人干细胞无血清培养基

人干细胞无血清/无饲养层培养基
Stemmera TM人无血清/无饲养层培养基（SFM）是在无血清和饲养层情况下，用于培养人的干细胞能支持干细胞的生长，包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。

规格: 500ml
产品描述：
Stemmera TM人ESCs/iPSCs无血清/无饲养层培养基(hStemSFM)是一种成分明确的即用型培养基，特殊的配方，在完全无血清和无饲养层环境下能用于人诱导多能干细胞（hiPSCs）和胚胎干细胞(hESC)的重编程、增殖和维持。

产品成分：
两种成分混合后是一种即用型完全培养基
存储和运输：
Stemmera TM hStemSFM中的两种成分是分开运输的，基本培养基在室温下运输然而SFM添加物是在干冰环境下运输。

在收到产品后基本培养基需存储在2-8°C环境中而SFM 需要存储在-20°C，避免多次冻融。

完全培养基储存在2-8°C的黑暗环境中能使用长达1个月。

完全培养基分成等份的供每日使用，避免反复预热，避光保存最佳。

产品使用：该产品是仅用于体外使用和研究使用。

不可用于人类或动物的诊断或治疗使用。

使用注意事项：
1.使用aerosol barrier枪头，每次用完更换新的枪头。

2.要用新的，干净的手套和穿实验服。

3.材料安全数据表（MSDS）可在网站下载。

4.用70%乙醇或其他合适的消毒剂清洁工作空间。

培养条件:
培养基：Stemmera TM hStemSFM。

细胞：人诱导多能干细胞（hiPSCs）和人胚胎干细胞（hESCs）。

培养类型：单细胞传代和贴壁培养。

温度范围：37°C。

孵育器的环境：在含5% CO2或5% O2的潮湿环境中，确保适当的气体交换，减少与外界接触。

建议培养容器：基质胶包被的板子、皿或烧瓶（Corning，货号：356231，稀释比1:100），根据容器的大小，调整细胞数量。

操作手册:
•完全SFM培养基的制备：添加3.5ml冷冻SFM添加物（货号 ST02001-S1）到500ml 基础培养基中（货号st02001-bm 500ml），搅拌均匀，0.22µM滤膜过滤。

•将完全培养基分成等份并在室温下预热SFM供每天使用。

•Corning基质胶包被培养容器：使用Corning基质胶（货号356231，稀释比1:100）包被容器，在5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中37 o C孵育至少30min或过夜。

已包被的容器能在一周内使用。

使用前，立即倒掉所有的基质胶，更换预热的完全Stemmera TM hStemSFM培养基。

注意：所有成分在有效期内存储在黑暗的2-8o C环境中，完全培养基StemmeraTM hStem SFM 能稳定储存时间长达4周。

在完全培养基hStemSFM 中hiPSCs 和hESCs的复苏
1.37°C水浴迅速解冻一小瓶冷冻人干细胞。

2.用移液管轻轻将小瓶中的所有干细胞都吸入含完全培养基的15ml无菌离心管中。

3.在1000转下离心5min。

4.吸弃上清液，尤其小心避免干扰细胞颗粒。

5.在含10nM Rock 抑制剂Y27632（Fisher Scientific, 货号50-863-7）的1ml预热完全培
养基中重悬细胞。

6.将细胞转入基质胶包被的6孔板中，在每孔中加入足够的完全培养基（2ml/孔）。

7.在一个5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中，在含Rock 抑制剂的完全培养基
SFM下37 o C过夜孵育细胞。

8.第二天更换为不含Rock 抑制剂的完全SFM培养基，每天更换培养基直到细胞达到
80-90%的覆盖度并继代培养。

在完全Stemmera TM hStemSFM培养基中继代培养干细胞
9.细胞达到80-90%的覆盖度，吸弃已无营养的培养基。

10.加入1ml Stemmera TM非酶细胞裂解液（货号ST03001）到培养板中的每孔中。

确保单
层细胞完全被覆盖。

在一个5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中37 o C孵育5min。

11.在倒置显微镜下定期观察细胞，直到细胞开始汇合。

（注：避免细胞脱落，参看下面的
问题解答）。

12.从培养孔中吸弃细胞裂解液（避免细胞变干）。

13.加入1ml完全SFM培养基到培养板的每个孔中，用1ml移液器的吸头轻轻吸打细胞几
分钟使得细胞团解散直到得到单个细胞（注意减少泡沫地形成）。

14.将细胞转移入新的预先包被的6孔板中，加入含ROCK抑制剂的完全培养基（6孔板中
的每孔添加2ml SFM，稀释比是1:6-1:12）
15.在一个5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中37 o C孵育过夜。

16.第二天更换为不含Rock 抑制剂的完全SFM培养基，每天更换培养基直到细胞达到
80-90%的覆盖度并继代培养细胞或为了长期贮存在液氮中冷冻细胞。

问题解答：
•在细胞裂解液中的孵育时间依赖于细胞密度和细胞数量。

•如果细胞是分离的，加入同样体积的细胞并重悬浮细胞，在15ml离心管中收集细胞，离心细胞并涂板.
在Stemmera TM无血清冻存液中冻存干细胞
17.冷冻前1-2小时更换培养基。

18.通过重复完全培养基Stemmera TM hStemSFM中继代培养干细胞步骤中的9-13步完成细
胞的收集。

19.将1ml的单细胞悬液转入15ml的离心管中。

20.在1000转下离心5min。

21.吸弃上清，注意避免干扰细胞颗粒。

22.按2x106活细胞/毫升的细胞密度的要求计算冻存液体积。

23.在精确体积下用Stemmera TM无血清冻存液重悬浮细胞颗粒(货号ST03002)并将细胞等
份分装到冷冻管中（1ml/管）。

24.以自动或手动控制速率的冷冻装置按照标准程序实现冷冻（每分钟降低1o C）。

25.转移冷冻细胞到气相的液氮中。

我们建议在-200o C到-150o C气相中，可存储长达几年
之久。

质量控制：
本品用于维持人ESCs/iPSCs细胞在无血清/无饲养层培养基下的多能性。

为了保证质量，下面的图片显示了人ESCs/iPSCs细胞以Stemmera TM hStemSFM为培养基，生长在基质膜包被的板子上的多能性形态。

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Rev. No.: 01 Date: Mar 20th , 2015。