CHO DG44细胞无血清培养基关键组分的优化与替代

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CHO细胞无血清培养基的筛选与优化

CHO细胞无血清培养基的筛选与优化在生物制药领域，CHO 细胞（Chinese Hamster Ovary Cell，中国仓鼠卵巢细胞）因其能够高效表达重组蛋白而被广泛应用。

然而，传统的含血清培养基存在诸多问题，如血清成分复杂且批次间差异大，易引入外源病毒和支原体污染等。

因此，开发和优化 CHO 细胞无血清培养基成为了提高生物制品质量和安全性的关键环节。

一、CHO 细胞无血清培养基的重要性血清在细胞培养中曾被广泛使用，但其存在的问题不容忽视。

血清中的成分复杂且不稳定，这使得细胞培养过程难以控制和标准化。

不同批次的血清质量差异较大，可能影响细胞的生长、代谢和产物表达。

此外，血清中可能携带的病毒、支原体等污染物会给生物制品带来潜在的安全风险。

相比之下，无血清培养基具有明显的优势。

它的成分明确且稳定，便于质量控制和优化。

无血清培养基可以减少外源污染物的引入，提高生物制品的安全性。

同时，它能够为细胞提供更适宜的生长环境，促进细胞的生长和产物表达，从而提高生产效率和产品质量。

二、筛选 CHO 细胞无血清培养基的方法1、基础培养基的选择首先需要选择合适的基础培养基作为起点。

常见的基础培养基如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium，杜氏改良伊格尔培养基）、RPMI 1640 等，它们在营养成分和离子浓度等方面有所不同。

需要根据 CHO 细胞的特性和培养需求，初步筛选出几种可能适用的基础培养基。

2、添加剂的筛选在基础培养基的基础上，需要添加各种营养成分、生长因子、激素等添加剂来满足 CHO 细胞的生长和代谢需求。

例如，胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺等对于细胞的生长和存活至关重要。

通过单独或组合添加这些添加剂，并检测细胞的生长情况、代谢指标和产物表达水平，来筛选出最优的添加剂组合。

3、化学成分的优化除了添加剂，培养基中的化学成分如氨基酸、维生素、无机盐等的浓度和比例也需要进行优化。

CHO细胞无血清培养基的研究进展

CHO细胞无血清培养基的研究进展作者：杜秀冬来源：《科技风》2020年第21期摘要：由于血清会增加支原体、病毒和朊病毒污染，使纯化过程复杂化，因此中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary，CHO）细胞的悬浮培养最好使用无血清培养基（serumfree medium，SFM），但是没有通用的SFM以用于所有细胞系的培养。

因此，需要针对每种单独的细胞系开发特定的SFM。

本文综述了CHO细胞SFM的研究进展。

关键词：CHO细胞;无血清培养基;基因工程蛋白质中国仓鼠卵巢细胞已被最广泛地用于治疗性抗体的商业生产。

随着对治疗性抗体需求的不断增加，CHO细胞的流行性可能会持续存在。

通过动物细胞培养生产基因工程蛋白是获得糖蛋白（例如用于治疗目的的单克隆抗体）的常用方法。

由于其表达量低于原核和酵母表达系统，故提高外源基因在CHO细胞中的表达效率至关重要，这对培养方法提出了更高要求。

临床上使用的生物技术产品应在无血清的培养基中生产，因为动物来源的血清价格昂贵，并且可能含有不合格物质，会损害人体健康。

其次，CHO细胞使用悬浮培养方式，与静态培养方式相比具有更高的剪切力。

因此，为提高CHO细胞生长和外源基因表达量，需要通过大量的知识和合理的技术来设计适用于CHO细胞培养的SFM[1]。

1 CHO细胞表达系统CHO细胞表达系统经过多年的研究和开发，是目前全球研究较多的一种外源基因表达系统，在生物制药领域中应用广泛[2]。

CHO细胞是抗体生产中最常用的宿主细胞系，因为它们能够对治疗用途的mAb进行适当的翻译后修饰。

CHO细胞表达系统原核表达系统优势较大，与其他表达系统相比，优点主要有以下几方面：（1）目的蛋白易于表达，且能被分泌至培养基中;（2）具有准确的转录后修饰功能，表达的外源蛋白与天然产物生物学特性及相关理化性质相同;（3）能在无蛋白、无动物源培养基中进行高密度的悬浮培养，利于工业化生产;（4）分泌自身的内源蛋白较少，利于重组蛋白的分离和纯化[3]。

CHO细胞无血清培养基的筛选与优化

CHO细胞无血清培养基的筛选与优化CHO细胞（Chinese Hamster Ovary cell）是一种常用于生物制药工业中的哺乳动物细胞系，用于产生重组蛋白质和抗体。

通过无血清培养基的筛选和优化，可以提高CHO细胞的生长和表达效率，降低生产成本。

1.细胞生长和细胞密度：无血清培养基应该能够支持CHO细胞的生长和扩增，达到较高的细胞密度。

2.细胞存活率和稳定性：无血清培养基应该能够提供足够的养分和适宜的环境条件，使CHO细胞能够保持良好的生存状态和稳定的遗传特性。

3.蛋白质表达水平：无血清培养基应该能够提高CHO细胞的蛋白质表达效率，使其能够产生高水平的重组蛋白质或抗体。

下面是一种无血清培养基的筛选和优化策略：1. 筛选适宜的基础培养基：根据CHO细胞的特性和需求，选择适合细胞生长和表达的基础培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）或CDM（Chromium Depleted Medium）等。

这些基础培养基都是经过优化和完善的，可以满足CHO细胞的基本需求。

2. 添加适宜的生长因子和细胞因子：在基础培养基中添加不同的生长因子和细胞因子，如FGF（Fibroblast Growth Factor）、EGF （Epidermal Growth Factor）等，可以促进CHO细胞的生长和扩增。

根据实验室的需求，可以逐个添加或同时添加这些因子，优化细胞生长和表达的效果。

3.优化细胞培养条件：CHO细胞的培养条件包括温度、CO2浓度、培养皿类型等。

根据CHO细胞的特性和需求，优化这些培养条件，使其适应无血清培养基的环境。

一般来说，CHO细胞的培养温度为37℃，CO2浓度为5%，培养皿选择TC增添剂的培养皿。

4.评估培养基的细胞生长和表达效果：通过细胞计数仪、流式细胞仪等实验手段，评估不同改良培养基对CHO细胞的生长和表达的影响。

比较不同培养基中CHO细胞的生长速率、细胞密度和蛋白质表达水平，选择表现较好的培养基进行优化。

用于重组蛋白药物生产的CHO细胞无血清培养基的研究进展

中国细胞生物学学报Chinese Journal of Cell Biology 2021，43(4): 905-916DOI: 10.11844/cjcb.2021.04.0025用于重组蛋白药物生产的CHO细胞无血清培养基的研究进展李伟风^樊振林“2张洹瑜U2林艳^王天云G新乡医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室，新乡453003;2河南省重组药物蛋白表达系统国际联合实验室，新乡453000;3新乡医学院护理学院，新乡453003)摘要哺乳动物表达系统因其具有类似于人源化细胞的翻译后修饰方式，已经成为重组蛋白药物生产的主要表达系统。

中国仓鼠印巢(Chinese hamster ovary,C H O)细胞是生产重组蛋白的理想哺乳动物细胞宿主，目前近70%批准上市的重组蛋白药物是由C H O细胞生产的。

常规细胞培养所用的培养基需要补充血清才能正常生长，但血清存在来源批次不一、下游分离纯化困难、支原体污染潜在风险等缺点，因此，C H O细胞生产重组蛋白药物要求必须用无血清培养基培养避免以上问题产生。

近年来，围绕无血清培养基进行了大量研究，并取得了显著进展。

该文综述了CHO细胞的特性、无血清培养基的基础成分及作用，以及一些特殊添加剂的作用等方面的研究进展。

关键词 C H O细胞;无血清培养基;糖蕋化;关键成分Advances of Serum-Free Medium for CHO Cells forthe Production of Recombinant ProteinLI W e i f e n g1’2,F A N Zhenlin1’2,Z H A N G H u a n y u1，2,L I N Y a n1’3,W A N G T i a n y u n1.2* {^Department o f B iochemistry and Molecular Biology, School o f B asic Medicine, Xinxiang Medical University, Xinxiang 453003, China\2H enan International Joint Laboratory o f R ecombinant Therapeutic Protein Expression System, Xinxiang 453000, China\z S chool o f N ursing, Xinxiang Medical University, Xinxiang 453003, China)Abstract M a m m a l i a n expression s y s t e m has b e c o m e the m a i n expression s y s t e m for the production of recombinant protein,d u e to its similarity o f the post-translational modification to the h u m a n cells.C H O(Chinese h a m ster ov a r y)cells are ideal m a m m a l i a n expression hosts for r e c o m b i n a n t protein production.T h e m e d i u m used for routine cell culture requires supplemental s e r u m for n o r m a l g r o w t h.H o w e v e r,d u e to the disadvantages o f s e r u m,s u c h as different sources a n d batches,difficulty in d o w n s t r e a m separation a n d purification,a n d potential risk o f m y c o p l a s m a contamination.Therefore,serum-free culture m e d i u m is required for C H O cells to produce r ecombinant protein drugs to avoid the a b o v e p r o b l e m s.In recent years,a lot o f researches h a v e b e e n per f o r m e d o n serum-free m e d i u m,a n d remarkable progress has b e e n m a d e.In this r eview,the characteristics of C H O cells,the basic c o m p o n e n t s a n d functions o f serum-free m e d i u m,a n d the functions o f s o m e special additives are r e v i e w e d.K e y w o r d s C H O cells;serum-free m e d i u m;glycosylation;k e y c o m p o n e n t收稿H期:202(M O~22 接受日期:2021 -02-04河南省高等学校重点科研项目计划(批准号:20A350007)和河南省高校重点科研项目(批准号:19A350008)资助的课题*通讯作者。

利用高通量生物反应器优化一种CHO细胞无血清培养基

ｉｕｎｄｎｒｖｎｅｕｎｚｏ１６２，ＣｉａｎＧａｇｏｇＰｏｉｃ，Ｇａｇｈｕ５０３ｈｎ）
ＡｂｔａｔＩｒｅｅｈａｄｕｆｒＣｓｒｃｎｏｄｒｔｇｔａｃｅｐｍｅｉｍｏＨＯｅｌ，ｄｆｒｎｕｐｅｎｓｗｅｅａｄｄｔＯｃｌｓｉｅｅｔｐｌｍｅｔｆｓｒｄｅＤＭＥｏＭ／１ｄｕＦ２ｍｅｉｍ．Ｉｗａｏｎｈｔｔｓｆｕｄｔａ
１Ｍｌｔｍｉ２ｍｇｕａｎｅ，９ｍｇ／Ｌｔａｏａｉｅｈｎｌｍｎｅ，９ｇｍ／Ｌｏｕｍｅｅｉｅ，０．ｌｄｓａｄ０．ｉａｉＢｙｓｐｙｎ５ｇｓｄｉｓｌｎｔ５ｉｐｉｎ５ｖｔｍｎ．ｕｐｌｉｇ２．／Ｌａｔｐｐｏｅａｍｌｅｔｎｎｄ
Hale Waihona Puke 培养基。以细胞密度和细胞活率为主要指标，ＤＭ／１（：１ｖＶ）对ＭＥＦ２１／培养基进行了优化。通过正交试验和单因素试验筛选出了ＣＯＤ４ＨＧ４细胞生长的最佳培养基。正交试验结果表明添加８／ｓｌ、０／ｒｎｆｒ、ｍｇＬＩｕｉ１ｍｇＬＴａｓｒｎｎｎｅｉ
，
Ｅｔｃ可使细胞密度达到２６。ｌ／Ｌ基本上达到商业培养基的培养效果，ｘａ．ｒｔ．５１ｃｌｍ，Ｘ０ｅｓ而成本降低了约６％。０关键词：ＨＣＯ细胞；清培养基；无血高通量生物反应器中圈分类号：８３１Ｒ９３Ｑ１．；３２— ３文献标识码：Ｂ

无血清培养基在CHO细胞培养中的应用进展-细胞生物学论文-生物学论文

无血清培养基在CHO细胞培养中的应用进展-细胞生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——随着生物技术的飞速发展，单克隆抗体、细胞因子、疫苗和各种生物活性蛋白等生物制品在诊断和治疗中应用日益广泛，其需求量增加，因此，通过体外大规模培养动物细胞生产生物制品技术的研究越来越受到青睐。

CHO 细胞是生产蛋白类生物制品最重要的表达系统，采用无血清培养CHO 细胞相比含血清培养，能避免对实验动物的伤害、潜在的污染源影响、不同批次血清间的生物活性和因子的不一致及价格高等诸多弊端，因而受到生物制药领域的广泛关注。

1 CHO细胞CHO 细胞即中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster OvaryCell），是最具代表性的动物细胞表达系统，被广泛应用于生物制药领域。

它建株于1957 年，由美国科罗拉多大学Theodore T. Puck 从一成年雌性中国仓鼠卵巢中分离得到，是一种连续细胞系，能传百代以上，具有永生性。

后来陆续又有很多科学家用药物加压、极端条件筛选和导突变等方法筛选得到了一系列不同表型的CHO 细胞株[1],如DUKX-B11、DG-44 和CHO-K1 等。

CHO 细胞能用于表达各种复杂的重组蛋白。

据统计，70%以上的动物细胞表达药物产品都是以CHO 细胞为表达宿主[2]. 2011 年 6 月批准的27 种单克隆抗体中，其中13 种就是通过CHO 细胞表达的，占了约50%的比例。

CHO 细胞之所以成为最受欢迎的宿主细胞，主要在于其易于培养以及基因操作，而且相比其他表达系统，它还具有许多优点[3-4]:①具有准确的转录后修饰功能，表达的糖基化药物蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子；②具有产物胞外分泌功能，便于下游产物分离纯化；③具有外源重组基因的高效扩增和表达能力；④既可贴壁生长也可以进行悬浮培养，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力，外源蛋白表达水平较高；⑤CHO 细胞属于成纤维细胞，很少分泌自身的内源蛋白，利于外源蛋白的后分离。

Plackett-Burman和响应面法优化CHO细胞无血清培养基中关键营养成分

2017年09月Plackett-Burman和响应面法优化CHO细胞无血清培养基中关键营养成分蒋飞黔（四川大学，生物治疗国家重点实验室，四川成都610041）摘要：为了提高CHO细胞在无血清培养基中的生长和蛋白表达能力。

通过文献选择16种物质，利用Plackett-Burman实验法筛选有出显著影响的4种营养物质，再使用中心复合设计响应面法优化各成分含量，得到最优配比为腐胺0.07mg/L、柠檬酸铁132.5mg/L、磷酸二氢钠0.84mg/L和烟酰胺2mg/L，优化后获得无血清培养基性能优于同类商品化培养基。

关键词：Plackett-Burman；响应面；CHO细胞；无血清培养基中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是目前生产重组蛋白的主要宿主细胞，广泛应用于药物生产领域。

CHO细胞表达系统能很好的指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的糖基化等修饰和加工；其表达蛋白的理化性质、分子结构及生物学活性等接近天然的生物蛋白分子[1]。

CHO细胞无血清培养基是在DMEM/F12基础上添加生长因子、氨基酸、维生素和微量元素等组成[2]，能减少生产难度也能稳定产品质量。

本研究目的是开发CHO细胞无血清培养基用于表达VEG⁃FR-FC融合蛋白，其作用为抑制肿瘤部位的血管新生而达到治疗目的。

本实验以细胞生长状态和表达量为评价指标，通过Plackett-Burman法筛选关键成分再使用响应面法优化其中含量[3-4]。

1材料和方法1.1实验材料1.1.1细胞CHO细胞，表达VEGFR-FC。

1.1.2试剂DMEM/F12基础培养基购自Gbico公司；营养物质购自Sig⁃ma-Aldrich公司。

1.1.3设备与仪器二氧化碳培养箱，Kuhner公司ISF1-X；细胞计数仪，Beck⁃man公司ViCell Counter；高效液相色谱仪，Agilent公司1200。

1.2实验方法1.2.1细胞培养细胞复苏后离心重悬至摇瓶培养，每培养72h时取样计数，按稀释密度3-5×105cells/mL再次传代；随后按实验设计接种至250mL摇瓶，每瓶培养体积50mL，培养条件：温度36.5℃、CO2浓度5%。

基于单纯型设计和部件搜索方法的CHO细胞无血清培养基的高通量优化

基于单纯型设计和部件搜索方法的CHO细胞无血清培养基的高通量优化李晓璐;范里;赵亮;陈飞;谭文松【期刊名称】《高校化学工程学报》【年(卷),期】2014(000)004【摘要】氨基酸的浓度与配比对细胞生长和产物表达有重要作用。

在自主研发无血清培养基的基础上，通过单纯型格子实验设计优化氨基酸浓度及配比后发现，优化的无血清培养基明显促进了细胞生长。

生物反应器批式培养中，最高活细胞密度达52.6×105 cells⋅mL-1，抗体融合蛋白产量52.2 mg⋅L-1，相对于商业培养基Ex-cell 302，分别提高了26.7%和11.5%。

在此基础上，通过部件搜索的方法确认具有显著正影响的氨基酸为谷氨酰胺、脯氨酸和甲硫氨酸。

基于上述研究工作，在2L反应器采用自主研发的优化无血清培养基，以葡萄糖为关键控制参数，进行两阶段动态流加培养过程， CHO细胞最大活细胞密度达94.6×105 cells⋅mL-1，抗体融合蛋白终产量600 mg⋅L-1，相对于商业培养基Ex-cell 302批式培养，分别提高了2.75倍和11.8倍。

本研究工作为抗体融合蛋白的高效工业化生产奠定了基础。

%Based on statistical analysis, cell growth was improved in optimized serum-free media via the optimization of the concentration and proportion of amino acids using simplex lattice and elements dialogue design methods. Using the optimized serum-free media, the maximum viable cell density (MVCD) and the maximum antibody concentration are 52.6×105 cells⋅mL-1 and 52.2 mg⋅L-1, respectively, and these values are increased by 26.7% and 11.5% respectively comparing to those obtainedby using the commercial medium Ex-cell302. Glutamine, proline and methionine are confirmed to have positive effects through the elements dialogue experiment. Moreover, two-stage dynamic fed-batch culture for CHO cells was studied in a 2 L bioreactor. The feeding strategy was based on using the glucose concentration as the key controlling parameter. The maximum viable cell density reaches to 94.6×105 cells⋅mL-1, and 600mg⋅L-1 antibody concentration was achieved within 10 days of cultivation. The maximum cell concentration and antibody production are improved by 2.75 and 11.8 times comparing to the results obtained by commercial medium cultivation. This research is useful for efficient industrial production of antibody fusion proteins.【总页数】7页(P777-783)【作者】李晓璐;范里;赵亮;陈飞;谭文松【作者单位】华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237【正文语种】中文【中图分类】Q813.1【相关文献】1.CHO DG44细胞无血清培养基关键组分的优化与替代 [J], 俞锦锋;陈慧萍;缑向楠;芦海姗2.Plackett-Burman和响应面法优化CHO细胞无血清培养基中关键营养成分 [J], 蒋飞黔3.利用高通量生物反应器优化一种CHO细胞无血清培养基 [J], 陈先金;彭雯丹;郭欣泳;陈小佳;谢秋玲4.CHO细胞无血清培养基的工艺优化 [J], 蒋娟娟;任东升;段鑫;张艳5.表达HSA/IL2的重组CHO细胞的无血清培养基优化研究 [J], 缪亚娜;熊文典;万爱妮;张晶晶;蔡燕飞;陈蕴;金坚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

CHO细胞无血清培养基的筛选与优化

CHO细胞无血清培养基的筛选与优化目的:动物细胞培养技术是当今生物工程领域中的前沿技术之一,无论是在研究还是在生产实践方面都对当代生物技术有着重要的影响。

虽然目前市售的商业化培养基已具有非常好的广谱性,但是却缺少针对性。

针对某一细胞品种设计对应的培养基成分无疑是需要耗费大量的金钱和时间,利用多种市售的培养基进行不同比例的混合,可以在较短时间内使细胞培养得到针对性优化,从而提高产物的产量。

方法:本文利用了市售的几种常用培养基,对CHO细胞进行培养,采用先筛选后优化组合的方式进行针对文中的CHO细胞培养进行优化。

筛选和优化又分为两部分进行:一是基础培养基的筛选和优化;二是补料培养基的筛选和优化。

在培养过程中检测细胞的活率、密度以及产物的表达量作为培养基的评价指标,用以考察培养基的优劣。

结果:通过对基础培养基和补料培养基的筛选、优化,使得最终的利用混合培养基培养的细胞不论是在细胞密度、活率还是产物蛋白的表达量方面都优于单一培养基培养的细胞。

通过优化使得基础培养基筛在最细胞高密度方面:混合培养基的平均最高密度高出单一培养基的平均最高密度9.8%;在最后细胞活率方面,混合培养基的最终平均活率高出单一培养基的最终平均活率11.8%;在最终蛋白产量方面,混合培养基的最终产量高出单一培养基的最终产量17.4%。

通过优化补料培养基在最细胞高密度方面:混合培养基的平均最高密度高出单一培养基的平均最高密度11.0%;在最后细胞活率方面,混合培养基的最终平均活率高出单一培养基的最终平均活率26.6%;在最终蛋白产量方面,混合培养基的最终产量高出单一培养基的最终产量20.6%。

结论通过初步筛选和优化组合的方式进行多种培养基的成分配比可以在短时间内提高细胞密度、提升细胞活率的维持时间从而提高目的蛋白的产量。

表达重组蛋白的CHO细胞培养基：历史、关键成分和优化策略

表达重组蛋白的CHO细胞培养基：历史、关键成分和优化策略摘要中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的培养应用于现代工业，如重组蛋白的表达，需要支持其生长和表达产物的培养基。

这种培养基必须支持高密度细胞存活，同时刺激生物产品的合成和细胞外运输。

这一领域的早期培养基开发工作产生了维持生长、活力和细胞功能的基本配方，包括动物源成分和在批量培养模式中使用的复杂成分。

随后的改进包括无血清培养基的开发和化学限定性(CD)培养基，鉴定关键营养素、生长因子、潜在抑制性或有毒细胞代谢物，以及使用分批补料和灌注培养技术优化营养物输送，同时尽量减少不需要的代谢废物的累积。

本综述包括哺乳动物细胞培养基发展的里程碑、营养成分和配方要求、优化策略、工业用粉末和液体培养基制备的一致性和可扩展性，以及推动CHO细胞培养基设计和开发的关键新进展。

哺乳动物细胞培养用培养基配方的历史演变最早成功开发并用于动物细胞培养的培养基通常由血浆、血清或组织提取物组成。

这些生物成分的复杂、未确定的性质导致可变性，增加污染风险，且细胞生产所需的最小、特定营养成分无法确定。

由于这些原因，许多研究小组试图通过分析细胞和血清成分，确定支持细胞生长所需的关键成分，开发无血清、化学限定性的细胞培养基。

HarryEagle实验室的开创性工作产生了一种基本的配方，可以支持两种不同细胞系的生长，即小鼠成纤维细胞和Hela细胞（人类子宫癌）。

其最初的培养基含有“任意混合的氨基酸、维生素、辅酶因子、碳水化合物和盐”。

通过对细胞蛋白质组成和氨基酸代谢的分析，Eagle进一步研究了透析后的血清，把这种培养基发展成“最低必需培养基”（EMEM）。

EMEM由28种必需代谢物组成。

当补充血清时，它可以支持多种细胞系的繁殖，倍增时间为18至24小时。

虽然这种培养基含有血清，但它的配方仍然是当今许多广泛使用的细胞培养基的基础。

例如，Dulbecco和Freeman的DMEM6是一种该培养基的改良版，含有与EMEM相关的四倍浓度的氨基酸和维生素。

CHODG44细胞无血清培养基关键组分的优化与替代

20． 00 20． 00 12． 50 12． 50 5． 00 12． 50 12． 50 20． 00 5． 00 20． 00 5． 00 12． 50 12． 50 12． 50 5． 00 20． 00 12． 50 12． 50 12． 50 5． 00
1
1． 1
材料和方法
材料 CHO DG44 细胞株由暨南大学生物医药开发基地惠赠；无血清培养基 ProCHO5 购自瑞士 Lonza 公 CD CHO、 freestyleTMCHO 培司； DMEM / F12 培养基、转铁蛋养基购自美国 Invitrogen 公司； ITS （胰岛素、 Dextran sulfate （硫酸葡聚糖）、 F68 、白及亚硒酸钠）、 Anticlumping agent（抗成团试剂）、谷氨酰胺，次黄胸腺嘧啶、硒酸钠、柠檬酸铁和硫酸锌购自美嘌呤、国 Sigma 公司； 50 mL 一次性生物反应器 TubeSpin 管购自瑞士 TPP 公司； CO2 箱式摇床 ISF － 4 － W 购自瑞士科耐公司。
Optimization and Substitution of Key Components for Suspension Culture of Chinese Hamster Ovary （ CHO DG44 ） Cells in Serum Free Medium
b YU Jingfeng a ， CHEN Huiping a，， GOU Xiangnan a ， LU Haishan a
表1 Tab． 1 响应面设计及响应值
Factor3 C： sodium selenite / 45． 00 5． 00 25． 00 25． 00 45． 00 25． 00 5． 00 25． 00 5． 00 5． 00 5． 00 25． 00 45． 00 25． 00 45． 00 45． 00 25． 00 25． 00 25． 00 25． 00 Respomse1 Viable cell density / 22． 5 20． 77 22． 35 24． 52 18． 05 19． 1 16． 8 27． 05 19． 75 17 17． 75 19． 95 20． 6 25． 3 21． 7 21． 77 23． 85 23． 4 23． 65 25． 5

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ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．ＡｓＩｎｓｕｌｉｎ，ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ，ａｎｄｓｏｄｉｕｍｓｅｌｅｎｉｔｅ（ＩＴＳ）ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄａｓｔｈｅｍｏｓｔｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｆａｃｔｏｒｓ，ｔｈｅ
（ＣＨｏＤＧ４４）ＣｅｌｌｓｉｎＳｅｒｕｍＦｒｅｅＭｅｄｉｕｍ
ＹＵＪｉｎｇ — ｆｅｎｇ，ＣＨＥＮＨｕｉ — ｐｉｎｇ，ＧＯＵＸｉａｎｇ — ｎａｎ，ＬＵＨａｉ－ｓｈａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＷｉｔｈｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎＣｈｉｎｅｓｅＨａｍｓｔｅｒＯｖａｒｙｃｅｌｌｌｉｎｅｓ（ＣＨＯＤＧ４４）ａｓｔｈｅｏｂｊｅｃｔｏｆｓｔｕｄｙ，ａｓｅｒｕｍｆｒｅｅ
摘要：以悬浮ＣＨＯＤＧ４４细胞为对象，采用ｃｅｎｔｒａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅ响应面分析法，以活细胞密度为评价指标，确定了
３种对细胞生长有明显促进作用的培养基关键组分—— 胰岛素、转铁蛋白及亚硒酸钠（简称ＩＴＳ）的最优浓度及其
ｗａｓｖｉａｂｌｅｃｅｌｌｄｅｎｓｉｔｙ．ＡｎｄａｎｉｎｅｘｐｅｎｓｉｖｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆＩＴＳｏｒｆＣＨＯｃｅｌｌｓｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｗａｓｆｏｍｕｒｌａｔｅｄ．Ａ１一
ｍｅｄｉｕｍｆｏｒｔｈｅｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＣＨＯｃｅｌｌｓｉｎｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｗａｓｆｏｒｍｕｌａｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇｃｅｎｔｒａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｆａｒｃｅ
Ｊｕｎ．２０１３
文章编号：１００６— ０４５６（２０１３）０２— ０１２５— ０４
ＣＨＯＤＧ４４细胞无血清培养基关键组分的优化与替代
俞锦锋，陈慧萍，缑向楠，芦海姗
（南昌大学ａ．转化医学研究院；ｂ．环境与化学工程学院，江西南昌３３００３１）
ＳＯｔｈｅｃｌｕｍｐｉｎｇｏｆｃｅｌｌｓｗａｓｒｅｓｏｌｖｅｄｂｙａｄｄｉｎｇ２５ｍｇ／Ｌｄｅｘｔｒａｎｓｕｌｆａｔｅｔｏｍｅｄｉｕｍ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｄａｂａｓｉｓｏｒｆｉｎｅｘ —
（ａ．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ；ｂ．ＳｃｈｏｏｌｏｆＥｎｖｉｏｒｍｅｎｔａｌａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｃｈａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００３１，Ｃｈｉｎａ）
第３５卷第２期２０１３
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｃｈａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）
Ｖｏｌ＿３５Ｎｏ．２
中图分类号：Ｑ８１３．１文献标志码：Ａ
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎａｎｄＳｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆＫｅｙＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓｆｏｒＳｕｓｐｅｎｓｉｏｎＣｕｌｔｕｒｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＨａｍｓｔｅｒＯｖａｒｙ
相互影响模式，并设计了一种有效的低成本ＩＴＳ替代混合物。同时在添加２５ｍｇ／Ｌ硫酸葡聚糖条件下成功解决细
胞高密度悬浮培养的成团问题，为ＣＨＯ细胞低成本无血清培养基的研制提供了理论依据。
关键词：ＣＨＯＤＧ４４细胞；响应面分析；硫酸葡聚糖；无血清培养基
ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｆｒａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅｓｅｆａｃｔｏｒｓ，ｗｈｅｒｅｔｈｅｅｖａｌｕａｔｉｎｇｉｎｄｅｘ