1-5 植物组织培养中常见问题及解决办法
植物组织培养的三大难题及解决方法
植物组织培养的三大难题及解决方法摘要：植物组织培养是以细胞全能性为理论基础建立的一种离体培养技术，阐述了植物组织培养快繁中褐变、玻璃化、污染和移栽成活率低等问题出现的原因，提出预防和控制措施。
关键词：植物组织培养；污染；玻璃化；褐化中图分类号：q813.1+2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-11-0142-2植物组织培养是利用植物体的一部分进行无性繁殖，而产生大量同源母本基因幼苗的生物技术。
植物的组织培养到如今以和农业、园艺、林业、医药等多个方面有了密不可分的关系，为其提供了理论基础和研究方法。
利用自然条件在获得珍稀植物和经济价值较高的植物时，由于受地域及季节的限制，很难达到高效、快速的目的。
通过组织培养这一技术手段则能满足这一要求。
组织培养在挽救珍稀植物、创造新物种等方面做出了重要的贡献[1]。
但是在植物的组培技术上面临的三个难题却经常困扰大家。
它们分别是污染，植物玻璃化和植物褐化。
1 污染污染是在组培过程中所面临的首要难题，该问题经常遇到并且难以解决。
不能把污染率降低到可行的范围内植物组培就很难进行下去，这是该问题所要面对的第一个难题。
在进行植物的组织培养时，通常存在两种污染方式：一种是外植体消毒不彻底以及无菌操作过程中引起的污染；另一种是引起内源菌污染的主要原因的真菌和细菌[2]。
大多数的研究结果表明引起污染的主要原因为外植体的生长状况、环境条件和操作过程[3]。
外植体污染是最难解决的污染之一。
污染来源主要为外植体处理不当或培养基的灭菌不彻底，或对接种工具的消毒不够，或操作人员的操作不慎，或环境不洁等所致。
选取外植体的原则是污染少易启动[4-5]。
选择有最大分化潜能的外植体是确保组织培养成功的关键[6]。
常规试验一般选用0.1%hgcl2溶液浸泡，再用无菌水对外植体进行反复冲洗，灭菌效果最好且污染率低。
胡重怡等在烟草无菌苗培养前种子消毒技术的研究中使用先用70%c2h5oh溶液进行消毒，再用30%h2o2的浸泡，再用无菌水反复冲洗外植体，所得烟草种子污染率底[7]，h2o2分解后生成有杀菌作用的氧气而成为无毒害的化合物[8-9]对外植体的损害小。
植物组织培养中常见问题及对策
细胞分裂素用量不够、温度偏高、光照不足
增加细胞分裂素用量，适当降低温度
苗分化过多，生长慢，部分苗畸形，节间极度缩短，苗密集丛生微型化
细胞分裂素用量过多，温度不适宜
减少细胞激动素用量或停用一段时间，调整培养温度
分化出苗较少，苗畸形，培养较久可能再次出现愈伤化
生长素用量偏Leabharlann ，温度偏高减少激素用量，延长光照。及时转接、减少接种量，改用透气性强的瓶膜
常有黄叶、死苗夹于从生苗中。部分苗逐渐衰弱，生长停止，草本植物有时水渍状、烫伤状
瓶内气体状况恶化，pH值变化过大；久不转瓶糖已耗尽，光合作用不足以满足生长；瓶内乙烯含量升高；培养物已经污染；温度不合适。
不分措施同上。去除污染，控制温度。
幼苗生长无力，陆续黄叶落叶。组织水渍状、煮熟状
部分原因同上，激素搭配不合适，无机盐浓度不合适
部分措施同上。及时转接。适当调整激素比例。
幼苗莲座化，节间极度缩短不伸长
自身合成的赤霉素不够，或细胞激动素用量过多
添加赤霉素、减少细胞激动素用量
苗淡绿色、部分失绿
铁盐不足，pH值不合适，铁、锰、镁元素配比失调，光照过强，温度不适合
减少生长素用量，适当降温
叶粗厚变脆
生长素用量偏高，兼有细胞分裂素用量偏高
减少激素用量，避免叶片接触培养基
再生苗的叶缘、叶面等处偶有不定苗产生
有细胞分裂素用量偏高、或该种植物适于这种再生方法
减少激素用量，或分阶段利用这一再生方法
从生苗过于细弱，不适于生根操作和将来的移栽
温度过高、光照时间短，光强不够、久不转接。生长空间小
激素用量过高、温度过高、培养基渗透势过低
减少激素用量、降低培养温度
植物组织培养中存在的问题及其预防措施
植物组织培养中存在的问题及其预防措施作者：王昱淇来源：《南方农业·下旬》2014年第04期摘要针对存在于植物组织培养过程当中的污染问题作具体分析，包括对于引起污染原因的科学认识和研究污染的意义所在，并提出了预防污染的有效措施，包括对于外植体自身灭菌和控制人为因素两方面，以期为工厂化生产提供一定的科学参考。
关键词植物组织培养；污染；预防措施中图分类号：Q943.1 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2014）12-0134-09自20世纪初，德国植物生理学家哈布兰特提出一个观点即高等植物可以由植物器官和组织不断分割，最后可以分到单个细胞水平，并加以设想，离体的组织器官可以通过植株再生性，从而在实验的条件下形成完整植株的能力，这就是哈布兰特提出的植物细胞全能性理论。
20世纪初，植物组织培养同样兴起，并经历了3个阶段，分别为，探索阶段，奠基阶段，迅速发展阶段。
植物组织培养技术已经得到了长远的发展，应用于工厂化的植物组织培养育苗技术就是一个很好的例证，且在农业、林业、医药等领域植物组织培养技术同样产生了巨大的经济效益和社会效益。
鉴于植物组织培养技术在我国日趋完善，且工厂化育苗生产也随着经济发展而在我国呈现出强势的发展势头，在市场竞争下，由于如何降低生产成本是增长经济效应的关键所在，因此，对于植物组织培养当中产生的污染问题导致经济效益的下降应当引起我们的高度重视。
因此，在植物组织培养过程当中，采取富有成效的预防措施，降低外植体被污染的概率，是工厂化组织培养成功与否的关键。
由此，从分析污染原因出发，并提出了在组培过程当中存在的污染原因及其特性，并以此为据，提出了在组培过程当中如何有效预防污染的措施，以期能为工厂化育苗生产提供理论参考和技术支持。
1 植物组织培养的定义植物的组织培养是近年来发展起来的一项新的科学技术，属于无性繁殖，且是根据细胞具有全能性这个理论来施行的。
广义的植物组织培养被定义为离体培养，这是指在无菌操作条件下，通过从植株中分离出适当的器官组织或者原生质体等，进行人工的控制和选育培养，以期获得再生植株或者具有经济效益的其他产品。
培育技术在植物组织培养中的常见问题解析
培育技术在植物组织培养中的常见问题解析植物组织培养是现代植物学中常用的实验技术，它通过将植物的组织或细胞分离培养于含有适宜营养物质的培养基中，以实现植物再生、基因转化等目的。
然而，由于培育技术的复杂性和植物本身的复杂性，常常会遇到一些困扰和挑战。
本文将针对植物组织培养中的常见问题进行解析，并提供一些解决之道。
问题一：组织污染在植物组织培养过程中，一个常见的问题就是组织污染，即外来细菌、真菌或其他微生物侵入培养基和植物组织中。
这会导致培养失败或产生不良的变异。
解决之道：1. 严格消毒：在进行培养操作前，必须进行彻底的操作台、器皿和培养基的消毒。
用70%酒精或其他消毒液擦拭操作台面和器皿表面，确保无菌状态。
2. 地方新鲜：在培养室内保持良好的通风和空气流动，通过定期更换和清洁培养室内的过滤网和空气过滤器，减少外界细菌的侵入。
3. 给予适宜的抗生素：在培养基中添加适量的抗生素，可以抑制细菌和真菌的生长，从而减少污染的可能性。
但需要注意的是，选择抗生素要根据具体培养物种和品种而定。
问题二：离体生根率低离体生根是植物组织培养中最重要的步骤之一。
然而，许多时候我们会发现离体生根率非常低或根系发育不良。
解决之道：1. 适宜的培养基组成：适量的植物生长调节剂（如生长素和细胞分裂素）对于促进离体生根至关重要。
通过调整培养基中激素的浓度，可以提高植物的生根能力。
2. 植物生长调节剂浓度梯度法：通过在不同的培养基上设置不同浓度的植物生长调节剂，例如生长素的浓度逐渐降低，可以促进植物从愈伤组织到根系转变的过程。
3. 建立泰勒诺夫瓜气孔消融法：在切割愈伤组织后，将其暴露在高湿度下，有助于减少水分蒸发和气孔开放，提高植物在离体生根过程中的存活率。
问题三：组织块增殖困难在一些植物的组织培养中，我们会遇到组织块增殖困难的问题，即组织块不再增殖或增殖速度非常慢。
解决之道：1. 选择适宜的培养基类型：不同植物的组织有不同的培养基类型要求。
植物组织培养常见问题及对策
植物组织培养常见问题及对策摘要：本文从植物组织培养中常见的问题污染、玻璃化、褐化、生根难、炼苗难等问题进行阐述，并提出相应的解决办法，为以后的组培奠定基础。
关键词：组织培养；问题；对策Plant tissue culture common problems and countermeasures Abstract: this article from the plant tissue culture of common problem pollution vitrification Browning tried hard to take root seedlings paper describes problems, and puts forward the corresponding solutions for the future of tissue, lay the foundation Keywords: tissue culture。
Problem。
countermeasures引言植物组织培养技术，作为现代生物技术的一个重要手段，已在工厂化育苗、种苗脱毒复壮、遗传育种、种质资源的保存与交换等领域得到了广泛应用。
在近几年开展植物组培快繁技术研究和生产过程中，发现有几个问题较常见，有时会严重影响工作效率和进展，降低组培快繁的经济效益。
现将这些问题及解决对策总结如下。
1污染组织培养是在无菌条件下进行的，在培养过程中若有微生物污染，组培将无法进行。
对于工厂化育苗来说，污染往往是影响生产任务按时完成的主要原因。
1．1产生污染的因素1．1．1外植体通常多年生的木本材料比1—2年生的草本材料带菌多；老的材料比嫩的带菌多；田间生长的材料比温室的带菌多；带泥土的材料比清洁的带菌多。
18中以雨季的材料带菌多，1 d中以中午阳光最强时的材料带菌少。
1．1．2培养基高压蒸汽灭菌的温度、压力、时间和正确使用情况，以及过滤灭菌中过滤膜孔径、过滤灭菌器械的灭菌处理、过滤灭菌操作等均影响培养基的灭菌效果。
植物组织培养中常见问题及解决办法
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二、传播途径
（1）户外风传播 菌类细小如尘 随风飘散，由上下落，见湿就长，有风就有 沙，有沙就有尘，有尘就有菌，菌尘混共存 （2）涡流传播 超净工作台上，摆放物品太多，当无菌风吹过时，就会在 物品周围形成涡流群，菌类就会在涡流群中停留。 （3 ）接种传播 脏手每只带有细菌4万~40万，干净的手，指甲盖大小也有 3200多个细菌。指甲缝可以窝藏30多种细菌。如果手上带菌 较多，在操作过程中，就难免有菌落入培养基或植物材料上， 而导致污染。
问题及解决办法
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第一节 组培污染及防治
一、污染来源
１、真菌：种类丰富，分布 广泛，繁殖快速，无处没有， 无处不在。 2、细菌 细菌是无孔不入的微生物， 为避免细菌的侵袭，科学家 曾尝试用抗微生物材料生产 各种用品，但效果不十分理 想，因为这些材料虽然能杀 死细菌，却充满了化学物质。
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四、污染原因判断及污染苗抢救
（1）若污染菌类是零星分散在培养基中，则可确定是人为引 起的污染。若是外植体，菌类从材料培养基以上部分长起，且发 生在5天以后，则说明是材料带的内生菌。若从培养基以下开始长 菌，发生时间较早，且有从里向外的趋势，则说明是切口引起的 污染。 （2）真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔 掉。但若是细菌污染，因此只要及时发现，将材料上部未感菌的 部分剪下转接，材料仍可以用。 （3）用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。
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门市店长 训练 Flash 网络动画 培 训 绩效 产业现况 分析 大学生 社一、褐化现象 外植体褐变是指在接种后，其表面开始变褐，有 时甚至会使整个培养基变褐的现象。它的出现是由于 植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞的代谢发 变化所致。在褐 变过程中，会产 生醌类物质，它 们多呈棕褐色， 当扩散到培养基 后，就会抑制其 他酶的活性，从 而影响所接种外 门市店长 训练 Flash 网络动画 培 7 训 绩效 产业现况 分析 大学生 社 植体的培养。
植物组织培养的常见问题
植物组织培养的常见问题
植物组织培养是一种技术，可以用来培养植物细胞、组织和器官，以及植物的发育过程。
它可以用来研究植物的生长发育、遗传转化、病毒感染和抗药性等方面。
植物组织培养也可以用来培养植物细胞，以便进行药物研究和生物技术研究。
然而，植物组织培养也存在一些常见问题。
首先，植物细胞的培养和维持需要特定的条件，如温度、湿度、光照和营养物质的比例。
如果这些条件不能得到恰当的控制，植物细胞就不能正常生长。
其次，植物细胞的培养和维持需要特定的培养基，如果培养基中的营养物质比例不正确，植物细胞也不能正常生长。
此外，植物细胞的培养过程中也可能受到病毒的感染，这会导致植物细胞的死亡。
此外，植物细胞的培养过程中也可能受到抗生素的抑制，这会导致植物细胞的死亡。
最后，植物细胞的培养过程中也可能受到抗药性的影响，这会导致植物细胞的死亡。
总之，植物组织培养存在一些常见问题，如温度、湿度、光照和营养物质比例不正确，病毒感染，抗生素抑制和抗药性等。
因此，在进行植物组织培养时，应该注意控制这些因素，以确保植物细胞的正常生长。
植物组织培养 第4章 植物组织培养中常见问题及解决办法
3、发生方式 ：以茎尖、茎段等发生不定芽的方式繁 殖不易发生变异或变异率极低。甘肃农业大学通过节 培法繁殖名贵葡萄品种，经5年—8年继代培养，其变 异频率与常规方法相同，在数成株中仅发现一株变异 此外用菊花茎尖、腋芽培养，变异较低，而从花瓣诱 导的变异较高。由花椰菜根诱导的不定芽和再生植株 中有不少变异，而从顶端分生组织（花菜）产生的 4000个再生植株基本没有变异。通过愈伤组织和悬浮 培养分化不定芽的方式获得再生植株变异率较高。通 过分化胚状途径再生植株变异较少，通过茎尖或分生 组织培养增殖侧芽可以保持基因型基本不变。在高浓 度的激素作用下，细胞分裂和生长加快，不正常分裂 频率增高，再生植株变异也增多。
玻璃化
具体解决的方法为：
1、培养基成分：增加培养基中的溶质水平，
以降低培养基的水势；减少培养基中含氮化合 物的用量； 2、培养条件：增加光照；增加容器通风，最 好进行CO2施肥，这对减轻试管苗玻璃化的现 象有明显的作用；降低培养温度，进行变温培 养，有助于减轻试管苗玻璃化的现象发生 3、生长调节剂：降低培养基中细胞分裂素 含量，可以考虑加入适量脱落酸。 -
在正常发育的植物组织中,底物、氧气、多酚
氧化酶(PPO)同时存在并不发生褐变，是因为在正
常的组织细胞内由于多酚类物质分布在细胞的液泡
内，而PPO则分布在各种质体或细胞质中，这种区
域性分布使底物与PPO不能接触。而当细胞膜的结 构发生变化和破坏时，则为酶创造了与PPO接触的 条件，在氧存在的情况下使酚类物质氧化成醌，进 行一系列的脱水、聚合反应，最后形成黑褐色物质， 从而引起褐变。
消毒：花雷或幼穗的表面消毒用70%酒精
－－－次氯酸钠10－20分钟或0.1%升汞7 －10分钟。操作熟练仅用70%酒精表面消 毒后即取花药接种
浅谈林木植物组织培养技术中存在的问题及对策
浅谈林木植物组织培养技术中存在的问题及对策林木植物组织培养技术是一项重要的科研工作，它为林木品种的改良、疾病抗性培育、研究基因工程等领域提供了重要手段。
在实践中，我们也必须正视存在的问题，并积极寻找对策进行解决，以提高组织培养的效率和质量。
一、存在的问题1. 低成活率在实际操作过程中，经常会出现植物组织培养失败或成活率低的情况。
这主要是因为生长条件的不合适、外界环境的影响、培养基质的选择等因素的影响。
2. 疾病和污染在植物组织培养的过程中，病毒、细菌、真菌等微生物的侵袭是常见的问题，导致植株死亡或生长异常。
外源污染也会对培养的植株造成影响。
3. 难以获得优质种苗目前，林木植物组织培养技术在种苗培育上存在着一些问题，难以获得高质量的种苗、难以实现批量生产等。
二、对策建议1. 优化生长条件为了提高植物组织培养的成活率，我们应该在培养的过程中，对生长条件进行优化。
控制培养基质的水分、温度、光照、空气流通等，使植物可以在最佳的环境下进行生长。
2. 强化无菌技术在植物组织培养的过程中，我们应该加强无菌操作技术，以避免外源污染对植物的影响。
对于已经受到影响的植株，应该及时进行消毒处理，以避免疾病的传播。
3. 创新培养基质针对不同种类的林木，我们应该开发和应用更加适合的培养基质，以提高种苗的生长速度和质量。
可以尝试添加植物生长调节剂、微量元素等物质，以促进植物的生长和发育。
4. 多途径育苗在植物组织培养技术中，除了传统的培养法之外，还可以利用愈伤组织培养、芽生苗培养等多种途径来进行育苗，以提高育苗的成功率。
5. 建立评估标准为了判断不同培养方法的有效性，我们需要建立起一套科学的评估标准和指标，对种苗的生长速度、生长势、抗逆能力等进行量化评估，以此来指导我们的培养实践。
林木植物组织培养技术在实际应用中存在一些问题，但随着科技的不断进步和实践的不断积累，我们有信心克服这些问题，提高培养技术的效率和质量，为林木植物的良种繁育提供更好的支撑。
植物组培实验中存在的问题及改进方法
植物组培实验中存在的问题及改进方法
植物组培实验是在研发技术过程中不可或缺的一环。
在合理的条件下，它可以
以最佳时间和最低成本同时获得超高效率，使科学家能够研究新品种，改良已有品种，并获得植物及其特性的详尽信息。
然而，植物组培实验仍有很多问题需要调整和改进，例如：
首先，植物组培实验的准确性破坏性往往被低估。
由于它不仅要有精确的位置
信息，而且还要满足足够的营养、湿度、气候和光照条件，因此影响它准确性的因素很多。
其次，植物组培实验的成本高于自然培养，使得其应用范围受到限制，从而阻碍了植物研究和培育的发展。
最后，繁茂杂草会在组培实验中大量滋生，使得识别植物标本和拔出来变得非常困难。
为了有效控制植物组培实验中的上述问题，许多科学家提出了不同的改进方法。
其中，最突出的是采用最高标准的培养方法，确保植物在实验中的纯净乾净，以避免实验过程中的干扰和不必要的损失；其次，可以采用机器辅助技术，以确保每一项植物组培实验都可以在最佳条件下进行；此外，为了防止杂草滋生，可以使用生物防治和药物防治手段，保证植株的健康发育。
当前，随着技术的不断发展，许多解决植物组培实验困难的产品和服务越来越多，从而实现有效的植物组培，有利于培育新品种并开发更好的品种。
只有通过努力研究和实践，才能保证植物组培实验结果的准确性和有效性，为植物研究开发奠定基础。
植物组织培养中常见问题与对策
植物组织培养中常见问题与对策作者：祁建国来源：《现代园艺》2012年第16期摘要：从植物组织培养中常见的污染、褐化、玻璃化现象等问题入手，分析了其形成的原因，并结合自身工作经验提出针对性的解决策略，对植物的组织快繁和工厂化育苗具有一定的参考意义和借鉴价值。
关键词：组织培养；污染；褐化；黄化1 污染问题及对策1.1 污染原因分析控制污染是组培过程中的首要技术。
造成污染的原因很多，如外植体的种类、取材的季节、时间、预处理方法、消毒药剂的种类、浓度、消毒时间以及消毒方法、培养基和器皿灭菌、操作人员、工作环境的要求、超净工作台的工作质量等都与污染密切相关。
一般来说，组培污染源分为3大类：材料带菌、接种污染、培养过程感染。
1.2 对策选择合理的外植体种类、取材的季节、时间、初代接种选取大小适宜的外植体。
在组培中应选取带菌较少或不带菌体的材料作为外植体。
对母株预处理，改善植株栽培环境，对母株喷布杀菌剂或抗生素。
改变灭菌方法，使用真空减压灭菌、多次消毒灭菌、混合消毒液、灼烧等。
在培养基中加入其它抑菌剂。
切分潜在的带菌材料时，要保证所用的接种工具已经过彻底的消毒；继代培养时确保污染的材料应给予丢弃。
针对接种污染，要做到紫外灯接种室消毒，清洗超净工作台；接种工具、材料不要与酒精灯、超净工作台铁网面、台面接触；接种人员接种时用酒精棉擦手或用浓度为75 %的酒精喷洒双手，接种时应穿上无菌的白大衣，戴上帽子和口罩；无菌室要注重平时除湿和熏蒸消毒工作。
培养过程中要定期对培养室进行消毒处理，及时清除污染材料，污染的材料及仪器必须经过药液消毒后方可使用。
2 褐化问题及控制措施2.1 褐化概念及原因分析褐化是指在植物组织培养过程中，外植体在诱导脱分化或再分化时，自身组织由其表面向培养基释放褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。
褐化一般分为2种：由于细胞受胁迫或其它不利条件影响所造成的细胞死亡而形成的褐化现象；由于酚类物质被多酚氧化酶氧化所引起的褐化。
植物组织培养中的常见问题及对策
20221020世纪30年代以来，随着现代科学技术的快速发展，植物组织培养技术得到了广泛的发展和应用。
目前，利用植物组织培养技术能使离开本体的植物体重新分化芽苗，得到新的小植株，具有快速繁殖能力的植物品种已经多达千种以上。
但是，无论初代还是继代的植物培养都存在易受污染物影响、易黄化和褐化导致枯死的现象，植物组织培养中还存在着不确定的变异率。
这些问题严重影响外植体的进一步脱离分化和再分化，成为植物组织培养的拦路虎，绝对不可小觑。
通过分析以上植物组织培养中的问题，研究其解决对策并加以执行，对提升植物组织培养成功率具有积极作用，也是当下值得深入探索的重要问题。
1植物组织培养过程中的污染问题及对策1.1植物组织培养过程中污染问题的危害及其成因污染问题一直是植物组织培养过程中的重大问题。
植物组织培养过程中有适宜快速繁殖的条件，微生物也能在其中快速繁殖，给试验材料产生不同程度的霉变、浑浊、云雾状、粘液状、泡沫状等形状、颜色和大小不同的污染痕迹。
污染问题带来的直接影响是阻碍植物组织培养材料的良好保存和新产品植株的培育。
同时，污染问题背后造成大量间接影响，带来大量的培养材料和前期工作时间的浪费，影响植物组织培养进度，被迫提高科研成本，阻碍科研和生存项目的发展。
植物组织培养过程中的污染原因大致包括：植物本身的种类和大小、预处理方法、灭菌消毒方式、人员操作和环境因素四大类。
1.2植物组织培养过程中污染问题的对策1.2.1选择外植体的种类和大小不同，污染风险等级也不尽相同。
在自然环境中难以避免植物本身携带各种真菌、细菌和相关的病虫害。
在适宜生长的野生状态下，细菌和病虫害都会影响植物的正常生长，在植物组织培养过程中，其威力更大。
植物组织培养过程中，应选取细菌较少或不带细菌的材料作为外植体。
避免选择长期生长在存在大量微生物环境中有块茎、鳞茎等器官的外植体。
外植体材料表面积越大，各类菌体含量越高，污染几率直线上升。
因此，应选择外植体材料表面积较小的植株，降低菌体污染的可能性。
植物组织培养中常见的问题及防治措施
植物组织培养中常见的问题及防治措施1微生物污染问题1.1造成污染的原因（1）外植体材料本身带菌；（2）接种过程中接种工具灭菌不彻底或者交叉污染；（3）培养基灭菌不彻底。
1.2防治措施（1）外植体灭菌要彻底。
首先可以选择组织内部无菌材料；其次根据不同的材料选择不同的消毒剂和消毒时间；第三外植体消毒要细心，比如茎段消毒，经过消毒处理后，要把两端切去约0.5cm，这样就可以大大减少污染的概率。
（2）严格遵守无菌操作规程。
操作人员在进入接种室前一定要洗手，然后换上接种服，带上口罩，操作之前先用75%的酒精擦拭双手，接种工具要经常灼烧一保证不会带菌或者交叉污染。
（3）加抗生素。
在培养基中适当的加入抗生素可以有效防止污染。
（4）无菌培养环境。
培养室内要定期进行灭菌，可在室内装紫外灯，或者用高锰酸钾和甲醛熏蒸，或者利用其它的熏蒸剂进行灭菌。
（5）控制外植体的接种数量。
每个培养瓶中尽量接种少量的外植体。
（6）及时继代培养。
定期检查组培苗的生长情况，发现有污染苗头的组培苗及时转接到新鲜培养基上。
2褐变问题2.1影响褐变的因素（1）外植体材料的基因型；（2）外植体的生理状态；（3）培养基成分。
2.2防治措施（1）选择适当的外植体。
选择处于旺盛生长状态的外植体，对于容易褐变的植物注意对其不同品系的基因型进行筛选，选择褐变率较低的材料作为外植体。
（2）在培养基中加入还原性物质或者吸附剂。
在培养基中加入偏二亚硫酸钠、抗坏血酸、柠檬酸等抗氧化剂；或者加入0.1-1%的活性炭吸附培养物在生长过程中分泌的酚类、醌类物质，但是要注意活性炭也可以吸收培养基中的激素使之浓度降低。
（3）对培养材料进行预处理。
用抗氧化剂溶液进行预处理或者在接种前用无菌水洗净切口渗出的酚类物质。
（4）适当的培养条件。
在培养初期保持较低温度（15-20℃），可以降低PPO活性，防止酚类物质氧化，减轻褐变。
（5）其他措施，培养初期进行连续转接。
3玻璃化问题3.1影响玻璃化的因素（1）外植体材料；（2）培养的环境条件；（3）培养基成分，琼脂的浓度、碳源的种类及含量等；（5）封口材料。
植物组培技术存在的问题及解决方法
植物组培技术的那些事儿哎呀，说起植物组培技术，这可真是个让人又爱又恨的活儿。
爱它，是因为它能让我们快速繁殖出一大堆一模一样的植物宝宝；恨它，是因为这过程中总有些小问题让人头疼。
今儿个，咱们就聊聊这些小问题，还有怎么解决它们。
问题一：污染问题首先得说说污染问题。
组培室里头，细菌、真菌这些小坏蛋可是无处不在，一不小心就能让你的植物宝宝生病。
这就好比你在家做饭，厨房里头要是不干净，做出来的菜能好吃吗？解决方法嘛，其实也简单。
首先，得保持组培室的清洁，定期消毒。
就像你做饭前得洗菜一样，组培室也得“洗洗”。
其次，操作的时候要戴手套、口罩，尽量减少污染源。
这就跟做饭时得洗手一样，防止把细菌带进食物里。
问题二：生长速度慢有时候，植物宝宝在组培室里长得特别慢，让人等得花儿都谢了。
这可能是因为营养液配比不合适，或者是光照、温度没控制好。
解决这个问题，就得像照顾孩子一样细心。
首先，得调整营养液的配方，确保植物宝宝能吸收到足够的营养。
这就像给孩子做营养餐，得保证营养均衡。
其次，得控制好光照和温度，让植物宝宝能在最适宜的环境下生长。
这就跟给孩子穿合适的衣服一样，太冷太热都不行。
问题三：变异问题有时候，植物宝宝在组培过程中会出现变异，长得跟原来的不一样。
这可能是因为基因不稳定，或者是受到外界环境的影响。
解决这个问题，就得像侦探一样，找出变异的原因。
如果是基因问题，就得从源头上控制，比如选择更稳定的基因型。
如果是环境问题，就得调整组培条件，比如光照、温度、湿度等。
这就跟给孩子创造一个良好的成长环境一样，得方方面面都考虑到。
结语总之，植物组培技术虽然有些小问题，但只要我们细心、耐心，总能找到解决的办法。
就像照顾孩子一样，虽然有时候会遇到困难，但只要我们用心去做，总能看到他们茁壮成长。
希望这些小建议能帮到你，让你的植物宝宝们都能健康成长！。
植物组织培养常见技术性问题
植物组织培养常见技术性问题、解决方案及应用实例植物组织培养常见技术性问题、解决方案及应用实例1.组培植物组织培养指在无菌条件下利用人工培养基对植物组织进行培养。
近年来这项技术的应用范围十分广泛，尤其在作物育种、马铃薯、甘薯、果树及花卉的脱毒和快繁等方面更具其他技术手段所无法比拟的优势。
虽然组织培养的操作并不难，但对一些技术环节的要求却十分严格，稍有疏忽变会延误实验进程甚至导致整个试验的失败，因而分析和探讨组培工作中应该注意的提是非常必要的。
2.在培养基配置中可能出现的问题有：2.1配置大量元素母液时残留不容物钙离子与硫酸根离子和磷酸氢根离子易反应生成硫酸钙、磷酸氢钙等不溶性化合物沉淀。
所以各种化合物必须充分溶解后才能混合，混合时注意先后顺序，特别要将钙离子与硫酸根离子、磷酸氢根离子错开，混合时速度宜慢，边搅拌变混合。
2.2激素不易溶解由于母液中许多激素都不易溶于水，所以在配置母液过程中IAA、玉米素、IBA、GA、多效唑等激素应先溶于少量95%乙醇中，再慢慢加水定容，如果加水后有结晶析出，则可以考虑先用1/10体积的95%究竟溶解后再定容；2,4-D 易溶于碱性水溶液，可用少量1mol/L的NaOH溶液溶解再慢慢加水定容；KT和6-BA应先用少量1mol/L HCL 溶解，再加水定容至一定浓度。
2.3培养基灭菌前凝固，灭菌后不凝固蔗糖和有些激素如吲哚乙酸在高温灭菌时容易酸化，致使培养基的pH值在灭菌后有所下降，而琼脂在酸性强的条件下不易凝固。
所以在灭菌前调整培养基的pH值，在琼脂用量为6.5~7g/L的情况下pH 值最好不低于5.8，如需酸性较强的培养基可适当增加琼脂的用量。
3.培养基污染3.1接种前培养基出现大量污染若菌落只存在培养基表面且多为真菌时可能是由于瓶塞不严或放置培养基的空气环境中孢子过多；如果菌落存在于基内侧则很可能是由各种储存母液的污染而引起的；另外，培养瓶不洁净或灭菌不彻底也会导致培养基在未接种前即有大量污染。
浅析植物组织培养常见问题与预防措施
浅析植物组织培养常见问题与预防措施摘要：在植物培养过程中，是比较容易出现玻璃化、褐变、污染等不良情况的，这会增大培养难度，同时还可能难以达到理想的培养目的。
根据笔者多年的研究实践，对三者发生的原因以及预防措施有一定的认识，整理出来与同行共享。
关键词：污染玻璃化褐变植物组织培养是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适宜的培养基，对植物离体器官、组织、细胞、原生质体进行培养，使其分化、生长发育成完整植株的过程。
从遗传学基础，植物细胞具有全能性与多能性，包含该物种基因组即全部遗传信息，因而具有分化为完整个体或特定类群组织或器官的能力，以及植物体的再生能力，即对受损结构自我修复或替代的能力。
在植物细胞全能性理论的指导下，经历一个世纪的发展，植物组织培养己成为一门重要的科学，它以植物学、植物生理学、植物遗传学为理论基础，研究植物离体条件下的形态建成、营养生理，体细胞遗传等规律。
这一培养方式改变了植物以往的发育过程，将植物放入容器中，实行无菌培养，能够避免其他微生物、病虫等危害，另外还可以采用各类技术方法，对该植物生长所需的光照、温度、营养等进行调节，让植物的生长环境达到最优。
同时，植物组织培养是一项令人振奋的奇妙的生物技术和重要的技术手段，它既是植物细胞工程和基因工程的技术基础，又是植物快速繁殖和脱毒的重要手段，具有培养材料来源广泛，培养条件可人为调控，不受季节限制，周年生产，管理方便，有利于实现育苗工厂化生产和自动化控制。
生长周期短，繁殖速度快，花卉植物通组培繁殖，在短其内可以繁殖出数以万计的苗木，这些苗木的中传特性和表型特片与母株完全相同，完全保存了母株的优良特性等优点。
至今己有100多个科，1000种以上的植物获得成功，在农业、园林业、医药等行业中得到广泛的应用，创造了巨大的经济效益和社会效益。
影响植物组培成功的因素很多，既有植物内部因素，己有外界环境因素，其中污染、褐变，玻璃化并称为植物组织培养的三大难题，能否有效控制是影响组培能否成功的关键。
植物组织培养中存在的主要问题与对策
植物组织培养中存在的主要问题与对策作为现代生物技术的重要部分，植物组织培养已经成为了科学家们研究植物发育、繁殖、基础遗传等领域的重要手段。
但是，在实践中，植物组织培养也存在着很多问题，这些问题往往会影响培养的效率和成功率。
本文将就植物组织培养中存在的主要问题以及其对策进行详细的阐述。
一、污染污染是植物组织培养中最常见的问题之一，此类污染往往源于致污物的不洁、操作人员的不洁以及环境的不洁。
对此，我们需要采取以下对策：对器皿、培养基、辅助物质等实验关键点的消毒操作必不可少；操作过程中应注意勤洗手、不闲置的原则；尽可能在清洁的环境下工作，如实验室的净化处理等。
二、温度温度是组织培养中的核心因素之一，温度过高或过低都会对组织培养产生一定的影响。
高温下培养，组织分化发育快，营养物质吸收速率增快；低温则能有利于激发细胞分裂。
但如操作者不去细心调节温度，则会造成培养组织养分不充足或异常分化等不良现象。
因此，对于植物组织培养，科学家们应该注意温度的调节，使其在一个适宜的温度范围内工作，以达到最理想的培养效果。
三、培养基培养基是植物组织培养的重要组成部分，其配制和新鲜度都会影响培养的效果。
无论是配制过量、欠量，还是老化的培养基，都会降低培养细胞的生物学特性和分化能力，从而影响分化速率, 使组织无法正常分裂，影响胚胎质量。
要想避免上述情况，科学家应该严格控制培养基的配制方法、投入量，及时更换过期的培养基，以保证最好的培养效果。
四、光照光照是植物组织培养的另一个重要因素，良好的光照将有助于培养出优质植物组织。
而适应不同光照强度的植物，其光合作用速率也不同，从而影响到组织细胞的分裂能力。
在组织培养过程中，科学家应该给予足够的光照，同时根据植物的特性和需求设置光照强度，并注意避免光照过度或不足，以及光照时间不均等问题，保障植物组织的健康发育。
总之，植物组织培养的成功性一方面取决于实验者的经验与技能，另一方面则取决于齐备的实验设备和极为细致的操作。
植物组织培养实验中存在的问题及方法的改进
植物组织培养实验中存在的问题及方法的改进本文对植物组织培养实验过程中出现的问题进行分析并提出实验改进方法。
标签：植物组织培养实验改进植物组织培养在过去的40多年中得到迅速发展，已渗透到生物学科的各个领域，并广泛应用于农业、林业、工业和医药业，产生了巨大的经济效益和社会效益。
尤其是快繁技术和无毒苗培育技术，在农林业生产中具有重大的实践意义。
虽然植物组织培养的操作过程并不复杂，但在实验中常常会遇到一些问题，这些问题可能会导致实验的失败，给科研和生产造成损失。
因此，在植物组织培养实验中积累经验和熟练掌握无菌操作技术是非常重要的。
笔者根据多年从事教学实验，对植物组织培养实验过程中出现的问题进行分析并提出实验改进方法，既提高了工作效率，又能提高实验的成功率。
（一）培养基母液的配制MS培养基是组织培养中常用的培养基，也是植物组织培养实验过程中主要使用的培养基，下面以MS培养基为例，简述其母液配制过程中常出现的问题及改进方法。
1.大量元素母液配制。
大量元素中的Ca2+、SO42-和HPO42-容易生成CaSO4、CaHPO4沉淀。
改进的方法是把NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、KH2PO4、CaCl2·2H2O5种药品分别用蒸馏水溶解，按顺序依次混合，同时考虑到大量元素的溶解度和方便使用，通常配制成10倍的母液5000ml贮存在冰箱中，使用一个学期不会产生沉淀，例如配制1000ml培养基，只需取100ml大量元素母液。
2.微量元素母液配制。
在配制微量元素母液时常常出现加入钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）后，钼酸钠难溶解，即使通过加热也无法解决问题。
解决的方法是在室温下用蒸馏水分别溶解微量元素药品，然后再依次混合在一起放入冰箱保存，用前摇匀母液。
同时考虑到微量元素的用量极微，通常配制成100倍的母液1000ml例如配制1000ml培养基，只需用移液管取10ml微量元素母液。
植物组织培养过程中的常见难点及解决
植物组织培养过程中的常见难点及解决1玻璃化现象在进植物组织培养时，经常会发现试管苗呈半透明状，植株矮小肿胀、失绿；叶片皱缩或卷曲、脆弱易破碎；叶表无角质层蜡质，没有功能性气孔，仅有海绵组织，没有栅栏组织。
这种试管苗生长异常现象被称为“玻璃化”，是植物组织培养中特有的一种生理性病变，是培养环境中的一些物理、化学和生化因子共同作用使植物组织新陈代谢紊乱所造成的。
玻璃苗的光合能和酶活性低，器官功能不全，分化能力低，很难继续用作继代培养和扩大繁殖的材料。
1.1 玻璃苗发生的因素培养材料种类和外植体类型影响玻璃苗的发生：梅菜外植体玻璃苗发生率依次是下胚轴≥茎尖≥子叶。
瑞香基部茎段玻璃苗的发生率最低，其次是茎尖，中部茎段产生的玻璃苗几率最高。
此外，玻璃化还可能与外植体大小有关。
组培苗生长的微环境能够影响玻璃化的发生有研究表明，光照时间太长会导致玻璃化现象的增加，超过１４ｈ玻璃化现象较严重。
使用透气性较差的塑口薄膜封口或组培温度过高时，由于引起组培瓶内气体组成的改变，也提高了玻璃化率。
培养基成分（如大量元素、植物激素和蔗糖浓度等）与玻璃化现象有关：培养基中的ＮＨ４＋过多容易导致试管苗玻璃化的发生。
在ＢＡ质量浓度０、５～１．０ｍｇ／Ｌ条件下，玻璃苗率随ＢＡ浓度的增加而显著上升。
蔗糖浓度与玻璃化呈负相关，在一定范围内，蔗糖浓度越高，玻璃苗的比率越低。
1.2 措施：①增加组培室内通气，并改善培养容器的通风换气条件，适当缩短继代间隔时间。
许多研究表明，使用透气性好的容器或封口材料（如牛皮纸和棉塞）可显著降低玻璃苗率。
增加自然光照②组培室温度：组培室温度控制在２０～２５℃，可缓解玻璃化现象。
另外，采用昼夜变温交替取代恒温也是不错的选择。
③适当提高培养基中蔗糖含量在培养基中添加４％和３.５％的蔗糖，能分别较好地预防光叶楮和山桐子组培玻璃苗的发生。
④调节培养基中植物生长调节剂的浓度和比例2褐变2.1 影响褐变的因素植物种类、基因型及外植体类型：橡胶树不同品种或品系的褐变程度不同，海垦２号的花药褐变较少，而有些品种极易褐变。
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（二）减轻褐变现象发生的方法
（3）使用抗氧化剂：在培养基中，使用半胱
氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够有效地避免 或减轻很多外植体的褐变现象。
培养基中添加0.1%～0.5%的活性炭对防止 褐变也有较为明显的效果。
（二）减轻褐变现象发生的方法
（4）连续转移：对容易褐变的材料可间隔
的成败有着至关重要的影响。结
合你的实践经验，分析如何降低
组培过程中污染现象的发生？
1）植物品种
由于多酚氧化酶活性上的差异，有些品种 的外植体在接种后较易褐变，而有些品种 的外植体在接种后不易褐变。
2）生理状态：
一般来说，老熟的组织在接种后褐变程度较
幼嫩组织严重。
3）培养基成分：
浓度过高的无机盐会使褐化程度增加；
细胞分裂素水平过高也会刺激某些外植体的 多酚氧化酶的活性，从而使褐化现象加深。
（二）、继代培养阶段
• 1、苗分化数量少、速度慢、 分枝少、个别苗生长细高
• 可能原因：细胞分裂素用量
不足，温度偏高，光照不足。 • 改进措施：增加细胞分裂素 用量，降低温度，改善光照， 改单芽继代为丛芽继代。
2、苗分化过多，生长慢，有畸形苗，节间极短，
苗丛密集，微型化
可能原因：细胞分裂素用
量过多，温度不适宜。
（一）、初始培养阶段
1、培养物变色、坏死、茎断面附近 干枯
可能原因：表面杀菌剂过量，消毒 时间过长，外植体选用不当 改进措施：调换其他杀菌剂或降低 浓度，缩短消毒时间，试用其他部
位，生长初期取材。
2、培养物长期培养几乎无反应
可能原因：基本培养基不适 宜，生长素不当或用量不足， 温度不适宜。 • 改进措施：更换基本培养基 或调整培养基成分，增加生 长素用量，试用2，4-D，调 整培养温度。
程序不对。
改进措施：调换生长素种类 或几种生长素配合使用， 降低浓度，改变生根培养 程序等。
（四）移栽驯化阶段
过渡苗死亡率高
可能原因：组培苗质量 差，环境条件不适，管 理不精细 改进措施：提高组培苗 质量，改善环境条件， 加强管理。
复习思考题
污染问题是植物组织培养中
？
首先要解决的问题，对组培研究
二、褐化及其防止措施
褐化：材料接种后，其表面开始褐变，
有时甚至会使整个培养基褐变的现象。
机理：植物组织中的多酚氧化酶被激活，
产生醌类物质，呈棕褐色，当扩散到培养
基后，会抑制其他酶的活性，从而影响接
种外植体的培养。
（一）褐变的原因
植物品种（基因型） 生理状态 培养基成分 培养条件
12～24小时培养后，再转移到新的培养基上， 这样经过连续处理7～10天后，褐变现象便 会得到控制或大为减轻。
三、玻璃化现象及其防止措施
含义：离体培养物的嫩茎、叶片呈半透明水 渍状的现象。属于生理失调症。
症状：试管苗生长缓慢
繁殖系数下降
生根率下降
移栽成活率下降
（一）玻璃化产生的原因
原因：接种空间不够密闭；
室内潮湿，霉菌繁衍多；
材料带菌； 无菌操作不正确。 传播：空气
真菌污染
真菌污染
（二）污染的预防措施
1、防止材料带菌：避免阴雨天在室外采集外植体；
春秋季节取材；材料预培养。 2、严格外植体灭菌
3、培养基(含接种用具)灭菌彻底
4、严守无菌操作规程 5、保持接种室、培养室清洁 6、培养物污染后应及时高压灭菌后再处理
3、愈伤组织生长过旺、疏松，后期水浸状
• 可能原因：激素过量，温度
偏高，无机盐含量不当。 • 改进措施：减少激素用量， 适当降低培养温度，调整无 机盐（尤其是铵盐）含量，
适当提高琼脂用量增加培养
基硬度。
4、愈伤组织太紧密、粗厚，生长缓慢
• 可能原因：细胞分裂素用 量过多，糖浓度过高，生 长素过量。 • 改进措施：减少细胞分裂 素用量，调整细胞分裂素 与生长素比例，降低糖浓 度。
4）培养条件不当
光照过强、温度过高、培养时间过长等，均
可加速被培养的外植体的褐变程度。
（二）减轻褐变现象发生的方法
（1）合适的外植体：一般来说，最好选择生
长处于旺盛的外植体。 （2）合适的培养条件：合适的无机盐成分、 植物激素水平、温度等均可以减轻材料的褐 变现象。
• 外植体诱导初期采取暗培养或弱光下培养可
改进措施：减少或停用细
胞分裂素一段时间，调节
温度。
3、幼苗生长无力、发黄落叶、有黄叶、死苗夹 于丛生苗中
可能原因：瓶内气体状况恶化， PH值变化过大，久不转接导致糖 已耗尽，营养元素亏缺失调，温 度不适，激素配比不当。
改进措施：及时转接、降低接种 密度，调整激素配比和营养元素 浓度，改善瓶内气体状况，控制 温度。
第五节 植物组织培养中常见 问题及解决办法
组织培养中常见的问题
一、污染的问题 二、褐化的问题 三、玻璃化的问题 四、其它问题
一、污染
（一）污染的原因
含义：组织培养过程中培养基和培养材料滋 生杂菌，导致培养失败的现象。 来源：细菌、真菌及其它微生物。 原因： 一是接种材料(外植体)带菌。 二是培养基、接种器具带菌。 三是操作人员接种不规范引起。
1、细菌污染
症状：培养基或外植体上出现粘液状或水迹状物，
有强烈的酸臭味，多在污染后２－３天内发生。 原因：外植体灭菌不彻底； 培养基灭菌不彻底； 接种用具灭菌不彻底； 母瓶带菌。
传播：介质
细菌污染
2、真菌污染
症状：培养基或外植体表面出现白、黑、绿等色的块状菌 丝(孢子)。接种后３－５天内发生。
培养基中激素浓度过高 培养容器透气性差，湿度过高 琼脂浓度低 温度过高
（二）玻璃化现象的预防措施
①增加琼脂用量，降低培养基的水势；
②采用通透性较好的容器进行培养； ③减少培养基中含氮化合物的用量； ④降低培养温度，进行变温培养； ⑤降低细胞分裂素用量 ⑥增加光照
四
其他常见问题和解决措施
（三）、生根阶段
1、培养物久不生根，基部切 口没有适宜的愈伤组织 可能原因：生长素种类、用 量不适宜；PH值不适，无 机盐浓度及配比不当。
改进措施：选用适宜的生长 素或增加生长素用量，适 当降低无机盐浓度等。
2、愈伤组织生长过快、过大，根茎部肿胀 或畸形，几条根并联或愈合。
可能原因：生长素种类不适， 用量过高，生根诱导培养