植物组织培养MS培养基配方
培养基配制
（2）无机微量(100倍液，配制500ml） 无机微量(100倍液，配制500ml） 倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。 蒸馏水中。每 升培养基吸此 液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
MS培养基：
MS培养基：MS是人名Murashige and Skoog的缩写。
MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
基于此，这种培养基就用他们的名字来命名了。
MS培养基是目前使用最普遍的培养基。
其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。
由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。
MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
MS培养基配方单：工作液浓度单位mg/L 大量元素：NH4NO3 1 650 KNO3 1 900 CaCl2·2H2O440 MgSO4·7H2O 370 KH2PO4 170 微量元素：KI 0.83 H3BO3 6.2 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 Na2MnO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 铁盐：FeSO4·7H2O（27.8）Na2-EDTA·2H2O（37.3）有机物质：肌醇100 烟酸0.5 盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5 盐酸硫胺素（维生素B1）0.1甘氨酸 2.0 注意：肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液，因为它比较难溶，一般配成100倍，而除去肌醇后的有机，还是可以配成1000倍的。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS培养基配制
培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方MS培养基主要包括两部分：无机盐和有机物。
无机盐部分的配方如下：1.氮源：氮源通常由硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾（KNO3）和硫酸铵（（NH4）2SO4）组成。
氮源的浓度通常为20-30mM。
2.磷酸盐：磷酸盐通常由二氢二钠磷酸盐（NaH2PO4）组成，浓度为10mM。
3.钠盐：MS培养基中含有钠盐，通常由硝酸钠（NaNO3）和硝酸钾（KNO3）组成。
钙盐的浓度为2.0mM，钾盐的浓度为1.0mM。
4.钠盐：MS培养基中含有钠盐，通常由硝酸钠（NaNO3）和硝酸钾（KNO3）组成。
钙盐的浓度为2.0mM，钾盐的浓度为1.0mM。
5.硫酸镁：硫酸镁（MgSO4）的浓度为1.0mM。
6.磷酸铵铁：磷酸铵铁（FeSO4·(NH4)2SO4）的浓度为27.8μM。
7.各种微量元素：包括锌、铜、锰、硼、钼、钴和镍等微量元素。
这些微量元素的浓度通常在微摩尔（μM）级别。
有机物部分的配方如下：1.蔗糖：蔗糖是植物培养基中最常用的碳源，浓度通常为30g/L。
2. 维生素：通常使用的维生素有二硝基地巴泼甲素（2,4-D）和吲哚-3-乙酸（IAA）。
它们的浓度通常在0.1-2.0 mg/L之间。
3. 激素：常用的激素包括植物生长素（BA）和乙烯利（2,4-D）。
它们的浓度通常在1.0-10.0 mg/L之间。
4.混合物：还可以加入一些有机物混合物，如胆固醇、烟酸和核酸酸等。
值得注意的是，这只是MS培养基的一个基本配方，根据具体的研究目的和植物种类的不同，还可以对该配方进行一些调整和优化。
总结起来，MS培养基是一种常用的植物组织培养基，主要用于植物生长和增殖。
其配方包括无机盐和有机物两部分，无机盐包括氮源、磷酸盐、钙盐、镁盐、磷酸铵铁和微量元素等；有机物包括蔗糖、维生素和激素等。
通过适当调整这些配方的浓度和比例，可以实现不同植物的生长和增殖需求。
ms培养基配方表
ms培养基配方表MS（Murashige and Skoog）培养基是细胞培养中常用的基础培养基，其命名来源自培养基组合者Murashige和Skoog。
MS培养基呈现出广泛的适用性，可用于各种组织培养和植物组织培养的研究。
其配方主要采用无机盐和有机物的混合物，以下是MS培养基的详细配方表。
1. MS微量元素添加剂：ZnSO4.7H2O = 8.6 mg/LH3BO3 = 3.1 mg/LMnSO4.4H2O = 0.25 mg/LCuSO4.5H2O = 0.025 mg/LKI = 0.83 mg/LNa2MoO4.2H2O = 0.025 mg/LCoCl2.6H2O = 0.025 mg/LFeSO4.7H2O = 27.8 mg/L2. MS盐基：NH4NO3 = 1650 mg/LKNO3 = 1900 mg/LCaCl2.2H2O = 440 mg/LKH2PO4 = 170 mg/LMgSO4.7H2O = 370 mg/L3. MS综合维生素添加剂：Myo-inositol = 100 mg/LNicotinic acid = 50 mg/LPyridoxine.HCl = 10 mg/LThiamine.HCl = 10 mg/LGlycine = 2 mg/LL-Asparagine.H2O = 150 mg/L4. MS植物生长调节剂添加剂：2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) = 0.5 ~ 5 mg/Lα-Naphthaleneacetic acid (NAA) = 0.5 ~ 5 mg/L6-Benzylaminopurine (BA) = 0.5 ~ 5 mg/LKinetin (Kin) = 0.5 ~ 5 mg/LGibberellic acid (GA3) = 0.1 ~ 10 mg/LAbscisic acid (ABA) = 0.1 ~ 10 mg/L以上是MS培养基的配方表，各种配方的配比可以根据实验需要适当调整。
ms培养基的制作流程
ms培养基的制作流程一、准备实验器材和试剂制作MS培养基需要准备以下实验器材和试剂：1. 称量仪：用于准确称量试剂。
2. 称量纸：用于放置待称量的试剂。
3. 密封袋：用于保存称量好的试剂。
4. 移液器和移液管：用于准确分配试剂。
5. 移液枪：用于混合试剂。
6. 培养瓶：用于保存制作好的培养基。
7. MS培养基盐基组分：包括氮源、磷源、钾源、微量元素、维生素和植物激素等。
二、制作MS培养基1. 称量盐基组分：根据所需的培养基体积，按照MS培养基的配方比例，准确称量盐基组分。
将盐基组分分别称量到称量纸上，并放入密封袋中保存。
2. 配制MS盐基溶液：依次取出密封袋中的盐基组分，使用移液器分别加入适量的去离子水中，并充分溶解。
注意，每次加入盐基组分后，应充分搅拌溶解后再加入下一个盐基组分，以确保完全溶解。
3. 调整pH值：使用pH计测量溶液的pH值，如果pH值不在所需范围内（通常为5.7-5.8），可以使用盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）调节pH值。
4. 加入糖和琼脂糖：根据实验需要，可以在溶液中加入糖（如蔗糖或葡萄糖）和琼脂糖。
糖提供能量和碳源，琼脂糖用于凝固培养基。
5. 补充植物激素和其他添加剂：根据实验需要，可以在溶液中添加适量的植物激素（如激素BA、IAA等）和其他必要的添加剂（如抗生素、抗氧化剂等）。
6. 调整体积和混合：根据实验需要，使用移液器向溶液中加入适量的去离子水，调整溶液的体积。
然后使用移液枪或移液器充分混合溶液，确保各组分均匀分布。
7. 灭菌：将制备好的MS培养基倒入培养瓶中，盖紧盖子。
然后使用高压灭菌锅或自动培养基灭菌器进行灭菌处理。
灭菌条件通常为121℃，压力为15 psi，持续20-30分钟。
8. 储存：灭菌后的MS培养基可以在常温下储存，避免阳光直射。
根据需要，可以在每个培养瓶上标记培养基配制日期、成分和有效期等信息。
以上就是制作MS培养基的具体流程。
制作过程中需要注意实验室卫生和操作规范，确保培养基的质量和可靠性。
MS培养基的配制
一、MS培养基的配制1. 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的10倍或100倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
2. 按配方表配制MS培养基母液：大量元素50×，微量元素配100×，铁盐、有机成分配制成100×，母液贮存于4℃的冰箱中。
激素配成浓度为0.1mg/mL.3. 配制各种母液是，成分顺序加入，上一成分溶解后再加下一成分。
钙液和铁盐都单独配制。
生长素配制时，先用微量1MNaOH溶解，再以蒸馏水定容；细胞分裂素配制时，先用微量0.1MHCl溶解，再以蒸馏水定容。
二、MS母液配制取作表序号药品名称MS量(mg/L）扩大倍数母液量(g)定容取作量(mg/L)甲液NH4NO3KNO3MgSO4.7H20KH2PO41650190037017050×41.2547.59.254.25500ml 20钙液无水CaCl2440 100×11 500ml 20乙液MnSO4.4H2O或MnSO4. H2OZnSO4.7H2OH3BO3KI22.316.98.66.20.83100× 1.120.850.430.310.0415500ml 10铁盐Na2.EDTA.2H2OFeSO4.7H2037.227.8100× 1.861.39500ml 10有机成分盐酸吡哆醇(VB6)烟酸甘氨酸0.50.52100×0.0050.0050.02100ml 10丙液ⅠNa2MoO4.2H2O.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.250.0250.025100×0.01250.001250.00125500ml 10丙液Ⅱ肌醇100 100× 2 200ml 10丙液Ⅲ盐酸硫胺素(VB1) 0.4 50×0.02 100ml 2附注琼脂5.5-6.5g/L 蔗糖30g/LpH5.8-6.2备注：1钙液的母液量由于易沉淀所以取11g2丙液Ⅰ由于取的量太少所以先去12.5mg,溶于10mL水，再取1mL溶液稀释三、注意事项1、药品的质量问题：为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注意药品质量，国内药品采用国际上通用标准，分为：一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级；二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级；三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级；四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物组织培养MS培养基配方
（一）母液配制与保存
配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。
母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）
1大量元素
配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。
2微量元素母液
在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。
3铁盐母液
由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。
配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4有机物母液
按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶
配成1 mg/ml 。
各100 ml。
6-苄基腺嘌呤（6-BA）用0.5 N的HCl加热溶解。
萘乙酸（NAA）用少量无水乙醇溶解，再加蒸馏水。
6 Ms培养基配制程序
配好各种母液后，就可以准备配制培养基，程序入下
1．将已配好的的各种母液按顺序排好,根据母液倍数或浓度计算和吸取应相应时的各种母液和生长调节物质;计算和称取琼脂和蔗糖.1L培养基称蔗糖30g琼脂7g.
2．由于琼脂难溶解,所以先在烧杯中放入一定量的水,在微波炉里加热后搅拌,使之溶解.
3．按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液的顺序倒入锅中加热至沸后把溶解的琼脂加入。
4．加入蔗糖，特蔗糖溶解后，定溶所要体积。
5．调PH到5.6～5.8
6．分装到培养瓶中121℃21min灭菌后取出，放在水平台上凝固接种。
做愈伤组织时还应在每1L培养基中加入2mg/mL的2，4-D1mL,对于不同的材料，加入的量不同，根据不同的材料选择不同的浓度。
还可加入不同生长调节素达到更好的目的。