MS培养基配方
MS培养基的配制
MS培养基配方表
编辑本段注意事项:
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水
浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功,主要取决于对培养基的选择。
不同的培养基具有不同的特点,也就适合于不同的植物种类和接种材料。
在开展组织培养项目时,首先要对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择合适的使用。
组培用的培养基一般包括基础培养基和激素,但是植物激素的种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料有变化,因此各培养基配方中均不列入植物激素。
常用的基础培养基除了有MS培养基,还有B5培养基,N6培养基。
MS培养基的配置
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点:(1)保证各物质成分的准确性;(2)便于配置时快速移取;(3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(50X)称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16.5g②KNO31900 mg/L 19.0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4.4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3.7g⑤KH2PO4170 mg/L 1.7g注:CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O(MnSO4·H2O)22.3 mg/L(21.4 mg/L)223mg②ZnSO4·7H2O8.6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0.025mg/L 0.25mg④CuSO4·5H2O0.025 mg/L 0.25mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg/L 2.5mg⑥KI 0.83 mg/L 8.3 mg⑦H3BO36.2 mg/L 62 mg注:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,即含0.25 mg的量。
3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量Na2·EDTA37.3 mg/L 373 mgFeSO4·7H2O27.8 mg/L 278 mg注:配制时,两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。
MS培养基配制方法-new
MS 培养基一、大量元素母液1:大量A母液2:大量B母液3:Fe盐注:配制顺序如下1. 称取3.73 g Na2-EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A);2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B);3. 将B缓慢倒入A中混合,边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h;4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4:微量三、有机物质母液5:有机(不含肌醇)℃注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel;肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp(氨苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Str(链霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Cb(羧苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml NAA(萘乙酸)1M NaOH溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容,过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone, AS)称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解,母液浓度100 mM,-20℃避光保存,工作浓度100 ~ 200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素(6-BA和NAA),定溶至1000 ml,用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel (Sigma)4.4g或Agar 10g。
灭菌完后,在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA)。
ms培养基配方表
ms培养基配方表MS(Murashige and Skoog)培养基是细胞培养中常用的基础培养基,其命名来源自培养基组合者Murashige和Skoog。
MS培养基呈现出广泛的适用性,可用于各种组织培养和植物组织培养的研究。
其配方主要采用无机盐和有机物的混合物,以下是MS培养基的详细配方表。
1. MS微量元素添加剂:ZnSO4.7H2O = 8.6 mg/LH3BO3 = 3.1 mg/LMnSO4.4H2O = 0.25 mg/LCuSO4.5H2O = 0.025 mg/LKI = 0.83 mg/LNa2MoO4.2H2O = 0.025 mg/LCoCl2.6H2O = 0.025 mg/LFeSO4.7H2O = 27.8 mg/L2. MS盐基:NH4NO3 = 1650 mg/LKNO3 = 1900 mg/LCaCl2.2H2O = 440 mg/LKH2PO4 = 170 mg/LMgSO4.7H2O = 370 mg/L3. MS综合维生素添加剂:Myo-inositol = 100 mg/LNicotinic acid = 50 mg/LPyridoxine.HCl = 10 mg/LThiamine.HCl = 10 mg/LGlycine = 2 mg/LL-Asparagine.H2O = 150 mg/L4. MS植物生长调节剂添加剂:2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) = 0.5 ~ 5 mg/Lα-Naphthaleneacetic acid (NAA) = 0.5 ~ 5 mg/L6-Benzylaminopurine (BA) = 0.5 ~ 5 mg/LKinetin (Kin) = 0.5 ~ 5 mg/LGibberellic acid (GA3) = 0.1 ~ 10 mg/LAbscisic acid (ABA) = 0.1 ~ 10 mg/L以上是MS培养基的配方表,各种配方的配比可以根据实验需要适当调整。
配置MS培养基
配置MS培养基以配置1000ml培养基为例。
MS培养基所需材料:大量元素:KNO3、NH4NO3、MgSO4·7H2O、KH2PO4、CaCl2·2H2O微量元素:MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·7H2O、CuSO4.5H2O4、CoCL2.6H2O铁盐:七水合硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)、乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA·2H2O)有机物:甘氨酸、盐酸硫胺素(维生素B1)、盐酸吡哆醇(维生素B6)、烟酸、肌醇1、配置MS培养基所需母液。
2、称取5-7g琼脂,加入300ml蒸馏水,加热溶解直至完全溶解。
3、称取30g蔗糖倒入,搅拌溶解。
4、分别移取各种母液混合,微量母液使用移液器吸取。
5、将混合好的母液加入琼脂与蔗糖溶液中,均匀混合,加蒸馏水用量筒定溶至1L.6、用1N的HCL和1N的NaOH来调溶液PH值至5.7-5.8.8、稍微冷却后,按需要分装入培养容器中.牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧,高温灭菌。
注意事项:1.大量元素: CaCl2·2H2O单独配制置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制:铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合配置。
3.铁盐配制:将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制:储存在棕色无菌瓶中。
MS培养基配方
母液用量配液体时取量
大量元素(母液Ⅰ) mg/L 50mL
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ) 5mL
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ) 5mL
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ) 5mL
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB 5mL
烟酸100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸400
以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基配方列表
MS培养基配方列表MS培养基是一种经典的植物培养基,广泛应用于细胞、组织和器官培养研究中。
其配方很复杂,包含多种无机盐和有机物,下面就介绍一下MS培养基的配方列表。
1. 硝酸铵 (NH4NO3)硝酸铵作为氮源,在细胞的生长和分化过程中非常重要。
2. 磷酸一氢钾 (KH2PO4)磷酸一氢钾是植物生长的主要磷源。
3. 硫酸镁七水合物(MgSO4·7H2O)硫酸镁七水合物是植物生长中的必需元素,同样也是叶绿素合成的关键。
4. 硝酸钾 (KNO3)硝酸钾是一种重要的氮源,也是蛋白质合成的必需元素。
5. 硝酸钙 (Ca(NO3)2)硝酸钙是植物生长过程中不可或缺的钙源,在细胞分裂和细胞伸长过程中起着重要作用。
6. 硫酸铁 (FeSO4)硫酸铁是植物体内铁元素的重要来源,对叶绿素和细胞色素c等生物化学过程有着至关重要的作用。
7. 乙酸 (CH3COOH)乙酸可以被植物利用作为碳源,同时还可以促进细胞发育和生长。
8. 吲哚-3-乙酸 (IAA)吲哚-3-乙酸是一种重要的生长素,能够影响细胞分裂和扩散,促进细胞分化和器官发育。
9. 6-苄氨基嘌呤 (BA)6-苄氨基嘌呤是一种核酸类似物,可以促进细胞分裂和增殖,对重组DNA和RNA的生成和转录起着关键的作用。
10. 抗生素 (G418)抗生素G418能够抑制细胞生长和增殖,用于防止其它微生物的污染。
以上就是MS培养基的配方列表,每种成分的浓度和配比都需要根据具体的实验室需求进行调整。
在制备MS培养基过程中,需要严格控制pH值和温度,以确保培养基的有效性。
MS培养基是一种经典、可靠的植物培养基,使用得当可以为细胞、组织和器官培养研究提供强有力的支持。
组织培养实验-MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS培养基配方
MS培养基母液的配制:20×MS大量元素(1 L):38 g KNO3,33 g NH4NO3,8.8 g CaCl2·2H2O,7.4 g MgSO4·7H2O,3.4 g KH2PO4。
200×MS微量元素(1 L):0.166 g KI,1.24 g H3BO3,4.46 g MnSO4·4H2O,1.72 g ZnSO4·7H2O,0.05 g Na2MoO4·2H2O,0.005 g CuSO4·5H2O,0.005 g CoCl2·6H2O。
200×MS维生素和氨基酸(1 L):20 g肌醇,0.1 g烟酸,0.1 g盐酸吡哆醇(VB6),0.02 g盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1),0.4 g甘氨酸。
200×MS铁盐(1 L):5.56 g FeSO4· 7H2O,7.46 g Na2EDTA· 2H2O,先溶于500 mL ddH2O,加热,调pH至5.5,定容至1 L。
注意:配制大量元素母液时,为避免产生沉淀,要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用分析纯。
化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合,混合时需注意边搅拌边混合。
CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O 时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。
配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合,并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min),调pH值至5 .5,室温放置冷却后,再冷藏。
使用上述配好的母液,按照稀释倍数,配制基础MS培养液:1×MS大量元素,1×MS微量元素,1×MS维生素和氨基酸,1×MS铁盐,蔗糖30 g/L,定容后调节pH至5.8,高温高压灭菌。
MS培养基的配制
MS培养基配方表
编辑本段注意事项:
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水
浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功,主要取决于对培养基的选择。
不同的培养基具有不同的特点,也就适合于不同的植物种类和接种材料。
在开展组织培养项目时,首先要对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择合适的使用。
组培用的培养基一般包括基础培养基和激素,但是植物激素的种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料有变化,因此各培养基配方中均不列入植物激素。
常用的基础培养基除了有MS培养基,还有B5培养基,N6培养基。
ms培养基配方
ms培养基配方MS培养基是一种广泛用于植物细胞培养的抗生素添加的标准培养基,可以用于各种植物细胞生物学实验,是一种快速高效的植物细胞培养方法。
MS培养基(Murashige and Skoog,1962)主要由六种化学复配组成,包括氯化钾、磷酸钾、硝酸钾、谷氨酸、氯化钠和B5维生素混合液。
这六种补充物是培养细胞生长和发芽的重要成分,可以通过调整不同组分的比例来获得更高的营养价值,以满足不同植物的生长需求。
MS培养基的组成比例可以调整,以便满足不同植物的生长需求。
氯化钾是培养基中最重要的钾源,每克培养基含有0.5-2.0毫克氯化钾,磷酸钾作为钾的替代品,其含量为0.2-0.8毫克每克培养基。
硝酸钾是细胞生长所需的重要组分,每克培养基含有0.15-0.8毫克硝酸钾。
谷氨酸作为一种有机氮源,每克培养基含有0.1-0.4毫克谷氨酸;氯化钠可维持培养基的离子平衡,每克培养基含有0.1-0.5毫克氯化钠;B5维生素混合液通常为2-9%,用于维持正常细胞生长。
此外,MS培养基作为植物细胞培养的标准培养基,也可以添加24种氨基酸和多种无机盐,以满足细胞生长和发芽的需求。
24种氨基酸中,非必需氨基酸比饱和氨基酸高出2倍左右,作为某些特殊植物细胞特殊需要的氨基酸,如甘氨酸和苏氨酸,可以根据细胞的特殊需求以不同的比例添加进去。
常用的无机盐包括硫酸钾、硫酸钠、氟化钠、氯化钠、酸钠、硫酸胺和亚硝酸钠等,细胞在此无机盐环境中才能正常发芽。
MS培养基是根据美国科学家Murashige和Skoog(1962)提出的植物培养技术来配制的,是一种标准化的植物细胞培养基配方,由营养物质如钾、磷、氮和铁等成分通过恰当的比例混合而成。
它具有组成比例可调、配方固定、细胞发芽率高、培养效率高、平衡缺乏及对细胞有利等特点,常用于植物细胞的培养实验,广泛用于植物细胞的生物学实验和栽培。
MS培养基的制备和使用步骤要求严格,首先,经过精制的培养基配方应由专家进行审核,确保其品质和效果,然后将所有组分称量、混合、离心、灭菌并过滤后,使其具有良好的稳定性。
MS培养基的配置
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点:(1)保证各物质成分的准确性;(2)便于配置时快速移取;(3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(50X)称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16.5g②KNO31900 mg/L 19.0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4.4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3.7g⑤KH2PO4170 mg/L 1.7g注:CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O(MnSO4·H2O)22.3 mg/L(21.4 mg/L)223mg②ZnSO4·7H2O8.6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0.025mg/L 0.25mg④CuSO4·5H2O0.025 mg/L 0.25mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg/L 2.5mg⑥KI 0.83 mg/L 8.3 mg⑦H3BO36.2 mg/L 62 mg注:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,即含0.25 mg的量。
3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量Na2·EDTA37.3 mg/L 373 mgFeSO4·7H2O27.8 mg/L 278 mg注:配制时,两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意:1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取,分别将各种化合物称量后,除CaCl2·2H2O单独配制外,其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
1.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
2.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
.生长调节剂母液配制:为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA),赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和玉米素(ZT)可先用少量95%酒精溶解,然后加水,如溶解不完全再加热。
MS培养基母液配方
MS培养基母液配方1、大量元素母液(10倍,1 L)NH4NO316.5 g KH2PO4 1.7 g(单独溶解后混匀)KNO319 g CaCl2·2H2O 4.4 g(单独溶解后混匀)MgSO4·7H2O 3.7 g(单独溶解后混匀)2、微量元素母液(200倍,1 L)KI 0.166 g Na2MoO4·2H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO4·5H2O 0.005 gMnSO4·4H2O 4.46 g CoCl2·6H2O 0.005 gZnSO4·7H2O 1.72 g3、铁盐母液(200倍,500 mL;定容后调pH至5.5,加热至90℃左右螯合15~30 min)EDTA二钠(Na2·EDTA·7H2O) 3.73 gFeSO4·7H2O 2.78 g4、有机母液①(200倍,500 mL)盐酸硫胺素(VB1)0.01 g烟酸0.05 g盐酸吡哆醇(VB6)0.05 g5、有机母液②(200倍,500 mL)肌醇10.0 g6、有机母液③(200倍,500 mL)甘氨酸0.2 g7、植物激素1)0.1mg/mL 的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250mL。
2)0.1mg/mL NAA:取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后,再加水定容至250mL。
3)2,4-D:2,4-二氯苯氧乙酸,相对分子量为221.0,用乙醇做助溶剂,cas号为94-75-7,分子式为,C8H6Cl2O30.2mg/mL 的2,4-D溶液:40mg 2,4-D,用少量95%乙醇溶解后,再用蒸馏水定容至200ml。
MS培养基的配制步骤
MS培养基的配制步骤MS培养基的配制步骤大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5?5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入:2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、[烈宜醄NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0?1 mg/mL)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH 溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0?1 mg/mL的母液。
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MS 培养基配方
1、配置MS母液
母液配置:加热都是用温水浴加热,全部都要避光保存,用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可
表2.1大量元素母液
药品20x g/L 500ml(20 x)KNO338g 19g
NH4NO333 g 16.5g
MgSO4•7H2O7.4 g 3.7g
CaCl2 6.644g 3.322g
KH2PO4 3.4g 1.7g
溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解
CaCL2.2H2O 4.4g/L
表2.2微量元素母液
药品100x g/L 500ml(100x g/L)
KI
H3BO3
MnSO4.4H2O
ZnSO4.7H2O
Na2MoO4.2H2O
GuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g
0.62
22.3 g
0.86 g
0.025 g
0.0025 g
0.0025 g
0.0415 g
0.31 g
1.115 g
0.43 g
0.0125 g
0.00125 g
0.00125 g
溶于100ml蒸馏水,定容至500ml
表2.3有机母液
药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g
烟酸0.05g0.025g
VB60.05g0.025g
VB10.1g0.05g
甘氨酸0.2g0.1g
表2.4铁盐母液
药品100x g/L500ml
FeSO4•7H2O 2.78g 1.39g
Na2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g
铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,加水定容至500ml,置于小口瓶中,贴上标签
2、固体MS培养基材料
•找到4种母液:大量元素,微量元素,有机微量元素,铁盐母液
•蔗糖,琼脂锥形瓶
MS培养基配方:母液都稀释至1x
MS培养基配方(1L)
母液体积或重量(1L) 200ml
大量元素20x50mL 10ml
铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml
有机100x10mL 2ml 蔗糖15g(15g/L)3g
琼脂8g(8g/L) 1.6g
PH先调至 5.85-5.88,最终灭菌后
pH接近5.8
1)。