人干细胞无血清培养基
2023年间充质干细胞无血清培养基行业市场规模分析
2023年间充质干细胞无血清培养基行业市场规模分析随着医疗健康行业的不断发展，间充质干细胞无血清培养基已经成为一个重要的领域。
这种培养基能够有效地提高间充质干细胞的繁殖、生长和分化能力，为医学研究和临床治疗提供了很大的帮助。
目前，随着人们对健康的需求不断增加，间充质干细胞无血清培养基的市场需求持续增加，市场规模也不断扩大。
一、行业现状目前，国内外生产和销售间充质干细胞无血清培养基的企业越来越多，市场竞争也日益激烈。
据统计，目前国内间充质干细胞无血清培养基市场的主要销售商包括：艾比生物、促进生命、直接无血清干细胞、细胞生物学、天池生物、麦迪森生物、永信生物和欣拓生物等；国际市场的主要销售商包括：Thermo Fisher Scientific、Merck KGaA、Cell Applications、MilliporeSigma、Gibco和STEMCELL Technologies 等。
据市场数据显示，目前全球间充质干细胞无血清培养基市场的规模已经逐年扩大，未来几年市场还将继续保持高速增长的趋势。
截止到2020年底，全球间充质干细胞无血清培养基市场规模已经达到了10.2亿美元。
其中，亚洲市场占据了整个市场的一半以上的份额，而且在未来几年还将继续保持高速增长。
二、市场需求和前景随着生物医学领域的不断发展和成熟，间充质干细胞无血清培养基市场需求会逐渐增大。
目前，这种培养基已经广泛应用于骨科、神经科、皮肤科、再生医学、心血管系统和肿瘤学等多个领域。
接下来，我们来详细了解每个领域的需求和前景。
1.骨科间充质干细胞无血清培养基在骨科领域中的应用非常广泛，主要表现在以下几个方面：（1）生长因子的效应：在体内和体外，生长因子对间充质干细胞的影响非常大。
因此，有很多的骨组织工程中，都会使用到生长因子和间充质干细胞无血清培养基。
（2）支架材料：间充质干细胞无血清培养基可以被组合到各种类型的支架材料中，来促进骨组织的生长和再生。
配置干细胞无血清培养基msc的原则
配制干细胞培养基msc的原则1、选择适宜的营养物质江苏地区干细胞培养基的配置原则，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
迈健培养基自养型微生物能从简单的元机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物组成。
例如，培养化能自养型的氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxdans)的培养基组成见表3.9。
在迈健培养基配制过程中并末专门加入其他碳源物质，而是依靠空气中和溶于水中的CO2为氧化硫硫杆菌提供碳源。
就微生物主要类型而言，有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分，培养它们所需的培养基各不相同。
在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基)培养细菌，用高氏I号合成培养基培养放线菌，培养酵母菌一般用麦芽汁培养基，培养霉菌则一般用查氏合成培养基。
2、营养物质浓度及配比合适迈健培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用，例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑菌或杀菌作用。
另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。
严格地讲，碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。
例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/l时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/l 时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。
再如，在抗生素发酵生产过程中，可以通过控制培养基中速效氮(或碳)源与迟效氮(或碳)源之间的比例来控制菌体生长与抗生素的合成协调。
14造血干细胞无血清培养基
AdvCell®造血干细胞无血清培养基AdvCell®造血干细胞无血清培养基（BHSC0001）的核心是采用无血清替代物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境,适用于人及哺乳类造血干细胞的研究及应用。
产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定，使用该培养基能使造血干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化（至少15代以内）。
★产品号Cat No : BHSC0001★产品组成名称产品号规格储藏条件运输AdvCell® 造血干细胞基本培养基BHSCBM0001 500 ml 2-8℃避光冰袋/常温AdvCell®Hematopoietic Stem Cell Base MediumAdvCell®造血干细胞添加物ABHSCS0001A 20 ml -20℃避光干冰AdvCell®Hematopoietic Stem Cell Supplement AAdvCell®造血干细胞添加物BBHSCS0001B 1 ml -20℃避光干冰AdvCell®Hematopoietic Stem Cell Supplement B★产品适用范围适用于人及哺乳类来源的人及哺乳类造血干细胞的培养及扩增。
★培养条件37℃，5％ CO2 无菌恒温培养。
★操作步骤以下过程作为常规造血干细胞培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优化条件来确定最佳的操作步骤，BHSC0001中各组分（BHSCBM0001、BHSCS0001A、BHSCS0001B）在使用前37℃解冻之后混合制备成完全培养基。
【细胞培养】1.经磁珠或其他方法富集的造血干细胞在37℃的水浴快速解冻或温浴（〈1 分钟）。
2.用生理盐水洗涤细胞后，加入AdvCell® 造血干细胞无血清培养基，并迅速加入细胞生长因子（SCF：50 ng/ml, GM-CSF:20 ng/ml, G-CSF: 20 ng/ml, IL-3:20 ng/ml, IL-6:20 ng/ml, EPO:3 U/ml, TPO:4 U/ml）。
细胞培养基种类及用途
细胞培养基种类及用途1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：DMEM 是最常用的无血清培养基之一，是以鹰的鸟胚为基础改进而来的，含有大量氨基酸、糖类、维生素和一些重要的生长因子。
适用于大多数哺乳动物细胞的培养，具有优良的细胞增殖和生长效果。
2.RPMI1640：RPMI1640是一种由罗斯韦尔公立医院制备的细胞培养基，主要用于淋巴细胞、淋巴瘤和骨髓细胞的培养。
它具有高浓度的氨基酸和维生素，适合长期的培养以及体外细胞繁殖实验。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：MEM 是一种最简单的细胞培养基，含有大量的必需氨基酸、维生素和果糖。
它广泛用于原代细胞和肿瘤细胞的培养，具有适应性强、成本低的优势。
4. FBS（Fetal Bovine Serum）：FBS 不是一种细胞培养基，而是培养基中添加的血清。
FBS 富含细胞生长因子、激素和营养物质，可提供所需的细胞补体和血浆蛋白。
它被广泛用于细胞培养中，可以促进细胞的增殖和生长。
5. StemPro MSC SFM：StemPro MSC SFM 是一种专门设计用于人类间充质干细胞（MSC）培养的无血清培养基。
它富含生长因子和维生素，可以维持 MSC 的干性状态，有利于其增殖和多向分化。
6. Neurobasal medium：Neurobasal 是一种特殊的神经元细胞培养基，用于神经元细胞的培养。
它含有许多神经营养因子和激素，能够促进神经细胞的生长和分化。
7.DMEM/F12：DMEM/F12是一种混合型细胞培养基，是DMEM和HAMF12培养基的混合产物。
它具有增强细胞的生存能力和增殖速度的优势，适用于许多类型的肿瘤细胞和原代细胞的培养。
细胞培养基的选择要根据具体实验目的和细胞类型来确定。
不同种类的细胞培养基在细胞生长、增殖和分化方面有不同的影响，因此合理的选择细胞培养基可以提高实验效果和数据可靠性。
2024年间充质干细胞无血清培养基市场策略
2024年间充质干细胞无血清培养基市场策略介绍间充质干细胞（MSCs）是一类多功能的成体干细胞，具有自我更新和多向分化的潜能。
干细胞研究领域的一项关键发展是开发出能够支持MSCs生长和分化的无血清培养基。
无血清培养基具备许多优势，如更好的生长性能、更高的细胞存活率和更低的细胞损伤风险等。
本文将分析并制定2024年间充质干细胞无血清培养基市场策略。
市场分析1.市场规模：间充质干细胞研究市场正在迅速增长，预计未来几年将保持稳定的增长趋势。
2.消费者需求：越来越多的研究人员意识到了无血清培养基的优势，对该产品的需求在增加。
3.竞争态势：目前，已有一些公司和研究机构提供无血清培养基，但市场上还存在一定的竞争空间。
策略制定1. 市场定位定位为高质量、可靠性强的无血清培养基提供商。
2. 产品定位无血清培养基的研发和生产要符合质量标准，确保提供高品质的细胞培养体验。
3. 产品特点无血清培养基的特点将成为营销的关键点，特别强调以下特点： - 高效的细胞生长性能，提供更好的细胞扩增效果。
- 低细胞损伤风险，保证高存活率。
- 内含优质成分，能够支持多向分化。
4. 宣传与推广通过多种渠道进行宣传和推广，包括但不限于以下手段： - 在学术会议上展示产品特点和优势。
- 利用互联网和社交媒体进行广告宣传。
- 与合作伙伴展开合作，共同推广产品。
5. 客户关系维护建立完善的客户关系管理系统，包括： - 及时回复客户的提问和反馈。
- 定期与客户进行沟通，了解他们的需求和意见。
- 提供技术支持和售后服务，确保客户满意度。
6. 价格策略合理定价是市场竞争中的重要因素。
通过研究市场价格水平和竞争对手的定价策略，制定合理的价格策略，确保产品的市场竞争力。
结论通过制定合适的市场策略，将无血清培养基作为核心产品，通过提供高质量、高效率和可靠性强的产品，积极宣传推广，与客户建立良好的关系，我们有望在间充质干细胞无血清培养基市场占据一席之地，并实现持续的增长。
干细胞无血清培养基排行榜
干细胞无血清培养基排名最近总是有实验室老板和学生向我咨询到底该买哪一款无血清培养基，什么牌子的无血清培养基比较好，不知道作何选择。
确实是，目前市面上有多款无血清培养基，琳琅满目，有好也有坏，要想使用一款比较好的无血清培养基，对于刚刚使用无血清培养基的老师和同学而言还是比较不容易甄别的。
本人十几年来天天跟干细胞培养打交道，使用过市面上绝大部分无血清干细胞培养基尤其是脂肪干细胞和间充质干细胞的无血清培养基。
每次最开心的就是每当市面上出现一款新的无血清培养基的时候就买回来赶紧试一试效果，呵呵，这也算是一个小小的爱好。
1. MesenCult TM 间充质干细胞无血清培养基非常好用的一款无血清培养基，著名的Stemcell Technology公司的拳头产品。
我个人还是比较有感觉的一款培养基，以前经常用来饲养人的骨髓间充质干细胞，扩增迅速，形态也非常好，脂肪干细胞也用它培养过，效果也还是可以。
脐带来源的间充质干细胞也饲养过，个人感觉一般，主要是扩增不太好，后来就没有再用了。
顺便说一下，买了他家的产品就送一张精美的干细胞相关的大海报和精美宣传册，确实是一家比较用心的公司。
2. Advcell○R间充质干细胞无血清培养基佰通生物(BioWiseTech) 的子牌子，这个牌子在国内主要是给工业客户提供无血清培养基，在实验室可能不如Stemcell Technology和Gibco牌子响亮和普及，但是却是我非常认可的一个牌子，非常有潜力，培养效果超好（呵呵，别喷我，我不是商家，也不是推手，我不给这些公司打广告，好用就好用，不好用就不好用）。
我最初用这个牌子的无血清培养基是因为我采用人的眼袋组织分离脂肪干细胞的时候，使用了其他无血清培养基都没有分离出来，最后无奈在市面上买了一款他家的针对脂肪干细胞的无血清培养基马上用上，结果有很多细胞贴壁，FACS显示CD29，CD44表达高达98%，CD90和CD105表达也在95%左右。
无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒工艺的建立
无血清培养基培养 Vero细胞制备狂犬病病毒工艺的建立摘要：文章主要是分析了Vero 细胞无血清培养基的组成，在此基础上讲解了Vero细胞无血清细胞培养基的发展，望可以为有关人员提供到一定的参考和帮助。
关键字：Vero细胞；无血清培养基；研究进展1、前言当前现代细胞工程的不断发展，无血清培养基培养Vero细胞作为其中的基质生产疫苗已被广泛的应用，市场上的商品化Vero细胞无血清培养基主要是使用到无血清培养基以及无血清无动物源成分的培养基，其可以有效维持到细胞在体外的生长以及增值，但其中还是存在了一定的污染可能，这会在一定程度上使得疫苗存在一定风险。
2、组成2.1、基础培养基葡萄糖是血液生长、增殖和产物表达过程中的重要能量来源。
通过对血清培养Vero细胞中枢代谢的研究，发现葡萄糖主要参与葡萄糖代谢，而谷氨酰胺是三羧酸循环中最重要的碳源。
用天门冬酰胺和丙酮酸钠代替谷氨酰胺作为碳源，才可以有效的减少到了次级代谢的产物（如乳酸和氨）对细胞的伤害，且谷氨酰胺易被降解，在新形成的培养基中加入等量的谷氨酰胺。
2.2、主要添加因子在Vero无细胞培养的早期研究中，主要是加入到了一些牛（人）血清白蛋白和转铁蛋白，然后有效的促进到了细胞的生长。
然而，血清白蛋白不仅能调节渗透压，能够有效的保护到了细胞免受受到机械的损伤，而且能与维生素、脂类激素、金属离子和生长因子结合，使这些物质在血清培养中的活性转移到血清培养中，具有结合毒素和还原蛋白酶的作用。
通过新的研究发现Vero细胞无血清培养物现在用于用植物蛋白质水解酸盐可以替换成了血清白蛋白。
该蛋白质是复杂的，其中主要是包括了氨基酸，寡肽，橄榄果多酚和纤维。
目前，最常用的植物水解产物是大豆植物水解产物，小麦植物水解产物和水稻水解产物。
这些植物蛋白质使疫苗更加安全。
转铁素是无细胞培养物中最重要的额外组分，这可能导致细胞生长抑制。
在没有动物来源成分的Vero细胞培养基研究中，认为铁柠檬酸铁和维生素C的混合物可以取代转铁蛋白。
2024年间充质干细胞无血清培养基市场分析报告
2024年间充质干细胞无血清培养基市场分析报告1. 引言间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）是一类具有多潜能分化能力的干细胞。
在体外培养MSCs时，血清是常用的培养基成分之一。
然而，传统的有血清培养基存在质量不稳定、传代效果差等问题。
为解决这些问题，无血清培养基逐渐成为间充质干细胞培养的新选择。
本报告旨在对间充质干细胞无血清培养基市场进行深入分析。
2. 市场现状2.1 市场规模间充质干细胞无血清培养基市场目前呈现快速增长的趋势。
根据市场调研数据，2019年全球间充质干细胞无血清培养基市场规模已达到X亿美元，并预计未来几年将保持高速增长。
2.2 主要市场驱动因素 2.2.1 技术进步间充质干细胞无血清培养基的研发不断取得新的突破，为市场提供了更多的发展机会。
无血清培养基具有更好的传代效果和质量稳定性，能够更好地满足科研和临床应用的需求。
2.2.2 应用拓展随着间充质干细胞的广泛应用，市场需求进一步扩大。
间充质干细胞无血清培养基被广泛应用于再生医学、药物研发、组织工程等领域，推动了市场的发展。
2.3 市场竞争格局目前，间充质干细胞无血清培养基市场上存在着多家知名企业，如STEMCELL Technologies、Thermo Fisher Scientific、Lonza Group等。
这些企业凭借自身技术优势、品牌影响力和市场拓展能力，在市场中处于领先地位。
3. 市场分析3.1 市场细分根据不同类型的无血清培养基成分、规格、用途等，间充质干细胞无血清培养基市场可以细分为多个子市场。
3.2 市场地区分布间充质干细胞无血清培养基市场主要分布在北美、欧洲、亚太地区和其他地区。
其中，北美市场规模最大，占据了全球市场的较大份额。
亚太地区市场在近年来呈现出快速增长的态势。
3.3 市场趋势 3.3.1 新产品开发随着技术的不断进步，市场上涌现出更多的创新产品。
一些企业通过不断研发和推出新产品，提高产品竞争力，占据市场份额。
干细胞培养和扩增的最佳实践方法
干细胞培养和扩增的最佳实践方法干细胞是具有自我更新能力和分化为多种细胞类型的特殊细胞，对于生物医学研究和临床应用具有巨大潜力。
干细胞的培养和扩增是实现其研究和应用的关键步骤之一。
本文将介绍干细胞培养和扩增的最佳实践方法，以帮助研究人员获得稳定的细胞系和高效的细胞扩增。
1. 选择合适的培养基选择适合干细胞生长和扩增的培养基是培养成功的关键。
常用的培养基有无血清培养基、人胎牛血清培养基和去血清培养基。
无血清培养基避免了血清带来的不确定因素，但需要添加增殖因子和细胞外基质。
人胎牛血清培养基在人胎牛血清中提供丰富的营养物质，但存在批次差异和传染病传播的风险。
去血清培养基是一种全合成培养基，不含动物源成分，较为安全可靠。
2. 优化细胞培养条件干细胞对培养条件非常敏感，因此需要优化培养条件以获得最佳的生长和扩增效果。
细胞密度、温度、CO2浓度、培养时间等参数需要精确控制。
细胞密度不宜过高，以避免细胞过度接触和相互影响。
通常，培养温度设定为37°C，CO2浓度可调整到5%。
培养时间需根据细胞特性和实验目的确定，一般为2-3天。
3. 选择合适的培养基质培养基质是干细胞培养和扩增的重要组成部分，能够提供细胞附着、生长和分化所需的支持。
常用的培养基质有凝胶体、基质蛋白和金属氧化物。
凝胶体如明胶、琼脂、琼脂糖等可以提供细胞附着的基质，但对于干细胞的维持和扩增效果有限。
基质蛋白如胶原、纤维连接蛋白等能够模拟细胞在体内的生长环境，促进细胞增殖和分化。
金属氧化物如陶瓷材料、纳米材料具有优异的生物相容性和支持细胞生长的特性，被广泛应用于干细胞培养和扩增。
4. 加入适当的生长因子和激素生长因子和激素在干细胞培养和扩增中起到重要的促进作用。
人类胚胎干细胞通常需要外源性生长因子如Fgf、Tgf-β等，以维持其自我更新的能力。
对于多能性干细胞，添加适量的BMP、Activin等能够促进其向特定细胞类型的分化。
另外，激素如胰岛素、球囊素等可以提供能量和物质基础，促进干细胞的生长和分化。
无血清培养基
干细胞无血清培养基是为扩增从骨髓、脐带血或脂肪组织提取的人类间充质干细胞而设计的无血清培养基。
它化学成分明确，所有组分为化学合成或重组纯化的蛋白。
它无异源蛋白，不含直接从任何动物组织提取成份。
因此它不存在批间误差和潜在的动物源性病原体。
如果配合使用特定的培养板，还可以省去铺板的工序和时间，免去铺板胶的费用。
Human MSC medium (Chemically-Defined) 人间充质干细胞无血清培养基间充质干细胞具有光明的临床治疗前景。
然而，常用培养基含有胎牛血清（FBS）相比较无血清培养基，不但增加了病原体、异种抗原、并且批间也不稳定性。
美国FDA正考虑禁止使用FBS用于细胞治疗。
组成及保存Human MSC medium (Chemically-Defined)（货号MGro-500）产品组成：
Size Storage Shelf Life MesenGro Basal Medium 500ml 2 to 8°C.Protect from light 12 months MesenGro Supplement 50ml ‐20°C.Protect from light12 months
产品组分规格储存保质期
mesengro基础培养基500ml 2～8°C, 避光保存12个月
mesengro添加因子50ml ‐20°C, 避光保存12个月
华雅思创。
MSC无血清培养基说明书
NutriStem® MSC XF Medium 间充质干细胞无血清培养基 使用说明1. 培养基组分 产品名称 NutriStem® MSC XF Basal Medium 间充质干细胞无血清基础培养基 NutriStem® MSC XF Supplement 间充质干细胞无血清营养添加物 NutriStem® MSC XF Basal Medium 间充质干细胞无血清基础培养基 NutriStem® MSC XF Supplement 间充质干细胞无血清营养添加物 注意: 作为完全的，即用型的培养基，不需要额外的添加物。
两种组分不单独销售。
2. 产品描述 NutriStem® MSC XF Medium是无血清、不含异源动物成分(Xeno-free) 的人类间充质干细 胞培养基，可促进多种来源的人类间充质干细胞的生长，如骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织 （AT-hMSC）、脐带（UCM-hMSC）。
NutriStem® MSC XF Medium可促进人类间充质干 细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。
NutriStem® MSC XF Medium和MSC间充质 干细胞促贴壁试剂（货号: 05-752-1）共同使用，细胞贴壁及增殖效果更好。
3. 特点 无血清、不含异源动物成分：所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质； 不含抗生素； 能够培养不同来源的人类间充质干细胞； 维持人类间间充质干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态； 极低的背景分化率； 维持间充质干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。
货号 05-200-1A 05-201-1U 05-200-1B 05-201-1-06 规格 500 ml 3 ml 100 ml 0.6 ml 储存条件 4°C -20°C 4°C -20°C4. hMSCs对NutriStem® MSC XF Medium的适应性 若之前使用血清培养法，转换至NutriStem® MSC XF Medium间充质干细胞无血清培养，可 能会面临细胞适应的问题，需要逐步适应，并优化培养方案，建议从原代开始使用。
无血清培养基体外分离培养人胶质瘤干细胞与鉴定
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人干细胞无血清/无饲养层培养基
Stemmera TM人无血清/无饲养层培养基（SFM）是在无血清和饲养层情况下，用于培养人的干细胞能支持干细胞的生长，包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。
规格: 500ml
产品描述：
Stemmera TM人ESCs/iPSCs无血清/无饲养层培养基(hStemSFM)是一种成分明确的即用型培养基，特殊的配方，在完全无血清和无饲养层环境下能用于人诱导多能干细胞（hiPSCs）和胚胎干细胞(hESC)的重编程、增殖和维持。
产品成分：
两种成分混合后是一种即用型完全培养基
存储和运输：
Stemmera TM hStemSFM中的两种成分是分开运输的，基本培养基在室温下运输然而SFM添加物是在干冰环境下运输。
在收到产品后基本培养基需存储在2-8°C环境中而SFM 需要存储在-20°C，避免多次冻融。
完全培养基储存在2-8°C的黑暗环境中能使用长达1个月。
完全培养基分成等份的供每日使用，避免反复预热，避光保存最佳。
产品使用：该产品是仅用于体外使用和研究使用。
不可用于人类或动物的诊断或治疗使用。
使用注意事项：
1.使用aerosol barrier枪头，每次用完更换新的枪头。
2.要用新的，干净的手套和穿实验服。
3.材料安全数据表（MSDS）可在网站下载。
4.用70%乙醇或其他合适的消毒剂清洁工作空间。
培养条件:
培养基：Stemmera TM hStemSFM。
细胞：人诱导多能干细胞（hiPSCs）和人胚胎干细胞（hESCs）。
培养类型：单细胞传代和贴壁培养。
温度范围：37°C。
孵育器的环境：在含5% CO2或5% O2的潮湿环境中，确保适当的气体交换，减少与外界接触。
建议培养容器：基质胶包被的板子、皿或烧瓶（Corning，货号：356231，稀释比1:100），根据容器的大小，调整细胞数量。
操作手册:
•完全SFM培养基的制备：添加3.5ml冷冻SFM添加物（货号 ST02001-S1）到500ml 基础培养基中（货号st02001-bm 500ml），搅拌均匀，0.22µM滤膜过滤。
•将完全培养基分成等份并在室温下预热SFM供每天使用。
•Corning基质胶包被培养容器：使用Corning基质胶（货号356231，稀释比1:100）包被容器，在5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中37 o C孵育至少30min或过夜。
已包被的容器能在一周内使用。
使用前，立即倒掉所有的基质胶，更换预热的完全Stemmera TM hStemSFM培养基。
注意：所有成分在有效期内存储在黑暗的2-8o C环境中，完全培养基StemmeraTM hStem SFM 能稳定储存时间长达4周。
在完全培养基hStemSFM 中hiPSCs 和hESCs的复苏
1.37°C水浴迅速解冻一小瓶冷冻人干细胞。
2.用移液管轻轻将小瓶中的所有干细胞都吸入含完全培养基的15ml无菌离心管中。
3.在1000转下离心5min。
4.吸弃上清液，尤其小心避免干扰细胞颗粒。
5.在含10nM Rock 抑制剂Y27632（Fisher Scientific, 货号50-863-7）的1ml预热完全培
养基中重悬细胞。
6.将细胞转入基质胶包被的6孔板中，在每孔中加入足够的完全培养基（2ml/孔）。
7.在一个5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中，在含Rock 抑制剂的完全培养基
SFM下37 o C过夜孵育细胞。
8.第二天更换为不含Rock 抑制剂的完全SFM培养基，每天更换培养基直到细胞达到
80-90%的覆盖度并继代培养。
在完全Stemmera TM hStemSFM培养基中继代培养干细胞
9.细胞达到80-90%的覆盖度，吸弃已无营养的培养基。
10.加入1ml Stemmera TM非酶细胞裂解液（货号ST03001）到培养板中的每孔中。
确保单
层细胞完全被覆盖。
在一个5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中37 o C孵育5min。
11.在倒置显微镜下定期观察细胞，直到细胞开始汇合。
（注：避免细胞脱落，参看下面的
问题解答）。
12.从培养孔中吸弃细胞裂解液（避免细胞变干）。
13.加入1ml完全SFM培养基到培养板的每个孔中，用1ml移液器的吸头轻轻吸打细胞几
分钟使得细胞团解散直到得到单个细胞（注意减少泡沫地形成）。
14.将细胞转移入新的预先包被的6孔板中，加入含ROCK抑制剂的完全培养基（6孔板中
的每孔添加2ml SFM，稀释比是1:6-1:12）
15.在一个5% CO2或5% O2（低氧孵育器）的孵育器中37 o C孵育过夜。
16.第二天更换为不含Rock 抑制剂的完全SFM培养基，每天更换培养基直到细胞达到
80-90%的覆盖度并继代培养细胞或为了长期贮存在液氮中冷冻细胞。
问题解答：
•在细胞裂解液中的孵育时间依赖于细胞密度和细胞数量。
•如果细胞是分离的，加入同样体积的细胞并重悬浮细胞，在15ml离心管中收集细胞，离心细胞并涂板.
在Stemmera TM无血清冻存液中冻存干细胞
17.冷冻前1-2小时更换培养基。
18.通过重复完全培养基Stemmera TM hStemSFM中继代培养干细胞步骤中的9-13步完成细
胞的收集。
19.将1ml的单细胞悬液转入15ml的离心管中。
20.在1000转下离心5min。
21.吸弃上清，注意避免干扰细胞颗粒。
22.按2x106活细胞/毫升的细胞密度的要求计算冻存液体积。
23.在精确体积下用Stemmera TM无血清冻存液重悬浮细胞颗粒(货号ST03002)并将细胞等
份分装到冷冻管中（1ml/管）。
24.以自动或手动控制速率的冷冻装置按照标准程序实现冷冻（每分钟降低1o C）。
25.转移冷冻细胞到气相的液氮中。
我们建议在-200o C到-150o C气相中，可存储长达几年
之久。
质量控制：
本品用于维持人ESCs/iPSCs细胞在无血清/无饲养层培养基下的多能性。
为了保证质量，下面的图片显示了人ESCs/iPSCs细胞以Stemmera TM hStemSFM为培养基，生长在基质膜包被的板子上的多能性形态。
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Rev. No.: 01 Date: Mar 20th , 2015。