专题五单元总体总结优秀课件
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⑶.PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度 来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实 质上也是一台能够自动调控温度的仪器。
5.Taq DNA聚合酶的应用
高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶 失活的问题，耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致 DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化。
6.需要为PCR反应提供的物质
缓冲液、DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种 引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通 过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循 环程序。
循环数 第一次 30次 最后一次
变性 94℃，10min
94℃，30s 94℃，1min
鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。
用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。 洋葱的鳞片叶表皮细10胞
专题5 DNA和蛋白质技术
课题2
多聚酶链式反应扩增DNA 片断
.PCR原理
⑴.在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结 构将解体，双链分开，这个过程称为变性。
⑵.当温度缓慢降低后， 两条彼此分离的DNA链 又会重新结合成双链。
•（4）纯度鉴定：•通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。
（一）样品处理及粗分离
•（一）样品处理及粗分离
•1、红细胞的洗涤：
•（1）步骤：血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸 出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水 →缓慢搅 拌10min→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直 至上清液无黄色 • （2）目的：是去除杂蛋白
•（3）注意事项：洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白； 离心速度过高或时间过长会使白细胞等一同沉淀，达 不到分离的效果。
•2 、血红蛋白的释放：•在蒸馏水和甲苯作用下搅拌，红细胞破裂释放 •蒸馏水的作用是 使红细胞大量吸水胀裂
•加入甲苯的作用是 溶解红细胞的细胞膜
•充分搅拌的目的是 加速红细胞的破裂
磁力搅拌器
2、概念：
根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法
3、原理：
具体过程
•在电场的作用下，这些带电分子会向着与 其所带电荷相反的电极移动
琼脂糖凝胶电泳示意图
用微笑告诉别人，今天的我，比昨天更强。瀑布跨过险峻陡壁时，才显得格外雄伟壮观。勤奋可以弥补聪明的不足，但聪明无法弥补懒惰的缺陷。孤独是 每个强者必须经历的坎。有时候，坚持了你最不想干的事情之后，会得到你最想要的东西。生命太过短暂，今天放弃了明天不一定能得到。只有经历人生 的种种磨难，才能悟出人生的价值。没有比人更高的山，没有比脚更长的路学会坚强，做一只沙漠中永不哭泣的骆驼！一个人没有钱并不一定就穷，但没 有梦想那就穷定了。困难像弹簧，你强它就弱，你弱它就强。炫丽的彩虹，永远都在雨过天晴后。没有人能令你失望，除了你自己人生舞台的大幕随时都 可能拉开，关键是你愿意表演，还是选择躲避。能把在面前行走的机会抓住的人，十有八九都会成功。再长的路，一步步也能走完，再短的路，不迈开双 脚也无法到达。有志者自有千计万计，无志者只感千难万难。我成功因为我志在成功！再冷的石头，坐上三年也会暖。平凡的脚步也可以走完伟大的行程。 有福之人是那些抱有美好的企盼从而灵魂得到真正满足的人。如果我们都去做自己能力做得到的事，我们真会叫自己大吃一惊。只有不断找寻机会的人才 会及时把握机会。人之所以平凡，在于无法超越自己。无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异纸上画饼充饥，无补于事。你可以选择这样的“三 心二意”：信心恒心决心；创意乐意。驾驭命运的舵是奋斗。不抱有一丝幻想，不放弃一点机会，不停止一日努力。如果一个人不知道他要驶向哪个码头， 那么任何风都不会是顺风。行动是理想最高贵的表达。你既然认准一条道路，何必去打听要走多久。勇气是控制恐惧心理，而不是心里毫无恐惧。不举步， 越不过栅栏；不迈腿，登不上高山。不知道明天干什么的人是不幸的！智者的梦再美，也不如愚人实干的脚印不要让安逸盗取我们的生命力。别人只能给 你指路，而不能帮你走路，自己的人生路，还需要自己走。勤奋可以弥补聪明的不足，但聪明无法弥补懒惰的缺陷。后悔是一种耗费精神的情绪，后悔是 比损失更大的损失，比错误更大的错误，所以，不要后悔！复杂的事情要简单做，简单的事情要认真做，认真的事情要重复做，重复的事情要创造性地做。 只有那些能耐心把简单事做得完美的人，才能获得做好困难事的本领。生活就像在飙车，越快越刺激，相反，越慢越枯燥无味。人生的含义是什么，是奋 斗。奋斗的动力是什么，是成功。决不能放弃，世界上没有失败，只有放弃。未跌过未识做人，不会哭未算幸运。人生就像赛跑，不在乎你是否第一个到 达终点，而在乎你有没有跑完全程。累了，就要休息，休息好了之后，把所的都忘掉，重新开始！人生苦短，行走在人生路上，总会有许多得失和起落。 人生离不开选择，少不了抉择，但选是累人的，择是费人的。坦然接受生活给你的馈赠吧，不管是好的还是坏的。现在很痛苦，等过阵子回头看看，会发 现其实那都不算事。要先把手放开，才抓得住精彩旳未来。可以爱，可以恨，不可以漫不经心。我比别人知道得多，不过是我知道自己的无知。你若不想 做，会找一个或无数个借口；你若想做，会想一个或无数个办法。见时间的离开，我在某年某月醒过来，飞过一片时间海，我们也常在爱情里受伤害。1、 只有在开水里，茶叶才能展开生命浓郁的香气。人生就像奔腾的江水，没有岛屿与暗礁，就难以激起美丽的浪花。别人能做到的事，我一定也能做到。不 要浪费你的生命，在你一定会后悔的地方上。逆境中，力挽狂澜使强者更强，随波逐流使弱者更弱。凉风把枫叶吹红，冷言让强者成熟。努力不不一定成 功，不努力一定不成功。永远不抱怨，一切靠自己。人生最大的改变就是去做自己害怕的事情。每一个成功者都有一个开始。勇于开始，��
红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物
•4、透析（粗提取）：•（装P入H为透7析.0袋）并透置析于。磷酸缓冲液中
1mL
1mL
•20mmol/L磷酸缓冲液
•目的：除去样品中分子量较小的杂质，或用于 更换样品中的缓冲液
㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）
1、凝胶：
一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖 类构成如葡聚糖、琼脂糖）
⑧ DNA的鉴定 自变量
比较
加入物质
结果
图示
实验组 对照组
均加入：
丝状
①4 mL二苯胺 物
试剂
(DNA)
②2mol/LNaCl
溶液5 mL
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
——
溶液逐渐 变蓝
不变蓝
鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 取少许丝状物，置玻片中央，
加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。
的
分离过程
提
缓冲溶液
取
组成
作用
和
蛋白质的
分
样品处理
粗分离
离
提取分离
纯度鉴定
纯化
二、实验操作
•蛋白质的提取和分离一般分为四步：
•（1）样•↓品处理：•分包离括血洗红涤蛋红白细溶胞液；。血红蛋白释放；
•（2）粗分离：•透析除去分子较小的杂质。
•↓
•（3）纯化： •通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋
•↓ 白质除去。
选修一 专题5 课题1
DNA的粗提取与鉴定
DNA提取和鉴定的实验步骤
❖选取实验材料
❖破碎细胞，获取含DNA的滤液 ❖去除滤液中的杂质 粗提取
❖析出 DNA 鉴定DNA
提纯
❖去除滤液中的杂质 粗提取
❖析出 DNA 提纯
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精 溶液（体积分数为95 ％）（使用冷却的酒精， 对DNA的凝集效果较佳） ，静置2－3min，溶液 中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻 璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸 吸取上面的水
复性 －
55℃，30s 55℃，30s
延伸 －
72℃，1min 72℃，1min
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分 为三个基本步骤──变性、复性和延伸.
PCR 循环第三步 ：引物延伸
选修一 专题5 课题3
血红蛋白的提取和分离
血
蛋白质分子的差异性 •知识总结
红
蛋
凝胶色谱法
白
凝胶电泳法
原理
鉴定DNA
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只 加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。混合 均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷 却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶 解有DNA的溶液是否有蓝色
（2）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色
搅拌器转子
搅拌器正在工作
•3.分离血红蛋白
•红细胞破碎混合液→中速长时离心（2000r/min×10min）→滤 纸过滤除去脂质→分液漏斗分离出血红蛋白，得到红色透明液体。
红细胞 混合液
•脂类物质
•分离过程
中速离心 10min
滤纸 过滤
•离心管
•烧杯
有机溶剂 无色透明的甲苯层 脂类物质 白色脂溶性物质沉淀层 血红蛋白溶液 红色透明液体
5.Taq DNA聚合酶的应用
高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶 失活的问题，耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致 DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化。
6.需要为PCR反应提供的物质
缓冲液、DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种 引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通 过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循 环程序。
循环数 第一次 30次 最后一次
变性 94℃，10min
94℃，30s 94℃，1min
鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。
用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。 洋葱的鳞片叶表皮细10胞
专题5 DNA和蛋白质技术
课题2
多聚酶链式反应扩增DNA 片断
.PCR原理
⑴.在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结 构将解体，双链分开，这个过程称为变性。
⑵.当温度缓慢降低后， 两条彼此分离的DNA链 又会重新结合成双链。
•（4）纯度鉴定：•通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。
（一）样品处理及粗分离
•（一）样品处理及粗分离
•1、红细胞的洗涤：
•（1）步骤：血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸 出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水 →缓慢搅 拌10min→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直 至上清液无黄色 • （2）目的：是去除杂蛋白
•（3）注意事项：洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白； 离心速度过高或时间过长会使白细胞等一同沉淀，达 不到分离的效果。
•2 、血红蛋白的释放：•在蒸馏水和甲苯作用下搅拌，红细胞破裂释放 •蒸馏水的作用是 使红细胞大量吸水胀裂
•加入甲苯的作用是 溶解红细胞的细胞膜
•充分搅拌的目的是 加速红细胞的破裂
磁力搅拌器
2、概念：
根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法
3、原理：
具体过程
•在电场的作用下，这些带电分子会向着与 其所带电荷相反的电极移动
琼脂糖凝胶电泳示意图
用微笑告诉别人，今天的我，比昨天更强。瀑布跨过险峻陡壁时，才显得格外雄伟壮观。勤奋可以弥补聪明的不足，但聪明无法弥补懒惰的缺陷。孤独是 每个强者必须经历的坎。有时候，坚持了你最不想干的事情之后，会得到你最想要的东西。生命太过短暂，今天放弃了明天不一定能得到。只有经历人生 的种种磨难，才能悟出人生的价值。没有比人更高的山，没有比脚更长的路学会坚强，做一只沙漠中永不哭泣的骆驼！一个人没有钱并不一定就穷，但没 有梦想那就穷定了。困难像弹簧，你强它就弱，你弱它就强。炫丽的彩虹，永远都在雨过天晴后。没有人能令你失望，除了你自己人生舞台的大幕随时都 可能拉开，关键是你愿意表演，还是选择躲避。能把在面前行走的机会抓住的人，十有八九都会成功。再长的路，一步步也能走完，再短的路，不迈开双 脚也无法到达。有志者自有千计万计，无志者只感千难万难。我成功因为我志在成功！再冷的石头，坐上三年也会暖。平凡的脚步也可以走完伟大的行程。 有福之人是那些抱有美好的企盼从而灵魂得到真正满足的人。如果我们都去做自己能力做得到的事，我们真会叫自己大吃一惊。只有不断找寻机会的人才 会及时把握机会。人之所以平凡，在于无法超越自己。无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异纸上画饼充饥，无补于事。你可以选择这样的“三 心二意”：信心恒心决心；创意乐意。驾驭命运的舵是奋斗。不抱有一丝幻想，不放弃一点机会，不停止一日努力。如果一个人不知道他要驶向哪个码头， 那么任何风都不会是顺风。行动是理想最高贵的表达。你既然认准一条道路，何必去打听要走多久。勇气是控制恐惧心理，而不是心里毫无恐惧。不举步， 越不过栅栏；不迈腿，登不上高山。不知道明天干什么的人是不幸的！智者的梦再美，也不如愚人实干的脚印不要让安逸盗取我们的生命力。别人只能给 你指路，而不能帮你走路，自己的人生路，还需要自己走。勤奋可以弥补聪明的不足，但聪明无法弥补懒惰的缺陷。后悔是一种耗费精神的情绪，后悔是 比损失更大的损失，比错误更大的错误，所以，不要后悔！复杂的事情要简单做，简单的事情要认真做，认真的事情要重复做，重复的事情要创造性地做。 只有那些能耐心把简单事做得完美的人，才能获得做好困难事的本领。生活就像在飙车，越快越刺激，相反，越慢越枯燥无味。人生的含义是什么，是奋 斗。奋斗的动力是什么，是成功。决不能放弃，世界上没有失败，只有放弃。未跌过未识做人，不会哭未算幸运。人生就像赛跑，不在乎你是否第一个到 达终点，而在乎你有没有跑完全程。累了，就要休息，休息好了之后，把所的都忘掉，重新开始！人生苦短，行走在人生路上，总会有许多得失和起落。 人生离不开选择，少不了抉择，但选是累人的，择是费人的。坦然接受生活给你的馈赠吧，不管是好的还是坏的。现在很痛苦，等过阵子回头看看，会发 现其实那都不算事。要先把手放开，才抓得住精彩旳未来。可以爱，可以恨，不可以漫不经心。我比别人知道得多，不过是我知道自己的无知。你若不想 做，会找一个或无数个借口；你若想做，会想一个或无数个办法。见时间的离开，我在某年某月醒过来，飞过一片时间海，我们也常在爱情里受伤害。1、 只有在开水里，茶叶才能展开生命浓郁的香气。人生就像奔腾的江水，没有岛屿与暗礁，就难以激起美丽的浪花。别人能做到的事，我一定也能做到。不 要浪费你的生命，在你一定会后悔的地方上。逆境中，力挽狂澜使强者更强，随波逐流使弱者更弱。凉风把枫叶吹红，冷言让强者成熟。努力不不一定成 功，不努力一定不成功。永远不抱怨，一切靠自己。人生最大的改变就是去做自己害怕的事情。每一个成功者都有一个开始。勇于开始，��
红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物
•4、透析（粗提取）：•（装P入H为透7析.0袋）并透置析于。磷酸缓冲液中
1mL
1mL
•20mmol/L磷酸缓冲液
•目的：除去样品中分子量较小的杂质，或用于 更换样品中的缓冲液
㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）
1、凝胶：
一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖 类构成如葡聚糖、琼脂糖）
⑧ DNA的鉴定 自变量
比较
加入物质
结果
图示
实验组 对照组
均加入：
丝状
①4 mL二苯胺 物
试剂
(DNA)
②2mol/LNaCl
溶液5 mL
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
——
溶液逐渐 变蓝
不变蓝
鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 取少许丝状物，置玻片中央，
加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。
的
分离过程
提
缓冲溶液
取
组成
作用
和
蛋白质的
分
样品处理
粗分离
离
提取分离
纯度鉴定
纯化
二、实验操作
•蛋白质的提取和分离一般分为四步：
•（1）样•↓品处理：•分包离括血洗红涤蛋红白细溶胞液；。血红蛋白释放；
•（2）粗分离：•透析除去分子较小的杂质。
•↓
•（3）纯化： •通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋
•↓ 白质除去。
选修一 专题5 课题1
DNA的粗提取与鉴定
DNA提取和鉴定的实验步骤
❖选取实验材料
❖破碎细胞，获取含DNA的滤液 ❖去除滤液中的杂质 粗提取
❖析出 DNA 鉴定DNA
提纯
❖去除滤液中的杂质 粗提取
❖析出 DNA 提纯
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精 溶液（体积分数为95 ％）（使用冷却的酒精， 对DNA的凝集效果较佳） ，静置2－3min，溶液 中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻 璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸 吸取上面的水
复性 －
55℃，30s 55℃，30s
延伸 －
72℃，1min 72℃，1min
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分 为三个基本步骤──变性、复性和延伸.
PCR 循环第三步 ：引物延伸
选修一 专题5 课题3
血红蛋白的提取和分离
血
蛋白质分子的差异性 •知识总结
红
蛋
凝胶色谱法
白
凝胶电泳法
原理
鉴定DNA
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只 加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。混合 均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷 却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶 解有DNA的溶液是否有蓝色
（2）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色
搅拌器转子
搅拌器正在工作
•3.分离血红蛋白
•红细胞破碎混合液→中速长时离心（2000r/min×10min）→滤 纸过滤除去脂质→分液漏斗分离出血红蛋白，得到红色透明液体。
红细胞 混合液
•脂类物质
•分离过程
中速离心 10min
滤纸 过滤
•离心管
•烧杯
有机溶剂 无色透明的甲苯层 脂类物质 白色脂溶性物质沉淀层 血红蛋白溶液 红色透明液体