无血清培养基介绍
无血清培养基的组成和作用介绍
无血清培养基的组成和作用介绍在细胞培养中大多数动物细胞体外培养时都需要加入血清提供营养，但由于血清存在很多潜在风险，促使科学家们进行无血清驯化细胞的研究。
所以，在1976 年Hayashi 等人提出了无血清培养基的概念，此后，大量生物医药学家开始对无血清培养基进行研制。
80 年代后，无血清培养基的研究与制备广泛发展，到 90 年代已有一些商业化无血清培养基。
与传统的培养基相比较，无血清培养基是不含动物血清，但仍可以维持细胞在体外较长时间生长、增殖的一种培养基。
无血清培养基由于其组成成分相对清楚，制备过程简单，在现代生物技术学领域得到广泛应用。
无血清培养基的组成和作用1.葡萄糖动物细胞培养基中添加的糖主要是葡萄糖，添加量通常在5-25mM之间。
葡萄糖的主要代谢途径是通过糖酵解代谢成丙酮酸，进而降解成乳酸。
这最终会导致乳酸在培养基中积累。
代谢流研究分析发现，只有一小部分（约20-30%）的葡萄糖流向其它途径包括三羧酸循环和戊糖磷酸旁路。
除了葡萄糖，研究发现，动物细胞也能利用谷氨酰胺作为主要的能量物质。
谷氨酰胺的添加量常常高于其它氨基酸（2-4mM），也是很多细胞系生长需要的物质。
在大多数情况下，谷氨酰胺和葡萄糖会分别被快速利用，在耗尽之前，会引起细胞生长抑制。
2.氨基酸细胞不同，所需的特定营养也不同，同理，它们所需的必需氨基酸（动物体内不能自身合成）也是不同的。
一些非必需氨基酸通常也会加入到培养基中，这是因为有些细胞系自身不能产生相应的氨基酸，从而会限制细胞生长。
培养基中氨基酸限制会降低细胞生长速率和/或最高细胞密度。
其它非必需氨基酸细胞可以产生，但是不足以维持优生长。
一些氨基酸如谷氨酰胺在培养基中不稳定，因此需要单独加入以维持其在一个合适的浓度水平。
支链氨基酸被很多细胞包括MDCK细胞、人成纤维细胞、小鼠骨髓瘤细胞和BHK 细胞等消耗得特别快。
研究发现，当杂交瘤细胞利用谷氨酰胺利用率很低的时候，支链氨基酸被氧化的更多。
植物源无血清培养基的研究进展
科技视界SCIENCE & TECHNOLOGY VISION0 引言与传统的培养基相比，无血清培养基不含动物血清或其他生物提取物，能支持细胞在体外长时间生长和繁殖，是继天然培养基和合成培养基之后的第三类培养基。
目前商业化的无血清细胞培养基有明显的特征区别，通常可分为4种类型：无血清培养基（Serum -free medium ，SFM ）、 无动物源培养基（Animal -component -free medium ，ACFM ）、无蛋白培养基（Protein -free medium ，PFM ）、化学成分限定培养基（Chemically defined medium ，CDM ）。
无血清培养基中没有添加血清，但会添加一些额外的成分来维持细胞的生长，因此，无血清培养基通常是由基础培养基和合适比例的激素、生长因子、贴壁因子和结合蛋白等添加因子组成。
在过去的几十年里，血清已经被各种成分所取代，如重组表皮生长因子（Epidermal growthfactor ，EGF ）、胰岛素、转铁蛋白、皮质醇，最常见的是牛垂体提取物（Bovine pituitary extract ，BPE ）用于培养贴壁角质形成细胞。
在基础培养基中添加血清的主要目的是提供促细胞生长成分，作为营养物质、激素、生长因子以及蛋白酶抑制剂，同时血清能够使细胞贴壁以及平铺在细胞瓶中，提供特殊的保护机制来避免细胞的机械损伤和剪切力，还可以抑制有毒部分对细胞的冲击，提高培养基的缓冲能力[1-3]。
血清中含有可以转运脂类、脂肪酸、激素和微量元素（尤其是铁元素）的白蛋白和转铁蛋白。
但是随着欧洲许多国家爆发疯牛病（Bovine spongiform encephalopathy ，BSE ），血清的应用受到越来越多的质疑。
由于批量使用的动物血清来源于自然生物体（主要是新生牛），它本身携带和采集、加工过程有污染外源微生物和致病因子的可能，因此，使用新生牛血清存在作者简介：张凯茵，南京财经大学本科生，主要研究方向为粮油副产品生物转化技术。
无血清细胞培养基研究报告
无血清细胞培养基研究报告北京大学王磊1.无血清培养基概述无血清培养基(Serum-Free Media)，通常以SFM表示，顾名思义，就是在细胞培养中不需要添加血清，但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。
无血清培养基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等，能减少血清带来的不利因素，使细胞培养的条件更稳定。
经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。
采用无血清培养可简化纯化和鉴定各种细胞产物的程序，避免病毒污染造成的危害。
2.无血清培养基的应用和主流模式目前在大规模动物细胞的培养中已经普遍适用于无血清培养基。
在疫苗生长、单抗和各种生物活性蛋白等生物制品的应用领域中，优化无血清培养基的成分可使不同的细胞在最有利于细胞生长和表达目的产物的环境中维持高密度培养，降低生产成本。
在人类细胞培养中，应用无血清培养基还能有选择性地控制及避免成纤维细胞的过度生长。
在无血清培养条件下，某些细胞的生长量和抗体的产量甚至较有血清时高出数倍。
除生产生物制品外，无血清培养基也被广泛应用于细胞生物学、药理学、肿瘤学领域：(1)研究细胞的分化条件：无血清培养基其组成可以是完全确知的化学物质，因而可根据研究的需要增减具有重要生物活性物质的种类和数量。
这就为研究细胞分化的条件提供了有效的手段。
(2)用于激素、生长因子和药物等与细胞相互作用的研究。
(3)用于从多种细胞混杂的培养中选择目的细胞：通过对无血清培养中的某些成分的取舍，可抑制原代组织培养物中非目的细胞的过度生长，达到选择目的细胞的目的。
(4)肿瘤病理学和病因学的研究：如用于研究致癌因子对细胞的影响，研究肿瘤细胞对可能触发正常细胞终末分化的外周信号的反应能力，或用于研究正常细胞与肿瘤细胞的生长和移行与基底膜信号的关系等。
(5)无血清培养基在生物制品生产中的得到广泛应用，国内外的很多生产单位都在致力于如何将无血清培养基与发酵罐培养技术更好的结合应用。
无血清培养基介绍
无血清培养基介绍无血清培养基是一种无需添加动物血清的培养基，适用于细胞的体外培养。
相较于传统的含有动物血清的培养基，无血清培养基具有许多优势，如避免了潜在的传染病传播风险、提高了细胞培养的一致性和可重复性，同时也降低了培养的成本。
本文将介绍无血清培养基的成分、制备方法以及应用领域等方面的内容。
无血清培养基的基本成分包括碳源、氮源、微量元素、维生素、生长因子、胶原蛋白和附加物等。
碳源常用的有葡萄糖、果糖等，氮源常用的有谷氨酸、天冬酰胺等。
微量元素是重要的细胞营养物质，包括铁、锌、铜、锰等，其浓度一般较低。
维生素在细胞的代谢过程中起到重要的辅酶和辅因子的作用，为细胞的正常生长提供必需物质。
生长因子是一类具有特定生物活性的蛋白质，能够直接影响细胞的增殖和分化。
胶原蛋白是一种结构性蛋白质，可以提供细胞粘附的基质支持。
其他附加物如氨基酸、核酸、脂质等也可以根据具体需要添加到培养基中。
无血清培养基的制备过程主要包括消毒、配制、滤过、灭菌等步骤。
消毒包括培养器皿、玻璃棒、试剂瓶等的高压蒸汽灭菌，确保杂菌的清除。
配制过程中需要将不同成分按照一定比例配制成培养基液。
滤过是为了除去微生物和大分子物质，常用的有0.22μm的滤膜过滤。
灭菌是一种无菌操作，可以使用高压蒸汽灭菌器或者紫外线灭菌器，确保培养基的无菌性。
无血清培养基在许多领域具有广泛的应用。
在生物医学研究领域，无血清培养基可以用于细胞培养、细胞扩增和细胞实验等。
细胞培养是生物医学研究中非常重要的实验手段，可以用于研究细胞的生理和病理功能，评估药物的毒性和疗效等。
在生物制药领域，无血清培养基可以用于生产重组蛋白、疫苗和细胞疗法等。
传统的生物制药方法中，常使用含有动物血清的培养基，但是这种方法存在一些问题，如潜在的传染病传播风险、批次差异大等。
无血清培养基不仅可以提高生产一致性和控制性，还可以降低成本和生产风险。
总结来说，无血清培养基是一种无需添加动物血清的培养基，具有许多优势，如避免了传染病传播风险、提高了培养一致性和可重复性，降低了培养的成本。
无血清培养基的介绍
无血清培养基的介绍经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。
采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。
无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。
但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。
虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。
而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。
因此研制出无血清培养基一直是生物科学工作者努力的目标。
无血清培养基的基本配方基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。
用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。
添加组分包括以下几大类物质：(1)促贴壁物质：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。
它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。
纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。
(2)促生长因子及激素：针对不同细胞添加不同的生长因子。
激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞必不可少的，如胰岛素。
(3)酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中必不可少须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。
最常用的是大豆胰酶；抑制剂。
淋巴细胞无血清培养基（无酚红）产品说明书
产品说明书淋巴细胞无血清培养基（无酚红）产品型号：HIPP-T009描述DrivingM®HIPP-T009淋巴细胞无血清培养基是上海倍谙基生物科技有限公司针对血液细胞的生长和分化的特点自主设计开发的个性化无血清基础培养基。
该培养基包含碳水化合物、氨基酸、维生素、金属离子、药用级别人血白蛋白等营养组分，不含酚红和抗生素。
本产品未加入细胞生长和扩增所需的细胞因子。
适用于下列人血液细胞的体外无血清培养： 外周血单个核细胞（PBMCs）T细胞NK细胞CAR-TCIKCAR-NK造血干细胞（CD34+）多种细胞系（NK-92、NK-92MI、K562和Jurkat）配方DrivingM®HIPP-T009淋巴细胞无血清培养基配方知识产权为上海倍谙基生物科技有限公司所有，如需获悉额外信息，请与公司技术支持部门联系。
声明请参照DrivingM®HIPP-T009淋巴细胞无血清培养基产品信息及使用说明使用本产品。
本产品在GMP条件下生产。
保存及有效期密封保存于2-8℃的避光环境中，避免冷冻。
上海倍谙基生物科技有限公司未开封保存于上述条件下，培养基的有效期为12个月。
开封后建议1个月内使用。
产品失效本产品为淡黄色的透明液体，密封保质期为12个月。
本品包装为经过0.22μm滤膜除菌后的无菌产品，若出现以下情况可认为本产品失效，请及时与上海倍谙基生物科技有限公司的技术支持部门/售后服务部门联系。
液体内出现肉眼可见的颗粒物或絮状物。
液体浑浊。
包装破损。
液体渗出。
使用说明使用该培养基培养描述部分所述细胞时，细胞培养过程中均无需添加血清、血浆或血清替代物，可根据细胞类型灵活选择恰当的细胞因子添加策略和培养工艺。
上海倍谙基生物科技有限公司。
无血清培养基制备
无血清培养基制备
无血清培养基是指在培养基中不添加任何动物血清成分。
制备无血清培养基可以通过以下步骤：
1. 制备基础培养基：选择合适的基础培养基，如DMEM （Dulbecco's Modified Eagle's Medium）、RPMI 1640
（Roswell Park Memorial Institute 1640）等。
2. 补充必要的营养物质：除了基础培养基外，无血清培养基还需要添加必要的营养物质，如氨基酸、脂质、细胞生长因子等。
可以根据所培养细胞的需求来进行选择和添加。
3. 添加替代物：血清中含有的一些成分，在无血清培养基中可以使用替代物来代替，如白蛋白、胶体明胶、凝血酶等。
4. pH调节：将培养基的pH调节到合适的范围，通常在7.0-
7.4之间。
5. 滤过和灭菌：将制备好的培养基进行滤过以去除可能存在的微生物和异物，并进行高温高压灭菌。
需要注意的是，不同类型的细胞对培养条件的要求不同，所以制备无血清培养基时需要根据具体的细胞类型来选择添加的营养物质和替代物。
此外，无血清培养基可能无法完全替代血清培养基，所以在实际应用中需要根据具体实验要求进行优化。
无血清培养基及应用
无血清培养基及应用
无血清培养基及应用
无血清培养基专门用来在无血清条件下培养特殊类型的细胞或进
行特殊应用。
无血清培养基的使用展现了一种重要的培养方法：允许细胞培养
在一套限定条件下进行，尽可能避免受到干扰参数的影响。
使用无血清培养的优点：
? 增加确定性。
? 性能更加一致。
? 容易进行纯化和后期处理。
? 对细胞功能进行精确评估。
? 增强生长和/或产量。
? 生理反应性的更好对照。
? 加强细胞内介质的检测。
某些应用可能需要添加生长因子和/或细胞因子。
术语表:
无血清培养基—无血清培养基无需添加血清，但可能含有离散
的蛋白或大块蛋白片段。
无蛋白培养基—无蛋白培养基不含有蛋白质，但可能含有植物或酵母的水解产物。
很多无蛋白培养基都不含动物来源成分。
符合化学定义的培养基—符合化学定义的培养基不含蛋白质、
水解产物或其它未知成分。
这些培养基不含动物来源成分，并
且所有成分都有已知的化学结构。
不含动物来源物的产品—不含动物来源物的产品不含有直接取
自高等真核生物(如哺乳动物(包括人)、鱼、鸟、昆虫等)的动物
组织、细胞或体液的材料。
“动物来源”一词不适用于低等真
核生物，如高等植物、真菌、原生动物和藻类，也不适于原核
生物，如细菌或蓝绿藻。
MDCK无血清培养基说明书(2015.9.16)
MDCK细胞传代 1. 细胞长至融合度达到80％-90％时，弃去培养液，用PBS或不含钙镁的Hank’s液清洗 细胞2-3遍。 2. 加入适量0.25%的EDTA-胰酶，37℃，5%CO 2培养箱中孵育至细胞收缩变圆，轻拍培养 瓶可见细胞移动即可。 3. 加入无血清培养基终止消化，用吸管轻轻吹打，使细胞分散。 4. 细胞悬液转入离心管中，800 rpm离心5分钟，去除上清液，重新加保存 有效期12个月
产品特性
1. MDCK细胞无血清培养基化学成分限定，不含胎牛血清。 2. MDCK细胞无血清培养基培养MDCK细胞，连续传代50代，细胞特性无改变。 3. MDCK细胞无血清培养基培养MDCK细胞的倍增时间是17.1小时。
使用说明
MDCK细胞复苏 1. 从液氮罐中取出冻存管直接置于37℃温水中，并不断地轻轻摇动，使管中的液体迅速 融化。 2. 用吸管吸取10 ml 预温的MDCK无血清培养基到15 ml离心管中，冻存管用75%酒精擦拭 表面后，将细胞悬液吸到15 ml离心管中，混匀。 3. 800 rpm离心5分钟，除去上清液，用适量预温的无血清培养基重悬细胞，接种于细胞 培养瓶中。 4. 37℃，5%CO2培养箱中培养，次日更换一次培养液，继续培养1-2天至细胞铺满瓶底的 80%-90%进行传代。
2 5. 以（1-5)×10 cells/cm 接种于细胞培养瓶内，置37℃ 5%CO2 培养箱中培养，细胞长满 4 2
瓶底80%-100%后进行下一次传代（一般2-3天传代一次）。 MDCK细胞冻存 1. 选取融合度达80%的MDCK细胞用于冻存。 2. 依据传代方法把消化好的细胞收集于离心管并计数，800 rpm离心5分钟。 3. 去除上清液，加入商品化的细胞冻存液或无血清配制的冻存液（冻存液需要提前预冷）， 冻存液中细胞的最终密度为（5-10）×10 cells/mL。用吸管轻轻吹打是细胞混匀，然后 分装至无菌冻存管中，每只冻存管加液1-1.5 mL。 4. 细胞经过程序降温后置于液氮中保存。 流感病毒的分离与培养 1. 选取融合度75％-90％的MDCK细胞，弃去培养液，PBS或不含钙镁的Hank’s液清洗 细胞2-3遍。 2. 加入200 uL的流感病毒标本，温和摇动数次。 3. 放于37℃、5% CO2培养箱中吸附1-2小时。 4. 加入6 mL流感病毒分离无血清培养基于培养瓶中。放置于35℃，5%CO2培养箱中培养。 5. 每日观察细胞病变情况。无血清培养基培养的MDCK细胞，病毒侵染后释放快，请及 时收获病毒。
12-725F无血清培养基
12-725F Serum Free Media(SFM)介绍Lonza华雅思创生物培养动物细胞，无论是为了增殖病毒，还是为了获得相关的生物制品，都力求使细胞大规模、高密度生长，并在高密度下维持高的细胞活性，简化下游纯化工艺，提高生物制品的安全性和产率，降低产品的成本，提高市场竞争力。
但是常规细胞培养基的组分——血清的存在严重制约了动物细胞的规模培养，使用户不得不每次都要费心挑选出不同批次的血清中质量最好的一批，并为此而投入大笔的成本资金。
如果您也为此而头痛，为什么不尝试一下无血清培养基呢？无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）是全部用已知成分组配的不加血清的合成培养基，通常在含有细胞所需营养和贴壁因子的基础培养基中加入适宜的促细胞生长因子，保证细胞良好生长，是最适合于制药生产的培养基。
它在提高细胞培养质量的同时，还有以下诸多优点：●无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）批次一致性高，可以省去对培养基进行预筛选的工作。
●无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）成本降低，价格波动不大。
如果用血清，那么很容易受到周围环境的影响（如天气干旱时，血清产量降低），而使血清价格有所调整。
●无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）不含有丝分裂原抑制剂，可以促进细胞增殖。
●无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）可以降低病毒、真菌、支原体等微生物污染的可能性。
●无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）组分稳定，可大量配制。
●无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）培养细胞，可以简化提纯和鉴定各种细胞产物的程序。
LONZA UltraCULTURE Serum-free Medium无血清培养基适应的细胞类型应用：通用无血清培养基，适于培养贴壁和悬浮哺乳动物细胞、疫苗生产中病毒颗粒的制备。
人干细胞无血清培养基
人干细胞无血清/无饲养层培养基Stemmera TM人无血清/无饲养层培养基（SFM）是在无血清和饲养层情况下，用于培养人的干细胞能支持干细胞的生长，包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。
规格: 500ml产品描述：Stemmera TM人ESCs/iPSCs无血清/无饲养层培养基(hStemSFM)是一种成分明确的即用型培养基，特殊的配方，在完全无血清和无饲养层环境下能用于人诱导多能干细胞（hiPSCs）和胚胎干细胞(hESC)的重编程、增殖和维持。
产品成分：两种成分混合后是一种即用型完全培养基存储和运输：Stemmera TM hStemSFM中的两种成分是分开运输的，基本培养基在室温下运输然而SFM添加物是在干冰环境下运输。
在收到产品后基本培养基需存储在2-8°C环境中而SFM 需要存储在-20°C，避免多次冻融。
完全培养基储存在2-8°C的黑暗环境中能使用长达1个月。
完全培养基分成等份的供每日使用，避免反复预热，避光保存最佳。
产品使用：该产品是仅用于体外使用和研究使用。
不可用于人类或动物的诊断或治疗使用。
使用注意事项：1.使用aerosol barrier枪头，每次用完更换新的枪头。
2.要用新的，干净的手套和穿实验服。
3.材料安全数据表（MSDS）可在网站下载。
4.用70%乙醇或其他合适的消毒剂清洁工作空间。
培养条件:培养基：Stemmera TM hStemSFM。
细胞：人诱导多能干细胞（hiPSCs）和人胚胎干细胞（hESCs）。
培养类型：单细胞传代和贴壁培养。
温度范围：37°C。
孵育器的环境：在含5% CO2或5% O2的潮湿环境中，确保适当的气体交换，减少与外界接触。
建议培养容器：基质胶包被的板子、皿或烧瓶（Corning，货号：356231，稀释比1:100），根据容器的大小，调整细胞数量。
操作手册:•完全SFM培养基的制备：添加3.5ml冷冻SFM添加物（货号 ST02001-S1）到500ml 基础培养基中（货号st02001-bm 500ml），搅拌均匀，0.22µM滤膜过滤。
人淋巴细胞无血清培养基（ELISPOT 专用）说明书
第1页共2页人淋巴细胞无血清培养基（ELISPOT 专用）说明书【产品名称】通用名称：人淋巴细胞无血清培养基（ELISPOT 专用）【规格】100mL/瓶；500mL/瓶【预期用途】仅用于在ELISPOT 检测技术中对细胞的培养，不具备对细胞的选择、诱导、分化功能。
培养后的细胞用于体外诊断。
【检验原理】ELISPOT 技术是根据ELISA 技术的基本原理，建立的体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术。
由于其灵敏度高、操作简便经济，因此备受青睐。
传统的ELISPOT 检测技术中，细胞培养这一步使用的多为含有FBS 或者FCS 的培养基，由于血清中含有的很多未知成分能够抑制或者刺激细胞，从而干扰实验，并且由于血清的不确定性，不同批次对于实验的影响也不同，造成了实验的重复性降低。
本产品可有效避免血清质量变动及血清组分对实验研究的影响，提高细胞培养和实验结果的重复性。
【主要组成成分】无机盐、氨基酸、维生素、糖类、蛋白等。
【储存条件及有效期】1、2℃~8℃密封避光保存，避免污染。
2、在储存条件下有效期为一年。
【样本要求】1、细胞要求：新鲜分离的人淋巴细胞。
2、细胞悬液要求吹打混匀，成单细胞悬液。
【检验方法】1、取ELISPOT 板，每孔加入200μL 本产品，室温静置5-10分钟后将其扣出。
2、取新鲜分离的人淋巴细胞，使用本产品调整细胞浓度。
3、将调整好浓度的细胞悬液加入各实验孔，100μL/well 。
4、正对照孔加入阳性刺激剂工作液；负对照孔（含背景负对照孔）加入本产品；实验孔：加入实验者自己的刺激物。
5、所有样品和刺激物加完后，盖好板盖。
放入37℃，5％CO 2培养箱培养16-24小时。
6、显色：按照标准ELISPOT 操作流程进行细胞裂解、洗板、检抗孵育、酶孵育、显色，记录板底斑点数并分析。
【检验结果的解释】结果显示阳性孔斑点分布均匀、频率较高、斑点较大、圆润、线性好、背景干净；阴性对照孔无斑点或有极少斑点，背景干净，无杂色。
人体细胞及组织培养用无血清培养基标准
人体细胞及组织培养用无血清培养基标准在当今生命科学领域，细胞和组织培养技术已经成为不可或缺的重要工具，用于生物医学研究、药物开发和生物工程等领域。
而作为细胞和组织培养的重要组成部分，无血清培养基更是备受关注。
本文将从深度和广度两个维度，探讨人体细胞及组织培养用无血清培养基标准的相关内容。
一、无血清培养基的概念和发展无血清培养基是在细胞和组织培养过程中，不使用任何动物血清成分的培养基。
这种培养基的出现，旨在解决传统培养基中可能存在的成分不稳定、造成细胞生长不稳定等问题。
随着生物技术的发展和对培养基要求的不断提高，无血清培养基逐渐成为细胞和组织培养的主流选择。
在过去的几十年中，无血清培养基经历了从初创阶段到成熟阶段的发展。
研究人员通过不断优化培养基的成分配比、添加生长因子和细胞因子等手段，逐渐实现了对多种细胞类型的无血清培养。
然而，无血清培养基的发展依然面临着一些挑战，比如细胞生长速度不稳定、细胞饱和密度难以控制等问题。
二、无血清培养基标准的必要性针对无血清培养基的发展过程中存在的问题，制定一套无血清培养基的标准显得尤为重要。
无血清培养基标准的制定，可以帮助研究人员更好地选择适用于不同细胞类型的培养基，提高细胞培养的成功率和稳定性。
由于不同细胞类型在生长环境、生长因子和营养物质需求上存在差异，因此制定一套通用的、兼具广度和深度的无血清培养基标准变得尤为必要。
这一标准的制定，可以为生物医学研究和生产领域提供统一的指导，并促进无血清培养基的更广泛应用。
三、制定无血清培养基标准的挑战和现状然而，实际制定无血清培养基标准面临着一定的挑战。
不同研究机构和生产企业对于培养基的配方和成分可能存在差异，这使得制定统一的标准变得复杂。
无血清培养基的制定需要考虑到细胞生长的多方面因素，如生长速度、表型稳定性、抗氧化性等，这也增加了标准的制定难度。
目前，国际生物医学研究机构和细胞生物学领域的专家学者已经开始在无血清培养基标准的制定上进行积极探索。
ELISPOT无血清培养基说明书
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本品专用于 ELISPOT 检测技术。 产品信息：
pH 值：6.8～7.4；渗透压：280～320 mOsm/kg；内含 L-谷氨酰胺、青霉素、链霉素。
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CHO细胞无血清无蛋白化学培养基产品简介
CHO细胞无血清无蛋白化学培养基产品简介
一、产品简介
CHO 细胞无血清无蛋白化学培养基是剑桥生物自主开发的细胞培养产品系列之一，它是专门针对CHO 细胞系打造，具无血清、无蛋白、无动物源性成分和化学组成明确的特点，适用于各种细胞培养方式包括培养瓶、细胞培养转瓶、生物发酵罐等，可广泛用于实验室研究和工业化的规模生产。
二、产品使用方法
液体产品：培养基开瓶后即可使用
粉包产品：按照每种产品标签上所标识的配制方法操作使用
三、产品使用效果
图1 培养24小时后细胞。
LONZA 无血清培养基
LONZA 上海华雅思创生物12-725F UltraCULTURE Serum-free Medium无血清培养基（Serum Free Medium, SFM）是由世界著名的美国LONZA公司生产，该12-725F UltraCULTURE Serum-free Medium无血清培养基是一种营养成分完全的通用型的无血清培养基，适用于培养贴壁哺乳动物细胞和悬浮哺乳动物细胞；适于在疫苗生产中制备病毒颗粒；支持杂交瘤形成时的细胞融合，支持单核细胞、巨噬细胞、上皮细胞和成纤维细胞系的细胞生长。
适合多种细胞类型的无血清培养，包括HeLa细胞、HEC细胞、HEL,N-10细胞、HNK细胞、MB231细胞等等。
LONZA公司生产的所有系列无血清培养基（Serum Free Medium, SFM ）都是在cGMPs洁净车间里生产，12-725F UltraCULTURE Serum-free Medium无血清培养基已被列入美国FDA产品管理档案中。
●TT Human Medulary thyroid tumor 人髓质甲状腺肿瘤细胞●MB231 Human Breast carcinoma 人乳腺癌细胞●U138 Human Glioma 人神经胶质瘤细胞●FM3A Mouse Breast cancer 小鼠乳腺癌细胞●NS-1 Mouse Myeloma 小鼠骨髓瘤细胞●L Mouse Subcutaneous 小鼠皮下L细胞●P388D1 Mouse Macrophage-like 小鼠巨噬样细胞●P815 Mouse Mast cell tumor 小鼠马斯特肿瘤细胞●T3 Mouse Pituitary 小鼠垂体脑细胞●B82 Mouse L cells –connective tissue 小鼠L细胞联结组织●RPL-1 Rat Peritoneum 大鼠腹膜RPL-1细胞应用：通用无血清培养基，适于培养贴壁和悬浮哺乳动物细胞、疫苗生产中病毒颗粒的制备本文原创。
无血清培养基
干细胞无血清培养基是为扩增从骨髓、脐带血或脂肪组织提取的人类间充质干细胞而设计的无血清培养基。
它化学成分明确，所有组分为化学合成或重组纯化的蛋白。
它无异源蛋白，不含直接从任何动物组织提取成份。
因此它不存在批间误差和潜在的动物源性病原体。
如果配合使用特定的培养板，还可以省去铺板的工序和时间，免去铺板胶的费用。
Human MSC medium (Chemically-Defined) 人间充质干细胞无血清培养基间充质干细胞具有光明的临床治疗前景。
然而，常用培养基含有胎牛血清（FBS）相比较无血清培养基，不但增加了病原体、异种抗原、并且批间也不稳定性。
美国FDA正考虑禁止使用FBS用于细胞治疗。
组成及保存Human MSC medium (Chemically-Defined)（货号MGro-500）产品组成：
Size Storage Shelf Life MesenGro Basal Medium 500ml 2 to 8°C.Protect from light 12 months MesenGro Supplement 50ml ‐20°C.Protect from light12 months
产品组分规格储存保质期
mesengro基础培养基500ml 2～8°C, 避光保存12个月
mesengro添加因子50ml ‐20°C, 避光保存12个月
华雅思创。
无血清培养基的介绍
无血清培养基的介绍无血清培养基是通过化学合成或以类似动物胎牛血清的化学物质替代的方式，在不使用动物血清的情况下提供细胞培养所需的营养和生长因子。
无血清培养基能够模拟传统的细胞培养条件，提供细胞所需的能量、氨基酸、维生素、脂类和激素等物质，从而维持细胞的正常生长和分裂。
1. 基础培养基：无血清培养基通常使用无菌的DMEM（Dullbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI（Roswell Park MemorialInstitute）等基础培养基作为起始材料。
这些培养基中含有大量的氨基酸、碳水化合物和盐类，能够提供细胞所需的能量和基础物质。
2.营养物质：无血清培养基会添加各种营养物质，如氨基酸、葡萄糖、核苷、维生素等。
这些物质能够提供细胞所需的营养物质，促进细胞的正常生长和代谢。
3.细胞生长因子：无血清培养基中还会添加各种细胞生长因子，如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子等。
这些生长因子能够刺激细胞生长和分裂，促进细胞的增殖和繁殖。
4.补充物质：无血清培养基中还会添加一些补充物质，如胰岛素、转铁蛋白、胆固醇等。
这些物质能够提供细胞所需的特殊物质，满足细胞的特殊需求。
与传统的含血清培养基相比，无血清培养基有以下几个优点：1.可重复性好：无血清培养基是通过化学合成方式制备的，成分和性质都是可控的。
不同批次之间没有差异，能够提供较好的重复性。
2.纯度高：无血清培养基中不含有血清，避免了血清可能存在的污染问题。
同时，无血清培养基还可以通过滤膜等方式过滤除去可能存在的细菌、病毒和真菌等微生物，提高了培养液的纯度。
3.免疫原性低：血清中存在的蛋白质和其他组分可能会引起宿主的免疫反应，导致细胞的受损甚至死亡。
而无血清培养基中不含有血清，因此免疫原性低，能够更好地保护细胞的生长和代谢。
4.成本低：虽然无血清培养基的制备和加工成本较高，但血清的价格较高，使用无血清培养基可以在一定程度上节省成本。
无血清培养基介绍
无血清培养基介绍
培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。有的培养基还含有抗菌素、色素、激素和血清。一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3~6℃的冰箱内。
免疫细胞无血清培养基
免疫细胞无血清培养基
1、培养基组分
2、产品描述
人免疫细胞无血清基础培养基是无血清、不含异源动物成分（Xeno-free）的人免疫细胞培养基，可用于人淋巴细胞、CIK、DC、NK等各类免疫细胞的培养，具有很高的成活率、杀伤活性和扩增倍数，甚至优于国外进口同类优质产品。
3、特点
3.1无血清、不含异源动物成分；所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质；不含抗生素；
3.2能够培养人淋巴细胞、CIK、DC、NK等各类免疫细胞；
3.3具有很高的成活率和扩增倍数；
3.4能够维持高密度培养；
3.5具有很高的杀伤活性。
4、注意事项和免责声明
4.1如果观察培养基种有可见的沉淀物，不能再使用；
4.2超过标签上的截止使用日期，不得再使用；
4.3所有组分均应避光保存；
4.4本产品仅适用于科研；
4.5 本产品请于阴凉干燥处避光保存，保存条件：2-8℃，避免反复冻融。
拆封后请于2周内用完。
5、质量控制
为保证产品的质量，每个批次的培养基均通过细胞培养的生长曲线实验以及杀伤性活力检测。
产品的整个生产流程均在GMP车间完成，严格按照GMP标准操作。
每批产品均有严格的细菌、真菌、内毒素、pH等指标检测。
确保产品质量合格。
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无血清培养基转载请注明来自丁香园发布日期：2012-02-17 12:29 文章来源：丁香园分享到：收藏夹新浪微博腾讯微博开心网豆瓣社区人人网关键词：丁香园生物专题义翘神州细胞培养培养基点击次数：1026无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。
但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。
虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。
而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质（抗体、生长因子）的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。
因此研制出无血清培养基一直是生物科学工作者努力的目标。
无血清培养基的基本配方:基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。
用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。
添加组分1.促贴壁物质：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。
它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。
纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。
2.促生长因子及激素：针对不同细胞添加不同的生长因子。
激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞必不可少的，如胰岛素。
3.酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中必不可少须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。
最常用的是大豆胰酶；抑制剂。
4.结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。
牛血清白蛋白的添加比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。
许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。
5.微量元素：硒是最常见的。
使用方法目前，血清仍是动物细胞培养中最基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。
细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从10%减少到5%，3%，1%，直至无血清培养。
在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。
在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。
细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。
为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞：1.处于对数生长中期2.>90% 活细胞率3.适应时以较高的起始细胞接种细胞适应无血清培养基的方法1.直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中。
一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。
对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。
当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml时，传代培养细胞。
当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时，细胞完全适应了无血清培养基。
每隔3~5天，当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
2.连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
（1）以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基：25％SFM 混合培养基中，传代培养。
（2）当细胞密度>5×105细胞/ml时，以2×105到3×105细胞/ml细胞密度，在有血清培养基：SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。
（3）以2×106到3×106细胞/ml细胞密度，25％有血清培养基和75% SFM中传代培养。
（4）当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml（接种后4到6天），在100％SFM培养基中传代培养。
（5）每隔3到5天，当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
建议备份前一次混合培养的培养物，直到每一次细胞适应了新的混合培养基。
每一次减少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。
在适应过程中，最好不要让细胞生长过度。
这将增加选择亚群的可能性。
需要注意，与有血清培养基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白质，因而更易于受外界因素的影响。
细胞培养适应替代血清：许多细胞利用连续适应方法能很好的适应，用包含FBS的的培养基和包含有替代血清的培养基1∶1（v∶v）的混合培养基培养细胞。
通过下列的混合培养基的方式，连续几代减少当前培养基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培养基。
每次适应改变血清比例时，传代细胞2到3次。
培养可以直接从FBS转换到替代血清。
一开始就使用相同于FBS的浓度的替代物或血清，生长的延迟可能会发生，4允许进行2到3次的传代，使生长率恢复到以前的水平。
特别需要强调的是：配制无血清培养液必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。
因为无血清培养基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。
这是无血清培养能否成功的关键因素之一。
无血清培养基的优点1.可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。
2.避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。
3.避免血清组分对实验研究的影响。
4.有利于体外培养细胞的分化。
5.可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。
缺点：1.细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便。
2.成本较高。
3.针对性很强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。
无血清培养基一些配方1.神经细胞，干细胞，PC12细胞成份终浓度葡萄糖－－0.6%谷氨酰胺－2mMNaHCO3－－3mMHepes －－5mM胰岛素－－2.5μg/ml转铁蛋白－100ng/ml孕酮－－20nM丁二胺－－60μM硒酸钠－－30nM青霉素－－50mg/ml链霉素－－50mg/ml最后用DF12添加到100ml即可细胞生物学产品 >> 无血清培养基 >> 无血清液体培养基产品编号： 12523385216产品名称： 无血清液体培养基规 格：见产品说明产品备注：产品类别： 细胞生物学产品产 品 说 明人树突状细胞无血清液体培养基产品描述 规格 价格(RMB)RDC2000 500ml 1200.00特点含重组人血清白蛋白（临床级）重组人转铁蛋白（临床级）重组人胰岛素（临床级）不含重组生长因子。
无菌，无支原体，无病毒.哺乳动物树突状细胞无血清液体培养基产品描述 规格 价格(RMB)DC2000 500ml 800.00特点含牛血清白蛋白（细胞培养级）牛转铁蛋白（细胞培养级），牛胰岛素（细胞培养级）不含重组生长因子。
无菌，无支原体，无病毒人干细胞无血清液体培养基产品描述 规格 价格(RMB)特点适用于造血干细胞，间充质干细胞。
含重组人血清白蛋白（临床级）重组人转铁蛋白（临床级），重组人胰岛素（临床级）不含重组生长因子。
无菌，无支原体，无病毒哺乳动物干细胞无血清液体培养基产品描述规格价格(RMB)ZX2001 500ml 1000.00特点适用于造血干细胞，间充质干细胞。
含牛血清白蛋白（细胞培养级）牛转铁蛋白（细胞培养级），牛胰岛素（细胞培养级）不含重组生长因子。
无菌，无支原体，无病毒其它无血清液体培养基产品描述规格价格(RMB)人树突状细胞无血清液体培养基添加物RDC2000T 20ml 700.00特点含重组人血清白蛋白（临床级）重组人转铁蛋白（临床级），重组人胰岛素（临床级）不含重组生长因子。
不含丙酮酸钠。
无菌，无支原体，无病毒。
20%的RDC2000T 加入80%的基础培养基中使用。
产品描述规格价格(RMB)哺乳动物树突状细胞无血清液体培养基添加物特点含牛血清白蛋白（细胞培养级）牛转铁蛋白（细胞培养级），牛胰岛素（细胞培养级）不含重组生长因子。
不含丙酮酸钠。
无菌，无支原体，无病毒20%的DC2000T 加入80%的基础培养基中使用。
产品描述规格价格(RMB)哺乳动物干细胞无血清液体培养基添加物RZX2001T 20ml 850.00特点含牛血清白蛋白（细胞培养级）牛转铁蛋白（细胞培养级），牛胰岛素（细胞培养级）及微量元素不含重组生长因子，不含丙酮酸钠。
无菌，无支原体，无病毒。
产品描述规格价格(RMB)人干细胞无血清液体培养基添加物ZX2001T 20ml 800.00特点含重组人血清白蛋白（临床级）重组人转铁蛋白（临床级），重组人胰岛素（临床级）不含重组生长因子。
不含丙酮酸钠。
无菌，无支原体，无病毒。
20%的RDC2000T 加入80%的基础培养基中使用产品描述规格价格(RMB)广谱无血清培养基添加物GP2004T 20ml(20倍浓缩液) 440.00特点含牛血清白蛋白（细胞培养级）牛转铁蛋白（细胞培养级），牛胰岛素（细胞培养级）及微量元素不含重组生长因子，不含丙酮酸钠。
无菌，无支原体，无病毒。
产品描述规格价格(RMB)哺乳动物角质细胞液体完全培养基JZ2003 500ml 950.00哺乳动物内皮细胞液体完全培养基NP2003 500ml 950.00哺乳动物碱性成纤维细胞液体完全培养基PN2003 500ml 950.0。