实验一MS培养基的配制
ms培养基配方表
ms培养基配方表ms培养基是一种常用的细胞培养基，用于无菌条件下培养哺乳动物细胞，特别是鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryo Fibroblast,MEF）。
它是由多种有机和无机化合物组成的复杂混合物，可以提供细胞生长所需的必需氨基酸、糖类、维生素和微量元素等营养物质。
同时，它还包含有机缓冲剂和盐类，可以调节培养品的 pH 值和离子浓度，保持培养条件的稳定性。
下面介绍 ms培养基的配方表：MS培养基水相1. 将1L 去离子水（DI水）加入1mol/L NaCl 至5mL2. 加入HEPES缓冲液（1mol/L）27.7g，调节至pH7.2-7.43. 加入葡萄糖25.0g，混合直至葡萄糖完全溶解4. 加入 L-谷氨酸1.42g，细胞培养I 类和 II 类所需濃度5. 加入 L-苏氨酸0.07g，细胞培养所需濃度6. 加入 L-半胱氨酸0.16g7. 加入 L-赖氨酸0.07g8. 加入 L-缬氨酸0.07g9. 加入L-异亮氨酸0.07g10. 加入L-亮氨酸0.14g11. 加入L-丙氨酸0.14g12. 加入L-天冬氨酸0.15g13. 加入L-芸香氨基酸0.42g14. 加入 L-色氨酸0.03g15. 加入 L-酪氨酸0.03g16. 加入 L-精氨酸0.17g17. 加入 L-组氨酸0.03g18. 加入 L-甘氨酸0.10gMS培养基固相1. 加入 NaHCO3（7.5%）4mL，细胞培养所需濃度2. 加入 4-(2-羟乙基)吡啶盐酸盐（HEP）2g，细胞培养所需濃度；过度使用可导致凝块形成3. 加入 MgSO4（7H2O）0.94g，细胞培养所需濃度4. 加入 KH2PO4 0.17g，细胞培养所需濃度5. 加入 NaH2PO4（H2O，2. H2O）0.19g，细胞培养所需濃度6. 加入 Na2HPO4（7H2O）3.05g，细胞培养所需濃度7. 加入次黄嘌呤（NEAA）1mL，必需的非必需氨基酸，促进细胞生长8. 加入乳酸钠2.72g，利用减少氧淤积，促进细胞生长9.加入硫酸铜子（10-5M)）1mL，为MEF的细胞类型提供最佳的增生所需注：以上配方根据MS原始文献略作调整，如果在实验中出现差异，请根据实际情况微调。
MS培养基配方
MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置：加热都是用温水浴加热，全部都要避光保存，用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml（20 x）KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml（100x g/L）KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，加水定容至500ml，置于小口瓶中，贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液：大量元素，微量元素，有机微量元素，铁盐母液•蔗糖，琼脂锥形瓶MS培养基配方：母液都稀释至1xMS培养基配方（1L）母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g（15g/L）3g琼脂8g（8g/L） 1.6gPH先调至 5.85-5.88，最终灭菌后pH接近5.81）。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS培养基的配制
MS培养基的配制1、配制几种母液（1）配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
分别称取名称重量名称重量NH4NO3165g KH2PO417gKNO3190g CaCl2·2H2O44gMgSO4·7H2O37g各自配成1L的母液。
各自倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称重量名称重量KI0.083g Na2MoO4·2H20.025gOH3BO3 0.62g CuSO4·5H2O0.0025gMnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O0.0025gZnSO4·7H2O0.86g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
注：CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
分别称取CuSO4·5H2O 0.05g，CoCl2·6H2O 0.05g各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。
（3）配制MS有机母液一般配制成100倍MS有机母液。
依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称重量名称重量肌醇10g盐酸硫胺素（VB1）0.01g烟酸0.05g甘氨酸0.2g盐酸吡哆醇（VB6） 0.05g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液一般配制成100倍MS铁盐母液。
依次称取EDTA二钠 3.73g，FeSO4·7H2O 2.78g（注：溶好一个后，再加下一个）配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。
（5）激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。
实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
其他常用试剂的保存
配制好的其他试剂应保存在密封的玻璃瓶中 ，并放置在阴凉干燥处。避免阳光直射和高 温环境，以防变质。对于一些易挥发或易氧 化的试剂，应特别注意密封保存和使用。
04
实验操作流程与注意事项
03
04
配制好的培养基应尽快使用，避 免长时间存放。
实验安全须知
避免直接接触培养基和化学试剂，如不慎接 触，应立即用大量清水冲洗。
对于有毒有害的化学试剂，应遵循相关规定 进行操作和处理，不得随意倾倒或排放。
在实验过程中，应注意防范火灾、爆炸等安 全事故，遵循实验室安全规定。
05
实验结果与数据分析
03
常用试剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制
根据实验需求，将植物生长调节剂溶解于相应的溶剂中，如 水、乙醇等。按照所需的浓度进行配制，并充分摇匀。
植物生长调节剂的保存
配制好的植物生长调节剂应保存在低温、避光、干燥的环境 中，避免长时间暴露在空气中，以防氧化失效。
无机盐与微量元素的配制与保存
实验过程中严格控制了操作步 骤和试剂质量，确保了实验结 果的准确性和可靠性。
实验结果符合预期，证明了实 验方案的有效性和可行性。
实验中存在的问题与改进建议
实验中存在试剂配制误差和操 作不规范的问题，可能导致实
验结果的不准确。
建议加强实验操作规范性培 训，提高实验人员的操作水 平，确保试剂配制的准确性
熟悉实验操作流程与注意事项
实验操作流程
准备所需试剂和器材→按照配方配制 母液和常用试剂→过滤除菌→分装→ 储存。
MS培养基配制方法-new
MS 培养基一、大量元素母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐注：配制顺序如下1. 称取3.73 g Na2-EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中，并置于70℃预热(A)；2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B)；3. 将B缓慢倒入A中混合，边倒边搅动，置于70 ℃水浴锅中螯合2 h；4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4：微量三、有机物质母液5：有机（不含肌醇）℃注：配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp（氨苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Km（卡那霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Str（链霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Cb（羧苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml NAA（萘乙酸）1M NaOH溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解，双蒸水定容，过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone, AS)称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解，母液浓度100 mM，-20℃避光保存，工作浓度100 ~ 200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中，混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素（6-BA和NAA），定溶至1000 ml，用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel （Sigma）4.4g或Agar 10g。
灭菌完后，在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素（IAA）。
实验一 MS培养基配制和灭菌
实验一MS培养基配制和灭菌一．目的和要求：1. 学会MS培养基的制作方法;2. 掌握高压灭菌的方法和基本操作。
二、仪器与试剂1. 仪器：灭菌锅、解剖刀、枪状镊子、烧杯（500ml）、培养皿、移液管等2. 试剂：MS的Macro-e、Micro-e、有机母液、Fe盐、肌醇蔗糖，琼脂粉，1N NaoH 和1N HCl三、方法步骤（一）配方设计: 以MS为基本培养基（mg/L）（二）配制培养基(1)溶化琼脂：量取300ml左右蒸馏水，加入4.8g琼脂粉，加热溶解直至完全融化。
(2) 各种母液的吸取：Macro-e 50mlMicro-e 1ml有机成分1mlFe盐5ml肌醇10ml加在一起，倒入烧杯（1L)（3）加入糖:称取30g 蔗糖，溶于溶有琼脂的300ml 蒸馏水中。
（4）根据实验设计，量取生长调节剂:加在一起，倒入烧杯。
（5）定容:加蒸馏水（用量杯）。
（6）调节pH至，用pH试纸进行测定，用1molHcl或1Mol NaoH调节。
（7）分装:30～40 ml/瓶6，培养基勿碰三角瓶口。
（8）用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
（三）灭菌：用高压蒸汽消毒器灭菌，其压力为～,温度为120～126℃，保持15~20 min。
具体操作步骤：1. 加水；2. 把包扎好的培养基装入高压锅；3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀；4. 加热；5. 排除冷空气；6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到1Kg位置时，开始计算灭菌时间，一般在1Kg 压力(121℃)下灭菌15~20 分钟即可，但要注意保持稳定压力。
7. 灭菌时间达到20 分钟后，停止加热，待压力自动降到0磅时，打开放气阀，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。
四.作业1. 总结配制培养基的注意事项。
2. 制作培养基前为何要提前配制母液实验二短柄五加无性系建立一．目的和要求：1.学习并掌握外植体的消毒方法及具体操作;2. 掌握无菌操作技术。
MS培养基的配制
一、MS培养基的配制1. 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的10倍或100倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
2. 按配方表配制MS培养基母液：大量元素50×，微量元素配100×，铁盐、有机成分配制成100×，母液贮存于4℃的冰箱中。
激素配成浓度为0.1mg/mL.3. 配制各种母液是，成分顺序加入，上一成分溶解后再加下一成分。
钙液和铁盐都单独配制。
生长素配制时，先用微量1MNaOH溶解，再以蒸馏水定容；细胞分裂素配制时，先用微量0.1MHCl溶解，再以蒸馏水定容。
二、MS母液配制取作表序号药品名称MS量(mg/L）扩大倍数母液量(g)定容取作量(mg/L)甲液NH4NO3KNO3MgSO4.7H20KH2PO41650190037017050×41.2547.59.254.25500ml 20钙液无水CaCl2440 100×11 500ml 20乙液MnSO4.4H2O或MnSO4. H2OZnSO4.7H2OH3BO3KI22.316.98.66.20.83100× 1.120.850.430.310.0415500ml 10铁盐Na2.EDTA.2H2OFeSO4.7H2037.227.8100× 1.861.39500ml 10有机成分盐酸吡哆醇(VB6)烟酸甘氨酸0.50.52100×0.0050.0050.02100ml 10丙液ⅠNa2MoO4.2H2O.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.250.0250.025100×0.01250.001250.00125500ml 10丙液Ⅱ肌醇100 100× 2 200ml 10丙液Ⅲ盐酸硫胺素(VB1) 0.4 50×0.02 100ml 2附注琼脂5.5-6.5g/L 蔗糖30g/LpH5.8-6.2备注：1钙液的母液量由于易沉淀所以取11g2丙液Ⅰ由于取的量太少所以先去12.5mg,溶于10mL水，再取1mL溶液稀释三、注意事项1、药品的质量问题：为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注意药品质量，国内药品采用国际上通用标准，分为：一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级；二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级；三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级；四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。
MS培养基的配置
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（50X）称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
注：CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0．25 mg的量。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注：配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。
混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母液（200X）称10升量溶解在50ml蒸馏水中。
配1升培养基母液5ml。
二、MS固体培养基的配制1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。
2、取少量的蒸馏水（约为配制培养基量的2/3）加入烧杯中。
注意：配500ml培养基用1000ml烧杯。
3、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
每1000ml培养基，需要：MS大量元素母液 20mlMS微量元素母液 10mlMS铁盐母液 10mlMS有机物母液 5ml4、通过计算，用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。
5、加入蔗糖（30g/L），溶解。
6、定容：用容量瓶。
7、调pH值：用0.1 N 和0.5N 的NaOH，一般pH=5.8。
注意：①经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2—0.8，故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。
MS培养基的配制-母液法
• 配好的培养基一般放置1-2条观察无菌落 后方可使用
• 配好的培养基在15-20℃存放,并尽快在 一个月内使用
组培室的卫生?
• 定期消毒,熏蒸 • 组培污染物的处理 • 污染的培养材料或培
养瓶,灭菌后洗涤 • 升汞等,回收后集中
灭菌温度与灭菌时间和培养基体积的关系
培养基的配制（母液法）
• 培养基配制过程 • /v_show/id_XMTE2Nzg
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0.025
25
铁盐
Na2-EDTA
37.3
3730
FeSO4˙4H2O
27.8
100
2780
1000
10
微生素等
Gly VB1 VB2 VB6 肌醇
2.0
100
0. 1
5
0.5
525
100
5000
母液的配制
• 以MS培养基为例，其母液如下： • MS大量组份（扩大20倍）； • MS微量（扩大1000倍）； • MS有机组分（扩大50倍）； • MS铁盐（扩大100倍）；
2，配制分工：
• 1.配制母液 • MS大量------第1组 • MS微量------第2组 • MS有机------第3组 • MS铁盐------第4组 • 6-BA母液（50mL;1mg/ml） ------第5组 • NAA母液（50mL;1mg/ml） ------第6组 • 2,4-D母液（50mL,1mg/,mL)---第7组 • 0.1% 溶液升汞，2000mL ---第8组 • 来苏尔液—1000MmL-----第9组 • 75%酒精 ------------1000mL---第10组
组织培养实验-MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
实验一 MS培养基母液的配制与保存
实验一MS培养基母液的配制与保存一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2、掌握培养基各种母液的保存方法。
二、仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
三、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量（10×）50升量（50×）①NH4NO31650 mg 16.5g②KNO31900 mg 19.0g③CaCl2·2H2O （CaCl2）440 mg （） 4.4g④MgSO4·7H2O（MgSO4）370 mg （） 3.7g⑤KH2PO4170 mg 1.7g2、MS微量元素母液（100×）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量100升量（100×）①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22.3mg（21.4 mg）223mg（214 mg）②ZnSO4·7H2O8.6 mg 86mg③H3BO3 6.2 mg 62 mg④KI 0.83 mg 8.3 mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg 2.5mg⑥CuSO4·5H2O0.025 mg 0.25mg⑦CoCl2·6H2O0.025mg 0.25mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0.25 mg×10=2.5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0.25 mg的量。
ms培养基的制备实验报告
ms培养基的制备实验报告
实验目的：
本实验旨在制备ms培养基，为细胞培养提供适宜的营养环境。
实验原理：
ms培养基是一种适用于植物细胞培养的基础培养基，其主要成分包括无机盐、糖类、维生素和植物激素等。
本实验制备ms培养基的主要步骤包括配制无机盐溶液、配制糖类溶液和调配维生素、植物激素溶液等。
实验步骤：
1. 配制无机盐溶液：按照ms培养基的配方，称取所需的无机盐粉末，加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
2. 配制糖类溶液：按照ms培养基的配方，称取所需的糖类粉末，加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
3. 调配维生素、植物激素溶液：按照ms培养基的配方，称取所需的维生素和植物激素粉末，加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
4. 将无机盐溶液、糖类溶液和维生素、植物激素溶液按照一定比例混合，得到ms培养基溶液。
5. 调节溶液的pH值：使用pH计测定ms培养基溶液的pH值，并根据需要调节pH值至适宜范围。
6. 将培养基溶液过滤：使用0.22μm的滤膜将ms培养基溶液过滤，以去除其中可能存在的微生物和杂质。
实验结果：
经过上述制备步骤，我们成功制备了一定量的ms培养基溶液。
经过pH调节和滤膜过滤处理，该溶液清澈透明，无菌。
经过质量检测，该溶液满足细胞培养的要求，可以用于细胞培养实验。
结论：
本实验通过一系列制备步骤，成功制备出适用于植物细胞培养的ms 培养基溶液。
该溶液满足细胞培养的营养需求，可以用于后续细胞培养实验。
MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
实验一MS培养基的配制
0.005
ZnSO4·7H2O 1.72 g
（3）配制MS铁盐母液
配制成200倍l L铁盐母液，依次称取:
EDTA二钠（Na2·EDTA·7H2O） 7.46
g
FeSO4·7H2O
5.56 g
（4）配制MS有机母液①
配制成200倍1 L有机母液，依次称取：
盐酸硫胺素（VB1） 烟酸
0.02 g 0.1 g
在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、 用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花 费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大 量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分 别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰 箱内保存。
当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各 种母液稀释即可。
三、实验材料与器具
1、用具器材
灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量 桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。
2、药品试剂
蒸馏水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、 琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。
四、实验步骤
1、母液配制
（1）配制10倍1 L MS大量元素母液
NH4NO3
KNO3 g
16.5 g 19 g
KH2PO4
1.7 g
CaCl2·2H2O 4.4
MgSO4·7H2O 3.7 g
（2）配制MS微量元素母液
配制成200倍1 L母液，依次称取:
KI
0.166 g
H3BO3
1.24 g
MnSO4·4H2O 4.46 g g
Na2MoO4·2H2O 0.05 g
CuSO4·5H2O 0.005 g
CoCl2·6H2O
母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数
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实验一MS培养基的配制
一、实验目的：
了解MS培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验材料与仪器：
电子天平、量筒、烧杯、玻璃棒、组培瓶、移液器、6种母液、白沙糖、琼脂、氢氧化钠、盐酸、酸度计或pH试纸。
三、实验方法与步骤
1、母液配制
（1）大量元素(母液Ⅰ) (2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(6－BA，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。
2、1 L固体MS培养基配制
（1）用电子天平称出8 g琼脂粉和 30 g蔗糖放在烧杯中，加入少量的蒸馏水在微波炉中加热使之溶解。
（2）用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB 各10ml。
（3）最后用蒸馏水定容到1 L；用 2 mol/L NaOH 或 2 mol/LHCL 溶液调节培养基的 pH 值至 5.8～6.0。
（4）用量筒量取100ml液体培养基分装在组培瓶里，再用移液器取适量的6－BA和NAA放入组培瓶里。
（5）在 1.1kg/cm2 压力（约 121℃）高压灭菌锅中灭菌 15～20 min；灭菌后，放置于室温自然冷却凝固待用。
3、实验分组
本实验分五组，每组负责配制一组培养基组合：
（1）MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
（2）MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA
（3）MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
（4）MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
（5）MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA
4、其他需要灭菌的实验材料
剪刀、镊子、蒸馏水、滤纸、培养皿、组培瓶。
四、分析
1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。
这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。
另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累。
2. 配固体MS培养基时一定要调pH值，如果pH值较小，培养基不易凝固。
3. 有些激素可以高压灭菌，如6-BA和NAA，有些则不能高压灭菌，如IAA 和玉米素(ZT)。