱仪的操作。
2、实验原理
高效液相色谱仪的组成与工作主要流程如下图所示：
思考题：
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1、高效液相色谱仪的组成与工作主要 流程？ 2、高效液相色谱的特点？ 3、进行高效液相色谱仪检测β-胡萝卜素 时要对待测样品进行哪些预处理？ 4、色谱图中β-胡萝卜素吸收峰峰高、峰 面积与样品中β-胡萝卜素浓度和纯度有 何关系？
色谱条件
• • • • • • 色谱柱：C18柱； 流动相：甲醇； 流速：1.5ml/min； 紫外检测波长：440nm； 进样量：20微升。 样品进样前需要用0.45微米的滤膜过滤， 装入进样瓶中。
5、实验结果和计算
• HPLC外标法定量 • • • • • • •
m1 A2 V 2 10 m m 2 A1 V 1
（1）标准溶液的配制：精确称取100mg的含量为30%的β-胡
萝卜素标准品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量 瓶中。进样时取1ml，稀释定容到100ml。
（2）样品的制备：取样品，捣碎成浆状，称取10g，加甲醇、
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正己烷各10ml研磨。过滤后，滤液以及用乙酸乙酯洗 涤渣的滤液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕 色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。
式中 m：10g(mL)样品中β-胡萝卜素含量（mg）； m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（mg）； m2：样品称样质量（g或mL）； A1：标样峰面积值； A2：样品峰面积； V1：样品进样质量（μL）； V2：样品定容体积（mL）。
实验注意事项 • 1、样品的预处理； • 2、流动相的过滤脱气处理； • 3、色谱条件的选择。
β-胡萝卜素含量测定原理
β-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在于各
种动植物体内，可以直接用有机溶剂提取后进行 检测，然后利用反相色谱法分析。
3、. 实验仪器和材料
仪器：
高效液相色谱仪 紫外检测器等。 试剂材料：β-胡萝卜素； 乙酸乙酯； 正己烷； 色谱甲醇； 新鲜胡萝卜。
4、实验操作步骤：