植物组织培养MS培养基配方

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培养基配制

培养基配制

(2)无机微量(100倍液,配制500ml) 无机微量(100倍液,配制500ml) 倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。 蒸馏水中。每 升培养基吸此 液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备:如实验一准备的培养基等; 接种室的准备(超净台的准备) 2 2、培养材料表面灭菌:洗涤、清理;(此处 开始在超净台上操作)75%酒精浸泡30秒, 倒出酒精;0.1%升汞5-8 min,倒出升汞; 无菌水洗涤3-5次,无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种:取出叶片置于培养皿中的滤纸上, 吸取水分,剪去被升汞杀死的叶片边缘,将 叶片剪成适当大小(3-5mm见方),接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口,写好标签 (时间、材料等) 4、培养观察:置于培养室或培养箱中培养, 温度25度左右,光照16小时,照度20003000lux。第一周注意观察污染情况,随时 清理污染的培养瓶,记录污染率及生长情况。
实验三 月季的快繁
一、实验目的:对月季茎段进行快繁 ,掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品: 1、仪器用具:超净工作台、接种器具(实验 一已灭菌)酒精灯、酒精棉球 2、试剂:实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料:植物茎段(月季)

MS培养基:

MS培养基:

MS培养基:MS是人名Murashige and Skoog的缩写。

MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的,其特点是无机盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。

基于此,这种培养基就用他们的名字来命名了。

MS培养基是目前使用最普遍的培养基。

其具有较高的无机盐浓度,能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。

由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存和消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不会影响离子间的平衡。

MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。

MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。

因此,一般情况下,不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。

和其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的显著特点。

MS培养基配方单:工作液浓度单位mg/L 大量元素:NH4NO3 1 650 KNO3 1 900 CaCl2·2H2O440 MgSO4·7H2O 370 KH2PO4 170 微量元素:KI 0.83 H3BO3 6.2 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 Na2MnO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 铁盐:FeSO4·7H2O(27.8)Na2-EDTA·2H2O(37.3)有机物质:肌醇100 烟酸0.5 盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5 盐酸硫胺素(维生素B1)0.1甘氨酸 2.0 注意:肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液,因为它比较难溶,一般配成100倍,而除去肌醇后的有机,还是可以配成1000倍的。

组织培养实验MS培养基及配制注意事项

组织培养实验MS培养基及配制注意事项

一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。

3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。

4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。

5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。

A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。

B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。

二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。

MS培养基配制

MS培养基配制

培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。

MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方MS培养基主要包括两部分:无机盐和有机物。

无机盐部分的配方如下:1.氮源:氮源通常由硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钾(KNO3)和硫酸铵((NH4)2SO4)组成。

氮源的浓度通常为20-30mM。

2.磷酸盐:磷酸盐通常由二氢二钠磷酸盐(NaH2PO4)组成,浓度为10mM。

3.钠盐:MS培养基中含有钠盐,通常由硝酸钠(NaNO3)和硝酸钾(KNO3)组成。

钙盐的浓度为2.0mM,钾盐的浓度为1.0mM。

4.钠盐:MS培养基中含有钠盐,通常由硝酸钠(NaNO3)和硝酸钾(KNO3)组成。

钙盐的浓度为2.0mM,钾盐的浓度为1.0mM。

5.硫酸镁:硫酸镁(MgSO4)的浓度为1.0mM。

6.磷酸铵铁:磷酸铵铁(FeSO4·(NH4)2SO4)的浓度为27.8μM。

7.各种微量元素:包括锌、铜、锰、硼、钼、钴和镍等微量元素。

这些微量元素的浓度通常在微摩尔(μM)级别。

有机物部分的配方如下:1.蔗糖:蔗糖是植物培养基中最常用的碳源,浓度通常为30g/L。

2. 维生素:通常使用的维生素有二硝基地巴泼甲素(2,4-D)和吲哚-3-乙酸(IAA)。

它们的浓度通常在0.1-2.0 mg/L之间。

3. 激素:常用的激素包括植物生长素(BA)和乙烯利(2,4-D)。

它们的浓度通常在1.0-10.0 mg/L之间。

4.混合物:还可以加入一些有机物混合物,如胆固醇、烟酸和核酸酸等。

值得注意的是,这只是MS培养基的一个基本配方,根据具体的研究目的和植物种类的不同,还可以对该配方进行一些调整和优化。

总结起来,MS培养基是一种常用的植物组织培养基,主要用于植物生长和增殖。

其配方包括无机盐和有机物两部分,无机盐包括氮源、磷酸盐、钙盐、镁盐、磷酸铵铁和微量元素等;有机物包括蔗糖、维生素和激素等。

通过适当调整这些配方的浓度和比例,可以实现不同植物的生长和增殖需求。

ms培养基配方表

ms培养基配方表

ms培养基配方表MS(Murashige and Skoog)培养基是细胞培养中常用的基础培养基,其命名来源自培养基组合者Murashige和Skoog。

MS培养基呈现出广泛的适用性,可用于各种组织培养和植物组织培养的研究。

其配方主要采用无机盐和有机物的混合物,以下是MS培养基的详细配方表。

1. MS微量元素添加剂:ZnSO4.7H2O = 8.6 mg/LH3BO3 = 3.1 mg/LMnSO4.4H2O = 0.25 mg/LCuSO4.5H2O = 0.025 mg/LKI = 0.83 mg/LNa2MoO4.2H2O = 0.025 mg/LCoCl2.6H2O = 0.025 mg/LFeSO4.7H2O = 27.8 mg/L2. MS盐基:NH4NO3 = 1650 mg/LKNO3 = 1900 mg/LCaCl2.2H2O = 440 mg/LKH2PO4 = 170 mg/LMgSO4.7H2O = 370 mg/L3. MS综合维生素添加剂:Myo-inositol = 100 mg/LNicotinic acid = 50 mg/LPyridoxine.HCl = 10 mg/LThiamine.HCl = 10 mg/LGlycine = 2 mg/LL-Asparagine.H2O = 150 mg/L4. MS植物生长调节剂添加剂:2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) = 0.5 ~ 5 mg/Lα-Naphthaleneacetic acid (NAA) = 0.5 ~ 5 mg/L6-Benzylaminopurine (BA) = 0.5 ~ 5 mg/LKinetin (Kin) = 0.5 ~ 5 mg/LGibberellic acid (GA3) = 0.1 ~ 10 mg/LAbscisic acid (ABA) = 0.1 ~ 10 mg/L以上是MS培养基的配方表,各种配方的配比可以根据实验需要适当调整。

ms培养基的制作流程

ms培养基的制作流程

ms培养基的制作流程一、准备实验器材和试剂制作MS培养基需要准备以下实验器材和试剂:1. 称量仪:用于准确称量试剂。

2. 称量纸:用于放置待称量的试剂。

3. 密封袋:用于保存称量好的试剂。

4. 移液器和移液管:用于准确分配试剂。

5. 移液枪:用于混合试剂。

6. 培养瓶:用于保存制作好的培养基。

7. MS培养基盐基组分:包括氮源、磷源、钾源、微量元素、维生素和植物激素等。

二、制作MS培养基1. 称量盐基组分:根据所需的培养基体积,按照MS培养基的配方比例,准确称量盐基组分。

将盐基组分分别称量到称量纸上,并放入密封袋中保存。

2. 配制MS盐基溶液:依次取出密封袋中的盐基组分,使用移液器分别加入适量的去离子水中,并充分溶解。

注意,每次加入盐基组分后,应充分搅拌溶解后再加入下一个盐基组分,以确保完全溶解。

3. 调整pH值:使用pH计测量溶液的pH值,如果pH值不在所需范围内(通常为5.7-5.8),可以使用盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)调节pH值。

4. 加入糖和琼脂糖:根据实验需要,可以在溶液中加入糖(如蔗糖或葡萄糖)和琼脂糖。

糖提供能量和碳源,琼脂糖用于凝固培养基。

5. 补充植物激素和其他添加剂:根据实验需要,可以在溶液中添加适量的植物激素(如激素BA、IAA等)和其他必要的添加剂(如抗生素、抗氧化剂等)。

6. 调整体积和混合:根据实验需要,使用移液器向溶液中加入适量的去离子水,调整溶液的体积。

然后使用移液枪或移液器充分混合溶液,确保各组分均匀分布。

7. 灭菌:将制备好的MS培养基倒入培养瓶中,盖紧盖子。

然后使用高压灭菌锅或自动培养基灭菌器进行灭菌处理。

灭菌条件通常为121℃,压力为15 psi,持续20-30分钟。

8. 储存:灭菌后的MS培养基可以在常温下储存,避免阳光直射。

根据需要,可以在每个培养瓶上标记培养基配制日期、成分和有效期等信息。

以上就是制作MS培养基的具体流程。

制作过程中需要注意实验室卫生和操作规范,确保培养基的质量和可靠性。

MS培养基的配制

MS培养基的配制

一、MS培养基的配制1. 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的10倍或100倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。

2. 按配方表配制MS培养基母液:大量元素50×,微量元素配100×,铁盐、有机成分配制成100×,母液贮存于4℃的冰箱中。

激素配成浓度为0.1mg/mL.3. 配制各种母液是,成分顺序加入,上一成分溶解后再加下一成分。

钙液和铁盐都单独配制。

生长素配制时,先用微量1MNaOH溶解,再以蒸馏水定容;细胞分裂素配制时,先用微量0.1MHCl溶解,再以蒸馏水定容。

二、MS母液配制取作表序号药品名称MS量(mg/L)扩大倍数母液量(g)定容取作量(mg/L)甲液NH4NO3KNO3MgSO4.7H20KH2PO41650190037017050×41.2547.59.254.25500ml 20钙液无水CaCl2440 100×11 500ml 20乙液MnSO4.4H2O或MnSO4. H2OZnSO4.7H2OH3BO3KI22.316.98.66.20.83100× 1.120.850.430.310.0415500ml 10铁盐Na2.EDTA.2H2OFeSO4.7H2037.227.8100× 1.861.39500ml 10有机成分盐酸吡哆醇(VB6)烟酸甘氨酸0.50.52100×0.0050.0050.02100ml 10丙液ⅠNa2MoO4.2H2O.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.250.0250.025100×0.01250.001250.00125500ml 10丙液Ⅱ肌醇100 100× 2 200ml 10丙液Ⅲ盐酸硫胺素(VB1) 0.4 50×0.02 100ml 2附注琼脂5.5-6.5g/L 蔗糖30g/LpH5.8-6.2备注:1钙液的母液量由于易沉淀所以取11g2丙液Ⅰ由于取的量太少所以先去12.5mg,溶于10mL水,再取1mL溶液稀释三、注意事项1、药品的质量问题:为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响,必须注意药品质量,国内药品采用国际上通用标准,分为:一级,即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级;二级,即分析纯试剂,Analytical Reagent, AR级;三级,即化学纯试剂,Chemical Pure, CP级;四级,即实验试剂,Laboratory Reagent, LR级。

配制ms培养基实验报告

配制ms培养基实验报告

配制ms培养基实验报告配制MS培养基实验报告引言:培养基是生物学实验中必不可少的一种工具,它提供了细胞生长所需的营养物质和环境条件。

在植物细胞培养中,MS培养基是最常用的一种基础培养基,它由Murashige和Skoog于1962年首次提出,并被广泛应用于植物组织培养和植物生理研究中。

本实验旨在通过配制MS培养基,深入了解其成分及配制方法。

一、材料与方法:1. 材料:- 水溶性盐类:硝酸钙、硝酸钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硼酸、锰酸钾、锌硫酸、硫酸铜、钼酸铵- 无机盐类:硝酸铵、磷酸二氢钾、硝酸钠、硫酸钾、硫酸铵- 有机物:肌酸、葡萄糖、维生素B5、天门冬氨酸、吲哚乙酸- 植物激素:植物生长素、植物生长素酸、植物生长素酯、植物生长素酸钠- pH调节剂:氢氧化钠、盐酸- 琼脂:用于凝固培养基2. 方法:1) 将硝酸钙、硝酸钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硼酸、锰酸钾、锌硫酸、硫酸铜、钼酸铵分别称取适量,溶解于蒸馏水中,得到无机盐溶液A。

2) 将硝酸铵、磷酸二氢钾、硝酸钠、硫酸钾、硫酸铵分别称取适量,溶解于蒸馏水中,得到无机盐溶液B。

3) 将肌酸、葡萄糖、维生素B5、天门冬氨酸、吲哚乙酸分别称取适量,溶解于蒸馏水中,得到有机物溶液。

4) 将植物生长素、植物生长素酸、植物生长素酯、植物生长素酸钠分别称取适量,溶解于蒸馏水中,得到植物激素溶液。

5) 将无机盐溶液A、无机盐溶液B、有机物溶液、植物激素溶液按一定比例混合,加入适量的琼脂,调节pH值至适宜范围。

6) 高压灭菌培养基,使其达到无菌状态。

二、结果与讨论:通过以上步骤,我们成功配制出了MS培养基。

MS培养基的配方中包含了多种无机盐类、有机物和植物激素,这些成分为细胞生长提供了必要的营养物质和信号物质,保证了细胞的正常生长和分化。

其中,无机盐类的添加对于细胞的生长起到了重要的作用。

硝酸钙、硝酸钾等提供了细胞所需的氮源和钾源,硫酸镁和硫酸亚铁则提供了细胞所需的镁和铁等微量元素。

实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制

实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制

5 MS培养基母液和 常用试剂的配制流程
▪ 5.1培养基的成分
▪ 目前,不论液体培养还是固体培养,大多 数植物组织培养中所用的培养基都是由无 机营养物、碳源、维生素、生长调节物质 和有机附加物等几大类物质组成。
5.2 培养基的配制方法
▪ 配制培养基的最简单的方法是用市售培养 基干粉溶解在蒸馏水里,加上蔗糖、琼脂 和其他必要的补加物,再加入蒸馏水使之 达到最终的容积。最后调节pH值,高压灭 菌,于是制成所需要的培养基。
▪ 如果没有培养基干粉,则可采用以下两种 方法来配制:
▪ 一个是按照配方规定的数量分别称量出各 种成分,分别使它们溶解于水,然后再将 它们混合在一起。
▪ 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液(母 液),贮存在2~4℃冰箱内,待配培养基 时取出,按比例稀释配用。此法较为常用。
5.3 MS 培养基母液的配制
▪ 2,4-D/NAA用少量95%酒精溶解,再加水定 容;6-BA应先溶于少量1 mol·L-1的HCl中, 再加水定容。
▪ 具体配制见下表:
母液
种类
生长 调节 物质
成分
2,4-D/NAA 6-苄氨基嘌呤
称取量 母液定容 母液浓度 (mg ) 体积(ml ) (mg/ml)
50
0.5
10
100
0.1
实验1 马铃薯试管薯的诱导
▪ 实验意义:马铃薯是世界重要的粮食和蔬 菜兼用作物,在生产中由于长期采用无性 繁殖,导致病毒积累而使种性退化,造成 产量和品质下降。目前,解决马铃薯种性 退化最有效的方法是通过茎尖组织培养脱 毒法培育出脱毒试管苗,用其进一步生产 马铃薯脱毒种薯。而在马铃薯脱毒种薯的 生产中,离体培养条件下诱导马铃薯无病 毒植株产生气生小块茎是一个重要的环节。

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方(一)母液配制与保存配制培养基时,如果每次配制都要按着杨成分表依次称量,既费时,又增加了多次称量误差。

为了提高配制培养基的工作效率,一般将常用的基本培养基配制成10~200倍,甚至1000倍的浓缩贮备液,即母液。

母液贮存于冰箱中,使用时,将它们按一定的比例进行稀释混合,可多次使用,并在配制较多数量的培养基时,降低工作强度,也提高试验的精度。

基本培养基的母液有四种:大量元素(浓缩20倍),微量元素(浓缩100倍),铁盐(浓缩200倍),除蔗糖之外的有机物质(浓缩100倍)1大量元素配制大量元素母液时要分别称量,分别溶解,在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中,以防出现沉淀。

倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保存。

表1大量元素母液(配1L20倍的母液)2微量元素母液在配制微量元素母液时,也应分别称量和分别溶解,定溶时不分先后次序,可随意加入溶量瓶中定容(表2),一般不会出现沉淀现象。

倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保有存。

由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用,只有基螯合物才能被植物吸收利用,因此需要单独配成螯合物母液表3)。

配制方法:称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠,分别用450ml的去离子水溶解,分别适当加热不停搅拌,分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中,将两种溶液混合在一起,最后用去离子水定溶于1000mL,倒入棕色贮液瓶中,贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存注意配制时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。

混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中4、有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物,分别溶解后,用蒸馏水或去离子水定容于1000mL,放入细口瓶中备用,贴好标签于4℃冰箱中低温保存。

MS培养基是什么

MS培养基是什么
有利于维持培养环境稳定
稳定的pH值对于植物细胞的生长和分化至关重要,MS培养基的缓冲能力强, 能够为植物细胞提供更加稳定的培养环境。
MS培养基的抑菌效果好
添加抗菌剂
MS培养基中通常会添加一定量的抗菌剂,如青霉素、头孢菌素等,以抑制细菌 等微生物的生长,保证植物细胞的良好生长和培养。
适宜的pH值
MS培养基的pH值适宜,不利于微生物的生长繁殖,从而有效避免了微生物对植 物细胞的污染和侵害。
腺嘌呤
提供氮源和细胞分裂素。
激素
生长素
促进细胞伸长和细胞分裂,促进根 的分化。
细胞分裂素
促进细胞分裂,诱导芽的形成。
赤霉素
促进细胞伸长,诱导叶的分化。
脱落酸
抑制细胞分裂,促进叶和果实的衰 老和脱落。
03
MS培养基的应用
MS培养基在植物组织培养中的应用
植物繁殖
MS培养基是植物组织培养中 最常用的培养基之一,可以用 于快速繁殖植物,如花卉、树
用效果。
MS培养基的激素作用不均一
激素作用复杂
MS培养基中添加了多种激素和 生长调节剂,这些成分的作用复 杂,相互之间可能存在相互干扰 和拮抗作用。
不易掌握
由于MS培养基中激素作用的不 均一性,使用者需要具备一定的 植物组织培养知识和技能才能掌 握其使用技巧。
难以比较
由于MS培养基中激素作用的不 均一性,不同实验室或研究机构 之间使用MS培养基时难以进行 比较和交流,影响了实验结果的 可靠性和可重复性。
06
MS培养基的发展前景
MS培养基的改进方向
01
02
03
优化营养成分
通过调整培养基中的营养 成分,以提高植物细胞的 生长和分化能力。

植物组织培养实验指导

植物组织培养实验指导

植物组织培养实验指导2021.3附录培养基母液的配制〔实验老师准备〕一、实验目的:掌握培养基母液配制的方法。

二、实验原理:配制培养基时,为了使用方便和用量准确,通常采用母液法进展配制,即将所选培养基配方中各试剂的用量,扩大假设干倍后再准确称量,分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存,使用时按比例汲取母液进展稀释配制即可。

以MS培养基为例,所需配制的母液可分为:MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。

另外,还要配制生长物质母液,在不同类型的培养基中使用。

三、实验器具与药品:电子分析天平、托盘天平、烧杯〔50ml, 100ml, 500ml, 1000ml〕、量筒〔1000ml,100ml, 25ml〕、容量瓶〔1000ml,500ml,100ml〕、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。

配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。

植物生长调节物质,2,4-D, NAA, 6-BA等。

四、培养基母液的配制过程首先,按下表“MS培养基母液的配制〞,将各种母液根据各自的扩大倍数,计算出扩大后的称取量,然后,分别进展药品称取和母液配制。

(1)MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍,将大量元素配制成20倍的母液。

配制时先用量筒量取蒸馏水800ml,放入1000ml的烧杯中,依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4, CaCl2·2H2O 8.8g,按顺序先后倒入烧杯中,用玻璃棒搅动,待第一种化合物溶解后再参加第二种化合物,当最后一种化合物完全溶解后,将溶液倒入1000ml的容量瓶,用蒸馏水定容至1000ml,然后,倒入细口磨砂试剂瓶中,贴上标签,注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。

配制培养基时每升MS培养基汲取该母液量为50ml。

(2)MS微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍,用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g,ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 g,Na2MoO4·2H2O 0.25g,CuSO4·5H2O 0.025g,CoCl2·6H2O 0.025g,并用重蒸水逐个溶解,待全部溶解用容量瓶定容后,装入1000ml倒入细口磨砂试剂瓶中,贴上标签,注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。

MS培养基配制流程

MS培养基配制流程

MS培养基配制流程母液1母液2 氯化钙母液3先分别溶解(每个试剂溶于120ml水,需微波炉加热)再混合定容(棕色瓶)注意:1) Na2MoO4·2H2O可按10倍量(62.5 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml(即含6.25 mg的量),加入到母液4中; 2) CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按100倍量(62.5 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取1ml,(即含0.625 mg 的量),加入到母液中。

母液6肌醇四、MS溶液的混合:配制MS培养基时,每1000ml培养基取:分别依次加入到800ml蒸馏水中,20g蔗糖定溶至1000ml,用5N NaOH调PH到5.8。

用500ml的锥形瓶分装(琼脂粉为0.8%,即每个锥形瓶内加2.4g琼脂粉,然后装入300ml MS溶液)。

附:NaOH、HCl溶液的配置:另配100ml 5N NaOH,4N HCl用于调节PH值。

(20g NaOH 定容至100ml的蒸馏水中。

34.48ml HCl定容至100ml的蒸馏水中。

MS培养基广泛用于植物组织培养。

除基本的化学药品配制要领外,MS培养基的配制还有一定的特殊要求,笔者试将其总结为“ 五点注意”,描述如下。

1 母液配制必须严格分类配制高浓度的母液是植物组织培养的基本功。

配制母液的目的,除了多次取用、节省实验准备的时间外,还有抑制杂菌生长的作用。

高浓度的母液能够有效地抑制细菌与霉菌的生长,加上低温环境( 4℃) ,能够大大增加培养基的存放时间( 一年左右) 。

一般而言,培养基中的各个成分可以按照表1的分类方式配成母液。

母液分类的依据,是要避免MS培养基中某些成分发生沉淀反应。

例如,如果将全部的大量元素混合在一起配制,则KH2PO4和CaCl2易产生Ca3( PO4)2沉淀,而CaC12和 MgSO4将生成CaSO4沉淀。

除上述成分外,还必须加上蔗糖、琼脂以及激素,才构成用于组织培养的MS培养基。

ms基础培养基的配方及配制注意事项

ms基础培养基的配方及配制注意事项

ms基础培养基的配方及配制注意事项下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

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ms培养基配方表

ms培养基配方表

ms培养基配方表MS培养基是一种用于植物细胞和组织培养的广泛使用的基础培养基。

该培养基所需的成分包括营养物质、维生素和激素等。

下面为大家介绍一份常用的MS培养基配方表。

营养盐成分:• NH4NO3 1650 mg/L• KNO3 1900 mg/L• CaCl2.2H2O 332 mg/L• MgSO4.7H2O 180 mg/L• KH2PO4 170 mg/L• FeSO4.7H2O 27.8 mg/L• MnSO4.H2O 22.3 mg/L• ZnSO4.7H2O 8.6 mg/L• CuSO4.5H2O 0.025 mg/L• Na2MoO4.2H2O 0.25 mg/L• Co(NO3)2.6H2O 0.025 mg/L维生素成分:• Myo-inositol 100 mg/L• Thiamine HCl 1.0 mg/L• Nicotinic acid 1.0 mg/L• Pyridoxine HCl 0.5 mg/L• Glycine 2.0 mg/L激素成分:• 2-苯氧基乙酸(2,4-D)0.5-2.0 mg/L•去落酸(IAA)0.1-1.0 mg/L•基础激素(KT)0.1-2.0 mg/L注意事项:1.培养基的pH应该保持在5.8-6.0之间,必要时可用盐酸或氢氧化钠调节。

2.将成分依次加入双倍蒸馏水,并搅拌至完全溶解。

3.将溶液通过微孔膜过滤器过滤,并分装入含有接种材料的试管或烧杯中。

4.加入激素前,将其他成分常温下恢复车齿期。

MS培养基是一种常用的基础培养基,为了得到高效的培养和增殖效果,还需要根据实际情况进行微调。

希望这份MS 培养基配方表能够对大家提供各种植物的组织和细胞培养带来一定的帮助。

ms基本培养基母液的配制方法

ms基本培养基母液的配制方法

ms基本培养基母液的配制方法一、准备所需材料1. 酸性植物激素溶液:包括吲哚乙酸(IAA)、纯度较高的激素(如6-苄基腺嘌呤,BA)等。

2. 碱性植物激素溶液:如生长素(GA3)等。

3. 无机盐溶液:包括硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钾、硼酸、锌硫酸、硼酸等。

4. 维生素溶液:如次黄嘌呤核苷酸(NAA)等。

5. 蔗糖溶液:用于提供能量和碳源。

6. 琼脂:用于凝固培养基。

二、配制步骤1. 称取适量的无机盐溶液成分,按照MS基本培养基的配方比例将各种盐溶解在蒸馏水中,常用的浓度为1/2或1/4的MS培养基。

2. 将酸性植物激素溶液和碱性植物激素溶液分别加入到溶液中,注意控制激素的浓度。

3. 加入维生素溶液,按照配方比例加入到溶液中。

4. 加入适量的蔗糖溶液,用来提供能量和碳源。

5. 最后将琼脂加入到溶液中,搅拌均匀。

6. 调节溶液的pH值,通常为5.8左右。

7. 用蒸馏水补充溶液至总体积,并充分搅拌均匀。

8. 将配制好的培养基溶液进行高温高压灭菌处理,一般条件下为121摄氏度,压力为0.1MPa,持续20分钟。

三、注意事项1. 在配制过程中,要保持实验室卫生,使用无菌操作。

2. 使用高质量的试剂和蒸馏水,避免杂质的干扰。

3. 激素的浓度要根据实验需要进行调整。

4. 配制过程中要注意酸碱度的调节,尽量控制在5.8左右。

5. 琼脂的加入要充分搅拌均匀,避免结块。

6. 灭菌处理要按照规定的条件进行,确保培养基的无菌性。

通过以上步骤,我们可以成功地配制出MS基本培养基的母液。

这种培养基在植物组织培养、植物细胞和胚胎发生研究中起着重要的作用。

根据实验的需要,可以在母液的基础上进一步调整培养基的成分和浓度,以满足不同植物材料的培养要求。

希望以上内容对您有所帮助。

植物组织培养基配制

植物组织培养基配制

培养基的配‎制植物组织培‎养中常用的‎一种培养基‎是MS培养‎基。

MS培养基‎的配制包括‎以下步骤。

培养基母液‎的配制和保‎存MS培养基‎含有近30‎种营养成分‎,为了避免每‎次配制培养‎基都要对这‎几十种成分‎进行称量,可将培养基‎中的各种成‎分,按原量的2‎0倍或20‎0倍分别称‎量,配成浓缩液‎,这种浓缩液‎叫做培养基‎母液。

这样每次使‎用时,取其总量的‎1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液‎。

现将制备培‎养基母液所‎需的各类物‎质的量列出‎,供配制时使‎用。

大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO‎333 000KNO3 38 000CaCl2‎·2H2O 8 800MgSO4‎·7H2O 7 400KH2PO‎4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3‎ 1 240MnSO4‎·4H2O 4 460ZnSO4‎·7H2O 1 720Na2Mo‎O4·2H2O 50CuSO4‎·5H2O 5CoCl2‎·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4‎·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇‎(维生素B6‎)100盐酸硫胺素‎(维生素B1‎)100甘氨酸400以上各种营‎养成分的用‎量,除了母液Ⅰ为20倍浓‎缩液外,其余的均为‎200倍浓‎缩液。

上述几种母‎液都要单独‎配成1 L的贮备液‎。

其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法‎是:每种母液中‎的几种成分‎称量完毕后‎,分别用少量‎的蒸馏水彻‎底溶解,然后再将它‎们混溶,最后定容到‎1 L。

母液Ⅲ的配制方法‎是:将称好的F‎e SO4·7H2O和‎N a2-EDTA·2H2O 分‎别放到45‎0 mL蒸馏水‎中,边加热边不‎断搅拌使它‎们溶解,然后将两种‎溶液混合,并将pH调‎至5.5,最后定容到‎1 L,保存在棕色‎玻璃瓶中。

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植物组织培养MS培养基配方
(一)母液配制与保存
配制培养基时,如果每次配制都要按着杨成分表依次称量,既费时,又增加了多次称量误差。

为了提高配制培养基的工作效率,一般将常用的基本培养基配制成10~200倍,甚至1000倍的浓缩贮备液,即母液。

母液贮存于冰箱中,使用时,将它们按一定的比例进行稀释混合,可多次使用,并在配制较多数量的培养基时,降低工作强度,也提高试验的精度。

基本培养基的母液有四种:大量元素(浓缩20倍),微量元素(浓缩100倍),铁盐(浓缩200倍),除蔗糖之外的有机物质(浓缩100倍)
1大量元素
配制大量元素母液时要分别称量,分别溶解,在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中,以防出现沉淀。

倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保存。

2微量元素母液
在配制微量元素母液时,也应分别称量和分别溶解,定溶时不分先后次序,可随意加入溶量瓶中定容(表2),一般不会出现沉淀现象。

倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保有存。

3铁盐母液
由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用,只有基螯合物才能被植物吸收利用,因此需要单独配成螯合物母液表3)。

配制方法:称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠,分别用450ml的去离子水溶解,分别适当加热不停搅拌,分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中,将两种溶液混合在一起,最后用去离子水定溶于1000mL,倒入棕色贮液瓶中,贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。

先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。

4有机物母液
按表4中的量分别称取各种有机物,分别溶解后,用蒸馏水或去离子水定容于1000mL,放入细口瓶
配成1 mg/ml 。

各100 ml。

6-苄基腺嘌呤(6-BA)用0.5 N的HCl加热溶解。

萘乙酸(NAA)用少量无水乙醇溶解,再加蒸馏水。

6 Ms培养基配制程序
配好各种母液后,就可以准备配制培养基,程序入下
1.将已配好的的各种母液按顺序排好,根据母液倍数或浓度计算和吸取应相应时的各种母液和生长调节物质;计算和称取琼脂和蔗糖.1L培养基称蔗糖30g琼脂7g.
2.由于琼脂难溶解,所以先在烧杯中放入一定量的水,在微波炉里加热后搅拌,使之溶解.
3.按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液的顺序倒入锅中加热至沸后把溶解的琼脂加入。

4.加入蔗糖,特蔗糖溶解后,定溶所要体积。

5.调PH到5.6~5.8
6.分装到培养瓶中121℃21min灭菌后取出,放在水平台上凝固接种。

做愈伤组织时还应在每1L培养基中加入2mg/mL的2,4-D1mL,对于不同的材料,加入的量不同,根据不同的材料选择不同的浓度。

还可加入不同生长调节素达到更好的目的。

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